第二章 兽医生物制品菌(毒)种的选育与构建
■ 由于 DNA 上核苷酸碱基的改变，而导致遗传性 状突变的结果。
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（二）弱菌（毒）种选育
弱毒（菌）种的选育
自然弱毒株的分离
同源 动物
异源 动物
人工诱变致弱
化学 途径
物理 途径
生物 途径
亚
高
适毒力强， 抗原性好， 性状稳定的菌毒株， 经增殖后进行冻干保存， 冻干菌种于 4℃保存， 冻干病毒毒种于零下 20℃以下， 可保存多年。
冻干菌/毒种一经动物传代，即应重新分离、鉴定和 检测后使用。
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（二）弱菌（毒）种选育
■ 弱菌 （毒）种用于弱毒活疫苗，部分诊断制品和 抗血清的制造。
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强菌（毒）种选育
②抗原性测定 反应原性多采用血清学方法， 以抗体滴度或效
价表示。 免疫原性多采用定量原强菌（毒）株的菌（毒）
液攻击免疫动物， 以保护率表示。
均应设对照，否则无效
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强菌（毒）种选育
③稳定性测定 ■ 毒力 （致病力）和抗原性还要进行稳定性测定，
以证明后代特性不变， 才有使用价值， 并参与筛 选择优。
■ 提高稳定性的方法：挑选和纯化
■ 如羊痘鸡胚化毒种在经过羊体传代2-4代复 壮、纯化后方能用于疫苗制备。
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4. 良好的反应原性和免疫原 性
■ 要求菌（毒）种具有良好的免疫原性，接种后能诱发机体的 体液免疫和细胞免疫，并持续较长的时间，使免疫动物获得 强效的免疫力。
■ 一般来说，动物接种后产生80%以上的保护即认为具有良好 的免疫原性。
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3. 初选依据
■ 细菌菌落特征的变异 ■ 病毒蚀斑的变异 ■ 对温度敏感性变异 ■ 对药物敏感性变异 ■ 对营养要求变异 ■ 对宿主动物易感性变异
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我国一些弱毒株的育成路线与方法
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硝
温
易感动
基 胍
紫 外 线
物或细 胞；杂 交减毒
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1. 自然弱毒株的选育
（1）利用病原的自然弱毒株:由于自然强毒株在 长期的自然因素作用下引起遗传基因突变， 从而形成了与祖代形状不同的生物株。
如巴斯德从巴氏杆菌的陈旧培养物中分离到禽霍 乱弱毒菌株。
机率低
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（2）选择同源不同种的微生物种：具有一定交叉免 疫原性，而天然宿主又不相同的微生物株作为疫苗株。 如：
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12
13
14
美国菌种保藏中心（ATCC）
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2. 生物学特性明显
■ 菌种的形态特征、培养特性、免疫学特性明显，易于鉴别； ■ 毒种的形态、增殖培养病变、免疫学特性明显； ■ 菌种和毒种人工感染动物后的临床表现、病理变化、引起的
细胞病变具有特征。
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3. 遗传性状稳定
■ 菌种和毒种在保存、传代和使用过程中，受各种因素影响而 变异，因此保证其遗传性状稳定是保障生物制品质量的重要 因素之一。
■ 生物诊断用的菌（毒）种少量注入动物体内就能诱发强烈免 疫反应，产生既特异又灵敏的诊断用品。
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5. 可靠的安全性
■ 菌（毒）种的安全性与两方面因素有关： 1. 菌（毒）种残余的毒力，如弱毒疫苗。 2. 混有强毒或其他病原体。 致病力进行测试。
灭活苗必须彻底灭活！
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四、菌种与毒种选育技术
（一）强菌（毒）种选育 • 强菌（毒）种广泛用于诊断制品，抗病血清， 灭活疫苗和疫苗制品
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三. 兽医生物制品菌（毒） 种标准
菌（毒）种是生物制品质量的关键。 制备的疫苗必须是安全、有效的，诊断试剂必须敏感和特异， 因此这些菌（毒）种除了毒力标准不同外，均需符合一定的标 准。
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1.来源（历史）清楚，资料完 整
■ 流行地区、动物种、流行资料清楚； ■ 分离鉴定资料完整； ■ 传代、保藏、生物学特性检查方法明确。
种扩散罪是指从事实验、保藏、携带、运输传染病菌种、毒种的人员， 违反国务院卫生行政部门的有关规定，造成传播染病菌种、毒种扩散， 后果严重的行为。
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生物制品用菌（毒）种生物安全分 类
■ 第一类病原微生物，是指能够引起人类或动物非常严重疾病 的微生物，以及中国尚未发现或已经宣布消灭的微生物。
■ 口蹄疫病毒、高致病性禽流感病毒、猪水 泡病病毒、非洲猪瘟病毒、非洲马瘟病毒、 牛瘟病毒、小反刍兽疫病毒、牛传染性胸 膜肺炎丝状支原体、牛海绵状脑病病原、 痒病病原。
反应原性
免疫原性
血清学试验 攻毒保护试验
筛选出毒力强、抗原性好、生长稳定、纯净的毒株
冻干、冷冻或冷藏保存
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强菌（毒）种选育
①致病力测定（毒力测定） ■ 常用易感实验动物或本动物：
■ 最小致死量（MLD）； ■ 半数致死量（LD50）。
■ 鸡胚或易感细胞：
■ 鸡胚半数致死量（CELD50）； ■ 鸡胚半数感染量（CEID50）； ■ 细胞半数感染量（TCID50）。
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生物制品用菌（毒）种生物安全分类
■ 第四类病原微生物，是指通常不会引起人类或动物疾病的微 生物。
■ 是指危险性小、低致病力、实验室感染机会少的 兽用生物制品、疫苗生产用的各种弱毒病原微生 物以及不属于第一、二、三类的各种低毒力的病 原微生物。
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二. 分类
（一）按照菌（毒）种的毒力分类 1. 强毒菌（毒）种 是指具有强大致病力的菌种，一般免疫原性良好，常用于制造某些灭活 疫苗、抗血清以及疫苗效力检验。
干燥 ■ 狂犬病病毒
狂犬病弱毒疫苗
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（3）生物途径选育
■ 通过生物途径选育的弱毒株，其生物稳定性极佳， 但过程比较长。
■ 至目前为止， 用于预防人类和家畜传染病的活疫 苗的菌种和病毒种，大部分都以这种方式培育， 在动物传染病的控制与消灭过程中， 这类疫苗起 着重要的作用。
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① 适应非易感动物 ■ 优点：动物来源广、饲养管理方便、成本低、易
■ 第三类病原微生物，是指能够引起人类或动物疾病但一般情 况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限， 实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防 措施的微生物。
■ 多种动物共患病病原微生物：低致病性流感病 毒、伪狂犬病病毒、破伤风梭菌、气肿疽梭菌、 结核分支杆菌、副结核分支杆菌、致病性大肠 杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌等。
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生物制品用菌（毒）种生物安全分 类
■ 第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病， 比较容易直接或间接在人与人、动物与人、动物与动物之间 传播的微生物。
■ 猪瘟病毒、鸡新城疫病毒、狂犬病病毒、 绵羊痘/山羊痘病毒、蓝舌病病毒、兔病毒 性出血症病毒、炭疽芽孢杆菌、布氏杆菌。
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生物制品用菌（毒）种生物安全分类
的效力检验，也用于人工育成弱菌（毒）株的菌（毒）种，以及微生 物学与免疫学、动物传染病等实验室研究。 • 分离于疫病流行区的典型病例。
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四 菌种与毒种选育技术
（一）强菌（毒）种筛选程序和内容
菌（毒）分离
纯粹性实验
致病力实验
抗原性实验
原动物 实验动物 LD50
TCID50
鸡胚 细胞
EID50 ELD50 稳定性实验
于连续传代及操作简单。
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② 适应细胞 ■ 采用同源或异源动物组织的原代细胞。
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③ 杂交减毒 ■ 两种遗传性状不同的菌（毒）种，在传代培育中
进行自然杂交，以导致不同菌（毒）株间基因发 生交换而育成有使用价值的弱毒株。 ■ 如流感病毒温度敏感株（抗原性低）与流行株 （毒力强）在混合培养传代中进行杂交，育成抗 原性强毒力低的弱毒株。
■“牛痘” 。 ■ 火鸡疱疹病毒作为预防鸡马立克氏病毒疫 苗株 ■ 牛病毒性腹泻病毒接种预防猪瘟感染。
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2. 人工方法诱发突变弱毒株的选育
（1）化学途径 ■ 化学诱变剂：亚硝基胍------1% ■ 例如：即支原体疫苗株，肺炎支原体突变株
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（2）物理途径选育
高温 ■ 炭疽强毒菌株
炭疽弱毒疫苗
2. 弱毒菌（毒）种 是指对动物无致病力而具有一定免疫原性的菌种，主要用于制造弱毒疫 苗。
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（二）按照菌（毒）种的用 途分类 1. 生产用菌（毒）种
是指用于生产生物制品的菌（毒）种，包括疫苗、抗毒素、类毒素、抗 血清及诊断用品的菌、毒种。 2. 检定用菌（毒）种 是指用于检定生物制品效力等菌（毒）种。还包括用于检定血清交叉反 应的菌（毒）种。 3. 工具用菌（毒）种 是指生物制品生产中作为工具使用的菌种。如基因工程表达抗原使用的 载体大肠杆菌、酵母菌等。 4. 标准菌株或参考菌株：不直接用于生产。
生物制品的流程
菌种的选育与构建 种子批的建立 前临床试验
疫苗规模化生产 III期临床试验
疫苗的生产
II期临床试验
I期临床试验
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第二章 兽医生物制 品菌（毒）种的选
育与构建
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一 概述
■ 菌（毒）种：直接用于制造和检定生物制品的细菌、支原体、立克次 体或病毒等。
■ 来源途径合法，并经国务院药品监督管理部门批准。 ■ 根据《中华人民共和国刑法》第三百三十一条规定，传染病菌种、毒
兽医生物制品学
兽医生物制品学第一讲绪论一、兽医生物制品学的概念1、兽医生物制品学（veterinary biologicology）以预防兽医学和生物工程学理论为基础，研究动物传染病和寄生虫病的免疫预防、诊断和治疗用生物性制品的制造理论和技术、生产工艺、制品质量检验与控制及保藏和使用方法，以增强动物机体特异性和非特异性免疫力，及时准确诊断动物疫病，并给予特异性治疗，防止疫病传播的综合性应用学科。
2、兽医生物制品(veterinary biologics)是根据免疫学原理，利用微生物、寄生虫及其代谢产物或免疫应答产物制备的一类物质，专供相应的疫病诊断、治疗或预防之用。
二、兽医生物制品学的应用：免疫预防、诊断、治疗1、免疫预防：18-19世纪,牛瘟在法国和南美引起大量牛只死亡；牛肺疫曾在亚非地区包括我国广泛流行；1956年周泰冲、袁庆志等研制成功的中国系（C系）猪瘟兔化弱毒疫苗。
口蹄疫多价灭活疫苗已被成功应用，特别是口蹄疫在欧洲的控制和扑灭、其中部分应归功于O型、A型、C型口蹄疫三价灭活疫苗的有效应用。
2、诊断：猪瘟、猪伪狂犬病、鸡新城疫及传染性法氏囊病等ELISA抗体检测试剂盒已在普遍使用。
3、治疗：有些动物传染病的免疫血清、痊愈血清和卵黄抗体等生物制品具有帮助动物机体杀死、抑制或消除病原体的致病作用。
三、生物制品的发展史（一）经验时期时间：十一世纪-1798年主要事件：1、十一世纪我国的“痘症防御法”。
2、1400年，我国甘肃牧区的“灌花”预防牛瘟。
（二）实验时期时间：1798年-1945年主要事件：1、1798年Jenner（秦纳）：天花疫苗的由来及效果的研究。
2、疫苗技术研究：1881－1885Pasteur(巴斯德）培养鸡霍乱陈旧物、高温培养炭疽、兔体传代狂犬病毒，首创弱毒疫苗。
1886Salmon首创灭活技术并培育成功灭活疫苗。
1888外毒素的脱毒技术，研制成功类毒素。
1890 德国人Behring和日本人北里（Kitasato）将白喉外毒素注射给动物，发现抗毒素。
菌种与毒种选育技术
菌种与毒种选育技术菌种和毒种是动物疫苗生产、检验与研究的基础。
自然界存在着多种多样的微生物，而且还在不断地出现新的株和型，由于生物制品用途的不同，所选择的菌种和毒种也各异。
有的需要致病力强，抗原性好的，有的则要求致病力弱仅有感染性而无病害性，免疫原性高的菌（毒）种。
1、兽医生物制品菌（毒）种标准生物制品用强弱菌毒种除毒力标准不同外，还需符合以下标准。
（1）历史清楚，流行地区，动物种毒，流行资料清楚，分离鉴定资料完整，传代、保藏、生物特性检查方法明确。
（2）生物性状明显，菌种的形态，培养特征和生化特性，血清免疫学特性明显，菌毒种人工感染动物后的临床表现，病理变化特征明显等。
（3）遗传学上相对均一与稳定：菌毒种遗传性状的改变主要表现在形态特征，毒力和反应原性等方面。
提高或保持菌毒种均一性和稳定性的方法，就是经常进行挑选，纯化，例如羊痘鸡胚化毒种在经羊体传2-4代复壮，纯化后方能用于制苗。
（4）反应原性与免疫原性优良：优良的反应原性与免疫原性是生物制品菌毒种标准的重要指标。
反应原性高，即使微量抗原进入机体即能产生强烈的免疫反应，在血清学上会出现很高的特异性。
优良的免疫原性物质能使免疫动物发生尽可能完善的免疫应答，从而获得坚强的免疫力。
通常也可通过浓缩，提纯或导入佐剂等方法提高反应原性、免疫原性不高的菌毒种制品的免疫效果与免疫反应。
（5）毒力应在规定范围内：用于制造弱毒疫苗的毒种毒力，要尽可能弱性；而其他制品用的则要强毒力毒种，但抗原性要尽可能高为准，强毒株细菌的毒性物质还含有毒素物质，在未处理前的毒力极强，对动物是不安全的，所以必要对致病力进行测定。
2、强菌（毒）种选育强菌毒种广泛用于诊断制品，抗病血清，灭活疫苗和疫苗制品的效力检验，也用于人工育成弱毒株的毒种，以及微生物学与免疫学、动物传染病等的研究。
强菌毒种常自疾病流行地区的典型病动物体内分离，在疾病流行初中期，病状病理变化典型而又未经任何治疗的病历可分离到毒力强大，抗原性良好的自然毒株，如我国的石门系猪瘟病毒，多杀性巴氏杆菌C44-1等。
兽用新生物制品管理办法.doc
兽用新生物制品管理办法［失效］发文单位：农业部发布日期：1989-9-2执行日期：1989-9-2生效日期：2004-7-1第一章总则第二章新制品的分类和命名第三章新制品的研制要求第四章新制品的审批程序第五章新制品的生产第六章附则第一章总则第一条根据《兽药管理条例》第二十二条的规定，制定本办法。
第二条兽用新生物制品（以下简称新制品）系指我国创制或首次生产的用于畜禽等动物疫病预防、治疗和诊断的生物制品。
对已批准的生物制品所使用的菌（毒、虫）种和生产工艺有根本改进的，亦属新制品管理范畴。
第三条凡从事新制品的研究、生产、检验、使用、监督管理的单位和人员，都必须遵守本办法。
第二章新制品的分类和命名第四条新制品按管理要求分为三类：第一类：我国创制的制品；国外仅有文献报道而未批准生产的制品。
第二类：国外已批准生产，但我国尚未生产的制品。
第三类：对我国已批准的生物制品使用的菌（毒、虫）种和生产工艺有根本改进的制品。
第五条新制品的命名要符合“生物制品命名原则”（见附录一）的规定。
第三章新制品的研制要求第六条新制品应经过实验室试验、田间试验、中间试制、区域试验等研究过程，取得完整的数据，提出制造及检验规程草案（有关试验数据要求见附录五）。
第七条实验室试验应包括菌（毒、虫）种的选育和鉴定，毒力、抗原性、免疫原性、稳定性、特异性试验和生产工艺，制品的安全性、效力（实验动物及使用对象动物）、免疫期和保存期试验等。
第八条田间试验应用3～5批实验室制造的新制品对生产条件下的使用对象动物进行试验，观察其安全性和效力。
第九条中间试制应按实验室生产工艺在生物药品厂或农业部认可的具备一定条件的中试车间试制5～10批（诊断制剂不少于3批）制品，定型生产工艺。
批量小且工艺复杂的诊断制剂，可在具备条件的实验室中间试制，批数同上。
第十条区域试验应用3批以上中间试制产品进行较大范围、不同品种的使用对象动物试验，进一步观察制品的安全性和效力。
兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控制培训课件
同源动物 （如NDV LaSota株）
异源动物 （HVT FC126株）
化学途径
物理途径 生物途径
亚硝基胍 醋酸坨 洗衣粉
高温 紫外线
适应非易感动物 或细胞 杂交减毒
兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控
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制
疫苗验规程》，它是 国家法定标准。
• 疫苗的生产必须严格按《规程》规定的方法进行 生产和检验，若要改变方法，则要提供研究材料 证明是可行的，并报农业部评审批准，形成新 《规程》才能进行生产。
LD50 EID50 ELD50 TCID50 血清学实验 攻毒保护实验
稳定性实验
筛选出毒力强、抗原性好、生长稳定、纯净的毒株，用于制备疫苗、诊断液和治疗 用抗体或疫苗效力检验用
冻干、冷冻或冷藏保存
兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控
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制
弱毒菌（毒）种的选育
弱毒菌（毒）种的选育
自然弱毒株的分离
人工诱变致弱
• 灌装设备：洗烘连动线、自动灌装加塞联动机；
• 包装设备：扎盖机、帖标机；
• 冷藏冷冻设施设备：冷库、冷柜、液氮罐等；
• 污水废弃物处理设施设备：灭菌柜、消毒罐、污水处理站；
• 检验仪器设施设备：各种显微镜、水分测定仪、二氧化碳
培养箱、生物安全兽柜医生、物制动品学物兽用制房疫苗等生产。和质量控
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兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控
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制
厂房、设施和仪器设备
• 灭菌设备：高压蒸气灭菌柜、干热箱、锅炉等；
• 净化设备：净化机组、无菌室、超净工作台等；
• 微生物培养设施设备：温室、孵化器、细胞培养转瓶机、 各种罐体、生化培养箱等；
• 乳化设备：各种罐体、胶体摸、高压匀浆机等；
新版兽医生物制品学
（4）合成肽疫苗
• 合成肽疫苗是一种仅含抗原决定簇的小肽; • 即用人工方法按天然蛋白的氨基酸顺序合成
保护性短肽，然后与载体蛋白连接后加佐剂 所制成的疫苗。
（5）转基因植物可食疫苗
• 利用分子生物学技术，将病原微生物的抗原 基因导入植物，并在植物中表达出活性蛋白;
• 人或动物食用含有该种抗原的转基因植物， 激发肠道免疫系统，从而产生针对相应病原 微生物的免疫能力。
目的基因表达
以获得的表达产物作为免疫原制成的疫苗， 称为基因工程亚单位疫苗。
例如： • 大肠杆菌菌毛基因工程亚单位疫苗 • 口蹄疫基因工程亚单位疫苗 • 乙型肝炎基因工程亚单位疫苗
（2）基因工程活疫苗
基因工程技术
病原微生物
删除其致病基因或部分片段
获得毒力丧失或降低的毒株
减毒彻底、不易力返祖、安全 遗传性能更稳定
血液制品(白蛋白、丙种球蛋白)
其他生物制品 —— 非特异性免疫制品(干扰素、胸腺肽)
微生态制品(促菌生)
2、按制备方法分类
普通制品 —— 利用一般生产方法制备的，
未经浓缩、纯化处理
精 制 品 —— 将原材料用物理或化学方法去除无效成分,
并进行适当浓缩
单价制剂 —— 只利用一种微生物的单一血清型
多价制剂 —— 利用一种微生物的若干血清型
第十三章 畜禽防疫
第一章 兽医生物制品概述
生物制品技术
• 是一种既古老而又充满时代信息的技术， 并与生命健康息息相关。
一、兽医生物制品的概念
根据免疫学原理，以微生物、寄生虫及其代 谢产物或免疫应答产物，以及动物组织等生物 材料为原料，通过生物学、生物化学或生物工
程学等方（法加b工i制o备lo的g一类ic生a物l制）剂。
兽医生物制品学教学大纲
兽医生物制品学教学大纲第一章绪论内容提要：本章主要讲述兽医生物制品学的概念及在预防疾病上的应用，兽医生物制品的分类、命名原则；兽医生物制品发展的历史、成就及前景。
教学目标：掌握兽用生物制品的概念、分类、应用，了解兽用生物制品的命名原则、兽医生物制品发展的方向。
计划课时：4学时1.1兽医生物制品学的概念与应用兽医生物制品的概念；兽医生物制品学的概念免疫预防；诊断；治疗1.2兽医生物制品的分类与命名原则1.3我国兽医生物制品的发展历史及前景第二章生物制品的免疫学理论内容提要：主要讲述抗原与抗体、免疫系统与免疫应答、免疫血清学技术教学目标：掌握抗原抗体的概念。
主要的微生物抗体，免疫球蛋白；理解免疫应答的机制；掌握体液免疫应答细胞免疫应答；熟悉免疫学诊断与检测的常用技术。
计划课时：16学时2.1抗原与抗体抗原的概念、构成免疫原的条件、抗原决定簇、抗原的交叉性、主要抗原微生物免疫球蛋白与抗体、Ig的分子结构、Ig的主要特性与免疫学功能2.2免疫系统与免疫应答免疫器官、免疫细胞、细胞因子免疫应答的基本过程、体液免疫应答、细胞免疫应答、免疫耐受、免疫应答的机制2.3免疫血清学技术第三章灭活剂、保护剂与免疫佐剂内容提要：介绍灭活剂、保护剂、免疫佐剂、新型免疫佐剂教学目标：掌握灭活剂、佐剂、保护剂的概念、影响灭活剂作用的因素，理解灭活剂、佐剂、保护剂在兽用生物制品生产中的作用。
计划学时:6学时3.1灭活剂灭火与灭活剂的概念、灭火的类型、甲醛、烷化剂、苯酚、结晶紫、β-丙酰内酯3.2保护剂做成、作用机理不同微生物适用的保护剂、兽医生物制品常用的保护剂3.3免疫佐剂铝盐类佐剂、油乳佐剂、蜂胶佐剂3.4新型免疫佐剂概念与分类、作用特点、应用、重要的细胞因子3.4.2 CpGDNA概念及特点、免疫学活性、佐剂效应与应用前景免疫刺激复合物、脂质体佐剂、MF59佐剂第四章兽医生物制品生产的基本技术内容提要：本章主要讲述菌（毒）种选育技术，细菌培养、病毒增值技术，疫苗制造流程，诊断、治疗制剂的制造技术以及冷冻真空干燥，干燥技术。
兽医生物制品学课件
利用微生物、寄生虫及其代谢产物， 或者含有特异性抗体的血清制成的，供诊 断动物传染病及寄生虫或检查动物免疫状 态以及鉴定病原微生物的生物制品。 诊断抗原：变态反应性抗原:纯蛋白衍生物 结核菌素（PPD）、布氏杆菌水解素。 血清反应性抗原 ：布氏、炭疽、鸡白痢等。
3.诊断血清：
多用抗原免疫羊、兔或其他动物制成
二、生物制品生产的申报与审批 1、实验室实验 2、田间实验 3、中间实验 4、区域实验 5、申报
6、审批 7、新制品试生产 8、申请转为正式生产 9、经兽药评审委员会再评价后，建设列 入规程的，发给正式生产批准文号
第四节 我国兽医生物制品事业的概况与成 就 ★ 1951 年 ， 成 立 了 兽 医 生 物 制 品 监 察 所 （1982年改名中国兽药监察所）。 ★猪瘟兔化弱毒苗属世界领先地位， ★马传贫弱毒苗、牛瘟疫苗、鸭瘟疫苗、 小鹅瘟疫苗、仔猪副伤寒苗属国际水平。 ★与发达国家相比仍有许多不足。
二、生物制品菌毒种的一般要求
1、来源（历史）清楚 ，资料完整 由中监所或中监所委托分管的单位负责 供应 2、生物学特性比较典型 菌、毒种的形态特征，培养特性， 对动物的病原性特点，引起细胞病变的 特征 生物化学、免疫学及血清学特性
3、血清型相符 与疫苗使用区的流行病原相符 4、遗传性状稳定
（1）灭活苗（死苗）
一般灭活苗：菌、毒种经大量培养后， 灭活而成。 脏器灭活苗:利用病、死动物的含病原微 生物脏器制成 自家灭活苗：从病、死动物分离培养病原 体大量培养制成的灭活苗
（2）活苗(弱毒苗)
主要指弱毒活疫苗，人工诱变获得的弱毒 株或筛选的天然弱毒株或者失去毒力的无 毒株所制成的 同源疫苗（homologous vaccines）用所要 预防的病原体制成。 异源疫苗(heterogenous vaccines)：火鸡疱 疹病毒疫苗、鸽痘病毒、麻疹苗
兽用新生物制品管理办法
兽用新生物制品管理办法文章属性•【制定机关】农业部(已撤销)•【公布日期】1989.09.02•【文号】农业部令第五号•【施行日期】1989.09.02•【效力等级】部门规章•【时效性】失效•【主题分类】畜牧业正文*注：本篇法规已被《农业部关于废止农业行政许可规章和规范性文件的决定》（发布日期：2004年7月1日实施日期：2004年11月1日）废止兽用新生物制品管理办法（一九八九年九月二日农业部令第五号发布）第一章总则第一条根据《兽药管理条例》第二十二条的规定，制定本办法。
第二条兽用新生物制品（以下简称新制品）系指我国创制或首次生产的用于畜禽等动物疫病预防、治疗和诊断的生物制品。
对已批准的生物制品所使用的菌（毒、虫）种和生产工艺有根本改进的，亦属新制品管理范畴。
第三条凡从事新制品的研究、生产、检验、使用、监督管理的单位和人员，都必须遵守本办法。
第二章新制品的分类和命名第四条新制品按管理要求分为三类：第一类：我国创制的制品；国外仅有文献报道而未批准生产的制品。
第二类：国外已批准生产，但我国尚未生产的制品。
第三类：对我国已批准的生物制品使用的菌（毒、虫）种和生产工艺有根本改进的制品。
第五条新制品的命名要符合“生物制品命名原则”（见附件一）的规定。
第三章新制品的研制要求第六条新制品应经过实验室试验、田间试验、中间试验、区域试验等研究过程，取得完整的数据，提出制造及检验规程草案（有关试验数据要求见附件五）。
第七条实验室试验应包括菌（毒、虫）种的选育和鉴定，毒力、抗原性、免疫原性、稳定性、特异性试验和生产工艺，制品的安全性、效力（实验动物及使用对象动物）、免疫期和保存期试验等。
第八条田间试验应用3－5批实验室制造的新制品对生产条件下的使用对象动物进行试验，观察其安全性和效力。
第九条中间试制应按实验室生产工艺在生物药品厂或农业部认可的具备一定条件的中试车间试制5－10批（诊断制剂不少于3批）制品，定型生产工艺。
2第二章 菌种的选育、保藏和复壮
② 色素：对于产生色素的菌落，特别从有色变为白 色者，更要挑选出来，因为色素对于产品质量有关，避 免色素产生可以简化提炼过程。 ③生理生化：变异不容易直接辨认。实践中常采用 特别方法加以测定。例如在含有酪蛋白的培养基上，是 否有透明圈出现，以及透明圈大小可用来判断该菌是否 能产生蛋白酶以及酶活力的强弱。
左：MSA：可抑制葡萄球菌以外之菌的生长，发酵甘露 醇的葡萄球菌会使培养基变黃。
中：淀粉培养基：测定微生物是否具有淀粉酶。 右：血液培养基：用於测定微生物是否具有溶血性。
马康基氏培养基：可抑制革兰氏阳性菌生長，乳糖发酵 菌会生成红色菌落，非乳糖发酵菌則形成无色的菌落。
三酪脂琼脂培养基：测定微生物是否具有解脂酵素
④一次处理和分次处理的效果一样。但时间间隔 不能太久。5s+5s =10s ⑤具体操作：开灯预热20min(使光波稳定)→5mL 菌悬液→φ6cm培养皿→离灯30cm处→照射。 注意: a.培养皿底要平整并要摇动或利用磁力搅拌 设备，以求照射均匀。 b.对于有光复活作用的菌体,照射后须在红光 下操作。 c.处理后的菌悬液增殖培养期间，可用黑纸 包住平皿。
(一）诱变剂的种类
①物理诱变剂 射线如紫外线、X-射线、γ-射线，快中子 ②化学诱变剂 碱基类似物、 5- 氟尿嘧啶、烷化剂、亚硝 基胍和甲基磺酸乙酯等。
化学诱变剂，比物理诱变剂电离辐射有效， 而且很很经济，但大部分诱变剂是致癌剂，危 害性大。
（二）诱变育种的基本步骤
1.基本步骤 •出发菌株的选择
胞系统内进行复制和表达的育种方法（又称
分子克隆）。
四、杂交育种
两个不同基因型的菌株通过结合或原生
质体融合遗传物质重新组合，在从中分离和
筛选初具有新性状菌株的育种方法
兽医生物制品基本生产技术—菌(毒)种选育技术
稀释 度 10-7 10-8
10-9
10-10
结果
生存 死亡
0
5
1
4
3
2
5
0
累积数
生存 死亡 总数 0 11 11
1
6
7
4
2
6
9
0
9
死亡 率% 100 86
33
0
菌（毒）种的鉴定
• Reed-Muench法计算公式 比距（L）=（高于50%的死亡率-50%）/（高于50%的死
亡率-低于50%的死亡率） lgLD50=死亡率高于50%的稀释度的对数—L×稀释倍数的
菌（毒）种的概念与分类
2.分类 （1）按毒力 ➢ 强毒菌（毒）种 具有强大致病力并且免疫原性良好的菌（毒）种，常用于 制造某些灭活疫苗、免疫血清及进行疫苗效力检验。 ➢ 弱毒菌（毒）种 对动物无致病力或致病力微弱并且具有一定免疫原性的菌 （毒）种，主要用于制造弱毒疫苗。
菌（毒）种的概念与分类
（2）按用途 ➢ 生产用菌（毒）种
菌（毒）种的鉴定
鉴定项目 1.毒力鉴定 2.抗原性鉴定 3.稳定性鉴定
菌（毒）种的鉴定
1.毒力鉴定 常用易感实验动物、禽胚或细胞测定菌（毒）种的半数致死
量（LD50)、半数感染量(ID50)、禽胚半数致死量(ELD50)、 禽胚半数感染量(EID50)、组织细胞半数感染量(TCID50)等 。
苗，免疫动物，同时设立阴性对照和阳性对照，经1～3周 ，所有动物均用致死量的强毒攻击，以保护率表示。在阴 性对照、阳性对照结果正确的情况下，抗致死量强毒越多 ，保护率越高者，免疫原性越好。 反应原性测定：一般采用血清学方法，以抗体滴度或效价 表示。
菌（毒）种的鉴定