2015版兽药挥发油测定法标准操作规程
挥发油检验标准操作规程
目的：建立挥发油测定法标准操作规程，保证检测结果准确
范围：原辅质量
1．仪器与用具
1.1500ml圆底烧瓶，挥发油测定器，回流冷凝器。
以上均用玻璃磨口连接。
1.2水，用去离子水。
1.3乳胶管，连接冷凝器与水管
1.4电热套。
2．操作方法
2.1取供试品适量（约相当于含挥发油0.5－1.0ml），称定重量（准确至0.01g）置圆底烧瓶中，加水300－500ml（或适量）与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。
2.2自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，溢流入烧瓶时为止。
2.3置加热套中缓缓加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中油量不再增加，停止加热
2.4放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层下端到达刻度0线5mm处为止、
2.5放置1小时以上，再开启活塞例油层下降至其下端恰与零刻度齐，读取挥发油量。
3．注意事项
3.1全部仪器应充分洗净，并检查接合部分是否严密，以防油分逸出。
3.2装置中挥发油测定器的支管岔处应与基准线平行。
4．计算
挥发油量
4.1供试品中含挥发油的百分数＝———————×100%（ml/g）
供试品重量。
挥发油的测定方法
附录Ⅹ D 挥发油测定法测定用的供试品，除另有规定外，须粉碎使能通过二号至三号筛，并混合均匀。
仪器装置如图。
A为1000ml（或500ml、2000ml）的硬质圆底烧瓶，上接挥发油测定器B，B的上端连接回流冷凝管C。
以上各部均用玻璃磨口连接。
测定器B应具有0.1ml的刻度。
全部仪器应充分洗净，并检查接合部分是否严密，以防挥发油逸出。
测定法甲法本法适用于测定相对密度在1.0以下的挥发油。
取供试品适量（约相当于含挥发油0.5～1.0ml），称定重量（准确至0.01g），置烧瓶中，加水300～500ml（或适量）与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。
自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。
置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。
放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度。
线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中挥发油的含量（％）。
乙法本法适用于测定相对密度在1.0以上的挥发油。
取水约300ml与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器。
自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再用移液管加入二甲苯1ml，然后连接回流冷凝管。
将挠瓶内容物加热至沸腾，并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的中部呈冷却状态为度，30分钟后，停止加热，放置15分钟以上，读取二甲苯的容积，然后照甲法自“取供试品适量”起，依法测定，自油层量中减去二甲苯量，即为挥发油量，再计算供试品中挥发油的含量（%）。
注：装置中挥发油测定器的支管分岔处应与基准线平行。
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• • •
2.7.2预培养（增菌培养）：
• 取供试液10mL（相当于1g样品），加在 定）中，30〜35℃培养24〜48小时。 ml增菌液体培养基（经方法适用性试验确
•
• •
耐胆盐革兰阴性菌 肠道菌增菌液体培养基
大肠埃希氏菌 沙门菌 胰酪大豆胨液体培养基 胰酪大豆胨液体培养基
2.7.3选择和分离培养
（3）物品取出,
• 随即检查包装的完整性,若有破坏或棉塞脱掉、包装有明显的水浸者,不可作为无菌物 品使用。培养基或试剂等,应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态,未达到者应废弃。 取出的物品掉落在地或误放不洁处,或沾有水液,均视为受到污染,不可作为无菌物品使 用。取出的合格灭菌物品,应存放于贮藏室或防尘柜内,严禁与未灭菌物品混放。凡属 合格物品,应标有灭菌日期及有效期限。
•
有毒有菌污物处理要求
• 1.4.5污染的工作服或进行强致病菌试验所穿的工作服、帽、口罩等，应放入专用消毒 袋内，经高压灭菌后方能洗涤。
•
• •
1.5培养基制备要求
1.5.1根据培养基配方的成分按量称取（可根据产品说明书用量和方法进行），然后溶 于蒸馏水中，在使用前对应用的试剂药品应进行质量检验。 1.5.2因高压灭菌可影响一些培养基的PH降低或升高，故不宜灭菌压力过高或次数太 多，以免影响培养基的质量。
1.3.2装放
• （1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。
•
（2）大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不 能过挤。
1.3.3设备检查
• • • （1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。 （2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察 是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。 （3）对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于 进行灭菌处理的要求。
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有毒有菌污物处理要求
• 1.4.3涂片染色冲洗片的液体，一般可直接冲入下水道，强致病菌的冲洗液必须冲在烧 杯中，经高压灭菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24 h后， 煮沸洗涤。做凝集试验用的玻片或平皿，必须高压灭菌后洗涤。
• 1.4.4打碎的培养物，立即用5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液喷洒和浸泡被污染部位，浸泡 半小时后再擦拭干净。
• 2.7.3.2大肠埃希氏菌：l ml接种至100 ml麦康凯液体培养基中，42〜44℃培养24〜4 8 小时。
选择和分离培养
• 2.7.3.3沙门菌：0.1 ml接种至10mlRV沙门增菌液体培养基中，30〜35℃培养18〜2 4 小时。
• 2.7.4平板划线分离培养
• （1）培养基平板的准备：取培养基，融化并让其冷却至50℃左右，倾入灭菌平皿中， 每个平皿约15mL，使其分布均匀，冷却凝固后即为固体平板培养基。
落则用接种针挑选于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，培养18 〜2 4小时，或采用其他适宜方法进一步鉴定。
3.数据报告
• 3.1平皿法：点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不 宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌 数。若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1 倍或以上。
• RV沙门增菌液体培养基
• 接种平板
紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基
• 麦康凯琼脂培养基
• 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基
实验操作
• 2.1.3稀释液：0. 9%无菌氯化钠溶液 • 2.1.4培养箱：3个（30〜35℃、20〜25℃、42〜44℃） • 2.2培养基配制 • 2.3灭菌 • 2.4无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24至48小时，以检查灭菌是否
药材挥发油测定法
药材挥发油测定法
一目的：制定挥发油测定法，规范药材的检验及验收。
二适用范围：适用于挥发油测定法。
三责任者：品控部。
四正文
1.测定用的供试品，除另有规定外，须粉碎使能通过二至三号筛，并混合均匀。
2.仪器
2.1 1000ml的硬质圆底烧瓶
2.2 挥发油测定器
2.3 回流冷凝管
3.测定法
3.1 甲法：
本法适用于测定相对密度在1.0以下的挥发油。
取供试品适量（约相当于含挥发油0.5～1.0ml），称定重量（准确至0.01g）,置烧瓶中，加水300～500ml（或适量）与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。
自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。
置电热套中或用其它适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。
放置1小时以上，再开启活塞使油层下端至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中挥发油的含量（%）。
3.1 乙法：
本法适用于测定相对密度在1.0以上的挥发油。
取水约300ml与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器。
自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再用移液管加入二甲苯1ml，然后连接回流冷凝管，将烧瓶内容物加热至沸腾，并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的中部呈冷却状态为度。
30分钟后，停止加热，放置15分钟以上，读取二甲苯的容积。
然后照甲法自“取供试品适量”起，依法测定，自油层量中减去二甲苯量，即为挥发油量，再计算供试品中含挥发油的含量（%）。
挥发油提取标准操作规程
依据：《GMP》与药品生产质量操作的要求目的：阐述水提取的有关操作和中间控制方面的规则及注意事项范围：适用于挥发油的提取操作1、准备1.1 检查1.1.1 提取罐、回流装置、提取液贮罐、不锈钢桶、胶管、工作区域已清洁，且不存在任何与操作无关的物料和文件，有清场合格证。
1.1.2设备完好，有设备完好证。
1.1.3 有批生产指令。
1.2 准备好一定数量的批生产记录和足够数量的状态标志。
1.3 已关闭提取罐、回馏装置、贮罐全部阀门。
1.4 根据生产指令，核对提取挥发油所用药材的名称、规格、数量、检验单号。
1.5 悬挂状态标志。
2、装配2.1 用胶管连接油水分离器和净化车。
3、操作3.1 按工艺规定，将药材投入提取罐。
3.2 加工艺规定量饮用水，浸泡2-4小时。
3.3 开启蒸汽阀门，加热，蒸汽压力≤0.25MPa，锅内压力≤0.02MPa。
3.4 开启进冷却水阀，进油水分离器阀门，出挥发油阀门，收取挥发油。
3.5 开启放料阀，放蒸馏液于贮罐中。
3.6 将挥发油送至口服液车间。
4、中间控制4.1 根据生产指令，检查挥发油的重量与色泽。
4.2 填写批生产记录并签名。
4.3 挂状态标志，注明名称、批号、数量、日期、操作人。
5、文件5.1 检查批生产记录上收集挥发油的各项是否已经正确填写。
5.2 任何的偏差都要在生产记录上注明并解释。
6、收集后的工作6.1 拆除收集挥发油软管并清洗。
6.2 反冲回流装置。
6.3 打扫工作区域卫生。
6.4 收集用过的状态标志。
6.5 悬挂新状态标志。
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1.3.2装放
? （1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。 ? （2）大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之
间不能过挤。
1.3.3设备检查
? （1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。 ? （2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，
1.4有毒有菌污物处理要求
? 1.4.1经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，并集中存放在指 定地点，待统一进行高压灭菌（经微生物污染的培养物，必须经 121℃30min 高 压灭菌）。
? 1.4.2 染菌后的吸管（即进行阳性菌操作后的），使用后放入 5﹪煤酚皂溶液或石 炭酸液中，最少浸泡 24h（消毒液体不得低于浸泡的高度）再经 121℃30 min 高 压灭菌。
1.3消毒灭菌要求 1.3.1灭菌前准备
? 1.2.3 处理和接种样品时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可 通过小窗传递。
? （1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿用纸包装严密，如用金属 筒应将上面通气孔打开。
? （2）装培养基的三角瓶，内容物不应超过总体积的 2/3（例如 500mL 的三角瓶 最好装 300～350mL 培养基，以防再次加热融化时爆沸）。
? 1.1.4 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用 完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用 95%酒精点燃烧灼三次 后使用。
? 1.1.5 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管 或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
1.1无菌操作要求
中华人民共和国兽药典(2015年版二部)淫羊藿
淫羊藿YinyanghuoEPIMEDII FOLIUM本品为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum（Sieb.et Zucc.）Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥叶。
夏、秋季茎叶茂盛时采收，晒干或阴干。
【性状】淫羊藿三出复叶；小叶片卵圆形，长3〜8cm，宽2〜6cm；先端微尖，顶生小叶基部心形，两侧小叶较小，偏心形，外侧较大，呈耳状，边缘具黄色刺毛状细锯齿；上表面黄绿色，下表面灰绿色，主脉7〜9条，基部有稀疏细长毛，细脉两面突起，网脉明显；小叶柄长1〜5cm。
叶片近革质。
气微，味微苦。
箭叶淫羊蕾三出复叶，小叶片长卵形至卵状披针形，长4〜12cm，宽2.5〜5cm；先端渐尖，两侧小叶基部明显偏斜，夕卜侧呈箭形。
下表面疏被粗短伏毛或近无毛。
叶片革质。
柔毛淫羊藿叶下表面及叶柄密被绒毛状柔毛。
朝鲜淫羊藿小叶较大，长4〜10cm，宽3.5〜7cm,先端长尖。
叶片较薄。
【鉴别】（1）本品叶表面观：淫羊藿上、下表皮细胞垂周壁深波状弯曲，沿叶脉均有异细胞纵向排列，内含1至多个草酸钙柱晶；下表皮气孔众多，不定式，有时可见非腺毛。
箭叶淫羊藿上、下表皮细胞较小；下表皮气孔较密，具有多数非腺毛脱落形成的疣状突起，有时可见非腺毛。
柔毛淫羊藿下表皮气孔较稀疏，具有多数细长的非腺毛。
朝鲜淫羊藿下表皮气孔和非腺毛均易见。
（2）取本品粉末0.5g，加乙醇10ml，温浸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml 使溶解，作为供试品溶液。
照薄层色谱法（附录0502）试验，吸取供试品溶液和【含量测定】淫羊藿苷项下的对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10：1：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
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湖南湘大兽药有限公司工作标准文件
题目挥发油测定法标准操作规程编号ZLJG F-044-02 修定质检部审核批准
修定日期2016.12 审核日期批准日期
颁发部门GMP办公室颁发数量 2 份生效日期
分发部门质检部、档案室文件页数共2页
一、目的：该操作规程用于规范兽用中药材及中药制剂中挥发油的含量测定操作
二、依据：《中华人民共和国兽药典》（2015年版二部附录P136）。
三、适用范围：该操作规程适用于兽用中药挥发油的含量测定。
四、职责：进行该项检验的检验员应按该操作规程进行检验，检测室主任负责监督该操作规程的正确执行。
五、检验：
1 技术依据及原理：挥发油是一类可随水蒸气蒸馏且不与水混溶的油状液体。
本测定法即利用这种特性，用水蒸气蒸馏法测定挥发油的含量。
2 注意事项
2.1 测定用的供试品，除另有规定外，须粉碎使能通过二至三号筛，并混合均匀。
2.2 装置中挥发油测定器的支管分岔处应与基准线平行。
3 材料、仪器、试剂的准备及基本要求
3.1 挥发油测定器仪器装置见右图。
A为1000ml（或500ml、2000m1）的硬质圆底烧瓶，上接挥发油测
定器B，B的上端连接回流冷凝管C。
以上各部均用玻璃磨口连接。
测定器B应具有0.1ml的刻度。
全部仪器应充分洗净，并检查接合
部分是否严密，以防挥发油逸出。
3.2 天平感量1mg
3.3 移液管
3.4 二甲苯分析纯
3.5 玻璃珠
4 检验步骤
4.1 甲法适用于测定相对密度在1.0以下的挥发油。
4.1.1 取供试品适量（约相当于含挥发油0.5～1.0ml ），称定重量（准确至0.0lg ），置烧瓶中，加水300~500ml （或适量）与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。
4.1.2 自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。
4.1.3 置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻。
4.1.4 开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm 处为止。
4.1.5 放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中挥发油的含量（%）。
4.2 乙法 适用于测定相对密度在1.0以上的挥发油。
4.2.1 取水约300ml 与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器。
4.2.2 自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再用移液管加入二甲苯lml ，然后连接回流冷凝管。
4.2.3 将烧瓶内容物加热至沸腾。
并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的中部呈冷却状态为度。
4.2.4 30分钟后，停止加热，放置15分钟以上，读取并记录二甲苯的容积。
4.2.5 照甲法自“取供试品适量”起，依法测定，自油层量中减去二甲苯量。
即为挥发油量。
5 记录与计算
5.1 记录供试品称量数据，挥发油量，计算和结果等。
5.2 计算
供试品中挥发油含量（%）=
%100 供试品重量
挥发油量
6 结果判定：计算结果按有效数字数值修约规程修约，使与标准中规定限度的有效数位一致。
根据2次测定的平均值是否在标准所规定的范围内，来判断是否符合规定。
对挥发油含量不符合规定的样品应进行复核。
7 注意事项：装置中挥发油测定器的支管分岔处于基准线平行。