抗原与免疫血清的制备(实验报告)
抗原与免疫血清的制备(实验报告)
抗原与免疫血清的制备××××××××××抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫特异性的球蛋白。
在免疫学实践中，为制备抗体常以抗原性物质（细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质）给动物注射。
经过一定时间后，动物血清中可以产生大量的特异性抗体。
这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清或者抗血清。
免疫血清的制备是一项常用的免疫学技术，高效价，高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂（如用于制备免疫标记抗体等），也可供特异性免疫治疗用[1]。
免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。
如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体，常可获得高效价的免疫血清。
而使用免疫原性弱的抗原免疫时，则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。
免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。
因此，如欲获得高特异性的免疫血清，必须予先纯化抗原。
此外，抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等，也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。
在本实验中采用ELISA法和凝集反应的原理来测定免疫血清的效价：ELISA测定的原理是利用标记技术将酶标记到抗体（抗原）上，使待检物中相应的抗原（抗体）与酶标记抗体（抗原）发生特异性反应。
在遇到相应的酶底物时，酶能高效、专一催化、分解底物，生成有颜色的产物。
根据颜色的深、浅、可以判断待检物中有无特异的抗原（抗体）以及量的大小。
该方法可对待检样品进行定性和定量分析；同时具有微量、特异、高效、经济、简便等优点，因此是一种广泛应用于生物和医学领域的微量测定技术。
凝集反应是一种经典的抗原抗体反应，也是高等医学院校学生免疫学实验的重要内容之一，它是指可溶性抗原及其相应抗体在一定条件下出现肉眼可见的沉淀物的现象[2]。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类。
前者可利用已知抗血清鉴定未知细菌，优点是极端快速，为诊断肠道传染病时鉴定病人标本中肠道细菌的重要手段；后者是一种定量法，现已发展成微量滴定凝集法，它可利用已知抗原测定人体内抗体的水平(效价)，也是诊断肠道传染病的重要方法。
抗原与免疫血清的制备(实验报告)
抗原与免疫血清的制备（实验报告）【实验报告】一、实验目的1.了解抗原的制备方法；2.了解免疫血清的制备方法；3.掌握抗原和免疫血清的试剂及设备的使用方法。
二、实验原理1.抗原的制备方法：常用抗原制备方法包括：（1）病原体抗原制备：将病原体培养后，通过离心、洗涤、冻融、超声等方法破碎病原体细胞，制备出包含病原体各种蛋白质的抗原混悬液；（2）纯化蛋白质抗原：通过分离技术从病原体中纯化特定蛋白质，如SDS-、Western blot等；（3）人工合成抗原：通过化学合成方法将特定蛋白质的氨基酸序列合成而成。
2.免疫血清的制备方法：（1）动物免疫：选择合适的免疫动物，如小鼠、兔子等，根据抗原的性质选择合适的免疫途径（常见的包括腹腔注射、皮下注射等）。
进行多次免疫后，采集免疫动物的血清；（2）离心和混合：将采集到的免疫动物血清离心沉淀，去除血细胞等杂质，使得血清达到一定的纯度；三、实验步骤1.抗原制备方法：（1）收集需要制备的病原体；对于纯化蛋白质抗原和人工合成抗原，根据实验需要获取相应的试剂。
（2）病原体抗原制备：将病原体培养至稳定的指标，通过离心收集菌体，洗涤后用适量缓冲液悬浮，并通过适当的方法破碎菌体，制备出抗原混悬液。
（3）纯化蛋白质抗原：将病原体提取蛋白质，通过SDS-等纯化方法获得目标蛋白质。
（4）人工合成抗原：根据目标蛋白质的氨基酸序列，通过化学合成方法合成抗原。
（5）对制备的抗原进行定性、定量检测和保存。
2.免疫血清的制备方法：（1）动物免疫：选择合适的免疫动物，按照需要接种适量的抗原，包括免疫剂量、注射途径等。
（2）免疫动物血清的采集：根据免疫动物的免疫接种时间表，选择合适的时机采集血清。
（3）离心和混合：将采集到的血液样品通过离心分离血清，去除血细胞等杂质。
四、实验结果与分析经过抗原的制备和免疫动物的免疫接种后，成功制备出抗原混悬液和免疫血清。
对抗原混悬液进行定性、定量检测，判断抗原的活性和浓度；对免疫血清进行定性、定量检测，判断抗体的活性和浓度，并检测血清中是否存在其他污染物。
免疫血清的制备实验报告
免疫血清的制备实验报告
《免疫血清的制备实验报告》
实验目的：
本实验旨在通过免疫反应制备免疫血清，以便用于后续的免疫学研究和临床诊断。
实验材料和方法：
1. 实验动物：选择适合的实验动物，如小鼠或兔子，进行免疫原注射。
2. 免疫原制备：根据研究需要选择合适的抗原，并进行纯化和浓缩处理。
3. 免疫程序：将免疫原与适宜的佐剂混合，然后注射到实验动物体内，以激发免疫反应。
4. 血清采集：在免疫原注射后，定期采集实验动物的血清样本，以监测抗体水平。
5. 血清制备：通过离心和沉淀的方法，从血清中分离出免疫球蛋白，得到免疫血清。
实验结果：
经过一系列的免疫程序和血清采集，成功制备得到了免疫血清。
通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹（Western blot）等方法，验证了免疫血清中存在特定的抗体，具有对应的特异性和亲和力。
实验结论：
本实验成功制备了具有特定抗体的免疫血清，为后续的免疫学研究和临床诊断提供了重要的实验材料。
免疫血清的制备过程复杂而精细，需要严格控制各个环节，以确保免疫血清的质量和稳定性。
实验意义：
免疫血清作为一种重要的实验试剂，在免疫学研究和临床诊断中具有广泛的应
用前景。
通过本实验的制备过程，可以更好地理解免疫反应的机制，为疾病的
诊断和治疗提供重要的实验依据。
同时，免疫血清的制备也为相关领域的科研
人员提供了一种重要的实验技术和方法，有助于推动免疫学研究的进展和应用。
1-1-免疫血清制备及效价测定
测定免疫血清中抗体效价旳措施诸多，如凝集反应、沉淀反应、溶血反应、 ELISA分析等均可用于对抗体效价旳测定。
此次试验将采用溶血试验测定所获免疫血清旳效价。
• 抗原旳两种特征：免疫原性与抗原性
• 免疫原性旳本质——异物性
• 与机体亲缘关系越远，组织构造旳差别越 大，异物性越强。
试验材料
1. 40% SRBC 2. 18-22g旳BALB/C系小白鼠 3. 无菌1ml 注射器 4. 抗凝剂（枸橼酸钠或肝素） 5. 新鲜豚鼠血清（作为补体用） 6. 小试管等
实验内容
1、免疫动物
首次免疫小鼠为腹腔注射40%绵羊红细胞 （SRBC）0.2ml，后来分别于第4天、第7天和第10 天时间，以相同免疫剂量、相同免疫途径加强免疫。
小ห้องสมุดไป่ตู้腹腔注射
1. 小鼠腹腔注射能够用1ml旳注射器，配合4号针头。 2. 腹腔注射时右手持注射器，左手旳小指和无名指抓住小鼠旳
尾巴，另外三个手指抓住小鼠旳颈部，使小鼠旳头部向下。 这么腹腔中旳器官就会自然倒向胸部，预防注射器刺入时损 伤大肠、小肠等器官。进针旳动作要轻柔，预防刺伤腹部器 官。 3. 尤其是对于体重较小旳小鼠，腹腔注射时针头能够在腹部皮 下穿行一小段距离，最佳是从腹部一侧进针，穿过腹中线后 在腹部旳另一侧进入腹腔，注射完药物后，缓缓拔出针头， 并轻微旋转针头，预防漏液。
试验1-1 免疫血清制备及效价测定
实验目旳和要求
1、学习抗血清旳制备措施； 2、掌握抗血清旳搜集和保存措施； 3、掌握免疫血清效价旳测定措施。
抗原制备的实验报告
抗原制备的实验报告一、实验目的本实验旨在通过制备抗原，提高对特定免疫原的免疫能力，从而进一步认识抗原的制备和应用。
二、实验原理抗原是一种能够激发机体产生特异性免疫应答的物质，通常可分为低分子量和高分子量两类。
低分子量抗原主要是指药物、激素、有机化合物等，而高分子量抗原主要是指蛋白质、多糖、核酸等。
抗原的制备主要包括以下几个步骤：1. 确定抗原：根据实验目的和需要，选择特定的抗原进行制备。
2. 提取抗原：从生物样品中提取目标抗原，常用方法包括细胞裂解、超声破碎、离心、柱层析等。
3. 纯化抗原：使用柱层析、凝胶过滤等技术，将抗原与其他杂质分离，获得纯净的抗原。
4. 浓缩抗原：将纯净的抗原浓缩至适宜浓度，便于后续实验的使用。
三、实验步骤1. 实验准备：清洗实验器材，并将所需溶液按比例配制好。
2. 抗原提取：取适量的生物样品，如细胞液、血清等，进行裂解或超声破碎，释放抗原。
根据需要，可能需要添加蛋白酶抑制剂、麦芽糖等保护剂。
3. 离心分离：将裂解后的样品进行离心，分离固体残渣和上清液。
上清液中含有目标抗原。
4. 柱层析：将上清液加入已经平衡好的层析柱中，根据抗原的特性选择合适的层析介质，如离子交换层析树脂、亲和层析树脂等。
通过洗脱方法，将抗原与其他成分分离。
5. 浓缩：将洗脱后的抗原溶液经过浓缩处理，以获得适用于后续实验的浓缩抗原。
四、实验结果与分析经过实验制备得到的抗原，经过SDS-PAGE电泳分析可见，目标蛋白条带的浓度较高，且无明显的杂带。
通过浓缩抗原，使其浓度达到1000μg/ml，便于后续实验的使用。
五、实验总结通过本次实验，我们成功地制备了目标抗原，并获得了一定浓度的纯净抗原。
本实验中使用的方法可以适用于其他抗原的制备，同时也了解了抗原的重要性及应用。
实验过程中需要注意对实验器材的清洗和消毒，以避免杂质的污染对抗原制备的影响。
六、参考文献[1] 李晓杰，杨立波，陈薇薇，等. 抗原制备及其在抗体制备与检测中的应用进展[J]. 生物技术通讯，2017，28（6）: 900-905.。
抗血清 的制备
抗血清的制备抗血清制备是一种常见的免疫学实验技术，用于检测特定物质的存在和数量。
下面将对抗血清制备的原理、步骤及注意事项进行详细介绍。
一、原理抗血清是由动物免疫某种抗原制备得到的一种免疫血清，其中包含了特异性抗体。
抗血清制备的原理是通过注射一定量的特异性抗原到动物体内，使其产生特异性抗体，然后收集抗血清。
二、材料和试剂1.抗原：需要制备抗血清的特定抗原。
2.兔、小鼠等动物。
3.盐酸：用于调整兔抗血清的pH值。
4.取血器：用于采集动物血液。
5.离心管、离心机：用于收集血清。
6.不含菌的容器：用于保存抗血清。
三、步骤根据实验要求，制备特定抗原，可以是蛋白质、细胞、病毒、细菌等。
2.制作与抗原相应的抗体兔/小鼠选择适宜种类的动物，注射免疫原，隔一段时间后，在动物体内试验特异性抗体的出现，出现后即可采血制血清。
一般来讲，兔子被认为是制备抗血清的最佳动物，而小鼠常常会出现交叉反应。
3.采集兔血液注射完最后一次免疫原后一周左右，在一个清洁的容器上臂处用取血器采血2-3ml。
离心采集到的兔血液，定量将其分离出血清，再加入盐酸，调节pH值，即可得到兔抗血清。
5.评价抗血清的质量评价抗血清的质量，主要是通过测定抗体滴度来判断抗血清的特异性和强度。
四、注意事项1.严格控制免疫原和免疫过程，确保抗原和抗体的特异性和纯度。
2.合理选择免疫动物种类，不同种类免疫动物会对抗原产生不同反应。
3.采血时要注意安全和卫生，防止感染病毒和细菌。
4.在制备抗血清的过程中需要注意保护动物的健康和福利，并严格按照实验室安全规范操作。
免疫血清的制备实验报告
实验报告实验名称多克隆抗体的制备一（抗血清制备）实验日期院系专业班级姓名学号一、实验目的了解免疫的原理，掌握免疫方法和抗血清的制备技术。
二、实验器材试剂：酒精棉球、NDV灭活油乳剂疫苗、麻醉剂器材：兔笼、注射器、剃毛剪、手术刀、止血钳、手术剪（组织剪、眼科剪）、动脉夹、眼科剪、动脉导管、纱布、棉线、细线、培养箱、冰箱、结扎细线、离心机、温箱三、实验原理1.机体的特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产体液免疫和细胞免疫的过程。
一种抗原能否引发抗体反应，一方面取决于抗原分子表面有无特异性的化学结构——抗原决定簇，另一方面取决于机体有无相应的免疫活性细胞。
2.将具有免疫原性的物质注入健康动物体内后，抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。
抗原进入机体经过一定的潜伏期，抗体效价逐步上升，达到高峰后，能维持一短暂的时期，以后又逐渐下降，但当第二次接触相同的抗原时，抗体的上升较前次为快，高峰时的效价也比前次为高。
抗体持续的时间也较长，此也称为再次反应。
待动物血清中存在大量抗体时，采集动物血液，分离析出血清，便得到所需的抗血清（免疫血清或抗体）。
3.由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体。
4.多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。
对于免疫原性较弱的可溶性抗原（如蛋白质类抗原）要加入佐剂，以增强免疫性。
3. 放37度温箱温浴，是为了让血液内纤维蛋白原收缩，降低血清和红细胞的粘连，从而使使血清更容易与红细胞分离，不易产生溶血现象。
4. 在4℃冰箱内放置使血清析出，低温有利于稳定抗体等蛋白质的结构，防止其变性而丧失功能。
免疫血清的制备实验报告
3.获得免疫血清
1）将采集的动脉血放到37℃温箱中，静置1小时。
2）在4℃冰箱内放置6-8小时，待血清析出。
4.在4℃冰箱内放置使血清析出，低温有利于稳定抗体等蛋白质的结构，防止其变性而丧失功能。
六、教师评价
2.在暴露颈动脉的手术过程中，应保持切口在正中位置，因此固定大白兔时就要注意。为了减少出血量，因此皮肤、黏膜、肌肉要一层层剪开同时用止血钳扩开，在肌肉层最好用手指撕开，以免剪刀丰富的血管造成过量出血。
3.放37度温箱温浴，是为了让血液内纤维蛋白原收缩，降低血清和红细胞的粘连，从而使使血清更容易与红细胞分离，不易产生溶血现象。
实验报告
实验名称
多克隆抗体的制备一（抗血清制备）
实验日期
院系
专业
班级
姓名
学号
一、实验目的
了解免疫的原理，掌握免疫方法和抗血清的制备技术。
二、实验器材
试剂：
酒精棉球、NDV灭活油乳剂疫苗、麻醉剂
器材：
兔笼、注射器、剃毛剪、手术刀、止血钳、手术剪（组织剪、眼科剪）、动脉夹、眼科剪、动脉导管、纱布、棉线、细线、培养箱、冰箱、结扎细线、离心机、温箱
3.由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体。
4.多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。对于免疫原性较弱的可溶性抗原（如蛋白质类抗原）要加入佐剂，以增强免疫性。
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抗原与免疫血清的制备××××××××××抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫特异性的球蛋白。
在免疫学实践中，为制备抗体常以抗原性物质（细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质）给动物注射。
经过一定时间后，动物血清中可以产生大量的特异性抗体。
这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清或者抗血清。
免疫血清的制备是一项常用的免疫学技术，高效价，高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂（如用于制备免疫标记抗体等），也可供特异性免疫治疗用[1]。
免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。
如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体，常可获得高效价的免疫血清。
而使用免疫原性弱的抗原免疫时，则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。
免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。
因此，如欲获得高特异性的免疫血清，必须予先纯化抗原。
此外，抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等，也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。
在本实验中采用ELISA法和凝集反应的原理来测定免疫血清的效价：ELISA测定的原理是利用标记技术将酶标记到抗体（抗原）上，使待检物中相应的抗原（抗体）与酶标记抗体（抗原）发生特异性反应。
在遇到相应的酶底物时，酶能高效、专一催化、分解底物，生成有颜色的产物。
根据颜色的深、浅、可以判断待检物中有无特异的抗原（抗体）以及量的大小。
该方法可对待检样品进行定性和定量分析；同时具有微量、特异、高效、经济、简便等优点，因此是一种广泛应用于生物和医学领域的微量测定技术。
凝集反应是一种经典的抗原抗体反应，也是高等医学院校学生免疫学实验的重要内容之一，它是指可溶性抗原及其相应抗体在一定条件下出现肉眼可见的沉淀物的现象[2]。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类。
前者可利用已知抗血清鉴定未知细菌，优点是极端快速，为诊断肠道传染病时鉴定病人标本中肠道细菌的重要手段；后者是一种定量法，现已发展成微量滴定凝集法，它可利用已知抗原测定人体内抗体的水平(效价)，也是诊断肠道传染病的重要方法。
免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。
机体的特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产生体液免疫（抗体）和细胞免疫（致敏的T淋巴细胞及其产物多种淋巴因子）的过程。
这种结合反应的特异性可能是生物学中已知的最特异的反应[3]。
1 材料与方法1.1 实验材料24h培养的大肠杆菌斜面，8~12周龄的健康小鼠，兔子。
1.2 实验试剂硫柳汞，0.5%石碳酸生理盐水，生理盐水，小鼠红细胞等抗原溶液，HRP-羊抗兔IgG，兔抗鼠IgG，小鼠抗兔IgG抗血清，HRP-兔抗鼠IgG，包被缓冲液，洗涤液，稀释液，底物溶液，2mol/L H2SO4。
1.3 实验用具McFarland比浊管，乙醇棉花，碘酒棉花，消毒干棉花，灭菌吸管，毛细滴管，小试管，大试管与离心管，1ml注射器(灭菌)，灭菌的离心管、微量滴定板，玻片，微量吸管(20~80 µl)，微量吸管的吸嘴，接种环、滴管、湿盒、酶标测定仪等。
1.4 实验方法1.4.1 血细胞抗原的制备采取兔子静脉血0.2ml，用肝素抗凝。
低速离心，收集血细胞，用0.9% NaCl调整细胞浓度至4×107个/ml。
1.4.2 大肠杆菌抗原的制备吸取灭菌的0.5%石碳酸生理盐水5ml，注入大肠杆菌斜面培养物上，将菌苔洗下。
用无菌毛细滴管吸取洗下的菌液，注入无菌小试管。
将此含有菌液的小试管放60℃的水浴箱中1h，并不时摇动。
取一与比浊管同质量的小试管，加菌液1ml，再加石碳酸生理盐水4ml(或更多，视原菌液浓度而定)，混匀后与各比浊管比浊，假若与第3管的浊度相等，则此菌液每毫升的细菌数为：5×900000000=4500000000(45亿)附McFarland比浊管配制法（取同质量同大小的试管10支，按下表加入药品）：用0.5%石碳酸生理盐水将菌液稀释至每毫升含9亿个细菌。
将已稀释号的菌悬液接种少量于肉汤培养基中，培养24-28h，观察有无细菌生长，如无细菌生长，即可放冰箱备用。
1.4.3 免疫小鼠先将此试验所需的试剂准备好。
向2只小鼠的腹腔分别注射0.5ml的灭活的大肠杆菌，向另2只小鼠的腹腔内分别注射0.2ml的血清。
每隔15天重复注射作加强免疫，共重复2次。
1.4.4 血清效价测定ELISA法：在酶标滴定板内加0.05ml抗原，置湿盒内4℃过夜，去抗原溶液，用洗涤液重复洗3次，每次3min。
然后去洗涤液，加入0.05ml待测样品，置湿盒内，37℃，放置1小时，同时设阴、阳性对照。
1小时后用洗涤液重复洗3次，每次3min。
然后加入0.05mlHRP-羊抗鼠IgG，置湿盒内，37℃，放置1小时。
1小时后用洗涤液重复洗3次，每次3min。
然后加入0.05ml新配底物溶液，置湿盒内，37℃，放置30min，然后加入0.05ml终止反应液。
观察各孔的颜色，用酶标测定仪测定OD490光吸收值。
1.4.5 凝集反应玻片凝集法：在玻片的一端加一滴1:10大肠杆菌免疫血清，另一端加一滴生理盐水。
用接种环自大肠杆菌琼脂斜面上挑取少许细菌混入生理盐水内，并搅匀；同法挑取少许细菌混入血清内，搅匀。
将玻片略为摆动后静置室温中，1～3min后即可观察到一端有凝集反应出现，另一端为生理盐水对照，仍为均匀浑浊。
微量滴定凝集法：在微量滴定板上标记10个孔，从1到10。
用移液枪于第1孔中加0.08ml 生理盐水，其余各加0.05ml。
然后加0.02ml大肠杆菌抗血清于第1孔中。
然后换一新的枪头，在第1孔中吸上，放下来回3次充分混匀，再吸0.05ml至第2孔。
换枪头，同样在第2孔吸上，放下，3次后吸0.05ml至第3孔中，依次类推，一直稀释至第9孔，混匀后弃去0.05ml。
每孔加大肠杆菌悬液0.05ml，将滴定板按水平方向摇动，以混合孔中内容物。
然后将滴定板置湿盒内，35℃,1小时，再放冰箱过夜。
最后观察孔底有无凝集现象。
1.4.6 制备血清小鼠颈动脉采血，采集的血液移入离心管中，尽量放成最大斜面，凝固后放入4-6℃冰箱中，使其自然析出血清。
用已灭菌的毛细滴管洗出血清。
若血清中带有红细胞，则用离心沉淀法去掉红细胞。
然后将血清分装于灭菌细口瓶中。
加入防腐剂，使血清含有0.01%硫柳汞。
用蜡或胶带纸封瓶口，贴上标签，注明抗血清名称，凝集效价及日期，放冰箱备用。
2 结果与分析2.1 ELISA法的测定结果在ELISA法的测定结果中，阴性对照孔和阳性对照孔均为无色，试验孔的颜色略显橙黄色。
用酶标仪测定OD490光吸收值，结果如下表所示。
1-12孔的稀释度分别为：1，1/25，1/50，1/100，1/200，1/400，1/800，1/1600，1/3200，1/6400，1/12800，1/25600。
根据样品吸光值/阴性对照吸光值>2.1为阳性可知，本实验中1、2、3、4、5、6孔为阳性孔，而7-12为阴性孔。
因此，该免疫血清的效价为400。
表1 各加样孔OD值加样孔OD490空白对照孔0.000阳性对照孔0.003阴性对照孔0.0051号孔0.0162号孔0.0153号孔0.0154号孔0.0125号孔0.0126号孔0.0117号孔0.0048号孔0.0049号孔0.00510号孔0.00411号孔0.00412号孔0.0032.2玻片凝集结果表1 玻片凝集结果大肠杆菌抗血清+大肠杆菌生理盐水+大肠杆菌画图表示阴性或阳性+-以（-）或（+）表示从以上结果中可以看出，大肠杆菌和大肠杆菌抗血清混合后，出现明显的凝集现象；而大肠杆菌和生理盐水混合，则无凝集现象发生。
这说明抗血清具有良好的生物活性和特异性。
2.2 大肠杆菌抗血清效价测定表2 大肠杆菌微量滴定凝集结果效价是指抗血清或抗体仍能产生可观察带的标准免疫反应时的稀释度。
从上表可以看出阴性对照未发生凝集现象，小鼠的血清稀释度为1:320时仍能看到凝集反应，稀释度为1:640时就未见凝集反应了，即小鼠免疫血清效价为320。
3 讨论通过ELISA法测定血清效价是一种广泛应用于生物和医学领域的微量测定技术。
同时具有微量、特异、高效、经济、简便等优点。
通过使用酶标仪测定OD490光吸收值能够定量和定性地判断免疫血清的是否为阳性。
当试验孔和阴性孔的比值大于2.1时，可是认定为是阳性。
本次实验得到的结果显示兔抗鼠免疫血清的效价为400。
从玻片凝集的结果当中我们可以看到大肠杆菌+大肠杆菌抗血清发生凝集现象，而大肠杆菌+生理盐水，无凝集现象发生。
该实验结果为接下来的微量滴定凝集法提供了参考。
在使用解剖镜对大肠杆菌微量滴定凝集结果显示当小鼠的血清稀释度大于等于1:320时仍能看到凝集反应，稀释度为1:640时就未见凝集反应了，因此最终确定小鼠免疫血清效价为320。
在生产应用上制备抗原须灭活细菌，抗体制备须研究抗原的注射剂量、注射时间和取血时间，避免抗原制备失败或抗体效价不理想。
所需细菌样品要求不严格，用离心沉降集菌法或增菌培养均不影响检验的灵敏度和准确性。
制备高效价和高特异的抗血清必须有理想的免疫原、适宜的动物和科学的方法，其中抗原纯化是制备特异性抗体的先决条件。
本次实验中制备大肠杆菌抗原时使用石炭酸生理盐水和加热60℃1h的目的即是为了灭活，起到纯化抗原作用。
抗血清的分离常采用室温自然凝固，然后放置37℃或4℃使血块收缩。
前者迅速，但获得血较少；后者时间较长，有时还会出现溶血，但获得血清量多，且效价不会下跌。
本实验分离血清时要快速，并且所用器皿要干燥、清洁以防溶血。
实验中我们组分离出的血清较其他小组的颜色会有些稍红，究其原因可能是由于器皿不清洁造成溶血。