上呼吸道标本的采集和处理
呼吸道标本采集和结果解读
病毒种 流感病毒 呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、副流感病 毒、人类偏肺病毒
风疹病毒 鼻病毒、柯萨奇病毒和埃可病毒的部分型别 腺病毒 人类冠状病毒、SARS冠状病毒 单纯疱疹病毒、带状疱疹、EB和CMV 人类博卡病毒 呼肠孤病毒（1，2，3，4型）
真菌涂片或其他真 支气管抽吸物 菌染色方法
无菌杯或管，室温，2h
真菌培养
支气管肺泡灌洗液；
PSB
半 乳 甘 露 聚 糖 血清
（GM）
支气管肺泡灌洗液
1-3 β-D 葡 聚 糖
（G）
促凝管，室温，立即送检 无菌杯或管，室温，2h
20
老年CAP患者的病原学诊断方法
老年CAP患者的病原学诊断
血培养
染色法
芽窄食单胞菌、金黄色葡萄球 革兰染色
痰 ； 支 气 管 抽 吸 物 ；无菌杯或管，室温，2h
菌和MRSA、流感嗜血杆菌 定量或半定量需氧 支气管肺泡灌洗液；
和厌氧细菌培养 PSB；肺组织
肺炎链球菌 混合厌氧菌（吸入）
曲霉菌属
同上
革兰染色 培养
尿液
PSB标本 肺组织
无菌容器，室温，2h
无菌管；无菌容器放组织； 室温，2h
咽拭子的采集方法
用拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁（3-5次）
9
上呼吸道感染标本的采集
咽拭子的采集
正确拿咽拭子的方法
错误拿咽拭子的方法
上呼吸道感染标本的采集
鼻 拭 子 标 本 的 采 集
请患者头部保持不动，将拭子轻轻转动缓缓插入患者鼻腔，不要用力， 当遇到阻力后即到达后鼻咽，停留数秒吸取分泌物，轻轻旋转取出拭子
呼吸道标本细菌学检验
呼吸道标本细菌学检验标准操作程序1.检验目的规范呼吸道标本细菌学检验操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。
3.标本采集与运送3.1 采集时间以晨痰为好。
3.2 采集方法3.2.1 自然咳痰法用清水反复漱口后从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内。
3.2.2 气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。
3.2.3 气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
3.2.4 呼吸机采集法使用呼吸机的病人，可利用呼吸机吸取深部痰入专用采集器内送检。
3.2.5 为了明确扁桃体炎、会厌炎、鼻咽部化脓性感染的病原体，可以采集拭子送检。
首先拭子用无菌生理盐水沾湿，然后用力在感染部位擦拭，采集标本与无菌管送检。
3.3 标本运送3.3.1 采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2h。
3.3.2 延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保存（疑为肺炎双球菌、流感嗜血杆菌等苛氧菌感染除外），以免杂菌生长，但必须在24h内处理。
3.3.3 对可疑烈性呼吸道传染病的患者检验标本，在采集、运送及保存过程中必须注意生物安全防护。
4.检验步骤4.1接种：用无菌拭子蘸取脓性部分，接种于血平板和巧克力平板第一区，再用一次性接种环分区划线接种。
4.2 涂片在接种的同时进行涂片。
用铅笔在磨砂部位编号，每片只涂一份标本。
4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。
4.4 涂片染色镜检：涂片革兰染色，自然干燥后镜检。
先用低倍镜浏览整片，计数平均每个低倍视野WBC、上皮细胞的数量。
标本合格与否参考表1，合格标本再用油镜观察，主要观察片中主要细菌类型、WBC内吞噬什么细菌等，以作为看板时决定什么细菌要做的依据。
表1 痰液标本分级4.5 培养结果观察4.5.1 口咽部正常寄生的需氧菌主要是腐生的奈瑟菌、草绿色链球菌，4.5.2 有明确意义的病原菌： A群溶血性链球菌(咽炎)、流感嗜血杆菌（b型5y以下儿童急性会厌炎、急性支气管炎）、肺炎链球菌（急性支气管炎常继发于病毒感染、大叶性肺炎）、百日咳鲍特菌（咳嗽、支气管扩张）、金黄色葡萄球菌（肺炎）、军团菌（肺炎）、白喉棒状杆菌。
呼吸道标本细菌学检验操作规程SOP
呼吸道标本细菌学检验操作规程（一）目的：规范呼吸道标本细菌学检验,确保检验结果准确可靠。
（二）适用范围及操作人员：呼吸道标本培养和涂片检检查；检验科工作人员。
（三）支持性文件：《WST805-2022临床微生物检验基本技术标准》、《下呼吸道感染细菌培养操作指南》、《全国临床检验操作规程》。
（四）标本类型：痰、咽拭、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺液等。
（五）标本采集时间：尽量在抗生素使用前采集。
（六）标本采集方法:1、咳痰：适用于肺部感染患者,特别是重病监护室(ICU)及住院的社区获得性肺炎(CAP)、慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)、肺脓肿(咳痰非最适标本)、可疑细菌性病原体引起的肺部感染患者。
咳痰前,患者用无菌生理盐水漱口;指导患者咳出深部痰,勿留取唾液和鼻咽腔分泌物。
2、气管吸出物：仅当气管插管的患者出现肺炎症状时(如发热或浸润),可采集气管吸出物标本。
从气管中吸痰，用无菌容器留取送检。
3、支气管肺泡灌洗液：利用纤维支气管镜向小支气管和肺泡中注入无菌生理盐水灌洗,在40mL～80mL回收的灌洗液中包含约1mL支气管末梢和肺泡中的分泌物;弃去前段可能污染的部分,收集其余部分后立即送检。
4、保护毛刷标本：将纤维支气管镜插入亚段支气管可疑感染部位,经支气管镜刷检孔推出双层套管中的毛刷(远端填塞聚乙二醇),刷取脓性分泌物,采样后将毛刷回收入双层套管并退出纤维支气管镜,用无菌剪刀剪断毛刷,置于含lmL生理盐水的无菌容器中(仅供需氧培养),快速送检。
5、气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
6、棉拭采集法用无菌棉拭子轻轻擦拭病人鼻咽部黏膜，留取标本，置无菌试管内送检。
（七）标本拒收标准：1、申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。
2、痰标本呈水样或唾液样。
3、痰涂片白细胞<10／低倍视野，上皮细胞>25／低倍视野。
4、标本容器溢漏，无瓶盖。
5、痰标本留取放置时间太长，超过2小时。
呼吸道标本的采集与送检要求
呼吸道标本的采集与送检要求1.采集标本的选择：常用的呼吸道标本有咽拭子、喉拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液等。
对于喷嚏液或唾液等非特异性标本的采集，不推荐用于病原体的检测。
2.采集时间：最佳的标本采集时间是在症状出现后24小时内采集，对于特定病原体如流感病毒等，应在症状出现48小时内采集。
3.采集方法：采用无菌的采集器具，如棉签、拭子等。
采集咽拭子时，应当将拭子的头部置于扁桃体和咽后壁的分泌物位置，不应担心引起患者咳嗽反射。
鼻拭子的采集方法是将拭子插入鼻腔内，盘旋擦拭鼻腔黏膜。
4.采集指导：采集者应经过专业培训并熟悉标本采集的技术要领。
采集过程中需要保持呼吸道的湿润，确保采集到的标本质量。
5.标本保存与运输：采集得到的标本应立即置于透明的标本袋中，封口完好。
若运输时间不长，可将标本放入4℃冰箱保存，不得冷冻。
如果运输时间较长，应采用冷冻方式运输（-20℃）。
运输过程中应尽量避免震动或损坏。
6.标本的处理：采集得到标本后，应尽快送往实验室进行处理。
痰液在送往实验室前应保持在4℃存放。
对于支气管肺泡灌洗液等标本，需要在接收实验室前制备样本。
7.实验室检测：送往实验室后，应当及时进行病原体的检测。
常用的检测方法包括细菌培养、病毒核酸检测（如PCR）、真菌培养等。
根据病情需要，还可以进行药敏试验、抗体检测等。
8.结果解读与报告：实验室所得结果需要专业人员进行解读，并及时生成报告。
报告应如实反映标本的检测结果，并提供相应的临床意义和建议。
在进行呼吸道标本的采集与送检时，需要确保采集者具备必要的知识与技能，并严格按照采集与送检要求进行操作，以保证最终的结果准确可靠，为诊治提供有力的支持。
新冠核酸检测标本采集、送检、处理流程(核酸检测)
新冠核酸检测标本采集、送检、处理流程
(核酸检测)
新冠病毒核酸检测标本采集、送检、处理流程
对于疑似或确诊新冠病毒感染患者，需要进行核酸检测。
下面是标本采集、送检、处理的流程。
1.医生开具医嘱，通知检验科负责人___。
检验科领取专
用采集管和转运箱。
2.采集标本时，采集者需要穿戴三级生物安全防护装备。
上呼吸道标本采集咽拭子和鼻拭子各一根，放入同一根核酸标本管中。
下呼吸道标本采集深咳痰液、呼吸道吸取物或支气管/肺泡灌洗，将标本放入内层小密封袋内，密封后用75%酒精
消毒外侧，再放入外层大密封袋内，同样用75%酒精消毒外
侧（双层密封袋开口均向上）。
标本垂直放置于专用转运箱内。
3.标本转运时，由专人进行核对、交接、登记，并单独转运至检验科双开门通道，交给PCR实验室人员。
4.PCR实验室人员确认转运箱后，在生物安全柜内打开转运箱（开箱瞬间喷洒75%酒精），取出标本并在56℃下灭活30分钟。
采样管降至常温后，在生物安全柜内打开并使用后的标本密封袋封口后，放入双层黄色垃圾袋内（袋内含有效氯含量1000mg/L的消毒剂）。
5.操作完成后，对生物安全柜进行75%酒精喷洒消毒，并开启紫外灯照射30分钟。
所有实验完成后，向科主任报告检测结果，科主任报告医院领导及医务部门。
消毒后的标本转运箱交给专人处理。
常见标本的采集及相应标本的微生物分布情况
生殖道标本采集
注意事项 生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格
遵循无菌操作以减少杂菌污染
生殖道标本采集
粪便标本采集及常见病原菌
采集方法
1、自然排便采集法：自然排便后，挑取有脓血 或粘液部位的粪便，液状粪便取絮状物盛于 无菌容器中及时送检
2、直肠拭子采集法：适用于排便困难患者或婴 幼儿。用肥皂水清洗肝门周围，用无菌盐水、 保存液润湿肝门采集拭子插入肝门（成人约 4~5cm,婴幼儿约2~3cm）轻轻旋转，采集后 及时送检
标本采集的一般原则
早期采集 采集标本最好是在病程早期、急性
期，且必须在使用抗菌素药物之前
严格无菌操作 尽量减少或避免与病灶周围正常
菌群和外源性细菌污染标本（如中段尿标本及阴道 分泌物的采集）
采集适量标本 标本量过少可能导致假阴性结果 盛放标本容器 无菌容器
血液及骨髓标本采集及常见病原菌
2、闭锁性脓肿：闭锁性脓肿标本指有完整脓壁 与体腔，与外界不相通的脓肿，如淋巴结脓 肿、乳腺脓肿、胸腔脓肿、腹腔积液、关节 腔积液及各器官脓肿等标本。之类标本应采 集渗出物和脓肿壁标本，一般不主张用拭子 采集标本，采集此类标本前应对病灶局部皮 肤或粘膜表面进行消毒，用无菌注射器将脓 肿内容物抽出，然后切开脓肿、引流，采集 脓液标本（大于1ml）送检。
3、如标本注入无菌试管时，试管应用先加入灭菌肝 素后在注入标本，防止标本凝固；另一方面是由于 标本在接种时发生二次污染的机会较大，本人建议 少用。
穿刺液标本采集及常见病原菌
注意事项 1、标本采集过程严格无菌操作，防止污染。 2、为了防止标本凝固，最好在无菌试管中预先
加入灭菌肝素抗凝剂，抗凝剂：标本=1：10 或可以直接注入血培养瓶送检 3、标本送检过程中必须保证其安全，防止溢出， 避免环境污染。 4、此类培养时最好同时做血培养
呼吸道标本的采集、储存和运送规范
㊃ＣＯＶＩＤ-１９特稿标准／指南㊃ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３-５５０１．２０２０．０１．００５呼吸道标本的采集㊁储存和运送规范杨童玲１，３ 夏爱梅１，３ 胡晓静１ 余艮珍２ 史 欢２ 顾 莺１ 张晓波１ 王传清１ 张崇凡１ 黄国英１作者单位 １复旦大学附属儿科医院 上海，２０１１０２；２华中科技大学同济医学院附属同济医院 武汉，４３００３０；３共同第一作者通讯作者 张崇凡，Ｅ-ｍａｉｌ：ｘｔ２１１３１１＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ；黄国英，Ｅ-ｍａｉｌ：ｇｙｈｕａｎｇ＠ｓｈｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ流感病毒检测最常见的是采集呼吸道标本，可采用拭子㊁刷子㊁吸出物和灌洗液获取呼吸道标本，可以采集鼻咽㊁口咽㊁鼻孔等㊂曾使用培养法或直接法荧光抗体法进行检测［１，２］，现以逆转录多聚酶链反应（ＲＴ-ＰＣＲ）方法，可以通过样本中少量的病毒核酸扩增而提高检测率［３］㊂急性严重呼吸综合征冠状病毒２（ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２）感染流行期间，ＲＴ-ＰＣＲ是ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染确诊的首选方法［４，５］㊂检测准确性最高的标本是下呼吸道标本，但属于有创性操作㊂由于核酸扩增检测可以检测更低浓度的病毒，并且不需要细胞的存在，因此喉部拭子或唾液样本可能是进行分析的合适样本［６］，但其检出率低于８３％［７］㊂相对无创而准确率高的是鼻咽抽吸物标本，能提供高浓度的感染细胞㊂对于儿童，采集一个口咽拭子和一个鼻部拭子的准确性相当于鼻咽拭子的准确性［８］，是检测准确性与无创性采集的理想搭配㊂但临床上为了避免假阴性，通常会同时采集一个口咽拭子和一个鼻咽拭子㊂口咽拭子的采集相对比较简单，鼻咽拭子的采集需要经过培训，而且鼻咽拭子的采集过程可能会引发患者打喷嚏或者咳嗽而导致气溶胶的产生，存在交叉感染的风险［９］㊂本文基于新型冠状病毒肺炎（ＣＯＶＩＤ-１９）作为乙类传染病甲类管理办法，介绍呼吸道标本的采集㊁贮存和运送［１０，１１］㊂１ 采集对象ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染的ＣＯＶＩＤ-１９疑似病例㊁疑似聚集性病例，其他需要进行ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染诊断或鉴别诊断病例，确诊的ＣＯＶＩＤ-１９是否康复的鉴别病例，或其他需要进一步ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染筛查检测的环境或生物材料㊂２ 采集者从事ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２检测标本采集的技术人员应经过生物安全培训且为合格者和具备相应的实验技能㊂按照‘儿童新型冠状病毒感染／肺炎疑似和确诊病例快速筛查和临床实践指南“［１２］的要求使用三级防护，最好使用全面型电动送风呼吸器面罩进行有效防护㊂３ 采集标本ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２初步诊断测试，中国疾病预防控制中心（ＣＤＣ）建议收集和检测咳嗽患儿的上呼吸道（鼻咽和口咽拭子）和下呼吸道（痰，如果可能）的样本㊂按照国家卫健委ＣＯＶＩＤ-１９诊疗方案（试行第六版）的要求，尽可能留取痰液标本，气管插管患者采集下呼吸道分泌物标本㊂４ 采集标本时机临床怀疑ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染应立即向当地卫生部门报告，当地公共卫生工作人员将确定患者是否符合ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染调查对象的标准㊂临床标本应在临床或公共卫生实验室采集，用于常规呼吸道病原体检测㊂临床实验室不应从ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染者采集的样本中分离病毒㊂一旦确定了符合ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染对象，应尽快采集样本㊂５ 采样管及其保存液上㊁下呼吸道标本采集后均置于含３ｍＬ病毒保存液的采样管中，推荐以Ｅａｇｌｅ'ｓ基础培养液为基础的保存液㊂保存液中也应添加胎牛血清或牛血清白蛋白等稳定病毒的蛋白质外壳的添加液㊂除此之外，还应添加青霉素㊁链霉素㊁庆大霉素及多黏菌素Ｂ等抑制细菌生长，保存液提供的样本基本是活病毒，可以最大程度保持样本的原始性，后续不仅可以用于病毒的核酸提取检测，还可用于病毒的培养和分离㊂６ 采样拭子应选用合成纤维或人造纤维，不推荐海绵或棉花拭子，棉花的纤维对蛋白质吸附较强，导致病毒不易洗脱到保存液中，也不推荐尼龙类的纤维，其吸水性不佳，导致采样量不足，影响检出效率㊂７ 样本的储存和拒收原则上样本应立即送检㊂以下是各种储存必需的条件：①采集后，应贴上相应的标签，样本可在４ħ以下保存㊃９１㊃中国循证儿科杂志 ２０２０年２月第１５卷第１期７２ｈ，②如果预计提取检验会延迟，则将样本储存在－７０ħ或更低的温度，③提取的核酸应储存于－７０ħ或更低的温度㊂拒收的样本包括：①没有保存在２ ８ħ或－７０ħ或以下的样本；②样本标签或资料不完整；③样本类型不合适；④样本量不足㊂８ 样本的运送①运送人员防护要求：需对运送人员进行专业培训，做好二级防护，目前中国的标本运送由ＣＤＣ的专业人员来取，工作人员通道进入，污染通道离开㊂②样本需要双层密封袋密封，每袋装１份标本，将样本储存在４ħ，并使用密封的标本转运箱（内附有冰袋）立即运送㊂在每个样本容器上贴上患者的具体信息㊁样本的具体信息㊂为每个提交的样本填写卫生行政部门要求的表格㊂③如果样本在－７０ħ下冷冻，运输时则将其放在密封的标本转运箱（内附有干冰）连夜运送，如无－７０ħ保存条件，则于－２０ħ冰箱暂存㊂９ 加强沟通临床和实验室工作人员之间的及时沟通很重要，这样才能在处理可能ＳＡＲＳ-ＣｏＶ-２感染病例的标本时将感染的风险降到最低㊂１０ 上呼吸道标本采集１０．１ 口咽拭子 ①视野要求：口咽拭子取样时，应该在良好的照明条件下，使用一次性压舌板来确保咽喉部有足够的视野，压舌板将舌压到一边，避开舌头，拭子擦拭扁桃体（图１Ａ㊁Ｂ）㊂②口咽拭子材质的要求：只能使用带塑料柄的合成纤维棉签，不能使用海藻酸钙拭子或带木柄的拭子，因为它们可能含有灭活某些病毒和抑制ＰＣＲ检测的物质㊂③患儿体位和口腔防护要求：患儿取坐位或卧位，采集者坐在患儿对面，以能够看清患儿口咽部扁桃体为准，采集的时候要让患儿头部上抬３０度，采集时患儿应该用口罩罩住鼻部，减少喷嚏或咳嗽飞沫飞溅（图１Ｃ）㊂④取材要求：将口咽拭子深入口咽部，在原位最好保持１０ｓ以吸收分泌物，用拭子棉签同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，轻度用力拭抹咽后壁部位，应避免触及舌部㊂将口咽拭子棉签头浸入采样管中，尾部弃去，旋紧管盖㊂１０．２ 鼻咽拭子采集（图１Ｄ㊁Ｅ） ①鼻咽拭子材质要求同口咽拭子㊂②准备含３ｍＬ病毒保存液的采样管备用㊂③患儿体位和口腔防护要求：患儿头部后仰７０度，采集时患儿应该用口罩罩住下颌，减少咳嗽飞沫飞溅，取材人站在患儿侧方，防止飞沫飞溅㊂④鼻咽拭子棒长度要求：可以用鼻咽拭子棒测量一下，量出耳根到鼻孔的距离，并用手指做标记㊂⑤体验要求：将采样拭子以垂直鼻子（面部）方向插入鼻腔，与上颚平行，拭子伸入距离最少应达耳垂部位到鼻尖长度的一半，如果能够达到先前估计的深度最好，可有阻挡感㊂⑥取材要求：深入鼻咽部，使拭子在鼻内停留１５ ３０ｓ，轻轻旋转３ ５次，以吸收分泌物，然后抽出拭子㊂⑦取材后要求：将鼻咽拭子棉签头浸入采样管中，尾部弃去，旋紧管盖㊂图１ 上呼吸道标本采集注 Ａ：扁桃体；Ｂ：鼻咽１１ 下呼吸道标本１１．１ 支气管灌洗液 将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管，见患儿有咳嗽反射后再稍微深入１ｃｍ后，注入５ｍＬ温生理盐水，开放负压，旋转收集器头部并缓慢退出，收集抽取的黏液于病毒采样管中㊂１１．２ 肺泡灌洗 该方法适合危重患儿，患儿往往因为呼吸衰竭或肺不张需要行气管插管或纤维支气管镜灌洗，便于获取肺泡灌洗液标本，需要在支气管镜室局麻下行电子支气管镜术㊂支气管镜由左鼻孔进入气管㊁支气管后，镜端固定于右／左肺中叶开口，经气管活检孔缓缓加入灭菌温生理盐水，每次８ｍＬ灌洗２ ３次，灌洗后吸出［１３］，收集至采样管中㊂１１．３ 鼻咽和气管抽吸 婴幼儿多需要采用该途径采集标本，使用痰液收集器连接负压吸引器，痰液收集器前端的吸痰管深入到患儿气道内，见患儿有咳嗽反射后再稍微深入１ｃｍ后开放负压，吸出２ ３ｍＬ呼吸道分泌物至采样管中㊂参考文献[１]ＬｏｅｎｓＫ,ＶａｎＨｅｉｒｓｔｒａｅｔｅｎＬ,Ｍａｌｈｏｔｒａ-ＫｕｍａｒＳ,ｅｔａｌ．Ｏｐｔｉｍａｌｓａｍｐｌｉｎｇｓｉｔｅｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｓｐｏｓｓｉｂｌｙｃａｕｓｉｎｇｃｏｍｍｕｎｉｔｙ-ａｃｑｕｉｒｅｄｌｏｗｅｒｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｔｒａｃｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ,４７(１):２１-３１[２]ＲｏｂｉｎｓｏｎＪＬ,ＬｅｅＢＥ,ＫｏｔｈａｐａｌｌｉＳ,ｅｔａｌ．Ｕｓｅｏｆｔｈｒｏａｔｓｗａｂ㊃０２㊃ＣｈｉｎＪＥｖｉｄＢａｓｅｄＰｅｄｉａｔｒ Ｆｅｂｕｒａｒｙ２０２０，Ｖｏｌ１５，Ｎｏ１ｏｒｓａｌｉｖａｓｐｅｃｉｍｅｎｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｖｉｒｕｓｅｓｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎ．ＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,４６(７):ｅ６１-６４[３]ＣｅｎｔｅｒｓｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ(ＣＤＣ)．ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｒａｐｉｄｉｎｆｌｕｅｎｚａｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｔｅｓｔｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｏｖｅｌｉｎｆｌｕｅｎｚａＡ(Ｈ１Ｎ１)Ｖｉｒｕｓ-ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓ,２００９．ＭＭＷＲＭｏｒｂＭｏｒｔａｌＷｋｌｙＲｅｐ,５８(３０):８２６-８２９[４]国家卫生健康委．关于印发新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)的通知(２０２０-０２-１８)．ｈｔｔｐ:／／ｗｗｗ．ｎｈｃ．ｇｏｖ．ｃｎ／,２０２０．０２．１８[５]ＣｏｒｍａｎＶＭ,ＬａｎｄｔＯ,ＫａｉｓｅｒＭ,ｅｔａｌ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ２０１９ｎｏｖｅｌｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ(２０１９-ｎＣｏＶ)ｂｙｒｅａｌ-ｔｉｍｅＲＴ-ＰＣＲ．ＥｕｒｏＳｕｒｖｅｉｌｌ,２０２０,２５(３)．ｄｏｉ:１０．２８０７／１５６０－７９１７[６]ＷａｎｇＷＫ,ＣｈｅｎＳＹ,ＬｉｕＩＪ,ｅｔａｌ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳＡＲＳ-ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｉｎｔｈｒｏａｔｗａｓｈａｎｄｓａｌｉｖａｉｎｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓ．ＥｍｅｒｇＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,２００４,１０(７):１２１３-１２１９[７]ＲｏｂｉｎｓｏｎＪＬ,ＬｅｅＢＥ,ＫｏｔｈａｐａｌｌｉＳ,ｅｔａｌ．Ｕｓｅｏｆｔｈｒｏａｔｓｗａｂｏｒｓａｌｉｖａｓｐｅｃｉｍｅｎｓｆｏｒ１８１ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｖｉｒｕｓｅｓｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎ．ＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,４６(７):ｅ６１-６４[８]ＳｐｅｎｃｅｒＳ,ＴｈｏｍｐｓｏｎＭＧ,ＦｌａｎｎｅｒｙＢ,ｅｔａｌ．ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＳｐｅｃｉｍｅｎＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＩｎｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓＩｎｆｅｃｔｉｏｎｂｙＲＴ-ＰＣＲ:ＡＬｉｔｅｒａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗ．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ,５７(９),ｐｉｉ:ｅ０００２７－１９[９]ＴｅｌｌｉｅｒＲ．ＲｅｖｉｅｗｏｆａｅｒｏｓｏｌｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｏｆｉｎｆｌｕｅｎｚａＡｖｉｒｕｓ．ＥｍｅｒｇＩｎｆｅｃｔＤｉｓ,２００６,１２(１１):１６５７-１６６２[１０]国家卫生健康委．新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南(第三版)．２０２０．０１．２８[１１]ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｆｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＣＯＶＩＤ-１９ＲｅｑｕｅｓｔｓｆｏｒＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＰａｎｅｌｓａｎｄＶｉｒｕｓ．ｈｔｔｐｓ:／／ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ／２０１９-ｎｃｏｖ／ｌａｂ／ｔｏｏｌ-ｖｉｒｕｓ-ｒｅｑｕｅｓｔｓ．ｈｔｍｌ[１２]复旦大学附属儿科医院．儿童新型冠状病毒感染／肺炎疑似和确诊病例快速筛查和临床实践指南．中国循证儿科杂志,１５(１):１-４[１３]黄宝兴,邓继岿,王红梅．１６９３例难治性肺炎患儿支气管肺泡灌洗液病原体培养分析．中国感染控制杂志,１４(６):３７９-３８２．（收稿日期：２０２０-０１-３１ 修回日期：２０２０-０２-１１）（本文编辑：张萍）㊃１２㊃中国循证儿科杂志２０２０年２月第１５卷第１期。
呼吸道标本的采集与送检要求
3. 对可疑烈性呼吸道传染病（SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）的患者 标本，在采集、运送或保存过程中必须注意生物安全保护。
二、临床微生物标本转运要求 1. 密闭运送原则。 2. 及时运送原则。 3. 生物安全原则，运送箱三层包装。
键（更加重要）。 4. 改善患者全身情况。
标本采集送检频次
一、怀疑普通细菌性肺炎： 1. 每天一次，连续2-3天。如果每天均报告同一种菌，
且++或+++，则有临床意义，但实际情况每天大多报告不 同菌。
2. 不建议24h内多次采集。
3. 关于是否一定要采集晨起第一口痰的质疑？——因第 一口痰会受胃肠道和口咽部细菌的影响，并存在过早采 集无法保证及时送检等问题。所以实际临床操作中只要 方便采集，正规口腔处理，及时送检，并非必须晨起第 一口痰。
一份培养结果与多个环节相关，最 关键的因素就是标本的正确采集与运 送!!!
感染的病原体是 什么？
是不是很难确诊 哪个是真正的致
病菌？ Why？
微生物检测背景及流程
一、常规项目检验时间： 标本接收（1-2min）——标本接 种、涂片（5min）——细菌培养 （18-48h）——细菌鉴定、药敏 试验（18-24h或48小时）——结 果报告（5min）
2. 经人工气道吸引分泌物：是目前临床较为常用的微 生物标本。但由于这些宿主的气管纤毛黏液防御机制受 到损害，有学者提出此法的标本应该先做细胞学筛选。
五、培养阳性细菌都需要抗菌药物治疗吗？ 1. 不是，培养阳性≠感染，可能为污染（血培养），可
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上呼吸道标本的采集和处理
一、检验项目
上呼吸道标本的细菌培养、真菌培养、结核菌培养、真菌涂片、结核菌涂片。
二、标本采集
【标本采集前的注意事项】
应在抗生素应用前或停药一周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集。
【标本送检指征】
1.病毒性普通感冒伴有明显咽痛时，怀疑为咽部链球菌感染，应做细菌培养。
2.细菌性咽－扁桃体炎：明显咽痛、畏寒、发热，体温可达39℃以上。
3.上呼吸道感染易并发鼻窦炎、中耳炎、气管－支气管炎，需送相应部位分泌物或痰液进行细菌培养。
【标本采集容器】
咽拭子或鼻咽拭子。
【标本的采集方法】
嘱患者用清水反复漱口，由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，用无菌棉拭子通过舌根到咽后壁或腭垂的后侧，涂抹数次，拭子要避免接触口腔和舌粘膜。
【标本采集注意事项】
1.采集时间：应于抗生素应用之前。
时间上可无严格限制，但咽部是呼吸和食物的通路，也应晨起后采集为佳。
2.送检：应立即送检。
*标本运送过程中必须保证其安全，防止溢出，避免细菌污染。