活细胞共聚焦显微镜操作指南及注意事项
共聚焦开关机流程及使用注意事项
共聚焦开关机流程及使用注意事项一、开机：1．打开PSU主电源（Main），先开开关，再开钥匙。
2．打开MCPSU（含半导体激光电源405，635nm）, 直接开开关3．打开显微镜电源IX2-UCB4．打开电脑，进入共聚焦软件5．打开荧光汞灯光源（15分钟内勿开、关），根据需要开激光器（黑盒子氩离子激光器：488,515nm; 白盒子LD559nm）。
注意：开氩离子激光器时先开开关，再开钥匙。
开LD559激光器时先开开关，见绿灯(Temp）闪烁，待绿灯闪烁约5分钟完毕后，再开钥匙，此时见红灯闪烁，待红灯闪烁约5分钟完毕后即可使用。
二、关机：1．488,515nm氩离子激光器：先关钥匙由1到0，等待风扇凉下来（会听到很大的声音停止）再关开关。
2．LD激光器（559nm），先关钥匙再关开关。
3．其他部件有钥匙的先关钥匙，后关开关。
三、使用注意事项1．每次切换物镜时务必先将其落至最低位置。
每次试验结束后，务必将物镜落至最低位置，然后切换到4倍物镜处。
2．实验完毕后将手动光闸小门关闭，即由空心圈转至实心圈。
使用时开机后再将其打开。
3．调节焦距时，注意微粗调的转换，并且注意观察显示器操作界面上焦距的数值，防止焦平面调得过高使样品片损伤物镜镜头。
一般样品焦平面在正负600µm 以内。
4．只拍CCD图片时，激光器都不用开，只开汞灯即可。
汞灯光源有三个激发波段：WU 330-385nm, NIBA 470-495nm, WIG530-550nm。
汞灯光源的强弱可以用黑色光源盒子的闸调节。
5. 用镜头液擦拭镜头时，向同一个方向擦拭，不要来回擦，用力要轻。
6．通风机组的使用：先打开配电箱的绿色按钮，开启通风，再开空调。
不可单独使用空调。
关闭时，先关空调再关闭配电箱的红色按钮。
显微镜操作技巧与注意事项
显微镜操作技巧与注意事项显微镜是科学研究和教学中常用的一种工具，广泛应用于生物学、医学、物理学等领域。
正确的操作显微镜对于获得清晰的显微图像至关重要。
本文将介绍一些显微镜操作的技巧和注意事项，以帮助读者更好地使用显微镜。
一、准备工作在使用显微镜之前，我们首先需要做一些准备工作。
首先要保证工作台面干净整洁，免得影响显微镜的工作。
其次，要确保显微镜本身处于良好的状态，镜头和目镜应该没有灰尘或污渍。
最后，要提前准备好待观察的样本，使其整齐地放置在载玻片上。
二、样本安装将样本安装在载玻片上是使用显微镜的第一步。
这个过程需要非常细心和耐心。
首先，取一小滴待观察物质放在载玻片上，然后轻轻放置另一块载玻片上方使其与待观察物质接触。
接下来，用抹片夹夹住载玻片两侧并轻轻压紧，确保样本均匀分布并不易挤出。
三、调节光源光源的调节对于获得清晰的显微图像至关重要。
开始时，将光源旋至最低亮度，然后逐渐调高亮度直到观察到适当的光线。
避免直接照射样本，以免损坏细胞结构或造成观察困难。
此外，适当调节光源的角度可以避免镜面反射。
四、调节目镜和物镜调节目镜和物镜是获取清晰显微图像的关键环节。
首先，将待观察物质放置在显微镜上并用夹片夹住。
然后旋转调焦轮，使物镜与样本之间的距离逐渐缩短，直到观察到清晰的图像。
如果图像依然模糊，可以通过转动调焦轮继续微调直至满意为止。
五、调节放大倍率显微镜通常有多个放大倍率可供选择。
在观察过程中，我们可以根据需要调节放大倍率，以获取更清晰的细节。
但需要注意的是，放大倍率增加会使视野范围减小，因此在调节放大倍率时需要移动载物台，以保持观察范围。
六、控制显微镜操作时间在使用显微镜时，我们应该尽量控制每次操作的时间，避免过长或持续的观察。
过长的观察时间可能会导致目镜和电子镜发热，影响显微镜的正常运行。
此外，过度使用显微镜也会对视力造成一定的损害，因此要注意休息和眼保健。
七、妥善保存和维护显微镜显微镜的保存和维护对于其长期使用起着关键作用。
0.共聚焦显微镜样品上机前须知
细胞免疫荧光(供参考)I、步骤：一、固定：PBS 5min×3次振荡洗涤制作好的细胞爬片。
固定液覆盖细胞，RT 静置15min。
PBS 5min×3次振荡洗涤。
注：A．如果检测的目的蛋白为内源蛋白或者表达水平较低的蛋白，固定前可以尝试：用预冷的PBS或预冷的固定液替代常温的PBS清洗细胞，且固定液固定过程置于摇床上进行，目的：防止蛋白降解，避免蛋白降解，导致荧光弥散的现象。
B．如果做组织切片免疫荧光，组织样品离体后请尽快置于预冷的PBS或预冷的固定液中进行清洗和后续的固定工作，且固定液固定过程置于摇床上进行，目的：防止蛋白降解，避免蛋白降解，导致荧光弥散的现象。
二、通透化：通透液覆盖细胞，RT 静置30min。
PBS 5min×3次振荡洗涤。
三、封闭：封闭液覆盖标本表面RT（或者37℃）孵育1h。
四、一抗孵育：一抗以合适浓度稀释PBS，覆盖标本表面。
RT（或者37℃）1h或者4℃孵育过夜（可选步骤：第二天37℃复温1h）。
PBS 5min×3次振荡洗涤。
注：如果实验结果荧光信号较弱，可以尝试以较低的一抗浓度4℃孵育更长的时间（＞24h），可以提高荧光信号强度，降低荧光背景。
五、二抗孵育：荧光基团标记的二抗以合适浓度稀释于PBS，覆盖标本表面。
RT或者37℃避光孵育<60min。
PBS 5min×3次避光振荡洗涤。
注：如果实验结果荧光信号较弱，应该优先调整一抗的孵育条件（浓度、孵育温度和孵育时间），不要随意改变二抗的孵育条件。
六、染核：新鲜稀释的DAPI或者Hoechst覆盖细胞表面，RT避光静置<10min。
PBS 5min ×3次避光振荡洗涤。
七、封片：在干净的载玻片上滴一滴封片剂，将爬片的细胞面扣在封片剂上。
注：封片剂的量不宜过多，只需满足能够完全覆盖盖玻片即可。
封片剂使用量过多，会造成样品偏厚，以致使用高倍油镜时无法找到理想的焦面；封完片后，请勿挤压或大范围挪动盖玻片，避免挤压破坏细胞或组织的形态；使用有颜色的指甲油将盖玻片四周完全封紧，避免封闭剂脱水收缩，压缩组织样品。
显微镜的使用步骤和注意事项总结
显微镜的使用步骤和注意事项总结显微镜，这个听起来就有点神秘的家伙，实际上可是我们探索微观世界的好伙伴。
今天就来聊聊，怎么用好这个神器，让你在观察小小细节的时候，也能乐在其中。
1. 显微镜的准备工作1.1 检查设备首先，使用显微镜前，咱们得把设备检查得妥妥的。
你可别小看这一步，像一台机器，常常是细节决定成败。
检查显微镜的镜头、光源和载物台，看看有没有灰尘、污垢啥的。
记得，清洁的时候要小心，不要用力过猛，搞坏了就得不偿失啦。
可以用专门的清洁布，轻轻擦拭镜头，像是在呵护一个小公主。
1.2 准备样品接下来，准备你要观察的样品。
无论是叶片、细胞还是别的啥，切片的时候尽量薄一点，这样光线才能透得过去哦。
咱们可以用显微镜专用的载玻片，把样品放上去，然后再加一片盖玻片，别让它孤单。
记得加的时候要小心，避免气泡，这可是观察的死敌。
2. 调整显微镜2.1 找到合适的光源一切准备就绪后，接下来就要调整显微镜了。
打开光源，调到适合的亮度，别太亮也别太暗，毕竟我们不是在拍电影。
太亮的话，样品的细节看不清，太暗又会让你眼睛受不了，简直是“像在黑暗中摸索”。
可以根据样品的特点来调整，找个“黄金中间”点，嘿嘿。
2.2 选择合适的物镜然后，选择物镜，通常从低倍物镜开始，慢慢放大。
哎呀，这就像剥洋葱，先从外层开始，逐渐深入，等你找到合适的倍数，就能看到那些令人惊叹的细节了。
别急，慢慢来，急不得哦，耐心是发现美的关键。
3. 观察和记录3.1 观察细节当你终于调整好一切，准备观察时，记得要专注。
眼睛盯着镜头，尽量减少外界的干扰。
仔细观察那些你从未见过的微观世界，兴奋的感觉就像打开了一个宝藏。
发现奇妙的细节时，心里那种“哇塞”的感觉真是无与伦比。
3.2 记录观察结果最后，观察完后，别忘了记录你的发现哦！可以画个图或者写点文字，把那些小细节记录下来。
以后回头看时，像是在翻阅一本微观世界的日记，感觉特别有成就感。
记录的同时，也能帮助你整理思路，理清观察的脉络，简直是“两全其美”。
显微镜的使用方法步骤和注意事项
显微镜的使用方法步骤和注意事项嘿，朋友们！今天咱就来唠唠显微镜的使用方法步骤和那些得注意的事儿。
你可别小瞧这显微镜，它就像是咱的超级眼睛，能带着咱看到平时根本看不到的微小世界呢！就好像你突然有了一双能穿透微小缝隙的神奇眼睛。
先说说使用方法步骤哈。
咱得先把显微镜从它的“小窝”里小心翼翼地请出来，轻拿轻放，可别毛手毛脚的。
然后呢，找个平稳的地儿把它放好，就像给宝贝找个安稳的床一样。
接下来，把你要观察的东西放上去，这就好比给它准备了一道“大餐”。
这时候，你就得调整焦距啦！就跟你戴眼镜找最清楚的那个点一样，得慢慢调，急不得。
你得一点一点地转动那个旋钮，直到你看到的图像清晰得像刚洗过的玻璃一样。
哎呀，那感觉，真的是太奇妙啦！等你看到了清晰的图像，就好好欣赏吧，就像你发现了一个神秘的宝藏世界一样。
不过，这里面可有不少要注意的地方呢！你可别不当回事儿。
比如说，放样本的时候，你得轻点儿，别把它弄伤了呀，它可娇贵着呢！还有调焦距的时候，别使太大劲，万一弄坏了咋办呢？那可就糟糕啦！而且啊，用完显微镜可得好好给它擦擦，让它干干净净的，下次还能更好地为咱服务呢，你说是不是？再就是，别老用手去摸镜片啥的，那上面要是有了指纹，不就看不清了嘛。
就好像你眼镜上有个手印，你还能看清东西吗？肯定不行呀！还有啊，别把显微镜放在太潮湿或者太脏的地方，它也爱干净，也需要一个舒适的环境呢。
总之啊，用显微镜就像是照顾一个小宝贝，得细心、耐心，还得有爱心。
只有这样，你才能真正发挥它的作用，看到那些神奇的微小世界。
你想想，当你通过显微镜看到那些平时看不到的小生物在活动，那是多么有趣的一件事儿啊！所以啊，大家一定要好好对待显微镜，让它成为我们探索微小世界的好帮手！咱可不能浪费了这么个好东西呀！原创不易，请尊重原创，谢谢!。
共聚焦显微镜使用规章(暂行)
共聚焦显微镜使用规章（暂行）为保证共聚焦显微镜正常和充分的利用，维护好使用秩序，更好的为各位服务，特制订本规则，请切实严格遵守。
一、简介：共聚焦显微镜为蔡司LSM710，位于生科楼D511室，该显微镜有优异的灵敏度、反差度和稳定性，可广泛用于细胞与组织的免疫荧光染色实验、活细胞成像实验、以及光漂白实验等，结合软件的强大功能，可对图片做各种后期处理，如进行组织切片的3D重构，荧光强度的定量检测以及共定位系数的测定等。
本显微镜配备物镜倍数为10×、20×、40×和63×，激发光源为405 nm、458 nm、488 nm、514 nm、543 nm和633 nm。
二、预约规则：1、对外开放时间暂定为每周一、三下午14点至17点，其他时段需与管理员沟通协调。
预约仅限2周之内，并至少提前24小时。
由管理员按预约先后安排实验。
如预约取消或更改，需至少提前24小时告知，若预约无更改，管理员一律按预约起始时间开机待用，开机时间自此算起。
开机待用时间超过1小时按取消处理，管理员将关闭系统，预约实验者须支付1小时费用。
2、每次预约上机时间不得超过三小时，活细胞成像实验可酌情延时，但最长不得超过6小时。
每次预约仅限一个时段，请勿一次连续预约多个时段。
3、开放对象：不对非本校人员开放，仅本校人员的课题方可使用该仪器，对外合作课题必须是本校人员承担部分，一经发现非本校人员利用本校人员名义使用该仪器者，取消该实验室全体人员使用资格半年。
4、收费标准：按实际使用时间（即从开机到用毕关机的时间）收费300元/小时，不足1小时者，按1小时计。
费用结算方式另行通知。
5、预约方式：请通过网上预约平台进行预约，等待管理员审核通过。
预约时请务必提交以下详细信息：姓名（限两人以内）、所属实验室、联系方式、预约时段、样品性质（细胞贴片、组织切片或活细胞）、实验所用荧光染料的种类。
其他未尽事宜请及时与管理员沟通。
显微镜的使用步骤及使用注意事项
显微镜的使用步骤及使用注意事项显微镜是由一个透镜或几个透镜的组合构成的一种光学仪器，是人类进入原子时代的标志。
紧要用于放大微小物体成为人的肉眼所能看到的仪器，那么关于产品的使用方法是怎么样的呢？通过以下文章来认得一下吧～显微镜的正确操作使用步骤1、镜检前的准备室内应清洁而干燥，试验台台面水平，稳固无震动，显微镜相近不应放置腐蚀性的试剂。
从显微镜柜或镜箱内取出显微镜时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，平稳地取出，放置在试验台桌面上，置于操左前方，距试验台边缘约10cm，镜臂朝本身，镜筒朝前。
试验台右侧放绘图用具。
2、调整光源如需利用外置光源，宜接受散射的自然光或柔和的灯光。
直射的太阳光会对察看者的眼睛造成损害。
转动转换器，使低倍镜正对通光孔，将聚光器上的虹彩光圈开到最大，察看目镜中视野亮度，同时调整反光镜角度，使光照达到光亮最均匀。
自带光源的显微镜，可通过调整电流旋钮来调整光照的强弱。
3、装置待检玻片将待察看的样品制作成临时或永久装片，放在载物台上，用弹簧夹固定，有盖玻片的一面朝上。
移动推动器，调整待检样品至通光孔的中心。
4、低倍镜察看将低倍镜对准通光孔，缓缓转动粗准焦螺旋，将物镜与装片的距离调至近来。
注意不要压碎盖玻片。
通过目镜察看，同时用粗准焦螺旋缓慢调整，直至物像显现，再用细准焦螺旋微调，同时调整光源亮度与虹彩光圈的大小，使物像达到清楚的程度。
并利用推动器把需要进一步放大察看的部分移至视野中央。
假如使用双筒目镜，应在察看前先调整双筒距离，使两眼视场合并。
5、高倍镜察看转动转换器，选择较高倍数的物镜，用细准焦螺旋调整焦距，到物像清楚为止。
6、油镜察看油浸物镜的工作距离（指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离）很短，一般在0.2mm以内，且一般光学显微镜的油浸物镜没有“弹簧装置”，因此使用油浸物镜时，调焦速度必需放慢，避开压碎玻片，并使物镜受损。
①在低倍镜下找到察看目标，中、高倍镜下渐渐放大，将待察看部位置于视野中央，调整光源和虹彩光圈，使通过聚光器的光亮达到最大。
Leica TCS SPE共聚焦显微镜操作规程(1)
Living up to Life
4. 通过显微镜侧面的“INT”按钮进行 光强调节
5. 按“TL/IL”转至荧光观察，通过前 面板按钮 选择 适宜的 滤块，见下 图，样品观察完毕后按 Shutter 键 阻断荧光光路以保护样品
共聚焦——设置采图条件
1. 按顺时针方向打开激光电源 2. 在Beam Path下调用已存的采图参数， 或重新进行光路设置： 1) 选择合适的激光谱线 2) 调节激光输出功率 3) 选择合适的分光镜 4) 选择合适的接收范围 (可拖动黑色滑块或双 击后输入接收波长范围) 5) 选择适宜的伪彩 6) 调节PMT Gain值 (检测器灵敏度) 和PMT Offset值 (背景值)
Living up to Life
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共聚焦——三维层切
1. 单击 Live进行预览，调至合适的 焦平面，再调节激光强度、接收 范围、PMT Gain和Offset等参数 2. 单击Set Plane记录焦平面位置
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3. 继续预览，改变 z 轴层面以确定 层切的起点和终点，红色表示已 设定
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共聚焦——波长扫描
1. 选择xyλ模式 2. 单击Live进行预览，调至合适的焦平 面，再调节激光强度、接收范围、 PMT Gain和Offset等参数 3. 停止预览 4. 设定接收总范围的起点和终点 5. 设定接收带宽 (默认值为10nm) 6. 设定 采集帧数 ，或接收带宽的 步进 值 7. 适当增加激光强度并提高PMT Gain 值，单击Start按键进行波长扫描
5. 根据图像调节激光强度、接收范 围、PMT Gain及Offset等参数 6. 如对图像满意，单击Live停止预览 7. 如有必要，单击 Save 保存当前参 数，便于以后调用
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活细胞共聚焦显微镜操作指南及注意事项
1，开机顺序：先开显微镜后面箱子里的激光器，再仪器架上的开关从左到右，从上到下依次打开，长时间观察活细胞动态可打开二氧化碳温控装置，一般尽量不打开汞灯，需要汞灯照明请联系老师，然后打开电脑电源，等待几十秒后再按电脑开机，然后刷卡开启显示器，进入系统后打开软件．汞灯打开时间超过半小时才能关闭，关闭后超过半小时才能打开。
2，将显微镜触摸控制屏上将TIRF转换为EPI，否则无法在显微镜上观察汞灯荧光。
3，使用完油镜后必须清洁镜头。
先用擦镜纸将多余的油吸干，再用新的擦镜纸沾取无水酒精将镜头擦拭干净。
4，使用显微镜期间，必须将空调打开，控制室温在18-24度，否则激光器会出现问题。
5，开机后登记开机时间，关机后登记关机时间，每次实验做好登记。
6，关机顺序：关闭软件程序，关闭电脑系统，仪器架上的开关从下到上，从右向左依次关闭，和开机顺序完全相反，然后关闭激光器，关闭空调。
整理好台面，清洁镜头，拿走垃圾。
管理员：高丁
分析测试中心
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