Takara说明书
takara反转录试剂盒说明书
takara反转录试剂盒说明书Takara反转录试剂盒是一种用于研究RNA分子的试剂盒。
该试剂盒可以用于DNA的反转录，将RNA转录成DNA，并进行后续的PCR扩增。
反转录试剂盒在生命科学领域中起着非常重要的作用，因此在使用过程中需仔细阅读说明书并按照说明书进行操作。
一、试剂盒组成Takara反转录试剂盒主要包含以下拉玛：1.反转录酶：外源的M-MLV反转录酶，具有高度的反转录活性和优异的扩增效率等优良特性。
2.反转录缓冲液：针对反转录酶的酶切优化反转录缓冲液。
3.引物：随机9mers引物，适用于多种RNA逆转录的应用。
4.对照RNA：In Vitro转录的任意序列的RNA，用于反转录和后续PCR扩增反应的质控。
二、试剂盒使用方法1. RNA提取：在使用Takara反转录试剂盒之前，需要从样品中提取RNA。
2. 反转录反应：将RNA测序专用随机引物、针对反转录酶的反转录缓冲液、反转录酶和RNA样品混合，进行逆转录反应。
3. PCR扩增：反转录完成后，可以利用PCR扩增技术对转录所得DNA进行扩增，完成DNA序列的检测和分析。
三、试剂盒注意事项1. 避免多次冻融。
为保证试剂的稳定性，反转录试剂盒必须储存于-20℃及以下的冰箱中，避免多次冻融。
2. 操作时需佩戴手套。
操作时需佩戴手套，尽量避免手汗或皮脂的污染，影响试剂盒的效率和准确性。
3. 注意反转录缓冲液的稀释量。
反转录缓冲液的稀释量会影响反转录效果，因此需要按照说明书进行操作，精准稀释。
4. 注意反转录酶的用量。
不同反转录酶的最优用量不同，需要根据实验需要按照说明书或文献进行调整。
5. 确认对照RNA引物的扩增效果。
在进行PCR扩增前，需要先进行对照RNA引物的扩增，以确认反转录反应的正确性，避免因为反应偏差而引起的实验结果的偏差。
4. 根据实验需要进行调整。
反转录试剂盒虽然具有大量的优良特性，但是实验环境和实验条件的不同，会对反转录试剂盒的效果产生较大的影响，因此需要根据实验需要进行调整。
Takara基因组抽提试剂盒说明书
照说明书的要求进行。 ② DNA 中含有乙醇。在 Rinse B 洗净时，离心速度和时间应严格遵循说明书要求进行。
Q5. 能否使用本试剂盒提取酵母菌中的基因组 DNA？ A5. 不能。因为酵母菌属于真核微生物，其细胞壁的化学组成和结构与细菌不同，因此 Lysozyme 不
TaKaRa Code：DV810A
MiniBEST Bacterial Genomic DNA Extraction Kit Ver.2.0 （50 次量）
说明书
宝生物工程(大连)有限公司
内容
●制品说明 ●制品内容 ●运输温度 ●保存温度 ●实验前的准备 ●操作方法 ●使用例 ●注意事项 ●Q&A
22 ml
Solution C
35 ml
DB Buffer
25 ml
Rinse A
28 ml
Rinse B*3
24 ml
Elution Buffer
4 ml
*1 RNase A1 为混浊溶液。 *2 若出现沉淀，请于 65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 *3 首次使用前，请添加 56 ml 的 100%乙醇。
11. 弃 Filter Cup，在滤液中加入 450 μl 的 DB Buffer， 混合均匀。
12. 将试剂盒中的 Spin Column 安置于 Collection Tube 上。
-2-
图 1. 操作流程简图
13. 将上述操作 11 的混合液转移至 Spin Column 中，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃滤液。 14. 将 500 μl 的 Rinse A 加入至 Spin Column 中，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃滤液。
TaKaRa TP600型 梯度PCR仪使用说明书
TP600型PCR仪使用说明目 录一．外观及功能介绍----------------------------------------------------------------------------------------2二．性能一览表----------------------------------------------------------------------------------------------3三．操作方法------------------------------------------------------------------------------------------------3 1．概述------------------------------------------------------------------------------------------------3 2．使用现有程序进行PCR反应-----------------------------------------------------------------4 3．建立新程序---------------------------------------------------------------------------------------7 4．修改现有程序------------------------------------------------------------------------------------9 5．注册新用户---------------------------------------------------------------------------------------9 6．应用扩展模式-----------------------------------------------------------------------------------10 7．工具栏的使用-----------------------------------------------------------------------------------12一． 外观及功能介绍TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Model TP600TP600型PCR 仪是T aKaRa 公司推出的多功能，高性能的梯度PCR 仪。
TaKaRa 提取RNA说明书
T a K a R a提取R N A说
明书
-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1
TaKaRa Code TaKaRa MiniBEST Plant RNA Extration Kit 说明书
一、制品说明
本试剂盒是小量提取植物组织Total RNA 的试剂盒。
试剂盒采用了独特的裂解系统，可以对各种简单的植物材料（叶片、茎、幼苗等）富含多糖多酚的植物组织材料（果实、种子）、真菌等进行RNA的提取，适用范围广。
按照标准流程使用本试剂盒可以有效提取分子量大于200nt的RNA，也可以按照可选步骤提取得到包含Small RNA（＜200nt）的Total RNA。
试剂盒中包含了RNA提取所需的全部是局，无需额外购买其他试剂。
本试剂盒具有高效、快速、方便的特点，组织或自爆裂解后，提取操作仅需要30min 便可完成操作。
提取过程中无需苯酚氯仿抽提等步骤。
利用该试剂盒提取的RNA纯度高，基本不含蛋白质及及基因组DNA污染。
本试剂盒可以从50mg—100mg植物组织中纯化得到多至数十微克的高纯度RNA。
提取得到的RNA可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、Real Time PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
二、制品内容（50次量）
本试剂盒分两部分|Part 1和Part 2。
（1）Part 1 （-20℃保存）
2。
takara反转录试剂盒说明书
takara反转录试剂盒说明书说明书一、产品简介takara反转录试剂盒是一种高效、可靠的反转录试剂盒，适用于转录RNA为cDNA的实验操作。
本试剂盒由takara公司制造，经过严格的质量控制，确保产品的稳定性和可靠性。
二、试剂盒组成本试剂盒包含以下组分：1. 反转录酶：高效反转录酶，能在广泛的实验条件下进行反转录反应。
2. 基质：提供反应所需的核酸和其他辅助物质。
3. 标记物：用于标记反转录产物的荧光染料或放射性同位素。
4. 缓冲液：维持试剂盒中酶的活性，调节反应条件的缓冲体系。
5. 控制样品：用于检验试剂盒的反应效果和稳定性。
三、实验操作1. 准备工作在进行实验前，请准备所需的实验仪器和试剂，确保实验环境的清洁和无菌，避免污染对实验结果的影响。
2. RNA提取使用适当的方法提取目标RNA样本，并在提取过程中避免RNA的降解。
3. 反转录反应将提取的RNA样本与反转录试剂盒中的反转录酶、基质和缓冲液按推荐比例混合，并在适当的温度下进行反应。
反应时间根据样本的RNA含量和实验要求确定。
4. 停止反应通过停止反应来终止反转录反应，一般使用热敏感性酶来达到这个目的。
5. 产物处理反转录产物可以直接用于下游实验，如实时定量PCR、聚合酶链式反应等，也可以进行储存和后续处理。
四、实验结果解读根据试剂盒的使用目的和实验设计，对反转录产物进行相应的分析和解读。
常见的分析方法有凝胶电泳、实时定量PCR和测序等。
根据实验结果，可以得到RNA的表达情况、差异表达基因等相关信息。
五、注意事项1. 试剂保存：请按照试剂盒上的说明保存试剂，避免暴露在高温、冻融循环和光照等不利条件下。
2. 操作规范：请按照本说明书中提供的实验操作步骤进行操作，避免实验误差对结果的影响。
3. 质量控制：在每次实验中，请使用合适的阳性和阴性对照样品，以确保实验结果的准确性和可靠性。
4. 废弃物处理：请将使用过的试剂和实验废弃物按照相关规定进行处理，避免对环境造成污染。
TaKaRa TP600型 梯度PCR仪使用说明书
TP600型PCR仪使用说明目 录一．外观及功能介绍----------------------------------------------------------------------------------------2二．性能一览表----------------------------------------------------------------------------------------------3三．操作方法------------------------------------------------------------------------------------------------3 1．概述------------------------------------------------------------------------------------------------3 2．使用现有程序进行PCR反应-----------------------------------------------------------------4 3．建立新程序---------------------------------------------------------------------------------------7 4．修改现有程序------------------------------------------------------------------------------------9 5．注册新用户---------------------------------------------------------------------------------------9 6．应用扩展模式-----------------------------------------------------------------------------------10 7．工具栏的使用-----------------------------------------------------------------------------------12一． 外观及功能介绍TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice Model TP600TP600型PCR 仪是T aKaRa 公司推出的多功能，高性能的梯度PCR 仪。
takara 胶回收试剂盒说明书
操作流程1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
胶块超过300 mg时，请使用多个Column进行回收，否则严重影响收率。
注）切胶时请注意不要将DNA 长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块溶解时间，提高DNA回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 μl 进行计算。
5. 向胶块中加入胶块溶解液Buffer GM，Buffer GM的加量如下表：凝胶浓度Buffer GM使用量1.0％3个凝胶体积量1.0％～1.5％4个凝胶体积量1.5％～2.0％5个凝胶体积量6. 均匀混合后室温15-25℃溶解胶块（胶浓度较大或比较难溶时可以在37℃加热）。
此时应间断振荡混合，使胶块充分溶解（约5～10分钟）。
7. 当凝胶完全溶解后，观察溶胶液的颜色，如果溶胶液颜色由黄色变为橙色或粉色，向上述胶块溶解液中加入3 M醋酸钠溶液（pH5.2）10 μl，均匀混合至溶液恢复黄色。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作步骤7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将700 μl 的Buffer WB加入Spin Column中，室温12,000 rpm离心30秒钟，弃滤液。
注）请确认Buffer WB中已经加入了指定体积的100%乙醇。
11. 重复操作步骤10。
12. 将Spin Column安置于Collection Tube上，室温12,000 rpm离心1分钟。
TAKARA植物DNA提取试剂盒说明书
加入 Extraction Solution 2 振荡仪振荡 5 秒，轻微离心
加入 Extraction Solution 3 振荡仪振荡 5 秒，轻微离心
50℃温浴 15 分钟
上层水相移至新的 Microtube 中 加入异丙醇混匀后，12,000 rpm 4℃离心 10 分钟
-1-
8. 轻微离心 2 秒钟以内，于 50℃温浴 15 分钟。 注：长时间离心 Extraction Solution 3 将会分层， 务必控制在 2 秒钟以内。
9. 12,000 rpm 4℃离心 15 分钟。 10. 取上层水相移至新的 1.5 ml Microtube 中，上层水
相约 400 μl。注意尽量不要混入水相以外的物质。 11. 添加等量的异丙醇，轻柔混匀。
除去上清，加入 1 ml 70％乙醇清洗沉淀 12,000 rpm 4℃离心 3 分钟
●实验例
除去上清，沉淀干燥后用 TE Buffer 溶解
实验例 1：从植物组织中提取基因组 DNA
将拟南芥的幼芽、西红柿的幼芽和菠菜叶用剪刀剪至 3 mm 以下角形状，分别称取 20 mg 和 50 mg 放入
1.5 ml Microtube 中，于-20℃冻结后按“操作方法”进行基因组 DNA 的提取，基因组 DNA 使用 20 μl TE
淀。 注：沉淀过度干燥将导致难以溶解，请注意。
注 1. 回收的基因组 DNA 溶液可直接作为 PCR 反应的 模板或直接进行限制酶切断等反应。 使用 20 μl TE Buffer 溶解基因组 DNA 时，PCR 反应液（25 μl 反应体系）或限制酶酶切反应液（20 μl 反应体系）中添加的 DNA 溶液在 0.5～2 μl 之 间为好。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
● 使用注意
以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前一定认真阅读。 1． 当同时需要进行数次反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master Mix；其中包括 RNase Free dH2O、
Buffer、酶等），然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免 重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。 2． gDNA Eraser 和 PrimeScript RT Enzyme Mix I 在使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存 液中含有 50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。同时，要使用精确、量程适合的移液枪，并且不 要使 Tip 插入液面过深，否则会因 Tip 壁粘着造成损失，而使酶量不足。 3． 5×gDNA Eraser Buffer 和 5×PrimeScript Buffer 2（for Real Time）在使用前需 Vortex 振荡混匀，轻轻 离心后使用。 4． 分装试剂时务必使用新的枪头（Tip），以防止样品间污染。
*5：反转录体系可以根据需要相应扩大。 *6：使用 Gene Specific Primer 时，建议反转录反应条件设置为 42℃ 15 min。PCR 反应有非特
异性扩增时，将温度升到 50℃会有所改善。 *7：合成的 cDNA 需要长期保存时，请于-20℃或更低温度保存。 注意：1) 在反转录反应中，SYBR® Green qPCR 法的 RT Primer Mix 用量为 1 μl，TaqMan®
页码
1 1 1 1 2 2 2 4 6 7 8
● 制品说明
为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有 cDNA 作为模板检出的先决条件，但 Total RNA 中常常 混有基因组 DNA，并可以直接作为 PCR 反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。为了避免这 种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组 DNA 得不到扩增。但是，此方 法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存 在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本 方法。在这种情况下，我们常常需要对 Total RNA 样品进行 DNase I 处理，以除去残存的基因组 DNA。 而 DNase I 处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成 RNA 的降解和损失。 PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser 是可以除去基因组 DNA 进行 Real Time RT-PCR 反应的专 用反转录试剂。Kit 中使用了具有较强 DNA 分解活性的 gDNA Eraser，通过 42℃，2 min 即可除去基因 组 DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制 DNA 分解酶活性的组分，经过 gDNA Eraser 处理后的样品可 以直接进行 15 min 的反转录反应合成 cDNA，因此，20 min 内即可迅速完成从基因组 DNA 去除到 cDNA 合成的全过程。 使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与 SYBR® Premix Ex Taq II（Tli RNaseH Plus）、Premix Ex Taq（Probe qPCR）等定量试剂组合使用。 注意：Takara Bio 使用 SYBR® Green I 作为研究试剂已得到 Molecular Probes Inc.的许可。SYBR®为
使用量 12.5 μl 1.0 μl 1.0 μl 2 μl*2 8.5 μl 25 μl
终浓度 1×
0.4 μM*1 0.4 μM*1
*1 通常引物终浓度为 0.4 μM 可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在 0.2～1.0 μM 范围内调整引物浓度。
◆应用 Thermal Cycler Dice Real Time System 扩增仪的操作方法 1. 按下列组份配制 PCR 反应液（反应液配制请在冰上进行）。
试剂 SYBR® Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)（2×） PCR Forward Primer（10 μM） PCR Reverse Primer（10 μM） RT 反应液（cDNA 溶液） dH2O（灭菌蒸馏水） Total
*3： 含有 dNTP Mixture。
*4： 含有 Oligo dT Primer 和 Random 6 mers。
*5： 制作标准曲线时梯度稀释 DNA 或 RNA 标准品的稀释液。模板 DNA 或 RNA 如果用水或 TE
Buffer 稀释时，由于受 Microtube 吸附作用等的影响，往往不能准确地进行稀释，导致实验结果精
研究用
Code No. RR047A
PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)
说明书
v201405Da
目录
内容
● 制品说明 ● 制品内容 ● 试剂盒外必备材料 ●保 存 ●特 长 ● 使用注意 ● 操作方法 ● Real Time PCR ● 实验例 ● 附录 ● 关联产品
400 l
5. RT Primer Mix*4
400 l
6. RNase Free dH2O
1 ml×2
7. EASY Dilution（for Real Time PCR）*5
1 ml
*1： 5×gDNA Eraser Buffer 在反转录反应前使用，请务必进行基因组 DNA 的除去反应。
*2： 含有 RNase Inhibitor。
*4：使用 RT Primer Mix 可以高效合成 cDNA。因为实验目的不同，也可以不使用 RT Primer Mix， 而选择 Oligo dT Primer 或 Gene Specific Primer 进行反转录反应，引物使用量如下： Oligo dT Primer 50 pmol／20 μl 反应体系 Gene Specific Primer 5 pmol／20 μl 反应体系
的最佳试剂。 3． 反转录引物使用了 Random 6 mers 和 Oligo dT Primer 混合的 RT Primer Mix，可以均匀合成样品中的
各种 cDNA。 4． 本制品提供了 SYBR® Green 分析法和 TaqMan®探针分析法各自最适反应体系，可以根据分析方法选
择体系。 SYBR® Green 分析法和 TaqMan®探针分析法区别如下： 反转录反应中RT Primer Mix的用量。 反转录反应中总 RNA 的用量。 5． Real Time RT PCR 定量需要建立标准曲线，建立标准曲线的条件就是需要将总 RNA 和反转录 cDNA 稀释到较低的浓度。如果用水或 TE Buffer 稀释时，由于模板浓度低不稳定，因而会缩小曲线范围，结 果精度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液 EASY Dilution（for Real Time PCR），将 Total RNA 或 cDNA 稀释至低浓度时也能够进行准确稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
使用量 10.0 μl 1.0 μl 4.0 μl 4.0 μl 1.0 μl 20 μl*5
Master Mix 10 μl
37℃ 85℃ 4℃*7
15 min*6 5 c
*3：若不配制 Master Mix，向步骤 1 的反应液中添加试剂时，要先加入 RNase Free dH2O 和 5× PrimeScript Buffer 2 (for Real Time)混合均匀，以使 gDNA Eraser 的活性充分受到抑制，再添 加 RT Primer Mix、PrimeScript RT Enzyme Mix I，轻轻混匀进行反转录反应。
PrimeScript RT Enzyme Mix I
1.0 μl
RT Primer Mix *4 5×PrimeScript Buffer 2（for Real Time） RNase Free dH2O Total
1.0 μl 4.0 μl 4.0 μl 20 μl*5
Master Mix 10 μl
Probe qPCR 法的用量为 4 μl。 2) 得到的 RT 反应液加入到下一步的 Real Time PCR 反应体系中，其加入量不要超过
Real Time PCR 反应体积的 1/10（V/V）量。 -3-
● Real Time PCR
以下是使用本制品进行反转录反应后，选择 SYBR® Premix Ex Taq II（Tli RNaseH Plus）（Code No.RR820A/B）进行 Real Time PCR 反应的操作方法。采用 TaqMan®探针法进行检测时，请选择 Premix Ex Taq（Probe qPCR）（Code No.RR390A/B）。
● 操作方法
1. 去除基因组 DNA 反应 按如下成分于冰上配制反应混合液，为了保证反应液配制的准确性，进行各项反应时，应先按反应数 +2 的量配制 Master Mix，然后再分装到每个反应管中，最后加入 RNA 样品。
试剂
使用量
5×gDNA Eraser Buffer gDNA Eraser Total RNA RNase Free dH2O
Molecular Probes Inc.的注册商标。
● 制品内容（20 l 反应×100 次）
1. gDNA Eraser
100 l
2. 5×gDNA Eraser Buffer*1
200 l
3. PrimeScript RT Enzyme Mix I*2
100 l
4. 5×PrimeScript Buffer 2（for Real Time）*3
-2-