PCR基因扩增仪操作步骤
PCR扩增原理及操作
PCR扩增原理及操作PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子技术，它能够在短时间内扩增特定DNA序列，从而使得微量的DNA可以被快速有效地检测和研究。
PCR的成功应用广泛，包括基因检测、病毒检测、遗传疾病诊断等等。
下面将详细介绍PCR的扩增原理及操作步骤。
PCR的扩增原理：PCR是一种体外合成DNA的方法，它需要三个关键组分：DNA模板、一种酶称为DNA聚合酶以及两段称为引物的DNA序列。
PCR的基本原理是通过重复进行三个温度环境的循环反应，以使得DNA链的扩增。
PCR的操作步骤：2.DNA提取：将DNA从样本中提取出来，以获得纯净的DNA样品。
常见的DNA提取方法包括蛋白酶消化、有机溶剂抽提、离心法等。
3.设计引物：引物是PCR的关键组成部分，它们能够指定目标DNA序列的区域。
引物一般由20-30个碱基组成，能够与目标DNA序列的两端部分互补配对。
4.准备PCR反应液：PCR反应液通常包括DNA模板、引物、dNTPs （即四种脱氧核苷酸）、聚合酶、缓冲溶液和镁离子。
引物的浓度一般为0.2-0.5μM，聚合酶的浓度为2.5-5.0U/μL。
5.PCR循环反应：PCR反应需要进行循环反应，即进行一系列的温度周期变化。
一般来说，PCR循环反应包括三个步骤：变性、退火和延伸。
-变性：将PCR反应液加热到94-98℃，将DNA模板的双链DNA变为单链。
此步骤有助于使DNA链分离以便于引物的结合。
-退火：将PCR反应液冷却到50-65℃，使得引物与DNA模板的目标序列互补配对。
-延伸：将PCR反应液加热到72℃，使得DNA聚合酶能够在引物的引导下在目标DNA序列上合成新的DNA链。
每个循环通常持续数十秒至数分钟，可由PCR仪自动控制。
6.PCR循环反应次数：PCR循环的次数通常是25-40次。
这些循环的重复会使所需扩增的目标DNA序列数量指数级增加。
7.凝胶电泳分析：通过凝胶电泳，可以确定PCR产物的大小、纯度和数量。
Roche480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）
Roche 480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）1 目的：确保Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪正确及正常使用。
2 适用范围：Line-Gene型核酸扩增荧光检测仪。
3操作人 ** **4标准操作方法：4.1在打开电源以前，先确认以下内容：4.1.1确认电源线插头已插入电源插座中。
4.1.2 Line-Gene与计算机及电源的连接是否可靠。
4.2．核酸扩增仪操作方法：4.2.1依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关,进入“荧光定量PCR检测系统”界面；4.2.2模板制好后，按模拟模板反应孔的样式放入扩增仪反应槽，注意阴阳性、阳性标准品、质控品位置，标本不够用空白管填补；4.2.3打开PCR仪电源开关,预热5分钟；4.2.4点击“运行”键，打开“运行”文件中“达安”试剂程序；4.2.3点击工具栏中的“样本资料”按钮，输入样本资料，并清空缺省样本号；点击“确认”保存样本资料信息，保存的文件名为：年月日+批次（批次用a、b、c表示）如20030516a 文件自动形成后缀名为*.flr4.2.4点击仪器运行的红色按钮“！！”，仪器进入运行状态。
4.2.5检测结果分析：a.程序运行结束后，系统自动进入分析界面并将检测结果自动保存，在荧光定量PCR检测系统界面单击“数据分析”键，进入结果分析界面。
b.定量分析：1）单击“分析模式”菜单中的“定量分析”命令，在分析方法选择中可选择样点拟合法。
2）样点数选择：样点为循环数/荧光强度对数曲线中基线以上各循环的点，系统根据选择的样点数，将被选中的样点拟合成直线，该直线与域值的交叉点即为CT值（仅适合于样点拟合）。
3）击“零点调整”，在弹出零点调整对话框进行设置——手动调整：以设置的起始循环至终止循环荧光强度的平均值为零点设置时尽可能选择样本荧光强度稳定（用“达安”试剂在Line-Gene荧光定量扩增仪对标本及控制品4）检测，通常起始及终止为5-15，结果较理想）。
PCR室SLAN型核酸扩增实时荧光定量仪操作和维护程序
PCR室SLAN型核酸扩增实时荧光定量仪操作和维护程序1.目的保证SLAN型核酸扩增荧光定量检测仪的正确和正常使用。
2.适用范围本规程适用于SLAN型荧光定量PCR仪分析的所有实验过程。
3.制定依据SLAN型核酸扩增荧光定量检测仪器操作使用说明书4.职责由经培训合格的临床基因扩增实验室技术人员操作仪器。
5．操作程序5．1开机前的准备5．1．1确认电源线插头已可靠插入电源插座中；5．1．2电源线接地可靠。
5．1．3接口线两端插头已分别可靠插入。
5．1．4打开稳压器电源，打开电脑主机、显视器、打印机、SLAN电源开关。
5．2“核酸扩增检测系统”的启动☆可以在【开始】/【程序】菜单中点击“SLAN PCR检测系统”启动。
☆也可直接在桌面上双击快捷键启动。
计算机系统启动SLAN PCR检测系统程序，进入荧光定量PCR检测系统界面5．3样品容器的放置5．3．1如何正确打开机盖：用手向后推开机子顶端机盖。
5．3．2样品容器的放入：正确打开机盖后，将0.2ml管放入模块中。
注意：①为保证样本升温和降温的均一性，样本管必须与模块完全接触，②将0.2ml管放入模块前应先检查（样本中有气泡或粘在管盖、管壁上都会严重影响实验结果）5．3．3如何正确关闭机盖：用手向前拉动机盖5．4实验设计：5．4．1温度参数设置：设置一个由三个程序组合的DNA荧光检测程序如下：①进入[温度参数]界面，鼠标左键单击扩增程序中的程序名处，输入程序名A，循环数1。
②设置此程序的温度点，按[添加]键增加温度点，输入目标温度930C，恒温时间120秒，“读取荧光”选择“否”，其它参数按默认值不变。
这样第一个程序设置完成。
③设置第二程序，在扩增程序逻辑界面中，按[添加]输入程序名B，循环数10。
④设置第二程序的温度点，按[添加]增加温度点，输入目标温度930C，恒温时间45秒，“读取荧光”选择“否”，再按[添加]增加温度点，输入目标温度550C，恒温时间60秒，“读取荧光”选择为“否”。
梯度pcr仪器操作流程
梯度pcr仪器操作流程
梯度PCR仪器是一种用于DNA扩增的仪器，通过在反应管中设
置不同温度梯度，可以在同一反应中同时进行多个不同的PCR反应。
梯度PCR仪器的操作流程如下：
1. 准备反应体系：首先，准备PCR反应所需的试剂和模板DNA。
根据实验设计，确定需要进行的PCR反应数量和反应条件，包括引
物浓度、模板DNA浓度等。
将这些试剂按照配方加入到反应管中。
2. 设置PCR程序：打开梯度PCR仪器，根据实验设计设置PCR
程序。
在程序中设置不同的温度梯度，通常从低温到高温逐渐增加，以确保在不同温度下进行PCR反应。
3. 放置反应管：将装有反应体系的反应管放入梯度PCR仪器中。
确保反应管的位置正确，以免影响PCR反应的进行。
4. 启动PCR程序：关闭仪器的盖子，启动PCR程序。
仪器会根
据设置的程序自动进行PCR反应，在不同温度下进行循环加热和降温，以完成DNA扩增过程。
5. 监控PCR反应：在PCR反应过程中，可以通过仪器上的显示
屏监控反应的进行。
可以观察到PCR曲线的变化，以判断反应是否
正常进行。
6. 收集PCR产物：在PCR反应结束后，取出反应管，可以进行PCR产物的分析和检测。
根据实验设计，可以进行凝胶电泳、测序等操作，以验证PCR反应的结果。
总的来说，梯度PCR仪器的操作流程相对简单，只需要准备好反应体系和设置好PCR程序，仪器会自动完成PCR反应的进行。
通过梯度PCR仪器，可以同时进行多个不同的PCR反应，提高实验效率和准确性，是分子生物学研究中常用的实验工具之一。
PCR扩增的原理和操作步骤
PCR扩增的原理和操作步骤PCR，全称为聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种在分子生物学领域广泛应用的技术，它能够在体外快速、大量地扩增特定的 DNA 片段。
这项技术的出现，极大地推动了生物学、医学、遗传学等领域的研究和发展。
PCR 扩增的原理其实并不复杂，就像是一个不断复制的过程。
想象一下，我们有一段想要大量复制的 DNA 片段，就像是有一个珍贵的宝贝，我们想要更多一模一样的宝贝。
首先，我们要把这段 DNA 加热到高温，比如 94-98 摄氏度。
这个高温会让 DNA 双链解开，变成两条单链，这一步叫做“变性”。
然后，我们把温度降低到 50-65 摄氏度左右。
在这个温度下，我们加入一些叫做“引物”的小东西，它们就像是钥匙，能够准确地找到DNA 单链上特定的位置，并和它们结合。
这个过程叫做“退火”。
接下来，温度再升高到 72 摄氏度左右，这时候有一种叫做“DNA聚合酶”的物质开始工作了。
它会从引物结合的位置开始，沿着 DNA单链，按照碱基互补配对的原则，一个一个地添加新的碱基，合成新的 DNA 链。
这样，原来的一条单链就变成了两条双链，完成了一次扩增。
然后，我们再把温度升高到高温，让新合成的双链DNA 再次变性，变成单链。
接着重复退火和延伸的步骤，每一次循环，DNA 的数量都会翻倍。
经过 20-30 次这样的循环，我们就可以得到大量的目标 DNA片段。
接下来，让我们详细了解一下 PCR 扩增的操作步骤。
第一步，准备工作。
我们需要准备好要扩增的 DNA 样本、引物、四种脱氧核苷酸（dNTPs）、DNA 聚合酶、缓冲液以及 PCR 反应管等实验器材。
引物是非常关键的，它们决定了我们要扩增的是哪一段DNA 。
第二步，配制反应体系。
按照一定的比例，将 DNA 样本、引物、dNTPs、DNA 聚合酶和缓冲液加入到 PCR 反应管中。
这个比例需要根据具体的实验要求和试剂说明书来确定，以确保反应能够顺利进行。
PCR基因扩增原理
PCR 基因扩增实验原理﹑仪器试剂和操作步骤实验原理：PCR(Polymerase Chain Reaction)-聚合酶链式反应，可以选择性扩增一段DNA序列。
其基本步骤是，首先将待扩增的模板DNA变性使之成为单链，DNA样品中，特异性的引物能够与其互补的序列杂交，在dNTPs和Taq酶存在时，就可以合成模板DNA的互补链，反应完成后，将反应混合物加热使DNA双链变性，温度下降后，过量的引物又可以开始第二轮的合成反应。
这种延伸—变性—退火—延伸的循环可以重复多次，使所需要的DNA片段得到特异性的扩增。
1.变性：加热使模板DNA在高温下（94℃）变性，双链间的氢键断裂而形成两条单链。
2.退火：使溶液温度降至50～60℃，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合.3.延伸：溶液反应温度升至72℃，耐热DNA 聚合酶以单链DNA为模板，在引物的引导下，利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸（dNTPs），按5ˊ→3ˊ方向复制出互补DNA上述3 步为一个循环，即高温变性、低温退火、中温延伸3个阶段。
从理论上讲，每经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，经过25～30个循环后DNA可扩增106～109倍。
典型的PCR反应体系由如下组分组成：DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、两个合成的DNA引物、耐热Taq聚合酶。
影响PCR的主要因素PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA，然后才进行自动热循环，最后进行产物鉴定与分析。
引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行，临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作，PCR自动热循环中影响因素很多，对不同的DNA样品，PCR反应中各种成份加入量和温度循环参数均不一致。
现将几种主要影响因素介绍如下。
一、温度循环参数在PCR自动热循环中，最关键的因素是变性与退火的温度。
如操作范例所示，其变性、退火、延伸的条件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s，共25～30个循环，扩增片段500bp。
小鼠pcr基因扩增及鼠灌注取脑操作
小鼠PCR基因鉴定一、取材：小鼠出生后3-4周，给小鼠打耳标，并依照雌雄分笼饲养，需要鉴定的小鼠剪尾部、脚趾或耳部边缘，放置好在印管中，并做好相应的标志，放置标本与标志混乱。
处理: (1)将A液一定量加入带有样本的印管中，在98℃孔板中煮1小时（2）取出印管后，再加入B液75 μl二、扩增1.反应体系 Mix 5μlH20 3μlPrimer1 0.5mlPrimer2 0.5ml2.加样先计算出所需总量，加入印管中，混合均匀，离心，摆放好单个PCR管，将上述混合液放入PCR仪，每管9 μl盖紧。
3.扩增打开PCR仪并设置好程序，将PCR管放入PCR仪，扩增，40多分钟可以完成。
4.保存扩增后，取出PCR管，放入冰中保存。
三、琼脂糖凝胶电泳1.制胶：电子天平称取计算后的琼脂糖，小心倒入干净的锥形瓶内（锥形瓶内保持干净）。
加入TAE缓冲液，盖上锡箔纸，加热。
取制胶模具、梳子，安装固定，保证不会漏胶。
戴上手套，取出锥形瓶，掀开锡箔纸，冷却3-4分钟，加入染色剂，贴着远梳子端的制胶模板壁缓慢倒入琼脂糖溶液，若有气泡。
室温放置凝固。
2.上样：胶凝固后，双手缓慢垂直地拔出梳子，避免破坏梳孔。
将胶板放上电泳槽，注意正负极变化，加入1×TAE缓冲液，从胶表面开始缓慢倒入，自然流向两边，然后依次对孔加入对应的DNA样品，剩余样品放入冰箱储存。
3.电泳：合上电泳槽，正负极对好，检查底部是否有气泡升起。
有气泡则电泳开始。
4.成像：观察是否出现条带，若出现条带，则停止电泳，打开凝胶成像系统，对结果进行比对、记录并拍照。
关闭系统，登记实验记录，取出胶并清洗仪器器材。
鼠灌注取脑1、麻醉：根据鼠的体型、重量适量注射麻醉剂，腹腔注射，用手套防止被鼠抓伤，虎口卡住颈部肌肉及其周围肌肉，注射药物时反推针筒活塞以防有空气，针头针刺入鼠腹腔注射药物后，并放回笼中，等待药物起效。
2、开胸：找到剑突，用弯剪在剑突附近把毛剪干净，露出表层皮肤，再沿肋弓朝两边剪开，注意深度，别剪到心脏，待心脏暴露出后，仔细剔除神经，剪掉心包膜，用镊子夹持剑突并将其连胸廓上翻固定，使心脏充分暴露。
PCR基因扩增仪操作步骤
PCR基因扩增仪操作步骤
1、首先准备好反应管；
2、打开机盖，将反应管平稳、端正的置入，盖好机盖；
3、打开电源开关，按照机器屏幕显示的提示设定程序，用
proceed键启动扩增，结束时出现“complete”，待风机停止工作，关闭电源。
注意事项：
（1）使用PCR仪时要严格注意本机的使用环境条件和对电源的要求；
（2）打开PCR仪机盖要轻，防止损坏机锁；
（3）PCR基因扩增仪工作时严禁打开机盖；
（4）要定期使用肥皂水清洗仪器的样品槽，不能使用强碱，高浓度酒精和有机溶剂擦洗；
（5）产品出现故障时要请专业的维修人员或厂家维修人员维修
冷冻离心机操作步骤
1、登记离心机使用登记本，检查使用状况。
2、检查箱体内是否有水分。
3、物体离心时应平衡物品：将需要离心的液体导入专
用离心杯内，要求液体的装量不要超过总体积的4/5,
然后在相应的天平进行平衡，旋紧盖筒。
4、装转子：打开离心机上盖，将相应的转子装入，调
试转子直到转好为之，盖上转子上盖，旋紧。
5、设置参数，当温度指针移到设定温度时，绿灯亮，
按下“START”键，此时机器开始正式工作。
在预
设时间完成以后，“STOP”键指示灯闪烁，机器停
止工作。
6、等待机器完全停止下来，“STOP”灯熄灭，转速为
零，打开机器上盖，打开转子上盖，取出离心物体，此时离心工作完成。
注意事项：
（1）、离心物体必须平衡，对称放入离心机转子内。
（2）、注意加速度调整，转子大小与加速度成反比。
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PCR基因扩增仪操作步骤
1、首先准备好反应管；
2、打开机盖，将反应管平稳、端正的置入，盖好机盖；
3、打开电源开关，按照机器屏幕显示的提示设定程序，用
proceed键启动扩增，结束时出现“complete”，待风机停止工作，关闭电源。
注意事项：
（1）使用PCR仪时要严格注意本机的使用环境条件和对电源的要求；
（2）打开PCR仪机盖要轻，防止损坏机锁；
（3）PCR基因扩增仪工作时严禁打开机盖；
（4）要定期使用肥皂水清洗仪器的样品槽，不能使用强碱，高浓度酒精和有机溶剂擦洗；
（5）产品出现故障时要请专业的维修人员或厂家维修人员维修
冷冻离心机操作步骤
1、登记离心机使用登记本，检查使用状况。
2、检查箱体内是否有水分。
3、物体离心时应平衡物品：将需要离心的液体导入专
用离心杯内，要求液体的装量不要超过总体积的4/5,
然后在相应的天平进行平衡，旋紧盖筒。
4、装转子：打开离心机上盖，将相应的转子装入，调
试转子直到转好为之，盖上转子上盖，旋紧。
5、设置参数，当温度指针移到设定温度时，绿灯亮，
按下“START”键，此时机器开始正式工作。
在预
设时间完成以后，“STOP”键指示灯闪烁，机器停
止工作。
6、等待机器完全停止下来，“STOP”灯熄灭，转速为
零，打开机器上盖，打开转子上盖，取出离心物体，此时离心工作完成。
注意事项：
（1）、离心物体必须平衡，对称放入离心机转子内。
（2）、注意加速度调整，转子大小与加速度成反比。