下呼吸道分泌物标本采集规程
痰和呼吸道分泌物标本采集规范
痰和呼吸道分泌物标本采集规范一、微生物学【概述】痰标本采集方便，无创伤性，临床应用广泛，对病原学诊断具有重要价值。
痰标本的正确采集、处理是临床细菌检验成功的关键，标本采集与处理的规范化是准确、及时向临床提供重要的感染信息的基础。
目前咳痰标本仍是最常用、最简单的采样方法，必须指导或辅助患者深咳痰，及时送检，并通过镜检筛选合格标本。
损伤性采样技术仅在选择病例(抗生素治疗反应不佳；可疑特殊病原体感染，如寄生虫、痰菌阴性肺结核、混合感染或二重感染等)使用。
【操作方法】1、咳痰标本采集要求患者在清晨用药前留取，因为晨痰量多，且含菌量也多。
留取前刷牙，用清水漱口3次，以除去口腔内大部分杂菌，之后用力咳痰。
咳痰较困难者可用3％～5％氯化钠溶液雾化蒸气吸入进行导痰；对咳嗽乏力或昏迷患者，可用普通吸痰管经鼻腔或口腔吸引下呼吸道分泌物；对不能咳痰的婴幼儿或病重患者，如须采集痰标本做结核杆菌培养，可插胃管抽吸胃液标本送检，也可留取12～24h痰液，经漂浮浓集后检查，以提高结核杆菌检出率。
若做细菌或真菌培养，痰液必须盛于无菌容器内送检。
观察痰量应留取24h痰液，必要时在容器内加入少许防腐剂。
2、咽拭子采样上呼吸道感染可通过咽拭子获取标本。
标本采集前数小时内不得用消毒药物漱口或涂抹病灶局部。
用咽拭子采集标本时应小心、认真、准确，避免触及舌、口腔黏膜和唾液，以防污染。
如咽拭子标本发现致病菌，如肺炎链球菌、流感杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等，且数量较多时，提示有该菌所致感染存在。
3、纤维支气管镜抽吸采样以利多卡因做咽喉部局部麻醉后，插入纤维支气管镜(纤支镜)，达到肺炎病灶引流支气管内，纤支镜吸引口依次连接标本采集瓶或试管及负压吸引装置，用负压将下呼吸道分泌物经纤支镜吸人标本采集瓶内送检。
气管切开或气管插管患者也可用普通无菌吸痰管直接经人工气道插至大约叶支气管水平，接负压装置将痰液经吸痰管吸入标本采集瓶内。
纤支镜直视下可准确采集病灶部位的分泌物，但插入时纤支镜顶端和内孔常受咽喉部正常菌群污染，所以纤支镜吸引物常规培养结果不能完全代表肺部感染的病原体。
痰液及下呼吸道分泌物培养简易操作规程
、痰液及下呼吸道分泌物培养标准操作流程1 观察标本合格后操作。
一般为晨痰，再留取痰之前刷牙、反复漱口，应从气管深部咳出痰，吐进无菌容器内送检。
涂片白细胞小于10，上皮细胞大于25为不合格痰，相反白细胞大于25，上皮细胞小于10-25为合格痰标本。
2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3 接种环灭菌—待冷却后—取痰液—接种到血平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。
平板划线分离培养：（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域得划线应接触上一区域得接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板得底部向上）于35°C培养18-24小时。
4观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还就是杆菌后鉴定种属。
5 做药敏试验-------报告结果。
便培养标准操作流程1、收取有粘液或脓血、稀水粪便标本。
2、点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3、接种环灭菌—待冷却后—取粪便—接种到血平板、SS平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。
平板划线分离培养：（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域得划线应接触上一区域得接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板得底部向上）于35°C培养。
4培养18-24小时后观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还就是杆菌后鉴定种属。
5 做药敏试验-------报告结果。
尿培养标准操作流程1 收取晨尿第一泡清洁中段尿。
（把外阴用肥皂清洗一遍，再用清水清洗两遍，待干或用干净布擦干）用导尿管得病号需新换导尿管后取标本2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3 接种环灭菌—待冷却后将标本混匀，用定量接种环取尿液1ul(大约一接种环）—接种到血平板，接种环灭菌---待冷后取标本接种到中国兰平板（或麦康凯平板上）。
呼吸道标本细菌学检验操作规程SOP
呼吸道标本细菌学检验操作规程（一）目的：规范呼吸道标本细菌学检验,确保检验结果准确可靠。
（二）适用范围及操作人员：呼吸道标本培养和涂片检检查；检验科工作人员。
（三）支持性文件：《WST805-2022临床微生物检验基本技术标准》、《下呼吸道感染细菌培养操作指南》、《全国临床检验操作规程》。
（四）标本类型：痰、咽拭、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺液等。
（五）标本采集时间：尽量在抗生素使用前采集。
（六）标本采集方法:1、咳痰：适用于肺部感染患者,特别是重病监护室(ICU)及住院的社区获得性肺炎(CAP)、慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)、肺脓肿(咳痰非最适标本)、可疑细菌性病原体引起的肺部感染患者。
咳痰前,患者用无菌生理盐水漱口;指导患者咳出深部痰,勿留取唾液和鼻咽腔分泌物。
2、气管吸出物：仅当气管插管的患者出现肺炎症状时(如发热或浸润),可采集气管吸出物标本。
从气管中吸痰，用无菌容器留取送检。
3、支气管肺泡灌洗液：利用纤维支气管镜向小支气管和肺泡中注入无菌生理盐水灌洗,在40mL～80mL回收的灌洗液中包含约1mL支气管末梢和肺泡中的分泌物;弃去前段可能污染的部分,收集其余部分后立即送检。
4、保护毛刷标本：将纤维支气管镜插入亚段支气管可疑感染部位,经支气管镜刷检孔推出双层套管中的毛刷(远端填塞聚乙二醇),刷取脓性分泌物,采样后将毛刷回收入双层套管并退出纤维支气管镜,用无菌剪刀剪断毛刷,置于含lmL生理盐水的无菌容器中(仅供需氧培养),快速送检。
5、气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
6、棉拭采集法用无菌棉拭子轻轻擦拭病人鼻咽部黏膜，留取标本，置无菌试管内送检。
（七）标本拒收标准：1、申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。
2、痰标本呈水样或唾液样。
3、痰涂片白细胞<10／低倍视野，上皮细胞>25／低倍视野。
4、标本容器溢漏，无瓶盖。
5、痰标本留取放置时间太长，超过2小时。
呼吸道标本的采集与送检要求
呼吸道标本的采集与送检要求1.采集标本的选择：常用的呼吸道标本有咽拭子、喉拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液等。
对于喷嚏液或唾液等非特异性标本的采集，不推荐用于病原体的检测。
2.采集时间：最佳的标本采集时间是在症状出现后24小时内采集，对于特定病原体如流感病毒等，应在症状出现48小时内采集。
3.采集方法：采用无菌的采集器具，如棉签、拭子等。
采集咽拭子时，应当将拭子的头部置于扁桃体和咽后壁的分泌物位置，不应担心引起患者咳嗽反射。
鼻拭子的采集方法是将拭子插入鼻腔内，盘旋擦拭鼻腔黏膜。
4.采集指导：采集者应经过专业培训并熟悉标本采集的技术要领。
采集过程中需要保持呼吸道的湿润，确保采集到的标本质量。
5.标本保存与运输：采集得到的标本应立即置于透明的标本袋中，封口完好。
若运输时间不长，可将标本放入4℃冰箱保存，不得冷冻。
如果运输时间较长，应采用冷冻方式运输（-20℃）。
运输过程中应尽量避免震动或损坏。
6.标本的处理：采集得到标本后，应尽快送往实验室进行处理。
痰液在送往实验室前应保持在4℃存放。
对于支气管肺泡灌洗液等标本，需要在接收实验室前制备样本。
7.实验室检测：送往实验室后，应当及时进行病原体的检测。
常用的检测方法包括细菌培养、病毒核酸检测（如PCR）、真菌培养等。
根据病情需要，还可以进行药敏试验、抗体检测等。
8.结果解读与报告：实验室所得结果需要专业人员进行解读，并及时生成报告。
报告应如实反映标本的检测结果，并提供相应的临床意义和建议。
在进行呼吸道标本的采集与送检时，需要确保采集者具备必要的知识与技能，并严格按照采集与送检要求进行操作，以保证最终的结果准确可靠，为诊治提供有力的支持。
痰液及下呼吸道分泌物培养简易操作规程
.痰液及下呼吸道分泌物培养标准操作流程1 观察标本合格后操作。
一般为晨痰，再留取痰之前刷牙、反复漱口，应从气管深部咳出痰，吐进无菌容器内送检。
涂片白细胞小于10，上皮细胞大于25为不合格痰，相反白细胞大于25，上皮细胞小于10-25为合格痰标本。
2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3 接种环灭菌—待冷却后—取痰液—接种到血平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。
平板划线分离培养：（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时。
4观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。
5 做药敏试验-------报告结果。
便培养标准操作流程1.收取有粘液或脓血、稀水粪便标本。
2.点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3.接种环灭菌—待冷却后—取粪便—接种到血平板、SS平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。
平板划线分离培养：（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养。
4培养18-24小时后观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。
5 做药敏试验-------报告结果。
尿培养标准操作流程1 收取晨尿第一泡清洁中段尿。
（把外阴用肥皂清洗一遍，再用清水清洗两遍，待干或用干净布擦干）用导尿管的病号需新换导尿管后取标本2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3 接种环灭菌—待冷却后将标本混匀，用定量接种环取尿液1ul(大约一接种环）—接种到血平板，接种环灭菌---待冷后取标本接种到中国兰平板（或麦康凯平板上）。
下呼吸道感染微生物检验的标本留取和运送的要求
下呼吸道感染微生物检验的标本留取和运送的要求发布时间：2021-03-22T02:36:38.082Z 来源：《健康世界》2020年16期作者：李晓英[导读] 下呼吸道感染是目前危害大众健康的严重疾病之一，据调查，该病的致死率位列全球疾病死因的第四位，全球每年因下呼吸道感染而死亡的人数占全球总死亡人数的4.83%左右，对于这种危害性极高的疾病，我们需要及时发现、及时治疗，才能够保证患者的生命安全。
李晓英成都锦江大观医院四川成都 610000下呼吸道感染是目前危害大众健康的严重疾病之一，据调查，该病的致死率位列全球疾病死因的第四位，全球每年因下呼吸道感染而死亡的人数占全球总死亡人数的4.83%左右，对于这种危害性极高的疾病，我们需要及时发现、及时治疗，才能够保证患者的生命安全。
而感染性疾病的诊断金标准为病原学诊断，只有了解药敏结果和病原学结果才能够合理选择抗菌药物，正确用药，以此来避免细菌耐药现象的发生，但是病原学诊断结果正确与否，取决于标本的管理，故临床医护人员应该知晓下呼吸道感染微生物检验标本在留取和运送方面的要求，为接下来的微生物检验和临床诊断奠定可靠的基础。
一、下呼吸道感染微生物检验标本类型下呼吸道感染微生物检验标本主要有两种，其一是纤维支气管镜采集的标本，经过纤维支气管镜获取到的支气管肺泡灌洗液和保护性毛刷更适合做细菌定量培养，当潜在的致病菌菌落数高于阈值时，诊断下呼吸道感染的特异度即可达到82%至91%。
纤维支气管镜获取到支气管灌洗液只用于诊断由严格致病菌引起的肺炎，如结核分支杆菌、军团菌，内源性真菌引起的感染，对其他病原菌的检查效果比较差。
其二就是痰标本，分自然咳痰和诱导痰，自然咳痰适合定性培养，且必须结合痰涂片判断标本的质量，提高感染病原菌诊断的特异性和敏感性。
诱导痰不能通过细菌的浓度判断是否有意义，只适用于检测结合分支杆菌以及卡式肺孢子菌，对其他病原菌的检查效果比较差。
相对来讲，纤维支气管镜的诊断价值远高于痰标本。
呼吸道标本的采集、储存和运送规范
㊃ＣＯＶＩＤ-１９特稿标准／指南㊃ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３-５５０１．２０２０．０１．００５呼吸道标本的采集㊁储存和运送规范杨童玲１，３ 夏爱梅１，３ 胡晓静１ 余艮珍２ 史 欢２ 顾 莺１ 张晓波１ 王传清１ 张崇凡１ 黄国英１作者单位 １复旦大学附属儿科医院 上海，２０１１０２；２华中科技大学同济医学院附属同济医院 武汉，４３００３０；３共同第一作者通讯作者 张崇凡，Ｅ-ｍａｉｌ：ｘｔ２１１３１１＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ；黄国英，Ｅ-ｍａｉｌ：ｇｙｈｕａｎｇ＠ｓｈｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ流感病毒检测最常见的是采集呼吸道标本，可采用拭子㊁刷子㊁吸出物和灌洗液获取呼吸道标本，可以采集鼻咽㊁口咽㊁鼻孔等㊂曾使用培养法或直接法荧光抗体法进行检测［１，２］，现以逆转录多聚酶链反应（ＲＴ-ＰＣＲ）方法，可以通过样本中少量的病毒核酸扩增而提高检测率［３］㊂急性严重呼吸综合征冠状病毒２（ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２）感染流行期间，ＲＴ-ＰＣＲ是ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染确诊的首选方法［４，５］㊂检测准确性最高的标本是下呼吸道标本，但属于有创性操作㊂由于核酸扩增检测可以检测更低浓度的病毒，并且不需要细胞的存在，因此喉部拭子或唾液样本可能是进行分析的合适样本［６］，但其检出率低于８３％［７］㊂相对无创而准确率高的是鼻咽抽吸物标本，能提供高浓度的感染细胞㊂对于儿童，采集一个口咽拭子和一个鼻部拭子的准确性相当于鼻咽拭子的准确性［８］，是检测准确性与无创性采集的理想搭配㊂但临床上为了避免假阴性，通常会同时采集一个口咽拭子和一个鼻咽拭子㊂口咽拭子的采集相对比较简单，鼻咽拭子的采集需要经过培训，而且鼻咽拭子的采集过程可能会引发患者打喷嚏或者咳嗽而导致气溶胶的产生，存在交叉感染的风险［９］㊂本文基于新型冠状病毒肺炎（ＣＯＶＩＤ-１９）作为乙类传染病甲类管理办法，介绍呼吸道标本的采集㊁贮存和运送［１０，１１］㊂１ 采集对象ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染的ＣＯＶＩＤ-１９疑似病例㊁疑似聚集性病例，其他需要进行ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染诊断或鉴别诊断病例，确诊的ＣＯＶＩＤ-１９是否康复的鉴别病例，或其他需要进一步ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染筛查检测的环境或生物材料㊂２ 采集者从事ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２检测标本采集的技术人员应经过生物安全培训且为合格者和具备相应的实验技能㊂按照‘儿童新型冠状病毒感染／肺炎疑似和确诊病例快速筛查和临床实践指南“［１２］的要求使用三级防护，最好使用全面型电动送风呼吸器面罩进行有效防护㊂３ 采集标本ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２初步诊断测试，中国疾病预防控制中心（ＣＤＣ）建议收集和检测咳嗽患儿的上呼吸道（鼻咽和口咽拭子）和下呼吸道（痰，如果可能）的样本㊂按照国家卫健委ＣＯＶＩＤ-１９诊疗方案（试行第六版）的要求，尽可能留取痰液标本，气管插管患者采集下呼吸道分泌物标本㊂４ 采集标本时机临床怀疑ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染应立即向当地卫生部门报告，当地公共卫生工作人员将确定患者是否符合ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染调查对象的标准㊂临床标本应在临床或公共卫生实验室采集，用于常规呼吸道病原体检测㊂临床实验室不应从ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染者采集的样本中分离病毒㊂一旦确定了符合ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染对象，应尽快采集样本㊂５ 采样管及其保存液上㊁下呼吸道标本采集后均置于含３ｍＬ病毒保存液的采样管中，推荐以Ｅａｇｌｅ'ｓ基础培养液为基础的保存液㊂保存液中也应添加胎牛血清或牛血清白蛋白等稳定病毒的蛋白质外壳的添加液㊂除此之外，还应添加青霉素㊁链霉素㊁庆大霉素及多黏菌素Ｂ等抑制细菌生长，保存液提供的样本基本是活病毒，可以最大程度保持样本的原始性，后续不仅可以用于病毒的核酸提取检测，还可用于病毒的培养和分离㊂６ 采样拭子应选用合成纤维或人造纤维，不推荐海绵或棉花拭子，棉花的纤维对蛋白质吸附较强，导致病毒不易洗脱到保存液中，也不推荐尼龙类的纤维，其吸水性不佳，导致采样量不足，影响检出效率㊂７ 样本的储存和拒收原则上样本应立即送检㊂以下是各种储存必需的条件：①采集后，应贴上相应的标签，样本可在４ħ以下保存㊃９１㊃中国循证儿科杂志 ２０２０年２月第１５卷第１期７２ｈ，②如果预计提取检验会延迟，则将样本储存在－７０ħ或更低的温度，③提取的核酸应储存于－７０ħ或更低的温度㊂拒收的样本包括：①没有保存在２ ８ħ或－７０ħ或以下的样本；②样本标签或资料不完整；③样本类型不合适；④样本量不足㊂８ 样本的运送①运送人员防护要求：需对运送人员进行专业培训，做好二级防护，目前中国的标本运送由ＣＤＣ的专业人员来取，工作人员通道进入，污染通道离开㊂②样本需要双层密封袋密封，每袋装１份标本，将样本储存在４ħ，并使用密封的标本转运箱（内附有冰袋）立即运送㊂在每个样本容器上贴上患者的具体信息㊁样本的具体信息㊂为每个提交的样本填写卫生行政部门要求的表格㊂③如果样本在－７０ħ下冷冻，运输时则将其放在密封的标本转运箱（内附有干冰）连夜运送，如无－７０ħ保存条件，则于－２０ħ冰箱暂存㊂９ 加强沟通临床和实验室工作人员之间的及时沟通很重要，这样才能在处理可能ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染病例的标本时将感染的风险降到最低㊂１０ 上呼吸道标本采集１０．１ 口咽拭子 ①视野要求：口咽拭子取样时，应该在良好的照明条件下，使用一次性压舌板来确保咽喉部有足够的视野，压舌板将舌压到一边，避开舌头，拭子擦拭扁桃体（图１Ａ㊁Ｂ）㊂②口咽拭子材质的要求：只能使用带塑料柄的合成纤维棉签，不能使用海藻酸钙拭子或带木柄的拭子，因为它们可能含有灭活某些病毒和抑制ＰＣＲ检测的物质㊂③患儿体位和口腔防护要求：患儿取坐位或卧位，采集者坐在患儿对面，以能够看清患儿口咽部扁桃体为准，采集的时候要让患儿头部上抬３０度，采集时患儿应该用口罩罩住鼻部，减少喷嚏或咳嗽飞沫飞溅（图１Ｃ）㊂④取材要求：将口咽拭子深入口咽部，在原位最好保持１０ｓ以吸收分泌物，用拭子棉签同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，轻度用力拭抹咽后壁部位，应避免触及舌部㊂将口咽拭子棉签头浸入采样管中，尾部弃去，旋紧管盖㊂１０．２ 鼻咽拭子采集（图１Ｄ㊁Ｅ） ①鼻咽拭子材质要求同口咽拭子㊂②准备含３ｍＬ病毒保存液的采样管备用㊂③患儿体位和口腔防护要求：患儿头部后仰７０度，采集时患儿应该用口罩罩住下颌，减少咳嗽飞沫飞溅，取材人站在患儿侧方，防止飞沫飞溅㊂④鼻咽拭子棒长度要求：可以用鼻咽拭子棒测量一下，量出耳根到鼻孔的距离，并用手指做标记㊂⑤体验要求：将采样拭子以垂直鼻子（面部）方向插入鼻腔，与上颚平行，拭子伸入距离最少应达耳垂部位到鼻尖长度的一半，如果能够达到先前估计的深度最好，可有阻挡感㊂⑥取材要求：深入鼻咽部，使拭子在鼻内停留１５ ３０ｓ，轻轻旋转３ ５次，以吸收分泌物，然后抽出拭子㊂⑦取材后要求：将鼻咽拭子棉签头浸入采样管中，尾部弃去，旋紧管盖㊂图１ 上呼吸道标本采集注 Ａ：扁桃体；Ｂ：鼻咽１１ 下呼吸道标本１１．１ 支气管灌洗液 将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管，见患儿有咳嗽反射后再稍微深入１ｃｍ后，注入５ｍＬ温生理盐水，开放负压，旋转收集器头部并缓慢退出，收集抽取的黏液于病毒采样管中㊂１１．２ 肺泡灌洗 该方法适合危重患儿，患儿往往因为呼吸衰竭或肺不张需要行气管插管或纤维支气管镜灌洗，便于获取肺泡灌洗液标本，需要在支气管镜室局麻下行电子支气管镜术㊂支气管镜由左鼻孔进入气管㊁支气管后，镜端固定于右／左肺中叶开口，经气管活检孔缓缓加入灭菌温生理盐水，每次８ｍＬ灌洗２ ３次，灌洗后吸出［１３］，收集至采样管中㊂１１．３ 鼻咽和气管抽吸 婴幼儿多需要采用该途径采集标本，使用痰液收集器连接负压吸引器，痰液收集器前端的吸痰管深入到患儿气道内，见患儿有咳嗽反射后再稍微深入１ｃｍ后开放负压，吸出２ ３ｍＬ呼吸道分泌物至采样管中㊂参考文献[１]ＬｏｅｎｓＫ,ＶａｎＨｅｉｒｓｔｒａｅｔｅｎＬ,Ｍａｌｈｏｔｒａ-ＫｕｍａｒＳ,ｅｔａｌ．Ｏｐｔｉｍａｌｓａｍｐｌｉｎｇｓｉｔｅｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｓｐｏｓｓｉｂｌｙｃａｕｓｉｎｇｃｏｍｍｕｎｉｔｙ-ａｃｑｕｉｒｅｄｌｏｗｅｒｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｔｒａｃｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ,４７(１):２１-３１[２]ＲｏｂｉｎｓｏｎＪＬ,ＬｅｅＢＥ,ＫｏｔｈａｐａｌｌｉＳ,ｅｔａｌ．Ｕｓｅｏｆｔｈｒｏａｔｓｗａｂ㊃０２㊃ＣｈｉｎＪＥｖｉｄＢａｓｅｄＰｅｄｉａｔｒ Ｆｅｂｕｒａｒｙ２０２０，Ｖｏｌ１５，Ｎｏ１ｏｒｓａｌｉｖａｓｐｅｃｉｍｅｎｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｖｉｒｕｓｅｓｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎ．ＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,４６(７):ｅ６１-６４[３]ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ(ＣＤＣ)．ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｒａｐｉｄｉｎｆｌｕｅｎｚａｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｔｅｓｔｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｏｖｅｌｉｎｆｌｕｅｎｚａＡ(Ｈ１Ｎ１)Ｖｉｒｕｓ-ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓ,２００９．ＭＭＷＲＭｏｒｂＭｏｒｔａｌＷｋｌｙＲｅｐ,５８(３０):８２６-８２９[４]国家卫生健康委．关于印发新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)的通知(２０２０-０２-１８)．ｈｔｔｐ:／／ｗｗｗ．ｎｈｃ．ｇｏｖ．ｃｎ／,２０２０．０２．１８[５]ＣｏｒｍａｎＶＭ,ＬａｎｄｔＯ,ＫａｉｓｅｒＭ,ｅｔａｌ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ２０１９ｎｏｖｅｌｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ(２０１９-ｎＣｏＶ)ｂｙｒｅａｌ-ｔｉｍｅＲＴ-ＰＣＲ．ＥｕｒｏＳｕｒｖｅｉｌｌ,２０２０,２５(３)．ｄｏｉ:１０．２８０７／１５６０－７９１７[６]ＷａｎｇＷＫ,ＣｈｅｎＳＹ,ＬｉｕＩＪ,ｅｔａｌ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳＡＲＳ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｉｎｔｈｒｏａｔｗａｓｈａｎｄｓａｌｉｖａｉｎｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓ．ＥｍｅｒｇＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,２００４,１０(７):１２１３-１２１９[７]ＲｏｂｉｎｓｏｎＪＬ,ＬｅｅＢＥ,ＫｏｔｈａｐａｌｌｉＳ,ｅｔａｌ．Ｕｓｅｏｆｔｈｒｏａｔｓｗａｂｏｒｓａｌｉｖａｓｐｅｃｉｍｅｎｓｆｏｒ１８１ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｖｉｒｕｓｅｓｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎ．ＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,４６(７):ｅ６１-６４[８]ＳｐｅｎｃｅｒＳ,ＴｈｏｍｐｓｏｎＭＧ,ＦｌａｎｎｅｒｙＢ,ｅｔａｌ．ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＳｐｅｃｉｍｅｎＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＩｎｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓＩｎｆｅｃｔｉｏｎｂｙＲＴ-ＰＣＲ:ＡＬｉｔｅｒａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗ．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ,５７(９),ｐｉｉ:ｅ０００２７－１９[９]ＴｅｌｌｉｅｒＲ．ＲｅｖｉｅｗｏｆａｅｒｏｓｏｌｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｏｆｉｎｆｌｕｅｎｚａＡｖｉｒｕｓ．ＥｍｅｒｇＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,２００６,１２(１１):１６５７-１６６２[１０]国家卫生健康委．新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南(第三版)．２０２０．０１．２８[１１]ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｆｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＣＯＶＩＤ-１９ＲｅｑｕｅｓｔｓｆｏｒＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＰａｎｅｌｓａｎｄＶｉｒｕｓ．ｈｔｔｐｓ:／／ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ／２０１９-ｎｃｏｖ／ｌａｂ／ｔｏｏｌ-ｖｉｒｕｓ-ｒｅｑｕｅｓｔｓ．ｈｔｍｌ[１２]复旦大学附属儿科医院．儿童新型冠状病毒感染／肺炎疑似和确诊病例快速筛查和临床实践指南．中国循证儿科杂志,１５(１):１-４[１３]黄宝兴,邓继岿,王红梅．１６９３例难治性肺炎患儿支气管肺泡灌洗液病原体培养分析．中国感染控制杂志,１４(６):３７９-３８２．（收稿日期：２０２０-０１-３１ 修回日期：２０２０-０２-１１）（本文编辑：张萍）㊃１２㊃中国循证儿科杂志２０２０年２月第１５卷第１期。
下呼吸道感染细菌学检验操作规范(1)
下呼吸道感染细菌学检验操作规范(1)下呼吸道感染细菌学检验操作规范近年来，下呼吸道感染病例不断增加，给医疗卫生事业带来了严峻的挑战。
为了确保下呼吸道感染病例的快速、准确、可靠的检测和诊断，制定下呼吸道感染细菌学检验操作规范，将有助于提高检验水平和工作效率，本文将针对细菌学检验操作规范进行详细介绍。
一、检验前准备1. 确定样本种类：本次检验需使用的下呼吸道标本种类有：痰、咽拭子或喉拭子等。
2. 样本采集：根据患者的情况进行样本采集，采集时要求患者咳嗽并咳出深部痰液，若患者不配合，则可采用吸痰管等工具进行痰液采集。
同时也可以采用喉拭子或者咽拭子进行标本采集。
3. 样本处理：对采集的样本，应及时送到检验室进行处理，加工前需要做出相应的标签，记录样本采集时间、采集标本证号、病人基本信息等。
二、操作流程1. 样本处理(a) 痰液标本处理方法：对于痰液标本，先进行分液处理，即分离痰液中的黏液、脓液、红细胞和有机杂质等。
然后以0.9%氯化钠溶液洗涤一次，摇匀后进行离心（5000r/min，10min）。
(b) 咽拭子或喉拭子标本处理：将采集的咽拭子或喉拭子样本转移到含有0.9%氯化钠溶液的离心管中，然后离心（5000r/min，5min），离心后取上清液进行下一步检验。
2. 检测**(a) 涂片制备：将上述处理后的纯化液采用无菌钢丝圈或无菌载玻片刷取标本并均匀涂在两张干净的干燥擅菌片上，干燥后送至乙醇固定。
(b) 染色：采用Gram染色方法进行染色，首先用碘酒凝固后，将菌片在床头火上迅速脱色，用80%乙酸洗去多余的碘酒和颜料，再冲洗水清洗，细心观察染色质量，必要时要反复染色。
(c) 细菌形态观察：观察染色后菌的形态。
非典型革兰氏染色细胞如需观察需通过进一步检验的手段，如选择恰当的培养基及培养条件等。
(d) 培养：将涂片标本在含有相应营养物质的培养基上培养，观察菌落的形态及生理生化特性，以进行分类鉴定。
常用的培养基及相应的菌种分类可参见《常用细菌分类鉴定表》。
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新型冠状病毒感染的肺炎患者下呼吸道标本采集操作规程
下呼吸道标本分为三种：痰液、支气管细胞灌洗液、支气管分泌物，主要以痰液为主。
采集方法包括：自行咳痰法、吸引器经口鼻吸痰法、支气管镜下留取标本法。
一、目的：
取患者下呼吸道分泌物做病毒分离，以帮助诊断。
二、评估：
1、评估患者：
（1）双人核对医嘱，打印标签，准备无菌痰杯或一次性痰液收集器。
（2）核对患者，了解患者病情、咳嗽咳痰情况。
（3）向患者解释，取得配合。
2、评估环境：
安静整洁、宽敞明亮、室温适宜、光线充足。
三、操作前准备：
（1）人员准备：防护级别：三级防护（医用防护口罩、一次性帽子、防护服、护目镜、防护面屏、乳胶手套2双、防护靴套）。
（2）物品准备：治疗车上层：无菌痰杯或一次性痰液收集器、温开水、漱口杯、负压吸引装置一套（检查处于备用状态）、一次性吸引器连接管、密封袋2个、75%酒精、纱布数块、快速手消液、必要时备口咽通气道。