血清总胆汁酸循环酶法测定法
血清总胆汁酸循环酶法测定法
血清总胆汁酸循环酶法测定法1. 实验原理胆汁酸会被3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。
生成的3-酮类固醇在3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。
如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）在405nm处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。
（胆汁酸会被3α-羟基类固醇脱氢酶及Thio-NAD 特异性地氧化，生成3-酮类固醇及Thio-NADH，此外，生成的3-酮类固醇在3α-羟基类固醇脱氢酶及NADH 存在下，和NAD。
如上所述，循环往复从而放大微量的胆汁酸量，测定生成的Thio-NADH的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。
）2. 标本：2.1 病人准备：标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会升高，应注意采血时间。
2.2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。
应使用新鲜标本。
标本必须避光保存。
3. 标本存放4℃保存可稳定7天，-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输常温条件下避光保存运输。
5. 标本拒收标准细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂威特曼总胆汁酸测定试剂盒Good’s缓冲液120mmol/L3a-羟基类固醇脱氢酶(3a-HSD) 12.5 KU/L硫代辅酶(Thio-NAD) 6.1g/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻，试剂2必须避光保存。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
总胆汁酸(TBA)测定试剂(盒)(酶循环法)产品技术要求新产业
医疗器械产品技术要求编号：总胆汁酸（TBA）测定试剂（盒）（酶循环法）2.性能指标2.1外观试剂应为清澈透明的液体，无沉淀、悬浮物和絮状物。
2.2装量试剂装量的装量应按表1，液体装量的最大允许负偏差应为5%。
2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度试剂（盒）测试空白样本，在37 ℃±0.1 ℃ 、405 nm 波长、1 cm 光径条件下，试剂空白吸光度应≤0.800 Abs。
2.3.2试剂空白吸光度变化率用试剂（盒）测试空白样本，在37℃ 0.1℃，405 nm 波长、1 cm 光径条件下，试剂空白吸光度变化率≤0.010 Abs/min。
2.4分析灵敏度试剂（盒）测试27.1 μmol/L 的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）≥0.060 Abs/min。
2.5线性区间试剂（盒）线性在(0.00，200.00] μmol/L区间内：a) 线性相关系数r≥0.990；b) (0.00，50.00] μmol/L 区间内，线性绝对偏差应在±5 .00 μmol/L 范围内；(50.00，200.00]μmol/L 区间内，线性相对偏差应在±10%范围内。
2.6精密度2.6.1重复性试剂（盒）测试浓度在（25±5）μmol/L 和（49±10）μmol/L 范围内的样本时，变异系数CV≤4.0%。
2.6.2批间差试剂（盒）测试浓度在（25±5）μmol/L 和（49±10）μmol/L 范围内的样本时，相对极差R≤6.0%。
2.7准确度测可溯源至有证参考物质的校准品，相对偏差 B 在±10%范围内。
总胆汁酸检测-PPT文档资料
酶比色法测定总胆汁酸
-----临床意义
3．肝硬化：肝硬化时，肝脏对胆汁酸的代谢能力 减低，血清TBA在肝硬化的不同阶段均增高，增高 幅度一般高于慢性活动性肝炎。即使在肝硬化晚期 亦如此。当肝病活动降至最低时，胆红素、转氨酶 及碱性磷酸酶等指标转为正常，血清TBA仍维持在 较高水平。 4．乙醇性肝病：乙醇性肝病血清TBA可增高，当 乙醇性肝病(包括肝硬化)发生严重的肝损伤时，血 清TBA明显增高，而轻、中度损伤增高不明显。有 报道认为，血清TBA测定对乙醇性肝病肝细胞损伤 诊断的可信度和灵敏度远优于各种酶学检查和半乳 糖耐量试验等指标，甚至建议将血清TBA再加上β氨基己糖苷酶作为乙醇性肝病的诊断指标。有人认 为，餐后60min-TBA测定对乙醇性肝病诊断更有 意义。
酶比色法测定总胆汁酸
-----注意事项
由于血清中TBA含量低，样品中存在干扰物质的 影响相对就大，乳酸脱氢酶(LD)是主要的干扰物质， 由LD反应中生成的NADH往往比TBA反应中生成 的量要大得多，因此测定前去除血清中LD的影响 至关重要，方法有：血清67℃加温30min；加草 氨酸作为LD的封闭剂；碱或酸处理；用丙酮酸钠 抑制LD活性。上述5种方法中丙酮酸钠法最好，可 免去前处理步骤，直接加入反应体系，不影响体系 的pH，且对反应无干扰。 血清中还存在其它脱氢酶(有相应底物存在时)和 还原性物质，如不除去，测定结果会偏高。据无选 择的40例肝功能标本的测定结果来看，平均干扰 相当于TBA 18μ mol/L，范围在5.5～45μ mol/L之 间。因此自动分析设计成双试剂二步法，样品先和 不加3α -HSD的体系孵育，使样品中的干扰物质先 反应，然后再加入3α -HSD，启动TBA反应。
酶比色法测定总胆汁酸
-----注意事项
生化试剂对循环酶法测定血清总胆汁酸的干扰因素分析和改进措施
［ ］ 郑荣辉 ， ３ 李
２ ６—２ ８．
健， 黄赖机 ， 红景天 对鼻 咽癌 同步放 化疗 等．
期内患者生存 质量 的影 响 ［ ］ 现 代 医院 ，０ ０，０ １ ）： Ｊ． ２１ １ （Ｏ
后Ｅ Ｂ病毒抗原检测的阳性率明显增加； ３中， 表 年龄 ＞４ ０岁的健康 体检者 的血 清 Ｅ Ｖ Ａ— ｇ 、Ａ— ｇ Ｂ— Ｃ Ｉ Ｅ Ｉ Ａ Ａ
现代 医院 ２ １ ０ ２年 ２月第 １ ２卷第 ２期
专 业 技 术 篇
Ｍｏｅ Ｈ ｓｉｌ ｅ ０ ２Ｖ ｌ ２Ｎ ｄｍ ｏｐｔ ｂ２ １ ｏ ｏ２ ａＦ １
生 化 试 剂 对 循 环 酶 法 测 定 血 清 总 胆 汁 酸 的 干 扰 因素 分 析 Fra bibliotek 改 进措 施
梁耀 荣 谢 国强
Ｔ ＮＴ ＲＦ ＲＥＮＣＥ Ｆ ＨＥ ｌ Ｅ Ｅ ＡＣＴ ＯＲ ＡＮＡＬ ＹＳＩ ＯＣＨＥ Ｉ ＡＬ Ｒ ＡＧＥ Ｓ Ｆ — Ｓ ＯＮ ＢＩ Ｍ Ｃ Ｅ ＮＴ ＯＲ ＤＥ ＴＥ ＲＭ Ｉ ＮＡＴ ＯＮ ＯＦ ＳＥ Ｉ ＲＵＭ ＯＴ Ｌ Ｔ ＡＬ Ｂｌ Ｅ ＡＣＩ Ｂ Ｅ ＹＭ ＡＴｊ Ｃ Ｉ Ｄ Ｙ ＮＺ Ｃ ＹＣＬＮＧ ＡＳ ＡＹ Ｓ
以 Ｔ Ａ为检 测项 目， Ａ Ｔ Ａ Ｔ等 ２ Ｂ 以 Ｌ 、Ｓ ０个 生化 常规
干扰 因素， 寻找 消除携 带污染的有效方法 。方法
总胆汁酸(TBA)测定试剂盒(循环酶法)产品技术要求科方
1外观性状
1.1试剂盒各组分应齐全、完整、无液体渗漏；中文包装标签应清晰，准确、牢固；
1.2R1 组分应为澄清透明、无絮状物、无肉眼可见颗粒及沉淀的液体。
1.3R2 组分应为澄清透明、无絮状物、无肉眼可见颗粒及沉淀的液体。
2
试剂盒装量
试剂净含量应不小于标示值。
3准确度
与比对试剂盒做比对试验，两组结果的相关系数 r 应≥0.975，相对偏差应≤10%。
4灵敏度
测定TBA含量为50.0μmol/L的样品时，平均每分钟吸光度变化值（△A/min）≥0.08。
5试剂空白
在温度37℃、波长405nm条件下检测，试剂空白吸光度≤0.40（比色杯光径1.0cm）；试剂空白吸光度变化率（△A/min）≤0.1（比色杯光径1.0cm）。
6线性范围
a）线性范围（0.5-150）μmol/L，相关系数 r 应≥0.990； b）（0.5～5.0）μmol/L范围内偏差绝对值不大于1.0μmol/L；（5.0以上
～150）μmol/L范围内线性偏差应≤15%。
7测量精密度
7.1重复性
CV%应≤5%。
7.2批间差
相对偏差（R）应≤8%。
8特异性
胆红素≤342μmol/L，甘油三酯≤5.6mmol/L，血红蛋白≤2.0g/L，维生素
C≤0.3g/L 对测定结果造成的干扰，偏倚在±15％内。
总胆汁酸测定试剂盒(酶循环法)产品技术要求meigaoyi
总胆汁酸测定试剂盒(酶循环法)适用范围：用于定量检测人血清中总胆汁酸（TBA）浓度。
1.1包装规格a) 试剂1：2×45ml，试剂2：2×15ml；b) 试剂1：4×45ml，试剂2：4×15ml；c) 试剂1：6×60ml，试剂2：2×60ml；d）试剂1：3×60ml，试剂2：3×20ml；e）试剂1：2×300ml，试剂2：2×100ml；f）试剂1：12×16.8ml，试剂2：12×5.6ml；g）试剂1：2×54ml，试剂2：2×18ml；h）试剂1：1×30ml，试剂2：1×10ml。
1.2试剂主要组成成分试剂1主要组成成分甘氨酸缓冲液25 mmol/Lβ-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷氧化型（Thio-NAD） 1 mmol/L试剂2主要组成成分Tris缓冲液25 mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷还原型（NADH）10 mmol/L3α-羟类固醇脱氢酶（3α-HSD）12500 U/L2.1 外观和性状2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。
2.1.2 试剂1应为淡黄色透明溶液；试剂2应为无色或淡黄色透明溶液。
2.2 净含量应不低于试剂瓶标示装量。
2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度测定试剂空白吸光度，应＜0.5。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.04。
2.4 分析灵敏度测试150umol/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.02。
2.5 准确度回收率90%～110% 范围内。
2.6 精密度2.6.1批内精密度批内变异系数应不大于5％。
2.6.2批间精密度批间相对极差应不大于10％。
2.7 线性区间2.7.1在[2,180)umol/L区间内，线性回归的相关系数（r）应不低于0.990；2.7.2在（50，180）umol/L区间内，相对偏差不超过±15%；2.7.3在[2,50]umol/L区间内，绝对偏差不超过±5umol/L。
肝功能中各检测项目的测定方法【精选】
肝功能中各检测项目的测定方法、测定原理和临床意义1、血清总胆汁酸TBA ：（1）测定方法：A 、酶循环法，B 、3a-HDS 法（3-a 羟类固醇脱氧酶）（2）测定原理方法A ：胆汁酸被3α羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH ）及口-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型特异性的氧化，生成3酮类固醇及}硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型。
此外，生成的3酮类固醇在3α羟基类固醇脱氢酶及β硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型存在下，生成胆汁酸及β烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型。
以上依据循环酶而放大量的胆汁酸测定生成的β-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型的吸光度，计算血清中胆汁酸的量。
方法B ：在3-a 羟类固醇脱氧酶作用下，各种胆汁酸C3上α位的羟基脱氧形成羰基，同时氧化型NAD 还原成NADH 随后NADH 上的氢由黄递酶催化转移给硝基四氮唑蓝（NTB ）产生甲替,用磷酸中止反应,甲替的产量与总胆汁酸成正比，在波长540nm 比色,与同样处理的标准品比较，计算其含量。
（3）临床意义1.测定血清中胆汁酸可提供肝胆系统是否正常，肝、胆疾病时周围血循环中的胆汁酸水平明显升高。
急性肝炎早期和肝外阻塞性黄疸时可增至正常值的100 倍以上。
对肝胆系统疾病的诊断具有特异性。
2．可敏感地反映肝胆系统疾病的病变过程。
肝胆疾病时血清胆汁酸浓度的升高与其他肝功能试验及肝组织学变化极为吻合，在肝细胞仅有轻微坏死时，血清胆汁酸的升高，常比其他检查更为灵敏。
据报道，急性肝炎、肝硬化、原发性肝癌、急性肝内胆汁郁滞、原发性胆汁性肝硬化以及肝外阻塞性黄疸，其血清胆汁酸均100 ％出现异常。
上述疾病时均有血清胆汁酸含量的增高。
2、丙氨酸氨基转移酶ALT（1）测定方法：酶偶联法，赖氏法，连续监测法（2）测定原理：L-丙氨酸 + α-酮戊二酸---ALT ----L-丙酮酸 + L-谷氨酸 丙酮酸 +NADH+H +---------LD -------L--乳酸+NAD +4 11 201628（3）临床意义：谷丙转氨酶升高临床意义就在于对急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV 携带者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的诊断和分析，ALT 的升高只表示肝脏可能受到了损害。
血清总胆汁酸操作程序
血清总胆汁酸操作程序1.目的规范血清总胆汁酸（TBA）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理4．1 测定方法：循环酶法4．2 测定原理：胆汁酸会被3α-羟甾醇脱氢(3α-HSD)以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)。
此外生成的3-酮类固醇在3α-羟甾醇脱氢(3α-HSD)及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)。
如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)在405nm处的吸光度变化，以求的胆汁酸的浓度。
5. 标本采集与处理5．1标本种类：新鲜无溶血血清。
5．2标本采集：见生化标本采集程序。
5.3 标本稳定性：4℃保存可稳定1周，-20℃保存可稳定3个月。
6. 试剂6.1试剂：本科使用浙江伊利康生物工程有限公司试剂盒，为即用式液体双试剂。
试剂内各主要成分如下：试剂成分浓度试剂1 Good’缓冲液80mmol/LThio-NAD 0.95g/L试剂2 Good’缓冲液80mmol/L3α-羟甾醇脱氢13KU/LThio-NADH 6.10g/L防腐剂适量6.2 总胆汁酸校准血清：浙江伊利康生物工程有限公司浓度50μmol/L标准品。
6.3 试剂与校准血清的稳定性：未开瓶的试剂于2~8℃避光保存，可稳定至有效期（12个月）。
如试剂空白吸光度大于0.5即不能使用。
6.4 试剂不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
7. 仪器参数设定AU2700参数设定：科华试剂仪器参数设置参见试剂厂家提供相应仪器设置参数。
8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
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血清总胆汁酸循环酶法测定法
1. 实验原理
胆汁酸会被3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。
生成的3-酮类固醇在3α-羟基类固醇脱氢酶（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。
如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）在405nm处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。
（胆汁酸会被3α-羟基类固醇脱氢酶及Thio-NAD 特异性地氧化，生成3-酮类固醇及Thio-NADH，此外，生成的3-酮类固醇在3α-羟基类固醇脱氢酶及NADH 存在下，和NAD。
如上所述，循环往复从而放大微量的胆汁酸量，测定生成的Thio-NADH的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。
）
2. 标本：
2.1 病人准备：标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会
升高，应注意采血时间。
2.2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。
应使用新鲜标本。
标本必须避光保存。
3. 标本存放4℃保存可稳定7天，-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输常温条件下避光保存运输。
5. 标本拒收标准细菌污染的标本。
6. 实验材料
6.1 试剂威特曼总胆汁酸测定试剂盒
Good’s缓冲液120mmol/L
3a-羟基类固醇脱氢酶(3a-HSD) 12.5 KU/L
硫代辅酶(Thio-NAD) 6.1g/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻，试剂2必须避光保存。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂
6.2 校准品：使用南京威特曼公司提供的TBA校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
7. 仪器：日立7060生化分析仪
8. 操作步骤:
8.1 项目基本参数：参见7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见7060生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以南京威特曼公司提供的TBA校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以μmol/L报告。
12. 参考值范围：成年人：<12μmol/L
13. 临床意义:椐报道，急性肝炎患者空腹TBA （F-TBA）和餐后TBA（P-TBA）测定的异常率为100%，平均增高幅度分别是正常高限的13倍和11倍。
证明TBA测定对急性肝炎早期诊断的价值与ALT和AST测定相同。
这些病例的动态观察说明ALT和AST随肝细胞损害的控制很快转为正常，F-TBA测定则随肝功能的恢复逐渐转为正常，而P-TBA的恢复缓慢。
TBA持续较高水平的患者往往慢性归转。
慢性活动性肝炎和肝硬化患者的F-TBA和P-TBA均增高，且幅度较大。
P-TBA测定对轻度肝脏病变、酒精或工业化学品引起的肝细胞损伤的灵敏度优于其他肝功能试验。
血清TBA测定对肝外胆管阻塞和肝内胆汁淤积的诊断，有较高的灵敏度。
14. 线性范围：1.06～90μmol/L。
15. 超出范围结果处理本法的检测范围为 1.06～90μmol/L。
当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。