质粒提取试剂盒-说明书-翻译
omga质粒提取试剂盒_说明书_翻译
omgaE.Z.N.A.质粒试剂盒操作规程说明书（译版）1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的2-5ml的LB或YT培养基进行培养。
37℃强力摇动（~300rpm）孵育20-24h。
使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。
强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。
此类菌株包括DH5α和JM109。
2. 将1.5-5.0ml细菌菌液室温13,000 g离心3min。
轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。
3. 加入200μl 的溶液Buffer T 1/Rnase A重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。
充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。
4. 加入200μl溶液Buffer T 2，倒置、转动试管5-10次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。
室温孵育5min。
不要用力混合，以免使染色体DNA断裂，减低质粒的纯度。
该步反应不要超过5min。
溶液II不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。
5. 加入200μl溶液Buffer T 3，立即倒置试管15-20次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。
冰上孵育5min。
为避免形成局部沉淀，加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。
6. 4℃13,000 g离心10分钟。
白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。
7. 小心翼翼的吸取上清液，加入到新的1.5ml离心管（不是试剂盒提供的）中。
加入200ul 用异丙醇稀释的BAC 结合液（缓冲液），颠倒3-5次充分混匀。
BAC 结合液使用前必须用96%-100%的异丙醇稀释，详细的说明见瓶壁或第三页说明书8.加入样本DNA（HiBind DNA MicroElute）到提供的2ml收集管中。
9. 室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
10. 将收集柱放回收集管并加入750ul SPM buffer（用乙醇稀释），室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
QIAGEN Plasmid Kits(德国凯杰质粒提取试剂盒说明书中文翻译)
QIAGEN Plasmid Mini,Midi,and Maxi Kits（说明书中文翻译版）Plasmid Midi Kit(cat.Nos.12143and12145)The kit can be stored at room temperature(15~25℃)for up to2years.使用前的注意事项：（1）将Rnase A solution加入Buffer P1中，混匀，2~8℃储存。
（2）可选步骤：按1:1000的比例将LyseBlue试剂加入到Buffer P1中。
（3）使用前在4℃预冷Buffer P3，检查Buffer P2是否出现SDS沉淀。
（4）需准备好异丙醇和70%酒精。
（5）标志：圆形代表小提试剂盒；三角形代表中提试剂盒；正方形代表大提取试剂盒。
表1推荐LB培养物体积试剂盒高考倍质粒低拷贝质粒小提3mL不推荐中提25mL100mL大提100mL500mL具体操作步骤：1.收取过夜培养的细菌培养物，在4℃条件下6000×g离心15min。
2.（弃去上清液）使用4mL Buffer P1重悬菌体沉淀。
3.加入4mL Buffer P2，颠倒4~6次使彻底混匀，室温（15~25℃）孵育5min。
注：如果使用了LyseBlue试剂，溶液会变蓝。
4.加入4mL预冷过的Buffer P3，颠倒4~6次使彻底混匀，冰上孵育15min。
注：如果使用了LyseBlue试剂，溶液混匀后直至蓝色消失。
5.在4℃条件下≥20000×g（14000×g）离心30min。
6.平衡柱子QIAGEN-tip100：加入4mL Buffer QBT，通过重力流使液体过柱。
7.将第5步的上清液转移至QIAGEN-tip中，使其依靠重力流通过柱中的树脂。
8.使用10mL Buffer QC洗涤QIAGEN-tip，使Buffer QC依靠重力流通过柱中的树脂。
洗涤2次。
质粒提取试剂盒说明书
质粒提取试剂盒说明书质粒提取的质量和得率受多种因素影响，既和质粒本身的性质以及拷贝有关，也和菌液的状态及实验操作有关，因此在质粒提取中的一些实验要点显得就极为重要了。
质粒提取这看似简单的实验，却暗藏杀机，下面我们来看一下在质粒提取过程中那些习以为常的实验操作中的“误会“。
通常我们会认为越多的菌液或是越浓的菌液提取的质粒会越多，但实际实验中结果并非如此。
良好菌液的标准：按1：1000的比例将菌液接种至培养基中，摇菌时间在8-12个小时，不超过16个小时。
菌液均匀悬浮于培养基中，无凝块、无沉淀，菌液的OD600吸光值在0.8-1.0之间，不超过1.2。
在提取质粒后进行凝胶电泳，如果在在超螺旋质粒的下方出现弥散条带，则是由于忘记加入RNaseA或RNaseA消化不充分，不完全降解的RNA与质粒共同被提取出来。
加入RNaseA的两个阶段：在使用试剂盒提取质粒时，菌液重悬时在P1溶液中加入RNaseA提取质粒后，在质粒溶液中加入RNaseA（试剂盒或溶液法）RNaseA的使用方法：RNaseA在质粒中的使用终浓度为20μg/ml经RNaseA孵育的质粒，需要进行纯化去除残留的RNaseA如何判断我们所使用的菌体量是否合适呢？在裂解时经几次颠倒混匀后，裂解液仍然为浑浊状态，说明未被裂解的菌体仍然悬浮在裂解液中，而充分裂解的菌体，溶液于裂解液中，裂解液呈现为澄清，质粒充分释放。
质粒小提试剂盒适合1-5 ml菌体的提取小提中量试剂盒适合5-15 ml菌液的提取中量提取试剂盒适合50-100 ml菌液的提取大量提取试剂盒适合100-200 ml菌液的提取如果我们想要增加提取的菌体量，也要相应提高所加入的裂解液体积。
质粒提取试剂盒说明书
质粒抽提：质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
实验原理：提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
详细内容请参考《分子克隆实验指南》。
另外，复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章，提供了质粒提取机理的详细解说。
碱裂解法人们使用碱与SDS裂解法从E. coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。
将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。
尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。
只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。
在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。
当用K+取代Na+时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。
在SDS存在的条件下，碱水解是一项非常灵活的技术，它对E. coli的所有菌株都适用，并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL 以上。
煮沸法煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到100℃使其裂解。
加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA 变性。
但是。
闭环质粒DNA链彼此不会分离，这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。
当温度下降后，闭环DNA的碱基又各就各位，形成超螺旋分子，离心除去变性的染色体DNA和蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。
QIAGEN最新试剂盒质粒大提操作步骤(翻译版)
QIAGEN EndoFree Plasmid Maxi KitCatalog numbers 12362 室温下15-25度存放2年。
在开始之前作如下准备1）按照说明把RNase A加到Buffer P1 中，混匀，放到2-8度储存。
选作：按照1:1000的比例把LyseBlue 加到Buffer P12）pre-chill Buffer P3 4°C存放。
3）检查Buffer P2 是否有SDS沉淀物，可以放到37℃短暂温热以便溶解分子沉淀物。
4）准备异丙醇。
5）用试剂盒提供的无内毒素的水中加入40ml的96-100%的酒精。
大量质粒提取过程在LB培养基中种植转化的E.coli菌。
使用100ml（高复制数的质粒）或者250ml（低复制数的质粒）过夜培养。
操作步骤如下1.收获LB培养过夜的细菌，在6000g，4℃条件下离心15min。
2.加入10ml Buffer P1（根据SBI要求加倍，用20ml）重悬细菌。
3. 加10ml Buffer P2（根据SBI要求加倍，用20ml），剧烈晃动离心管4-6次使其彻底混匀，室温放置5min。
如果使用了LyseBlue试剂，溶液应该变成均匀蓝色。
4.在孵育期间，打开针口的密封盖.并把过滤器放到合适的架子上。
5.加入10ml冰浴的Buffer P3（根据SBI要求加倍，用20ml）到此溶菌产物中，剧烈晃动离心管4-6次使其混匀。
如果加入了LyseBlue试剂，混匀试剂直到没有颜色。
6.将溶菌产物倒入针口密封的过滤器中，室温放置10min，不要插入活塞。
打开针口的密封盖，轻轻挤压活塞将溶菌产物过滤到一新的50ml离心管中。
7. 加2.5ml Buffer ER到过滤的溶菌液中，充分混匀10次后冰上孵育30min。
8.将QIAGEN-tip 500的柱子挂在另一离心管上，加入10ml Buffer QBT，让管中溶液通过重力滴下排空。
9.将第7步冰上孵育的溶菌液加入QIAGEN-tip柱子中让其透过树脂慢慢滴下。
GENMED 无内毒素小量质粒抽提试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60007.3 v.A GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂是一种旨在通过化学和生物裂解细胞、 沉淀、亲和树脂过滤、萃取来达到脱盐、去内毒素、去蛋白、去杂质小分子的纯化无内毒素质粒DNA的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种质粒/柯斯质粒DNA样品的制备，OD260/280在1.8-2.0之间。
产物可用于各种后续分子生物学操作。
产品即到即用，性能稳定，操作方便迅速，提取效率和纯化程度高。
技术背景内毒素（Endotoxin）是一种脂多糖（Lipopolysaccharides；LPS），革兰氏阴性细菌细胞膜的组成成分。
在质粒纯化过程中，细菌裂解释放出内毒素，伴随着质粒，严重干扰后续真核细胞的转染，尤其对于敏感的细胞株。
GENMED无内毒素小量质粒DNA制备技术综合了酶解、碱裂、煮沸等优势元素，融入了特异亲和树脂充分有效地使细菌中核酶、PCR反应抑制剂失活，并清除内毒素（低达<0.1 EU/微克）以及非DNA 分子，其效率和纯度都出乎其上。
产品内容GENMED混匀液（Reagent A）毫升GENMED裂解液（Reagent B）毫升GENMED平衡液（Reagent C）毫升GENMED去毒液（Reagent D）毫升GENMED去干扰剂（Reagent E）微升GENMED沉淀液（Reagent F）毫升GENMED清理液（Reagent G）毫升GENMED保存液（Reagent H）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED混匀液（Reagent A）和GENMED去干扰剂（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5和2毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于沉淀核酸涡旋震荡仪：用于混匀反应物37℃恒温水槽：用于孵育反应物1．加入毫升含质粒的细菌到毫升离心管（注意：确保细菌量OD600＝ ;如果细菌量不足，影响质粒提取）2．放进微型台式离心机离心秒，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED混匀液（Reagent A），涡旋震荡少许，使细菌颗粒混匀5．加入微升GENMED裂解液（Reagent B），轻轻混匀6．加入微升GENMED平衡液（Reagent C），强力涡旋震荡秒7．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）8．小心移取微升上清液到新的毫升离心管，避免絮状物9．同时移取微升GENMED去毒液（Reagent D）到另一个新的毫升离心管（注意：参见注意事项3和4）10．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）11．小心抽去上清液12．加入微升实验步骤的上清液13．涡旋震荡秒14．平放在平式摇荡仪上孵育分钟，速度为RPM15．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）16．小心移取微升上清液到新的毫升离心管，避免黑色小粒17．加入微升GENMED去干扰剂（Reagent E），混匀18．放进℃恒温水槽孵育分钟19．加入微升GENMED沉淀液（Reagent F）20．涡旋震荡秒21．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）22．小心抽去上清液23．加入微升GENMED清理液（Reagent G）24．放进微型台式离心机离心分钟，速度为0g（例如eppendorf 5415D，RPM）25．小心抽去上清液26．空气中晾干27．加入0微升GENMED保存液（Reagent H）28．放进℃冰箱里备用注意事项1．本产品为20次操作2．本产品采用特殊树脂法3．使用GENMED去毒液（Reagent D）前，充分混匀4．使用1毫升枪头，将枪头尖端部分剪去，用于移取GENMED去毒液（Reagent D）5．细菌量是个重要因素：通常1毫升细菌可获得1－5微克无内毒素质粒6．如果需要制备各种数量的细菌质粒/柯斯质粒，可订购中量和大量规格7．本公司提供GENMED RNA清除试剂盒（GMS20059）和GENMED去内毒素试剂盒（GMS20067）8．本公司提供系列质粒提取试剂产品1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定去内毒素和纯化程度高使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
提质粒试剂盒说明书
质粒大提试剂盒说明书DI1120-10（10次）RNaseA（10mg/ml）600μl溶液Ⅰ60ml溶液Ⅱ60ml溶液Ⅲ80ml漂洗液（浓缩液）2×15ml洗脱缓冲液30ml吸附柱10个收集管（50ml）10个说明书1份产品简介：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白质及细胞中其他有机化合物，一般从20-50ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取200-300μg纯净地高拷贝质粒DNA，提取率达85-90％。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
注意事项：在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（可将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀置于2-8℃保存。
如果菌液量太大，超过50 ml，会造成RNＡ消化不完全，可先加入500μl RNaseA，提出的质粒中再加入余下的100μl，2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在漂洗液中加入无水乙醇配制成工作液（如向15ml的漂洗液中加入60ml的无水乙醇）。
3、使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。
4、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后应立即盖紧盖子。
5、如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心。
操作步骤：1、收集50-100ml过夜培养的菌液11000rpm离心10分钟，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入5ml溶液Ⅰ（请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入5ml P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
ZYMORESEARCH质粒提取试剂盒说明书
ZYMORESEARCH质粒提取试剂盒说明书预期用途
本试剂盒可用于提取咽拭子样本中人上皮细胞、细菌和真菌的DNA。
本试剂盒提供的裂解液能快速有效裂解细胞，裂解产物能够直接用于PCR 扩增，并且灵敏度高，特异性强，省去了繁琐的核酸提取与纯化步骤，实现快速PCR检测。
对于病原微生物检测，流行病学调查、菌群调查及其它一些以口腔微生物为样本的核酸检测都非常适用。
操作步骤
1、待检拭子样本直接置于200IFatlyeL1中，充分搅拌洗脱拭子上的样本，在管壁挤压数次后弃拭子；
2、吹打混匀，95℃孵育5min；
3、孵育后的样本12，000rpm离心2，3min，上清可直接用于PCR扩增，上清如不立即使用，需置于-20℃长期保存。
推荐使用咽拭子DNA快速提取扩增试剂盒（荧光PCR法），货号MKNJGNSWDLAQP008。
注意：
离心后的上清加入PCR反应体系的量不宜超过总体积的5%。
如偏好较小体积的反应体系，可将裂解产物稀释5倍或10倍后用作模板；
样本要求
用专用采样拭子，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将拭子放采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥。
以上标本可立即用于测试，也可放置在-20℃条件下长期保存。
注意事项
2、如样本中扩增反应抑制物较多时，可将裂解后的上清稀释5倍作为模板，进行PCR扩增。
3、实验完毕用1%的次氯酸钠或75%酒精处理工作台和移液器。
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（适用于No. D6942, D6943 & D6944）
1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培
养基进行培养。
37℃强力摇动（~300rpm ）孵育12-16h 。
使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。
强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。
此类菌株包括DH5α和JM109。
2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。
轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。
3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。
充分重悬沉
淀对于获得高质量的DNA 非常重要。
4. 加入250μl 溶液II ，倒置、转动试管数次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。
可能需要孵育2min 。
不要用力混合，以免使染色体DNA 断裂，减低质粒的纯度。
该步反应不要超过5min 。
溶液II 不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。
5. 加入350μl 溶液III ，立即倒置试管数次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。
为避免
形成局部沉淀，加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。
6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。
白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。
7. 小心翼翼．．．．
的吸取上清液，加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。
确保离心沉淀未受扰动，确保没有细胞碎片加入到柱子中。
室温下10,000 x g 离心1分钟，使裂解液完全通过柱子。
8. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入500μl HB 缓冲液清洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完成通过柱子。
该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除，以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。
9. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清
洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完全通过柱子，丢弃滤过液。
注意：DNA 清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释（5倍稀释），如果DNA 清洗液稀
释液经过冷藏，则使用之前必须置于室温。
10. 可选步骤：重复清洗，加入另外的700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液。
11. 将空柱子≥13,000 x g 离心2min ，使柱子的基质干燥。
此步骤为关键操作，不可
遗漏。
12. 将柱子放入干净的1.5ml 微量离心管中。
将30-50μl （取决于终产物的期望浓度）
洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上，使之于室温下静置1-2min 。
≥13,000 x g 离心1min 洗脱DNA 。
可以进行二次洗脱，以收集残存的DNA 。
13. DNA 的产量和质量：分别在波长260nm 和280nm 处测定样品适当稀释液的吸光度。
DNA 的浓度计算如下：
DNA 浓度=A 260×50×（稀释倍数）μg/ml
A 260/A 280的比率可以反映核酸的纯度。
比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。
或者，DNA 的产量（及质量）有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA 样品相比较更好的予以确定。
通常情况下洗脱的大部分DNA 是超螺旋单体形式，但也可能存在串联体形式。
张小强 翻译。