临床微生物样本采集规范
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临床微生物项目与样本采集规范
临床微生物项目 与样本采集规范
汇报提纲
01
微生物新技术
02
微生物新项目组合
03
微生物项目采集规范
2
1 微生物新技术
3
微生物新技术
• MALDI-TOF-MS • 16S rRNA和真菌ITS/D2（28S)测序
4
微生物质谱仪
16S rRNA
• 判断16S rRNA序列扩增是否成功：经琼脂糖凝胶电泳在1500bp附近 出现条带，说明16S rRNA已经扩增成功。由于16S rRNA序列长度一 般1500bp左右。
• 不可避免地受到污染 • 唾液中口咽部定植菌的浓度可达108 ～ 109/ml。 • 研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现
象。
52
咳痰标本不合格，退检吗？
• 如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于25个，白细胞小于10个， 应不做或仅在特殊要求时做培养。
• 如做培养，报告中注明“镜检结果表明标本口咽分泌物污 染明显”。
带菌样本
相对无菌样本
痰、咽拭子
尿液
生殖道分泌物：
女：阴道分泌物、宫颈分泌 物、后穹窿分泌物；
血管内导管 肺泡灌洗液
粪便
生殖道分泌物：
男：前列腺液、精液、尿道分 泌物
脓液、伤口分泌物、眼部分泌 物
无菌样本
全血、骨髓
脑脊液
胸腹水
穿刺液：关节腔积液、鞘膜 积液、盆腔积液、心包积液 等全身各个部位的体液穿刺 胆汁
57
六、生殖道标本采集规范 • 推荐使用男性或女性专用拭子，置运送培养基送检。 • 男性前列腺：用肥皂和水清洗阴茎头，通过直肠按摩前列
腺，用无菌拭子收集液体或使液体进入无菌管内。 • 男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2～4cm，旋转拭
汇报提纲
01
微生物新技术
02
微生物新项目组合
03
微生物项目采集规范
2
1 微生物新技术
3
微生物新技术
• MALDI-TOF-MS • 16S rRNA和真菌ITS/D2（28S)测序
4
微生物质谱仪
16S rRNA
• 判断16S rRNA序列扩增是否成功：经琼脂糖凝胶电泳在1500bp附近 出现条带，说明16S rRNA已经扩增成功。由于16S rRNA序列长度一 般1500bp左右。
• 不可避免地受到污染 • 唾液中口咽部定植菌的浓度可达108 ～ 109/ml。 • 研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现
象。
52
咳痰标本不合格，退检吗？
• 如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于25个，白细胞小于10个， 应不做或仅在特殊要求时做培养。
• 如做培养，报告中注明“镜检结果表明标本口咽分泌物污 染明显”。
带菌样本
相对无菌样本
痰、咽拭子
尿液
生殖道分泌物：
女：阴道分泌物、宫颈分泌 物、后穹窿分泌物；
血管内导管 肺泡灌洗液
粪便
生殖道分泌物：
男：前列腺液、精液、尿道分 泌物
脓液、伤口分泌物、眼部分泌 物
无菌样本
全血、骨髓
脑脊液
胸腹水
穿刺液：关节腔积液、鞘膜 积液、盆腔积液、心包积液 等全身各个部位的体液穿刺 胆汁
57
六、生殖道标本采集规范 • 推荐使用男性或女性专用拭子，置运送培养基送检。 • 男性前列腺：用肥皂和水清洗阴茎头，通过直肠按摩前列
腺，用无菌拭子收集液体或使液体进入无菌管内。 • 男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2～4cm，旋转拭
临床微生物样本采集规范
临床微生物样本采集规范临床微生物样本采集规范1. 范围和目的本规范适用于临床微生物样本的采集、处理和管理，旨在保证样本采集的质量和规范性，确保临床微生物诊断结果的准确性和可靠性。
2. 术语和定义（1）微生物：指包括细菌、真菌、病毒、支原体、立克次体、螺旋体等在内的微小生物体。
（2）临床样本：指从患者体内采集的各种生物标本，如血液、口腔、鼻咽部、骨髓、尿液、痰液、脑脊液等。
（3）采集容器：指用于采集临床样本的容器，如血液采集管、尿样瓶、培养皿等。
（4）采集套装：指一次完整的样本采集过程中所需的所有采集工具和材料。
3. 采集前准备（1）确定采集部位、时间和采集方式，注意患者的生命体征和病情变化。
（2）准备好所需的采集套装和采集容器，在样本采集前做好标签，并核对患者信息。
（3）认真阅读所有相关规范和实验室要求，确保样本采集符合要求。
4. 采集操作步骤（1）根据采集部位和样本类型选择合适的采集套装。
（2）采集前应让患者了解采集的目的和过程，并获得其同意。
（3）采集前要检查采集部位，患者的身体状态和生命体征，确保采集过程安全和无痛苦。
（4）采血时应注意采血量、采血速率、采血部位、采血方式等。
（5）尿样采集时应注意尿样的采集量、采集时间、采集方式、保护好样本的完整性和纯度。
（6）痰液采集时应注意痰液的颜色、黏度、量和纯度，选择合适的采集器具和采集方式。
（7）脑脊液采集时应注意采集部位、采集方式、采集量、采血顺序和样本处理标准等。
（8）其他临床样本采集时，应根据具体要求和操作规范，选择合适的采集方法和器具。
5. 样本运输和储存（1）在采集后，立即将样本放入相应的采集容器中，尽快送至实验室进行处理。
（2）若无法立即处理样本，应按要求在采集容器中注明采集时间和采集者信息，并存储在规定温度下，以便后续处理。
（3）运输过程中应遵循规范，确保样本不泄漏、不污染，并尽快送至目的地。
（4）储存过程中应保持样本的纯度和完整性，控制储存温度，在保质期内使用。
标本采集、运送标准操作规程
4 7
血培养 淋球菌培养
立即 30分钟
1小时 30分钟
阳性结果3天以上，阴性结果7天 2天
8
真菌培养
1小时
2小时
3天后
细菌室项目检验周期表
9 解脲、人型支原体培养及药敏、衣原体培 养 1小时 2小时 2天后
11
一般涂片革兰氏染色
1小时
2小时
5小时
当天下午
12
涂片找抗酸杆菌
1小时
2小时
5小时
当天下午
Байду номын сангаас
查询申请医师，补足标本信息。
仅有申请单而无标本或无菌容器内无标本
与原送检部门联系，退回申请单，要求重送标本
标本外漏及明显受污染（如开塞） 标本收集不符合采集要求 样本混入消毒液 或防腐剂
与原送检部门联系，退回申请单，建议重送标本。 退回申请单，及时通知临床，告知正确收集方法，要求重送标本 退回申请单，及时通知临床，建议重送标本。
13
新型隐球菌墨汁染色
1小时
1小时
5小时
当天下午
• 注： 1. 细菌室正常上班时间为周一至周六
全天、周日上午；其他时间（包括中午、 夜班、周日下午、）常规培养请送急诊化 验室。 • 2．各类血清学检测周一至周五做；支原体、 衣原体检查周一至周六上午做，其余时间 标本一律不接收。 • 3． 空气培养、物表监测周六、周日不做， 于周一至周五打电话给细菌室告之数量。
【标准操作程序】
• 3. 粪便样本
养：
• 5.1采集指征： • 当腹泻患者出现以下任何一种情况时建议采集粪便标本，进行细菌培
粪便涂片镜检白细胞＞5/HP 体温＞38.5℃ 重症腹泻 血便或便中有脓液 未经抗菌药物治疗的持续性腹泻病人
临床微生物标本的采集,储存和转运
临床微生物标本的采集，储存和转运微生物检验的基本原则1.及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作4.采样后立即送检5.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂6.送检标本应注明来源和检验目的标本采集1.尽早采集2.无菌操作3.合适部位4.适量标本5.适当方法6.安全采集1-尽早采集标本“采集重在时效性”1.1最好是病程早期、急性期1.2尽量在抗生素使用之前采集1.3对已用抗生素又不能停药者，可在下次用药前采集2-合适部位“背景干扰”2.1无菌标本:注意局部及周围皮肤的消毒，严格进行无菌操作与外界相通的腔道:避开腔道口区标本，以免皮肤表面正常菌群的污染，造成混淆和误诊。
2.2正常菌群寄生部位：采集时应特别小心；应明确检查的目的菌在进行分离培养时，采用特殊选择性培养基2.3血标本采集:应避免输液的影响。
3-无菌操作采集标本时应尽量减少或避免感染部位附近皮肤或粘膜常居菌群污染和防止外源性细菌污染标本。
3.1.在采集血液、脑脊液、胸腔积液、关节液等无菌标本时，应注意对局部及周围皮肤的消毒，严格进行无菌操作；3.2.对于采集与外界相通的腔道标本时，如窦道标本，应从窦道底部取活组织检查，而非从窦道口取标本，以免受皮肤表面正常菌群的污染，造成混淆和误诊；3.3.采集的标本均应盛于无菌容器内送检。
盛装标本的容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或使用一次性无菌容器，不能用消毒剂或酸类处理。
标本中也不得添加防腐剂，一面降低病原菌的分离率。
4-适量标本4.1标本采集应足量。
标本量过少，可能会导致假阴性结果。
4.1.1血液标本:通常成人采血量每瓶8-10ml,儿童每瓶1-5ml;脑脊液、骨髓、4.1.2脓肿、穿刺液、引流液、痰液等标本：三1ml尿液标本：＞3ml4.1.3粪标本：1-3g 或 1-3ml4.2结核标本采集量要求特殊：4.2.1痰、肺泡灌洗液或支气管冲洗液：>5ml;4.2.2清晨中段尿：5-10ml;4.2.3粪标本：>1g;4.2.4穿刺液(胸水、腹水、关节液等)：5- 10ml。
2024版年度临床微生物标本采集规范总结
优化采集方法和工具
根据不同类型的标本和采集需求， 选择合适的采集方法和工具，确 保采集到足够的标本量。
规范标本运输和保存
制定详细的标本运输和保存规范， 包括温度、光照等环境条件的控 制，确保标本在运输和保存过程 中保持质量稳定。
2024/2/2
31
未来发展趋势预测
2024/2/2
自动化和智能化技术应用 随着科技的不断发展，自动化和智能化技术将在临床微生 物标本采集中得到更广泛的应用，提高采集效率和准确性。
节。
2024/2/2
关键控制点分析
对标本采集过程中的关键控制点进 行了深入剖析，如无菌操作技术、 标本采集时机、采集量等因素对标 本质量的影响。
成功经验总结
总结了在实际操作过程中取得的成 功经验，如合理选用采集工具、正 确保存和运输标本等。
29
存在问题及原因分析
标本污染问题
分析了标本污染的主要原因，包括采集过程中未严格执行无菌操作、 采集容器不洁净等。
2024/2/2
重症患者样本
对于重症患者，其样本也 应优先处理，以便医生及 时了解患者病情。
特殊项目样本
对于某些特殊项目，如细 菌培养、药敏试验等，也 应优先处理，以缩短检验 周期。
26
及时反馈问题并改进工作流程
反馈问题
分析原因
在接收和处理过程中发现的问题，应及时反 馈给相关科室和人员。
对反馈的问题进行分析，找出问题产生的原 因。
临床微生物标本采集规范总结
2024/2/2
1
目 录
2024/2/2
• 标本采集重要性 • 标本采集前准备 • 不同类型标本采集方法 • 标本采集过程中质量控制措施 • 实验室接收和处理流程优化建议 • 总结反思与未来展望
临床微微生物标本的采集注意事项接种及涂片染色
第三十页，共67页
导管尖端阳性培养结果
第三十一页，共67页
6、脑脊液标本
⑴ 培养基：5%羊血琼脂、5%兔血巧克力琼脂、
葡萄糖肉汤
⑵ 培养环境：置5 % CO2、35℃环境培养。
第三十二页，共67页
7、胆汁或胸水或腹水标本
⑴ 培养基：如标本量大时可按血液培养方法直接
取16-20ml分别种入需氧和厌氧培养瓶。如标本
的外生殖器包括包皮内，然后用清水冲洗。
5、长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取
尿标本。
第四页，共67页
（三）分泌物的采集
1、对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃
体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、 生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐 水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭子采集 病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。
宜做培养的标本；
当白细胞≤10个／L ，上皮细胞≤25个／L时再参照油
镜观察标本中细菌分布作出判断。
第四十八页，共67页
痰镜检的判断标准：
当标本中细菌种类超过3种以上，未见到钎毛拄状上 皮细胞，作为不合格标本；如见到数量不等的白血
胞或钎毛拄状上皮细胞或两者同在，含1-2种不同细
菌，可考虑继续培养，结果可根据病情再作分析；当 涂片中见到1-3种细菌，少量的扁平上皮细胞，少量 或较多钎毛拄状上皮细胞均可按合格标本继续培养。
10ml）。 9、粪标本培养，放置时间过长，已干。
第十七页，共67页
三、分离培养基本操作规范
合格的标本是保证培养成功的重要条件，但如 果没有适宜的分离培养基、培养环境以及正确 的处理方法同样不能获得好的结果，为此制定
如下基本操作规范以保证致病细菌分离成功 。
导管尖端阳性培养结果
第三十一页，共67页
6、脑脊液标本
⑴ 培养基：5%羊血琼脂、5%兔血巧克力琼脂、
葡萄糖肉汤
⑵ 培养环境：置5 % CO2、35℃环境培养。
第三十二页，共67页
7、胆汁或胸水或腹水标本
⑴ 培养基：如标本量大时可按血液培养方法直接
取16-20ml分别种入需氧和厌氧培养瓶。如标本
的外生殖器包括包皮内，然后用清水冲洗。
5、长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取
尿标本。
第四页，共67页
（三）分泌物的采集
1、对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃
体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、 生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐 水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭子采集 病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。
宜做培养的标本；
当白细胞≤10个／L ，上皮细胞≤25个／L时再参照油
镜观察标本中细菌分布作出判断。
第四十八页，共67页
痰镜检的判断标准：
当标本中细菌种类超过3种以上，未见到钎毛拄状上 皮细胞，作为不合格标本；如见到数量不等的白血
胞或钎毛拄状上皮细胞或两者同在，含1-2种不同细
菌，可考虑继续培养，结果可根据病情再作分析；当 涂片中见到1-3种细菌，少量的扁平上皮细胞，少量 或较多钎毛拄状上皮细胞均可按合格标本继续培养。
10ml）。 9、粪标本培养，放置时间过长，已干。
第十七页，共67页
三、分离培养基本操作规范
合格的标本是保证培养成功的重要条件，但如 果没有适宜的分离培养基、培养环境以及正确 的处理方法同样不能获得好的结果，为此制定
如下基本操作规范以保证致病细菌分离成功 。
临床微生物检验标本采集规范要求★
24小时尿
记录尿量，将尿液混匀后取适量用于 检验。
粪便标本采集
自然排便
排便后用干净竹签取粪便 表面部分。
直肠拭子
在特殊情况下，如肠道感 染，可用直肠拭子采集粪 便。
粪便量
一般需采集足够量的粪便 用于检验。
呼吸道标本采集
痰液
患者自行咳出痰液，避免唾液和 鼻咽部分泌物。
支气管肺泡灌洗
在特殊情况下，如重症肺炎，可通 过支气管肺泡灌洗采集呼吸道标本 。
确定采集时间
根据患者的病情和检验目的，选择最 佳的采集时间，如空腹采集、餐后采 集等。
注意采集时间与用药时间的间隔，避 免药物对检验结果的影响。
采集人员防护措施
采集人员应穿戴符合要求的防护服、手套、口罩等，确保自 身安全。
采集过程中应遵循无菌操作原则，避免交叉感染和环境污染 。
02
标本采集方法
足或采集方法不当导致检验结果出现偏差。
03
标准化采集时间
根据疾病类型和病情发展，选择合适的采集时间可以提高检验准确性。
例如，对于急性感染患者，应在发热期采集标本；对于慢性感染患者，
应选择在疾病活动期采集。
保障患者安全
减少交叉感染风险
遵循无菌操作原则可以降低交叉感染的风险，保护患者安全。
避免患者不适
采集过程中，应避免接触非检 验部位，确保标本不受污染。
采集后应及时送检，避免长时 间存放导致污染。
防止标本变质
采集的标本应尽快送检，避免长时间 存放导致变质。
保存过程中应定期检查，确保标本质 量。
对于需要长时间保存的标本，应采取 适当的保存措施，如低温、干燥等。
其他注意事项
采集前应了解患者病情和用药情 况，避免干扰检验结果。
临床微生物标本采集和运送规范
➢ 可疑菌血症或真菌菌血症,但血培养持续阴性,应改 变血培养方法,以获得罕见的或苛养的微生物。
➢ 可疑细菌性心内膜炎,在1～2h内采集3份血标本,如 果24h后阴性,再采集3份以上的血标本。
12
脑脊液标本采集送检规范
❖ 采集时间：最好在抗菌药物使用前采集。 ❖ 采集方法：通常用腰穿的方法采集脑脊液，
➢ 采集数量：对于细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连 续2～3天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状 出现改变。
➢ 标本运送：标本应尽快送检（1-2h内），如不能及时
送检，室温保存≤2h，4℃冰箱保存≤24h。
16
生殖道标本采集送检规范
❖ 应由临床医师采集，用无菌棉拭子采集。淋球菌 检查时，不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入 尿道及子宫颈3cm深取样送检，要避免受阴道分 泌物污染。
离体后回迅速自溶。肺炎链球菌和流感嗜血杆菌 离体后极易死亡。）。延迟送检时一定不能放冰 箱，肺炎链球菌和流感嗜血杆菌等对温度敏感的 细菌在冰箱会很快死亡。 ❖ 各种无菌体液标本，如胸腹水、浆膜腔积液及各 种穿刺液等亦可注入血培养瓶以提高培养的阳性 率。
14
尿液标本采集运送规范
❖ 采集时间：尽量在抗菌药物使用前（多数药物从尿道 排泄）。
15
痰标本采集运送规范
❖ 采集时间：尽量在使用抗菌药物之前 ❖ 采集方法： ➢ 自然咳痰：以晨痰为佳。咳痰前应清洁口腔如刷牙和
漱口，然后用力咳出呼吸道深部痰，直接吐入于无菌 容器中。痰少或无痰者可用3-5%NaCl水溶液5ml雾化吸 入5min导痰（气道高反应如哮喘病人不宜采用此法）。 对于难于自然咳痰者可用微生物室提供的一次性无菌 吸痰杯抽取气管深部分泌物。 ➢ 小儿取痰法 最好用微生物实验室提供的一次性无菌 吸痰杯抽取气管深部分泌物。
➢ 可疑细菌性心内膜炎,在1～2h内采集3份血标本,如 果24h后阴性,再采集3份以上的血标本。
12
脑脊液标本采集送检规范
❖ 采集时间：最好在抗菌药物使用前采集。 ❖ 采集方法：通常用腰穿的方法采集脑脊液，
➢ 采集数量：对于细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连 续2～3天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状 出现改变。
➢ 标本运送：标本应尽快送检（1-2h内），如不能及时
送检，室温保存≤2h，4℃冰箱保存≤24h。
16
生殖道标本采集送检规范
❖ 应由临床医师采集，用无菌棉拭子采集。淋球菌 检查时，不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入 尿道及子宫颈3cm深取样送检，要避免受阴道分 泌物污染。
离体后回迅速自溶。肺炎链球菌和流感嗜血杆菌 离体后极易死亡。）。延迟送检时一定不能放冰 箱，肺炎链球菌和流感嗜血杆菌等对温度敏感的 细菌在冰箱会很快死亡。 ❖ 各种无菌体液标本，如胸腹水、浆膜腔积液及各 种穿刺液等亦可注入血培养瓶以提高培养的阳性 率。
14
尿液标本采集运送规范
❖ 采集时间：尽量在抗菌药物使用前（多数药物从尿道 排泄）。
15
痰标本采集运送规范
❖ 采集时间：尽量在使用抗菌药物之前 ❖ 采集方法： ➢ 自然咳痰：以晨痰为佳。咳痰前应清洁口腔如刷牙和
漱口，然后用力咳出呼吸道深部痰，直接吐入于无菌 容器中。痰少或无痰者可用3-5%NaCl水溶液5ml雾化吸 入5min导痰（气道高反应如哮喘病人不宜采用此法）。 对于难于自然咳痰者可用微生物室提供的一次性无菌 吸痰杯抽取气管深部分泌物。 ➢ 小儿取痰法 最好用微生物实验室提供的一次性无菌 吸痰杯抽取气管深部分泌物。
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–经支气管镜直接吸引 –支气管肺泡灌洗 –防污染样本毛刷
下呼吸道标本采集方法
3
胃内采痰法：无自觉症状的肺结核病人尤 其婴幼儿不会咳嗽，有时将痰误咽入胃中， 可采集胃内容物做结核分支杆菌培养。 4 小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将拭 子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽，可喷出 肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还 可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
血培养标本的运送
采集后的血培养瓶应在1小时之内送往
实验室。 血培养瓶在采血接种后在室温不超过 数小时。 血培养瓶在接种前和接种后均不得冷 藏或冷冻。
血培养假阳性的危害
1、增加患者抗生素用量，破坏其微生态环境 2、延长了住院天数 3、延误病情诊断 4、增加经济负担
防止皮肤寄生菌或环境微生物污染
但由于标本的采集和运送常有护士或医
生或病人自己完成，所以也是最不容易 做好的事情，而且不知道问题所在之处 ，造成的后果是: 临床医生最不能接受的问题:阳性率低
微生物样本采样基本原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作，将污染情形降至最低。 4.采样后立即送检，最好在2h内。甚至床旁接种尤其是 厌氧培养，棉拭子标本宜用运送培养基，尽量不要以 棉花拭子收集样本。 5. 标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。 6.送检标本应注明来源和检验目的 7.混有正常菌群的标本如痰、尿、伤口拭子，不可置肉 汤培养。 8.安全：标本收集时，注意安全防护；标本收集后，须 避免他人被感染。
咳痰标本不合格，退检吗？
如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于25个，
白细胞小于10个，应不做或仅在特殊要求 时做培养。
如做培养，报告中注明“镜检结果表明标
本口咽分泌物污染明显”。
下呼吸道标本采集方法
1
自然咳痰法：晨痰、漱口，深咳呼吸道 深部痰（非后鼻部分泌物、非唾液）留于 无菌容器内。对于痰量少或无痰的患者可 采用雾化吸入45℃10％NaCL 水溶液，使痰 液易于排出。 2 支气管镜采集法：
临床标本的分类
带菌标本
痰 咽拭子 尿液 粪便 其他类别
无菌标本
血液 脑脊液 关节腔积液 胸腹水 其他类别
一、血培养操作规范
临床常见的采血指征
发热（38C）或低温（36C） 寒战 白细胞增多（计数大于 10109/L，特别有“核左
移” 未成熟的或杆状核的白细胞） 粒细胞减少（成熟的多核白细胞<1000109/L） 血小板减少 皮肤粘膜出血 昏迷 ，休克 多器官衰竭 CRP/PCT升高
特别注意
尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道内 或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能导致 错误的培养结果。 诊断症状明显的病人（如尿急、尿频、尿痛），一份标 本就已足够，治疗48 ～ 72小时后再采集第二份标本。 对于症状不明显的病人，需采集2 ～ 3份标本。怀疑肾 结核时，应连续3天采集晨尿。
皮肤消毒程序，严格执行三步法:
1、用75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上 2、用1%-2%碘酊作用30s或10%碘伏作用60s，从穿刺点 向外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上，涂擦穿
刺皮肤2遍，待干燥。
3、75%酒精脱碘：用75%酒精由内向外方向涂抹去碘酒 液 ，待酒精挥发干燥后采血。
徐英春，倪语星等。血培养操作规范，上海科学技术出版社，2002,1-31
二、泌尿标本采集的规范
尿液培养标本送检指征
1
有典型的尿路感染症状； 2 肉眼脓尿或血尿； 3 尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸 盐阳性； 4 不明原因的发热，无其他局部症状； 5 留置导尿管的病人出现发热； 6 膀胱排空功能受损； 7 泌尿系统疾病手术前。
您知道吗？
泌尿标本采集的规范
1、采集后的标本应立即送检。标本采集
后应立即送检，否则可暂存于4℃冰箱。 2、采集时间：多数药物从尿道排泄，所 以不管用哪种方法都应在用药前采集。 应采集早晨第一次的尿。 3、标本管不应含防腐剂和消毒剂。
泌尿标本采集的规范
4、采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的
外阴和男性的外生殖器包括包皮内，然 后用清水冲洗。 5、长期留置导尿管的患者应在更换新管 时留取尿标本。 6、 做厌氧培养时应膀胱穿刺采集尿。
临床微生物样本采集规范
正确的采取、处理与运送本是临床微生物检 验成功与直接关系检验结果的基本关键。 如果标本采集不当，即使有经验的实 验室工作者及最好的仪器设备也难以弥补 在采集标本时引入的误差和错误。 标本采取与处理不符合要求，则微生 物培养的结果毫无意义。
标本采集和运送是 细菌培养成功的最最重要的关键
三、下呼吸道分泌物（痰培养） 标本采取规范
下呼吸道标本标本送检指征
1 咳嗽、咳痰：痰液可为脓性、血性、铁锈色或 红棕色胶胨样痰。 2 咯血：肺结核病人常痰中带血。 3 呼吸困难 4 发热 5 胸痛：当炎症病变累及壁层胸膜时，会发生胸 痛。 肺部感染的患者有25 ～ 50％可能发生菌血症， 应同时作血培养。
尿培养样本采集方法
标本采集应力争在未使用抗生素之前．注意 避免消毒剂污染标本
1 清洁中段尿中段尿（晨尿最佳）约10 ～ 20ml直 接排入专用的无菌容器中，立即送检，2h内接种。 2 耻骨上膀胱穿刺：评估膀胱内细菌感染的“金标 准”方法。 3 直接导尿：可减污染，准确反映膀胱感染情况。 4 留置导尿管收集尿液：穿刺导尿管吸取尿液，不 能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿患者，应在 更换新尿管时留取尿标本。
我国痰细菌培养现状
结果重复性差 感染菌与污染菌不易区分 药敏结果与治疗反应存在差距
咳痰标本的采集
标本采集方法
– 医师或护士直视下采集标本 – 病人先漱口，去除表面的菌群 – 教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液
临床上约半数咳痰标本不合格！
关于咳痰标本
在抗生素应用前采集痰标本; 标本采集后1 ～ 2h内必须立即进行实验室处理； 咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标本 ; 取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口 ; 深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导 ; 无痰可用3％ ～ 5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰； 也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰；
分类中1 ～ 3类不做培养，要求重新留取标本：4、5 类为合格标本：6类为气管穿刺液，如未见到白细胞， 而扁平上皮细胞>10/低倍镜视野，亦应重新留取标本。
痰培养的送检次数
对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，
连续2 ～ 3天。不建议24h内多次采集，除非 痰液外观性状出现改变； ห้องสมุดไป่ตู้怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰 液送检； 怀疑军团菌或深部真菌感染，痰标本理想的送 检次数尚无定论。
标本的质量检查
于显微镜低倍镜下检查（10x10），观察WBC及扁平上 皮细胞存在情况，作为参考： 痰标本显微镜检查的分类
分类 (级 ) 6 5 4 3 2 1 细胞数/低倍镜视野 白细胞 扁平上皮细胞 <25 <25 >25 <10 >25 10-25 >25 >25 10-25 >25 <10 >25
正常人尿液是无菌的，而尿液细菌培养 最大的问题是杂菌污染。正常人外尿道有 大肠杆菌、葡萄球菌等存在。而这些细菌 又是尿路感染中常见的病源菌。因此要作 好尿液细菌学检查，首先应注意标本收集 问题。
您知道吗？
尿液经尿道排出时会受到尿道内正常
菌群的污染,但定量培养时计数不会超 过103 CFU /m l, 泌尿系感染时定量 培养在104 ～ 105 CFU /m l 。 另外,由于绝大多数的泌尿系感染是由 肠杆菌科细菌引起,而此类细菌的硝酸 盐还原实验为阳性,故可参考尿十项检 查中的硝酸盐还原实验来推断是否有 细菌感染。
培养瓶消毒程序
打开血培养瓶塑料盖用75%酒精消毒血 培养瓶橡皮塞并擦干表面残余酒精→消 毒皮肤后用无菌注射器抽取血液从橡皮 塞处注入血培养瓶内→用75%酒精重新消 毒血培养瓶橡皮塞并盖好塑料盖→立即 送检。
血培养的采血量
血培养中采集血液的量，是影响细菌或真菌血 症检测最重要的因素，特别是成年患者。 成人采集量5-10ml（推荐最好8-10ml），儿童 采血量1-3ml。婴幼儿患者，采血量不超过患 者总血量的1％。 Why?成人血液中每毫升的菌落形成单位(CFU) 很低，是检出率的相关因素, 因此增加送检血 液量可以提升检出率;而儿童的血液中每毫升的 菌落形成单位(CFU)是成人10-100倍，因此采 集血量少于成人。
特别注意
多次收集或24小时尿不能用作培养。 申请单上必须注明病人症状是否明显，这对于 定量培养分析非常重要，尤其只有少量尿液标 本。
室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因 此若30min内不能及时培养尿液则必须冷藏， 但也不能超过24小时。
特别注意
多数药物从尿道排泄,所以标本采集应 力争在未使用抗生素之前或停用抗菌药 5d之后留取尿液标本;尿液在膀胱内应停 留6 ～ 8h以上，使细菌有足够的时间繁 殖,故应尽量采集早晨第一次的尿,同时 注意避免消毒剂污染标本。
菌血症病人血中细菌浓度
成年病人: 链球菌心内膜炎 葡萄球菌心内膜炎 革兰氏阴性菌血症 organisms/ml 革兰氏阳性菌血症 幼儿病人: 革兰氏阴性菌血症 organisms/ml 75%幼儿菌血症病人血液有
1 to 30 organisms/ml 1 to 20 organisms/ml 少于 1 to 10
痰培养的运送和保存
所有病人的下呼吸道标本应在采集后立即送至
微生物室，并于1小时内接种 如不能及时送达，应将标本暂存于4℃，但放 置时间不可超过24h。运输时勿置于冰块中 被口咽部菌群污染的标本如咳痰等不可用于厌 氧菌培养。 室温下放置>1h会降低肺炎链球菌、流感嗜血 杆菌的分离率而定植于上呼吸道的非致病菌则 会过度生长
下呼吸道标本采集方法
3
胃内采痰法：无自觉症状的肺结核病人尤 其婴幼儿不会咳嗽，有时将痰误咽入胃中， 可采集胃内容物做结核分支杆菌培养。 4 小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将拭 子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽，可喷出 肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还 可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
血培养标本的运送
采集后的血培养瓶应在1小时之内送往
实验室。 血培养瓶在采血接种后在室温不超过 数小时。 血培养瓶在接种前和接种后均不得冷 藏或冷冻。
血培养假阳性的危害
1、增加患者抗生素用量，破坏其微生态环境 2、延长了住院天数 3、延误病情诊断 4、增加经济负担
防止皮肤寄生菌或环境微生物污染
但由于标本的采集和运送常有护士或医
生或病人自己完成，所以也是最不容易 做好的事情，而且不知道问题所在之处 ，造成的后果是: 临床医生最不能接受的问题:阳性率低
微生物样本采样基本原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作，将污染情形降至最低。 4.采样后立即送检，最好在2h内。甚至床旁接种尤其是 厌氧培养，棉拭子标本宜用运送培养基，尽量不要以 棉花拭子收集样本。 5. 标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。 6.送检标本应注明来源和检验目的 7.混有正常菌群的标本如痰、尿、伤口拭子，不可置肉 汤培养。 8.安全：标本收集时，注意安全防护；标本收集后，须 避免他人被感染。
咳痰标本不合格，退检吗？
如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于25个，
白细胞小于10个，应不做或仅在特殊要求 时做培养。
如做培养，报告中注明“镜检结果表明标
本口咽分泌物污染明显”。
下呼吸道标本采集方法
1
自然咳痰法：晨痰、漱口，深咳呼吸道 深部痰（非后鼻部分泌物、非唾液）留于 无菌容器内。对于痰量少或无痰的患者可 采用雾化吸入45℃10％NaCL 水溶液，使痰 液易于排出。 2 支气管镜采集法：
临床标本的分类
带菌标本
痰 咽拭子 尿液 粪便 其他类别
无菌标本
血液 脑脊液 关节腔积液 胸腹水 其他类别
一、血培养操作规范
临床常见的采血指征
发热（38C）或低温（36C） 寒战 白细胞增多（计数大于 10109/L，特别有“核左
移” 未成熟的或杆状核的白细胞） 粒细胞减少（成熟的多核白细胞<1000109/L） 血小板减少 皮肤粘膜出血 昏迷 ，休克 多器官衰竭 CRP/PCT升高
特别注意
尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道内 或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能导致 错误的培养结果。 诊断症状明显的病人（如尿急、尿频、尿痛），一份标 本就已足够，治疗48 ～ 72小时后再采集第二份标本。 对于症状不明显的病人，需采集2 ～ 3份标本。怀疑肾 结核时，应连续3天采集晨尿。
皮肤消毒程序，严格执行三步法:
1、用75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上 2、用1%-2%碘酊作用30s或10%碘伏作用60s，从穿刺点 向外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上，涂擦穿
刺皮肤2遍，待干燥。
3、75%酒精脱碘：用75%酒精由内向外方向涂抹去碘酒 液 ，待酒精挥发干燥后采血。
徐英春，倪语星等。血培养操作规范，上海科学技术出版社，2002,1-31
二、泌尿标本采集的规范
尿液培养标本送检指征
1
有典型的尿路感染症状； 2 肉眼脓尿或血尿； 3 尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸 盐阳性； 4 不明原因的发热，无其他局部症状； 5 留置导尿管的病人出现发热； 6 膀胱排空功能受损； 7 泌尿系统疾病手术前。
您知道吗？
泌尿标本采集的规范
1、采集后的标本应立即送检。标本采集
后应立即送检，否则可暂存于4℃冰箱。 2、采集时间：多数药物从尿道排泄，所 以不管用哪种方法都应在用药前采集。 应采集早晨第一次的尿。 3、标本管不应含防腐剂和消毒剂。
泌尿标本采集的规范
4、采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的
外阴和男性的外生殖器包括包皮内，然 后用清水冲洗。 5、长期留置导尿管的患者应在更换新管 时留取尿标本。 6、 做厌氧培养时应膀胱穿刺采集尿。
临床微生物样本采集规范
正确的采取、处理与运送本是临床微生物检 验成功与直接关系检验结果的基本关键。 如果标本采集不当，即使有经验的实 验室工作者及最好的仪器设备也难以弥补 在采集标本时引入的误差和错误。 标本采取与处理不符合要求，则微生 物培养的结果毫无意义。
标本采集和运送是 细菌培养成功的最最重要的关键
三、下呼吸道分泌物（痰培养） 标本采取规范
下呼吸道标本标本送检指征
1 咳嗽、咳痰：痰液可为脓性、血性、铁锈色或 红棕色胶胨样痰。 2 咯血：肺结核病人常痰中带血。 3 呼吸困难 4 发热 5 胸痛：当炎症病变累及壁层胸膜时，会发生胸 痛。 肺部感染的患者有25 ～ 50％可能发生菌血症， 应同时作血培养。
尿培养样本采集方法
标本采集应力争在未使用抗生素之前．注意 避免消毒剂污染标本
1 清洁中段尿中段尿（晨尿最佳）约10 ～ 20ml直 接排入专用的无菌容器中，立即送检，2h内接种。 2 耻骨上膀胱穿刺：评估膀胱内细菌感染的“金标 准”方法。 3 直接导尿：可减污染，准确反映膀胱感染情况。 4 留置导尿管收集尿液：穿刺导尿管吸取尿液，不 能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿患者，应在 更换新尿管时留取尿标本。
我国痰细菌培养现状
结果重复性差 感染菌与污染菌不易区分 药敏结果与治疗反应存在差距
咳痰标本的采集
标本采集方法
– 医师或护士直视下采集标本 – 病人先漱口，去除表面的菌群 – 教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液
临床上约半数咳痰标本不合格！
关于咳痰标本
在抗生素应用前采集痰标本; 标本采集后1 ～ 2h内必须立即进行实验室处理； 咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标本 ; 取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口 ; 深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导 ; 无痰可用3％ ～ 5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰； 也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰；
分类中1 ～ 3类不做培养，要求重新留取标本：4、5 类为合格标本：6类为气管穿刺液，如未见到白细胞， 而扁平上皮细胞>10/低倍镜视野，亦应重新留取标本。
痰培养的送检次数
对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，
连续2 ～ 3天。不建议24h内多次采集，除非 痰液外观性状出现改变； ห้องสมุดไป่ตู้怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰 液送检； 怀疑军团菌或深部真菌感染，痰标本理想的送 检次数尚无定论。
标本的质量检查
于显微镜低倍镜下检查（10x10），观察WBC及扁平上 皮细胞存在情况，作为参考： 痰标本显微镜检查的分类
分类 (级 ) 6 5 4 3 2 1 细胞数/低倍镜视野 白细胞 扁平上皮细胞 <25 <25 >25 <10 >25 10-25 >25 >25 10-25 >25 <10 >25
正常人尿液是无菌的，而尿液细菌培养 最大的问题是杂菌污染。正常人外尿道有 大肠杆菌、葡萄球菌等存在。而这些细菌 又是尿路感染中常见的病源菌。因此要作 好尿液细菌学检查，首先应注意标本收集 问题。
您知道吗？
尿液经尿道排出时会受到尿道内正常
菌群的污染,但定量培养时计数不会超 过103 CFU /m l, 泌尿系感染时定量 培养在104 ～ 105 CFU /m l 。 另外,由于绝大多数的泌尿系感染是由 肠杆菌科细菌引起,而此类细菌的硝酸 盐还原实验为阳性,故可参考尿十项检 查中的硝酸盐还原实验来推断是否有 细菌感染。
培养瓶消毒程序
打开血培养瓶塑料盖用75%酒精消毒血 培养瓶橡皮塞并擦干表面残余酒精→消 毒皮肤后用无菌注射器抽取血液从橡皮 塞处注入血培养瓶内→用75%酒精重新消 毒血培养瓶橡皮塞并盖好塑料盖→立即 送检。
血培养的采血量
血培养中采集血液的量，是影响细菌或真菌血 症检测最重要的因素，特别是成年患者。 成人采集量5-10ml（推荐最好8-10ml），儿童 采血量1-3ml。婴幼儿患者，采血量不超过患 者总血量的1％。 Why?成人血液中每毫升的菌落形成单位(CFU) 很低，是检出率的相关因素, 因此增加送检血 液量可以提升检出率;而儿童的血液中每毫升的 菌落形成单位(CFU)是成人10-100倍，因此采 集血量少于成人。
特别注意
多次收集或24小时尿不能用作培养。 申请单上必须注明病人症状是否明显，这对于 定量培养分析非常重要，尤其只有少量尿液标 本。
室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因 此若30min内不能及时培养尿液则必须冷藏， 但也不能超过24小时。
特别注意
多数药物从尿道排泄,所以标本采集应 力争在未使用抗生素之前或停用抗菌药 5d之后留取尿液标本;尿液在膀胱内应停 留6 ～ 8h以上，使细菌有足够的时间繁 殖,故应尽量采集早晨第一次的尿,同时 注意避免消毒剂污染标本。
菌血症病人血中细菌浓度
成年病人: 链球菌心内膜炎 葡萄球菌心内膜炎 革兰氏阴性菌血症 organisms/ml 革兰氏阳性菌血症 幼儿病人: 革兰氏阴性菌血症 organisms/ml 75%幼儿菌血症病人血液有
1 to 30 organisms/ml 1 to 20 organisms/ml 少于 1 to 10
痰培养的运送和保存
所有病人的下呼吸道标本应在采集后立即送至
微生物室，并于1小时内接种 如不能及时送达，应将标本暂存于4℃，但放 置时间不可超过24h。运输时勿置于冰块中 被口咽部菌群污染的标本如咳痰等不可用于厌 氧菌培养。 室温下放置>1h会降低肺炎链球菌、流感嗜血 杆菌的分离率而定植于上呼吸道的非致病菌则 会过度生长