细菌感染的病原学诊断
二章细菌感染实验诊断
二、标本的处理
1.标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。 脑脊液则要在25 ℃保存，用于细菌培 养的标本保存时间不应超过24h。对环 境敏感的细菌应保温并立即送检。
2.标本中可能含有致病菌，必须注意安全 防护。切勿污染环境。对于烈性传染病 标本运送时更要由专人运送，严格按规 定包装。
3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管 内运送，有时可直接用抽取标本的注射 器运送。
二、不染色细菌标本检查
1.主要用于检查生活状态下细菌的 动力及运动状况。可对某些病原 菌作出初步鉴定，如霍乱菌。
2.螺旋体由于不易着色并有形态特 征，故多用不染色标本作暗视野 显微镜检查。
三、细菌染色标本的检查
细菌标本经染色后，除能清楚看 到细菌的形态、大小、排列方式外， 还可根据染色反应将细菌进行分类。
(一)常用染料
分为碱性和酸性两大类。此外，还有复 合染料。 1．碱性染料 电离后显色离子带正电荷，
易与带负电荷的被染物结合。由于细菌 均带负电荷，易与染料结合而着色。常 用的有碱性复红、结晶紫、美蓝等。
2．酸性染料 电离后显色离子带负电荷， 易与带正电荷的被染物结合。细菌都带有 负电荷故不易着色。通常用来染细胞浆， 而很少用于细菌的染色。常用的酸性染料 有伊红、刚果红等。
第一节 临床感染性疾病 实验诊断要求
一、诊断的目的 1.以疾病的病原学诊断为目的,只需鉴
定到细菌的种。 2.为提供治疗方案为目的，要进行临
床标本的直接药物敏感试验。
3.以流行病学研究为目的,要鉴定到型。 4.以了解细菌与感染的关系为目的,应
该做细致的鉴定。
二、诊断试验的选择
1.选择有鉴定价值的试验。 2.选择简易、快速、方便的试验，达
第二章细菌感染实验诊断
细菌感染的病原学诊断 ppt课件
（二）常用的染色方法 1．革兰染色（gram stain）
革兰阳性球菌
革兰阴性杆菌
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第二节 细菌的形态学检查
2．抗酸染色 （acid-fast stain） 可将细菌分为两大类： 即-抗酸性细菌 -非抗酸性细菌
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第二节 细菌的形态学检查
3．荧光染色 （1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察
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第四节 细菌的非培养检测方法
二、分子生物学检测 （一）核酸杂交
1. 探针的种类 （1）全染色体DNA探针 （2）染色体克隆片段DNA探针 （3）质粒DNA探针 （4）rRNA基因探针 （5）寡核苷酸探针
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第四节 细菌的非培养检测方法
2．核酸杂交在临床细菌检测中的应用 （1）细菌分类鉴定 （2）细菌快速鉴定 （3）细菌耐药性的检测 （4）细菌毒素的检测 （5）细菌流行病学调查
结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。 （2）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白
喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。
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第二节 细菌的形态学检查
4.鞭毛染色 可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数
量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中 很重要。 5.异染颗粒染色
用于白喉棒状杆菌染色。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（三）培养基的选择 从血液、骨髓中
分离病原菌用血液增 菌培养基
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
二、分离及培养 （一）细菌的分离
1．平板划线分离法 2．斜面接种法 3．液体接种法
细菌感染的病原学诊断、细菌分类与命名ppt课件
主要用于肠杆菌科细菌中属及种的鉴别
2019
-
67
明胶液化试验
明胶
胞外酶 分解
氨基酸
失去凝固力
液态明胶
主要用于肠杆菌科细菌的鉴别 2019 也用于鉴别- 炭疽杆菌（+）和类炭疽杆菌 68
苯丙氨酸
苯丙氨酸脱氨酶 脱氨基
苯丙酮酸 +
氯化铁
绿色
主要用于肠杆菌科细菌的鉴别
2019
-
69
氨基酸脱羧酶试验
2019
-
6
一、检查方法
（一）不染色标本检查法
主要用于观察生活状态下微生物某些形态 特点及运动性
٭常用的方法有压滴法和悬滴法
如:用压滴法观察霍乱弧菌的“鱼群样运动”
悬滴法观察霍乱弧菌的“穿梭样运动”
如在同一方法制作的另一标本中加入效价≥1:64
霍乱多价血清则穿梭样运动停止并发生凝集,则为制
2动019 试验(+)
2019
-
二氧化碳培养箱
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2、烛缸法:
3、化学法： 按每升容积重碳酸钠
0.4g与1mol/L盐酸 0.35ml比例放入标本 缸,密封后倾斜容器使 两者接触产生CO2
2019
-
烛缸二氧化碳培养法
47
★厌氧培养法：厌氧罐培育法和厌氧袋法 1、厌氧罐培育法：用理化方法除去密
闭容器中的氧，造成无氧环境，以利于专 性厌氧菌生长。
2019
-
28
（7）鸡蛋和动物血清:虽然不是构成培养基 的基本成分,但却是某些细菌生长所必需的营养物 质,所以仅用于制备一些特殊的培养基。
（8）生长因子：是细菌生长所必需的，但需 要量很小。在制备培养基时，常加入维生素、氨 基酸、嘌呤、嘧啶等生长因子。
临床医学检验学主治医师：细菌感染的病原学诊断三
临床医学检验学主治医师：细菌感染的病原学诊断三1、单选利用实验动物分离鉴定病原菌时，首选的动物是（）.A.雌性动物B.雄性动物C.健康的动物D.体重相近的动物E.对病原菌最敏感的动物正确答案：E2、（江南博哥）单选下列哪个不是细菌生长所需要的营养物质（）.A.蛋白质B.肉浸液C.牛肉膏D.琼脂E.血液正确答案：D参考解析：制备培养基时，需要在液体中加入凝固物质，最常用的是琼脂，是一种理想的固体培养基赋形剂，因其不被细菌分解利用，故无营养作用。
3、单选破伤风梭菌应选用的培养基是（）.A.普通琼脂斜面培养基B.鲍-金培养基C.吕氏血清斜面培养基D.罗-琴培养基E.庖肉培养基正确答案：E参考解析：结核分支杆菌应选用的培养基是罗-琴培养基；白喉棒状杆菌应选用的培养基是吕氏血清斜面培养基：破伤风梭菌厌氧芽孢杆菌应选用的培养基是庖肉培养基。
4、单选培养肠道致病菌常用的选择性培养基是（）.A.LB培养基B.巧克力培养基C.醋酸铅琼脂培养基D.葡萄糖半固体培养基E.SS培养基正确答案：E参考解析：SS琼脂有较强的抑制力，用于志贺菌和沙门菌的分离。
5、单选甲基红试验的基本原理是（）.A.检测细菌对尿素的分解能力B.检测细菌对色氨酸的分解能力C.检测细菌对糖的分解能力D.检测细菌对蛋白胨的分解能力E.检测细菌对含硫氨基酸的分解能力正确答案：C参考解析：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降至4.5以下，当加入甲基红试剂则呈红色，为甲基红试验阳性。
6、单选对实验动物进行接种的方法是（）.A.皮内注射法和皮下注射法B.腹腔注射法和肌内注射法C.静脉注射法和足掌接种法D.脑内注射法和鼻内接种法E.以上均是正确答案：E7、单选甲基红试验阳性结果是（）.A.黄色B.红色C.黑色D.绿色E.蓝色正确答案：B8、单选用于接种胆汁标本的培养基不包括（）.A.血平板B.厌氧平板C.麦康凯平板D.SS平板E.增菌肉汤正确答案：D参考解析：胆汁标本除一般培养外还需加厌氧培养及增菌培养。
微生物学--细菌感染的病原学诊断
结果代码
0 0 1 0 2 1 4 2 1 4 2 0 4 2 0
总值 1 3 7 6 6
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第二节 细菌的形态学检查
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细菌的形态学检查
1.包括不染色标本检查法和染色标本检查法 2.镜检可以了解有无细菌及大致的菌量 3.根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的
初步识别和分类 4.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊
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细菌的形态学检查
3.有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作 出初步鉴定 如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似 流星状运动的细菌，制动试验阳性，可初步 推断为“疑似O1群霍乱弧菌”。
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细菌的形态学检查
二、染色标本 （一）常用染料 1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等 2．酸性染料：有伊红、刚果红等 3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有
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细菌感染的实验诊断-生化反应
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细菌的分离培养和鉴定
4．七叶苷水解试验 主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别。
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细菌的分离培养和鉴定
5．甲基红试验
原理 某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖生成丙 酮酸,丙酮酸进一部分解生成甲酸乙酸乳酸等有机 酸,使培养基的PH下降至4.5以下,当加入甲基红指示 剂,使指示剂呈红色变化.
细菌感染的病原学诊断
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本章内容
第一节 标本的采集和处理原则 第二节 细菌的形态学检查 第三节 细菌的分离培养和鉴定 第四节 细菌的非培养检测方法
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临床医学检验技师初级(师)微生物学及检验(细菌感染的病原学诊断)-试卷1
临床医学检验技师初级【师】微生物学及检验【细菌感染的病原学诊断】-试卷1(总分：60分，做题时间：90分钟)一、 A1型题(总题数：30，score:60分)1.下列革兰染液成分不包括【score:2分】【A】稀释复红【B】结晶紫【C】95％酒精【D】卢戈碘液【E】5％石炭酸复红【此项为本题正确答案】本题思路：革兰染液成分有结晶紫、95％酒精、卢戈碘液、稀释复红。
2.临床上最常见的真菌培养基是【score:2分】【A】脑心浸膏琼脂【B】沙保琼脂【此项为本题正确答案】【C】尿素琼脂【D】马铃薯葡萄糖琼脂【E】玉米粉聚山梨酯一80琼脂本题思路：本题考查真菌的临床培养。
真菌培养常用的培养基有沙保琼脂、脑心浸膏琼脂、米粉吐温琼脂、蔡氏培养基、马铃薯葡萄糖琼脂等，其中沙保琼脂适用于分离绝大多数真菌，应用广泛。
3.下列关于培养基性能试验说法不正确的是【score:2分】【A】分离培养基应每周测试1次【B】鉴别培养基需每批及每月测试1次【C】如需观察多项性能，可使用多种菌株完成【D】每批新购、新配的培养基，均应用已知性质的标准菌株进行预测【E】用于测试分离培养基性能的菌株，原则上应使用预期最容易生长的细菌菌种，并且应多量生长【此项为本题正确答案】本题思路：本题考查对培养基性能试验的理解。
用于测试分离培养基性能的菌株，原则上应使用预期最难生长的细菌菌种，并且应少量生长，其余均正确。
4.专性需氧菌经人工液体培养基培养后，可观察到的生长现象是【score:2分】【A】液体表面形成菌膜【此项为本题正确答案】【B】液体底部有沉淀【C】液体变色【D】可闻到腐败性的恶臭【E】液体分层本题思路：专性需氧菌在液体培养基中培养时，因生长代谢时需要氧气，故呈表面生长，常在液体表面形成菌膜。
5.中国蓝培养基属于【score:2分】【A】基础培养基【B】营养培养基【C】鉴别培养基【D】选择培养基【此项为本题正确答案】【E】增菌培养基本题思路：中国蓝平板可抑制革兰阳性菌，有选择地促进革兰阴性细菌生长，是很好的弱选择培养基。
医院感染的病原学诊断方法
医院感染的病原学诊断方法医院感染是指在医疗机构内接受治疗的患者出现的新发感染，它是医疗安全中的重要问题之一。
医院感染的发生与病原体的传播密切相关。
因此，准确地确定病原体的种类以及其感染途径对于控制和预防医院感染至关重要。
本文将介绍医院感染的常见病原学诊断方法。
1. 细菌培养细菌培养是一种常见的病原学诊断方法，它通过将临床样本（如血液、尿液、伤口分泌物等）接种到含有营养物质的培养基中，利用条件和培养时间来培养和检测细菌。
通过对细菌的形态、生理特性、生化反应和抗生素敏感性进行观察和鉴定，可以确定感染病原体的种类。
此外，细菌培养还可以提供定量信息，即通过计算细菌数量来评估感染的严重程度。
2. 真菌培养与细菌类似，真菌培养也是一种常用的病原学诊断方法。
真菌感染多见于抗生素使用频繁或免疫功能低下的患者。
真菌培养主要通过将临床样本（如痰液、皮肤刮片、血液等）接种到含有酵母菌或霉菌专用培养基的培养皿中，利用适当条件和培养时间培养和检测真菌。
真菌培养的结果可以提供准确的真菌种类信息，有助于指导抗真菌药物的选择。
3. 病毒核酸检测病毒核酸检测是一种先进的病原学诊断方法，它通过提取临床样本中的病毒核酸，利用特定的引物和试剂进行反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）或聚合酶链式反应（PCR）扩增，最终检测和鉴定病毒的存在或种类。
病毒核酸检测具有高度特异性和敏感性，可以用于迅速确定感染性病毒，如呼吸道病毒、肝炎病毒、HIV等。
4. 分子生物学检测分子生物学检测技术已经成为医院感染病原学诊断中的重要方法之一。
其中，PCR技术和DNA杂交技术是常用的分子生物学检测方法。
PCR技术利用DNA聚合酶扩增目标序列，从而使其达到能够被检测到的水平。
DNA杂交技术则通过对病原体核酸探针和基因组DNA进行杂交，利用特定的信号标记来检测目标病原体。
5. 免疫学检测免疫学检测是通过检测患者体内产生的特定抗体或抗原来确定感染病原体的一种方法。
细菌与病毒的病原学检查法
凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、免疫荧光技 术
核酸检测：
1.核酸杂交技术:Southern印迹杂交、Northern印迹 杂交、原位杂交
2.PCR技术 3.基因芯片 4.16rRNA基因序列分析：编码rRNA，保守区、可变 区
三、抗体的检测（血清学诊断）
凝集试验：直接、间接、协同、冷凝集 沉淀试验：环状、絮状、双向、对流电泳 补体结合试验： 酶联免疫吸附试验（ELISA）：
取双份血清，抗体效价比早期高4倍以上有意
义。
第二节 病毒感染的微生物学检查法
一、形态学检查
1.电子显微镜检查
直接镜检法：107颗粒/ml，电镜观察病毒
颗粒的形态和结构
免疫电镜法（IEM）：
标本+特异性抗体 病毒颗粒聚集 电镜 观察
轮状病毒的粪便、HAV、HBV的血清、疱疹 病毒的疱疹液，可早期诊断。
三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标
细胞的变化：CPE 红细胞吸附（HAd）： 红细胞凝集： 病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒,Vero细
胞。
中和试验（NT）：是病毒在活体内或细胞培
养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验
空斑形成试验：蚀斑形成单位（PFU），感染
性病毒的滴度用PFU/ml表示。
四、病毒成分的检测
血凝抑制试验
病毒+红细胞 血凝现象
病毒+抗体+红细胞 血凝现象消失
用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行 病学调查及鉴定病毒的型和亚型。
ELISA法：HSV、CMV、EB病毒等
蛋白印迹技术：用已知病毒蛋白检测未
知病毒
病毒抗原的检测：HIV和HBV抗原
病毒核酸的检测
细菌感染的病原学诊断
结果 紫色：革兰阳性菌
红色：革兰阴性菌
抗酸染色法（acid-fast stain）
原理 方法 （Ziehl－Neelsen染色法）
– 初染：5％石碳酸复红 加温 染 3～5min ，水洗
– 脱色：3%盐酸酒精 1 min ，水洗
– 复染：碱性美兰
1 min ，水洗
结果
红色：抗酸性细菌 蓝色：非抗酸性细菌
产碱型
发酵型
氧化型
• 主要用于革兰阴性杆菌的鉴别。肠杆菌科细菌均为发酵型， 非发酵菌通常为氧化型或产碱型。
• 葡萄球菌和微球菌的鉴别，前者为发酵型，后者为氧化型。
3.七叶苷水解试验
阳性 培养基变黑 阴性 培养基不变色
• 用途
主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别，前者 阳性，后者阴性。也可用于肠杆菌科、其他革兰阴性 菌及厌氧菌的鉴别。
• 用途 糖发酵试验是鉴定细菌最常用的生化反应，特别用于肠
杆菌科细菌的鉴定。
2.氧化/发酵试验（O／F试验）
原理
有氧
分解葡萄糖
氧化型
细菌
有氧或无氧 分解葡萄糖
发酵型
有氧或无氧 不分解葡萄糖 产碱型
又 称 葡 萄 糖 代 谢 类 型 鉴 别 试 验 或 Hugh-Leifson （HL）试验
用途
主要用于观察细菌的动力及其运动状态 1.悬滴法 2.压滴法 3.毛细管法 4.暗视野显微镜检查法 5.相差显微镜检查法
（二）细菌染色标本的检查
细菌染色标本的制作程序
涂片 → 干燥 → 固定 → 染色
3.细菌常用的染色方法
（1）单染色法 只用一种染料色的方法 制片→结晶紫1min→水洗→晾干、油镜检
（2）复染色法 革兰染色法（Gram stain） 抗酸染色法（acid-fast stain）
微生物感染的病原学检查法
微生物感染的病原学检查法文/ 张力平微生物感染的病原学检查可查明标本中的病原微生物并对其进行种属鉴定，必要时进行药物敏感试验和毒力检查等，从而协助医生对感染性疾病进行病因学诊断、指导合理用药或观察治疗效果。
微生物感染的病原学实验室诊断方法大致包括：①光学显微镜对标本或组织中的病原体的形态学检查；②病原体的分离培养和鉴定；③用免疫学技术对病原体抗原或相应抗体的检测；④用分子生物学方法对病原体特异性基因的检测。
标本的采集与送检微生物学检查的第一步，方法的正确与否直接影响病原体的检出率，因此应注意下述原则：1．采集标本时应无菌操作，尽量避免污染；盛放标本的容器和培养基应预先进行无菌处理并贴好标签。
2．应选择感染部位或病变明显的部位采集标本，避免周围组织、器官或分泌物中的杂菌污染。
例如感染性伤口，应从其深部而不是从表面采集标本；若采集龈沟液检查口腔厌氧菌，应将无菌滤纸条深入龈沟中，停留数秒后取出；怀疑细菌性痢疾时，应采集有粘液或脓血的粪便；采集病毒的标本应尽量含有感染的细胞。
3．根据病原体在感染性疾病的不同时期的体内分布和排出部位选择在最佳时间采集适宜标本。
例如，可疑伤寒的病人，在病程的1～2周内取血液，2～3周时则取粪便或尿液送检；怀疑流行性脑膜炎的病人，应选取脑脊液、血液或皮肤上的出血淤斑进行检测；如果进行病毒培养或其抗原检测，一般应取急性期标本，标本采集越早，病毒的阳性检出率越高。
4．对于怀疑细菌感染的标本，尽量在抗生素使用前采集，特别是对抗生素敏感的病原体，如乙型溶血性链球菌、脑膜炎奈瑟菌。
病毒对抗生素不敏感，故无此限制。
而且用于病毒分离培养的标本应加入抗生素，以避免在病毒培养过程中的细菌污染。
5．检查病原体的特异性抗体IgG时，应采集急性期和恢复期双份血清，只有当恢复期血清抗体效价比急性期的效价明显升高达4倍或以上时，方有诊断价值。
检测血清特异性抗体的标本应保存在-20℃。
6．标本采集后应及时送检。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
3．鉴别培养基（diferential medium） 糖发酵管、克氏双糖铁
琼脂（KIA）、伊红-镁
蓝琼脂和动力-吲哚-尿素
（MIU）培养基等。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
4．选择培 （selective medium） SS琼脂使致病的沙门菌、 志贺菌容易分离到
（五）抑菌试验
1． O/129抑菌试验
用于弧菌科的属间鉴别，弧菌属、邻单胞菌属 对O/129敏感，而气单胞菌属耐药。
2．杆菌肽试验 用于A群链球菌与非A群链球群的鉴别。
3．奥普托欣（Optochin）试验
主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。
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第四节
细菌的非培养检测方法
一、免疫学检测 抗原检测、抗体检测 二、分子生物学检测 核酸杂交、聚合酶链反应、生物芯片技术 三、细菌毒素的检测 内毒素、外毒素 四、动物实验
（二）细菌培养方法
1．需氧培养法
2．二氧化碳培养法
3．厌氧培养法
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
三、生化反应和鉴定
（一）碳水化合物的代谢试验
1. 糖（醇、苷）类发酵试验
是鉴定细菌最主要和最基
本的试验，特别对肠杆菌科 细菌的鉴定尤为重要
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子
2．凝固物质
琼脂、明胶、卵白
3．抑制剂和指示剂
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（二）培养基种类 1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient medium） 3．鉴别培养基（diferential medium） 4．选择培养基（selective medium） 5．特殊培养基（special medium）
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31
第三节 细菌的分离培养和鉴定
4．七叶苷水解试验
主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别。 5．甲基红试验 主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌。 6．V―P试验 本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的 细菌，后者通常为阴性。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
2．氧化―发酵试验（O/F试验） 主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴 别，前者均为发酵型，而后者通常为氧化型 或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的 鉴别。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
3．β―半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为 阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验 主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。
第三章 细菌感染的病原学诊断
褚云卓
2014-5-18
1
本章内容
第一节 标本的采集和处理原则
第二节 细菌的形态学检查
第三节 细菌的分离培养和鉴定
第四节 细菌的非培养检测方法
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第一节 标本的采集和处理原则
一、标本采集的一般原则
1．早期采集
2．无菌采集
3．根据目的菌的特性用不同的方法采集
DNA酶，在肠杆菌科中沙雷氏菌和变形杆菌
产生此酶。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
7 ．凝固酶试验
作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也
是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。
8 ． CAMP试验
在链球菌中，只有B群
链球菌CAMP试验阳性，
故可作为特异性鉴定。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
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第二节 细菌的形态学检查
1.包括不染色标本检查法和染色标本检查法
2.镜检可以了解有无细菌及大致的菌量 3.根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的 初步识别和分类 4.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊 断和治疗疾病有一定的参考意义
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第二节 细菌的形态学检查
瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）
等；荧光染料有荧光标记的抗体
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第二节 细菌的形态学检查
（二）常用的染色方法
1．革兰染色（gram stain）
革兰阳性球菌 革兰阴性杆菌
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第二节 细菌的形态学检查
2．抗酸染色 （acid-fast stain） 可将细菌分为两大类： 即-抗酸性细菌 -非抗酸性细菌
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
一、培养基的种类和选择
培养基（culture medium）
是由人工方法配制而成的， 专供微生物生长繁殖使用 的混合营养物制品。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
(一)培养基的组成成分
1．营养物质
蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、
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第四节 细菌的非培养检测方法
一、免疫学检测
（一）抗原检测
免疫荧光技术是利用免疫学特异性反应与荧光 示踪技术相结合的显微镜检查手段。既保持了血清 学的高特异性，又极大地提高了检测的敏感性，在 细菌鉴定方面占有重要地位。常用的方法有直接
法、间接法和免疫荧光菌球法。
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一、不染色标本 1.细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态 下细菌的动力及运动状况
2.常用的方法有压滴法和悬滴法
有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显
的方向性位移
无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无 位置的改变
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第二节 细菌的形态学检查
3.有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（三）培养基的选择 从血液、骨髓中 分离病原菌用血液增 菌培养基
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
二、分离及培养 （一）细菌的分离
1．平板划线分离法
2．斜面接种法
4．穿刺接种法 5．倾注平板法 6．涂布接种法
3．液体接种法
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
第四节 细菌的非培养检测方法
一、免疫学检测 （二）抗体检测
抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价的
升高。因此用已知的细菌或其特异性抗原检测病人 血清中有无相应抗体及其效价的动态变化，可作为 某些传染病的辅助诊断。主要适用于抗原性较强的 致病菌和病程较长的感染性疾病。
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第四节 细菌的非培养检测方法
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
5．特殊培养基 （special medium） 疱肉培养基、 巯基乙醇酸纳培养基
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（三）培养基的选择
根据标本来源和可能存在的
病原菌，确定选用各种分离培养
基。伊红美蓝/麦康凯用于筛选
革兰阴性杆菌。
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4．采集适量标本
5．安全采集
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第一节 标本的采集和处理原则
二、标本的处理 1. 对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌 和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检
2. 其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室
3. 若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存
4. 一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应
超过24h
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５.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全 防护
６.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装
好，防止送检过程中倒翻或碰破流出
７.对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须
按规定包装，由专人运送 ８.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送， 有时可直接用抽取标本的注射器运送2014-5-18源自13第二节 细菌的形态学检查
6.芽胞染色： 绿色部分 为芽胞
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第二节 细菌的形态学检查
7.墨汁染色:
一般用于新型隐球菌
检查
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
一、培养基的种类和选择
培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择
二、分离及培养 细菌的分离、细菌培养方法 三、生化反应和鉴定 碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验
4．尿素分解试验 主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。 5．苯丙氨酸脱氨酶试验 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、 普罗菲登斯菌属和摩根菌属细菌均为阳性，肠 杆菌科中其他细菌均为阴性。
6．氨基酸脱羧酶试验
主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（三）碳源和氮源利用试验 1．枸橼酸盐利用试验
出初步鉴定
如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似
流星状运动的细菌，制动试验阳性，可初步
推断为“疑似O1群霍乱弧菌”。
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第二节 细菌的形态学检查
二、染色标本
（一）常用染料
1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等
2．酸性染料：有伊红、刚果红等
3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
1．基础培养基