OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(中文翻译版)
质粒中提中文版(Omega)
中提质粒步骤材料准备：灭菌250或500mL三角瓶，托盘天平，5mL移液枪及枪头，卫生纸，废液缸，记号笔，50mL 圆底离心管，15mL尖底离心管步骤：1.集菌将100mL菌液分批倒入50mL圆底离心管中，室温12000rpm离心1min，弃流出液体，打开盖倒置吸水纸上控干。
2.加入2.5mL solution I（提前加入RNase，4℃保存），重悬细菌沉淀（可使用5mL移液枪吹打）。
3.加入2.5mL solution II，轻柔混匀（颠倒离心管7-10次），以获得清亮的裂解物，室温静置3-5min。
（此步主要是碱裂解细菌，使其中的蛋白质和DNA变性，反应时间不能太长，否则容易使大肠杆菌的基因组DNA断裂成小片段，污染质粒DNA）4.加入1.25mL Buffer N3，轻柔混匀（颠倒离心管7-10次），直至形成白色沉淀，室温静置2-3min。
5.4℃12000rpm离心10min，使白色沉淀沉于底部。
6.取出一个Lysate Clearance Filter Syringe，抽出活塞，小心将5中液体全部转移至注射器中（注射器可不放活塞直接直立于4中的离心管中，液体不会出来），室温静置2min。
7.将6中注射器放置于一新的15mL离心管，轻推注射器活塞，使液体流入离心管中。
8.加入0.1倍体积的ETR（约600uL）至过滤后的液体中，混匀（颠倒离心管7-10次），冰浴20min，期间颠倒离心管几次。
（此期间准备一个Hind-Bind DNA midi Column加入2mL GPS Buffer，室温静置10min，4000rpm离心5min）9.42℃温浴5min，溶菌液变浑浊，室温4000rpm离心5min，则ETR沉入底部。
10.小心将上层液体转移至一新的15或10mL离心管中，加入0.5倍体积的EtOH（约2.5mL），轻柔混颠倒5-6次，室温静置2min。
11.将10中液体加入柱子中，室温4000rpm离心5min，弃液体，重新装好柱子，直至液体全部滤过。
omga质粒提取试剂盒_说明书_翻译
omgaE.Z.N.A.质粒试剂盒操作规程说明书（译版）1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的2-5ml的LB或YT培养基进行培养。
37℃强力摇动（~300rpm）孵育20-24h。
使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。
强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。
此类菌株包括DH5α和JM109。
2. 将1.5-5.0ml细菌菌液室温13,000 g离心3min。
轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。
3. 加入200μl 的溶液Buffer T 1/Rnase A重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。
充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。
4. 加入200μl溶液Buffer T 2，倒置、转动试管5-10次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。
室温孵育5min。
不要用力混合，以免使染色体DNA断裂，减低质粒的纯度。
该步反应不要超过5min。
溶液II不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。
5. 加入200μl溶液Buffer T 3，立即倒置试管15-20次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。
冰上孵育5min。
为避免形成局部沉淀，加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。
6. 4℃13,000 g离心10分钟。
白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。
7. 小心翼翼的吸取上清液，加入到新的1.5ml离心管（不是试剂盒提供的）中。
加入200ul 用异丙醇稀释的BAC 结合液（缓冲液），颠倒3-5次充分混匀。
BAC 结合液使用前必须用96%-100%的异丙醇稀释，详细的说明见瓶壁或第三页说明书8.加入样本DNA（HiBind DNA MicroElute）到提供的2ml收集管中。
9. 室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
10. 将收集柱放回收集管并加入750ul SPM buffer（用乙醇稀释），室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
OMEGArna提取试剂盒中文说明
E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps)步骤A ． 真核细胞和组织自己需要的材料：β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC 水配置）、除RNase 的枪头和EP 管。
材料的最佳量想得到最佳的产量和好的Hibind RNA 柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。
Hibind RNA 柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。
最大的结合能力是100ug 的RNA 。
TRK 裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg 的组织。
细胞的步骤1． 用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP 管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入20ul 的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。
完全吸去培养基后直接加TRK 裂解缓冲液至细胞中。
加700ul 的TRK 到T35细颈瓶或10cm 的培养皿中，更小的培养器加500ul 的TRK 。
将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。
将裂解产物转移至1.5mlEP 管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g ）*5min ，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀。
2． 匀浆化裂解产物“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min 。
不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA 的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s ，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm 直径），至少吹打5次是样品匀浆化。
注射器要除RNase 。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column 中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。
将离心收集的流出液转移到新的EP 管中。
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(无内毒)
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(中文翻译版)1、将携带目的质粒的大肠杆菌接种于含10~15ul基础培养基/氨苄西林培养介质的50ml培养瓶中。
2、室温下500×g离心10min。
3、弃去上清，剩余沉淀物中加入500ul的SolutionⅠ/RNase A，彻底混匀。
4、将混悬液移至新的2ml离心管中，加入500ul SolutionⅡ，轻柔彻底混匀，可得清亮的细菌裂解物，室温下孵育2min（混匀时用力过大，可破碎出染色体DNA，使目的质粒纯度下降）。
5、向4中液体加入250ul预冷的Buffer N3，轻柔、彻底混匀，直到出现白色絮状沉淀，4℃≥12000×g离心10min（可室温，最好4℃）（Buffer应彻底混匀，若混合物粘稠呈棕色或呈球状，应多混匀几次以中和溶液，溶液的彻底中和对于获得好的产出是必要的）。
6、小心吸取并将上清液转移进新的1.5ml离心管1：0.1的比例向上清液中加入ETR Solution 混匀溶液并于冰上孵育10min，孵育过程中颠倒几次以混匀（加入ETR Solution后，细菌裂解物将出现浑浊，但冰上孵育后将变澄清）（勿用2ml离心管收集上清，因为2ml离心管中有太多液体时，ETR Solution将悬浮于溶液中）。
7、将6中液体于42℃孵育5min，溶液将再次变浑。
室温下12000×g离心3min，ETR Solution 将于离心管底部形成蓝色层。
8、将上层水相转移入新的2ml离心管中，按1：0.5的比例加入无水乙醇（室温，96~100％），轻柔混匀，室温下孵育1~2min。
9、将8中的溶液取700ul到柱子中，组装收集管，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中通过柱子的液体，柱子和收集管重复利用。
10、重复9中步骤，直到收集的细菌裂解物全部用完。
11、将500ul Buffer HB加入柱子中，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中废液（目的：将残存的蛋白污染物除去，是获得高质量DNA所必需的）。
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤以下是使用OMEGA小提试剂盒提取质粒的步骤：1. 打开Omega小提试剂盒，并将试剂瓶放置在室温下15-30分钟，以使其达到室温。
同时，将所需试剂加热至37°C，并准备其他必要的材料和试剂。
2.使用无菌技术，取出含有目标质粒的菌落并转移到15mL离心管中。
注射100-500µL的STET缓冲液（一种细胞裂解缓冲液）至离心管中。
3. 使用无菌技术，将质粒菌落悬浮液均匀涂布到2% Made by Omicron小鼠胚胎或其他适当的琼脂糖琼脂糖板（SD盘）上。
将板培养在37°C的培养箱中，24-48小时。
4.在培养后，用移液器或吸管轻轻吹气将质粒菌落悬浮液从SD盘转移到1.5mL（或2mL）离心管中。
5.离心细胞，以将固体与培养上清分离。
将离心条件设置为13,000×g，4°C，5分钟。
6.丢弃上清液并用1mLSTET缓冲液洗涤菌落。
在洗涤步骤中，轻轻上下振荡离心管，以确保洗涤液均匀地覆盖菌落。
7.离心细胞，以将液体与固体分离。
将离心条件设置为13,000×g，4°C，5分钟。
丢弃上清液。
8.重新悬浮菌落，使用约200-500µLSTET缓冲液，并轻轻振荡离心管，直到完全悬浮。
9. 取1.5 mL离心管中的样品，加入等体积的Lysis Buffer G2，并快速倒置混合，以完全裂解细胞，并将细胞内容物释放到溶解液中。
10. 加入等体积的N3 Buffer，并轻轻倒置混合，以中和裂解反应。
11. 加入等体积的G3 Buffer，并轻轻倒置混合。
此时，样品已经准备好进行DNA纯化。
请注意，上述步骤仅提供了OMEGA小提试剂盒提取质粒的基本步骤。
根据具体实验要求和试剂盒的使用说明，步骤可能会有所不同。
在开始实验之前，请仔细阅读并遵守试剂盒的使用说明。
omega质粒提取试剂盒原理
omega质粒提取试剂盒原理
omega质粒提取试剂盒是一种快速提取质粒的试剂盒，原理基于离心法和碱裂解法。
质粒提取步骤如下：
1.细菌菌落挑选：选择莱茵氏或理光法制备的菌落，接种到含有复性2倍YT培养基中的管中，温育至15-18小时，使生长到中期即可。
2.洗涤菌体：离心收集菌体细胞，使用TE液洗涤菌体，通过离心去除菌体细胞内部的杂质。
3.裂解细胞：用离心的菌体用Alkali Lysis Buffer裂解细胞。
使得细胞壁和细胞膜破裂，游离出细菌的质粒和基因组DNA。
此时保持碱性能稳定质粒。
4.中和试剂添加：使用HCl溶液中和裂解碱的催化活性，维持实验体系pH值在7.0左右。
5.离心收集DNA：用NaCl把DNA从碱性溶液中析出，并通过离心将DNA沉淀下来。
6.洗涤DNA：用乙醇洗涤钠盐，去除残留的离子，甘油可保持溶液中的DNA
稳定性。
7.重悬质粒：将去除干扰物后的纯质粒在TE缓冲液中重悬，即可用于下一步实验。
质粒小提试剂盒提取质粒
质粒小提试剂盒提取质粒
（1）柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μL的平衡液BL，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；
（2）取1-5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12,000rpm离心1分钟，尽量吸除上清；
（3）向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液P1（先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀；
（4）向离心管中加入250μL溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解；
（5）向离心管中加入350μL溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀。
12,000rpm离心10分钟，此时在离心管中底部形成沉淀；
（6）将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中，注意尽量不要吸出沉淀。
12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中；
（7）向吸附柱CP3中加入600μL漂洗液PW（先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中；
（8）重复操作步骤（8）；
（9）将吸附柱CP3放入收集管中，12,000rpm离心2分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液除去；
（10）将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100μL洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000rpm离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中。
小提质粒实验方案及详细步骤
2、
3、Leabharlann 4、 5、 6、 7、Solution Ⅱ Solution Ⅲ TE 缓冲液 酚-氯仿
无水乙醇 70%乙醇 其他准备 2、具体操作步骤 1、 取 1.5ml 培养液加入 EP 管中，12000rpm 离心 2min，弃上清，将离心管倒 置于滤纸上 1~3min，使液体尽可能流尽。将细菌沉淀重悬于 100μl 预冷的 SolutionⅠ中，吹打混匀，剧烈振荡，使菌体分散均匀。打开盖子，室温 下放置 3~5min。 加 200μl 新鲜配制的 solutionⅡ，盖紧管口，颠倒 3~5 次混匀，动作温和， 裂解细胞使 DNA 变性后将离心管放置于冰上冰浴 5min(破坏氢键)， （溶液 Ⅱ为裂解液，故离心管中菌液逐渐变清） 加入 150μl 预冷的 solution Ⅲ，将管温和颠倒 5~10 次混匀，使 DNA 复性， 见白色絮状沉淀，在冰上放置 5min。12000rpm 离心 10min。复性时间不 宜过长，否则会有基因组 DNA 污染。 （solution Ⅲ为中和溶液，此时质粒 DNA 复性，染色体和蛋白质不可逆变性，形成不可溶复合物，同时 K+使 SDS- 蛋 白 复 合 物 沉 淀 。 ）根据菌体的量调节三种溶液的比例，保证 solution1：solution2：solution3=1:2:1.5 将上清液移入干净 EP 管中，加入 450μl 的苯酚/氯仿/异戊醇，振荡混匀， 4℃,12000rpm 离心 5min 将上清液移入另一干净 EP 管中， 加入 2.5 倍体积预冷的无水乙醇混匀 （轻 柔） ，置于-20℃冰箱放置 20min，4℃下 12000rpm 离心 10min。 弃上清，用 1ml 预冷的 70%乙醇洗涤沉淀 1-2 次，4℃离心 8000rpm,5min， 弃上清，将 EP 管倒扣与滤纸上流尽水分。静置一会儿使乙醇挥发干净。 向沉淀中加入 50μl TE 缓冲液，使 DNA 完全溶解，-20℃保存备用。 高压灭菌锅，冷冻离心机，移液枪，EP 管，滤纸，枪头，提前制冰。
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质粒提取（小提，mini kit）
1、将携带目的质粒的大肠杆菌接种于含10~15ul基础培养基/氨苄西林培养介质的50ml培养瓶中。
2、室温下5000×g离心10min。
3、弃去上清，剩余沉淀物中加入500ul的SolutionⅠ/RNase A，彻底混匀。
4、将混悬液移至新的2ml离心管中，加入500ul SolutionⅡ，轻柔彻底混匀，可得清亮的细菌裂解物，室温下孵育2min（混匀时用力过大，可破碎出染色体DNA，使目的质粒纯度下降）。
5、向4中液体加入250ul预冷的Buffer N3，轻柔、彻底混匀，直到出现白色絮状沉淀，4℃≥12000×g离心10min（可室温，最好4℃）（Buffer应彻底混匀，若混合物粘稠呈棕色或呈球状，应多混匀几次以中和溶液，溶液的彻底中和对于获得好的产出是必要的）。
6、小心吸取并将上清液转移进新的1.5ml离心管1：0.1的比例向上清液中加入ETR Solution 混匀溶液并于冰上孵育10min，孵育过程中颠倒几次以混匀（加入ETR Solution后，细菌裂解物将出现浑浊，但冰上孵育后将变澄清）（勿用2ml离心管收集上清，因为2ml离心管中有太多液体时，ETR Solution将悬浮于溶液中）。
7、将6中液体于42℃孵育5min，溶液将再次变浑。
室温下12000×g离心3min，ETR Solution将于离心管底部形成蓝色层。
8、将上层水相转移入新的2ml离心管中，按1：0.5的比例加入无水
乙醇（室温，96~100％），轻柔混匀，室温下孵育1~2min。
9、将8中的溶液取700ul到柱子中，组装收集管，室温下1000×g 离心1min，弃去收集管中通过柱子的液体，柱子和收集管重复利用。
10、重复9中步骤，直到收集的细菌裂解物全部用完。
11、将500ul Buffer HB加入柱子中，室温下10000×g离心1min，弃去收集管中废液（目的：将残存的蛋白污染物除去，是获得高质量DNA所必需的）。
12、向柱子中加入混有乙醇的700ulDNA Wash Buffer，室温下10000×g离心1min，弃去收集管中液体。
13、重复12中的步骤。
14、弃去收集管中液体，空管在最大转速（≥13000×g）离心3min 以干燥柱子（对于移除柱子中残留的乙醇是必须的）。
15、将柱子放入新的1.5ml离心管中，直接向柱子中的白色网状物上加入Endotoxin-Free Elution Buffer 80~100ul（依终产物浓度而定，可每次30ul×2次），室温下放置2min，≥13000×g离心1min，以洗提DNA（将提取约70~85％柱子中收集的DNA，可再重复一次以提取完全，但因再次加入洗提液，会使终产物浓度下降）。
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