(液体)人工冬虫夏草发酵培养基的优化研究_王化河
冬虫夏草菌液体发酵培养基的优化研究
冬虫夏草菌液体发酵培养基的优化研究发布时间：2022-12-06T07:45:36.054Z 来源：《福光技术》2022年23期作者：倪春红[导读] 冬虫夏草是我国青藏高原特有的名贵中药材，它与人参、鹿茸合称为我国中药宝库中的“三大宝”。
杭州中美华东制药江东有限公司浙江省杭州市 310000摘要：冬虫夏草是我国青藏高原特有的名贵中药材，它与人参、鹿茸合称为我国中药宝库中的“三大宝”。
据中药典籍记载：它有补虚损、益精髓，保肺益肾，止血化痰之功效。
用于久咳虚喘、劳嗽咯血、阳痿遗精、腰膝酸痛。
现代医学研究证明：它还有镇静、止血、降压、改善心肌缺血、抗血小板凝集、抗衰老、抗种瘤及双向调节人体免疫的功能”。
但是，天然冬虫夏草有其严格的寄生性及特殊的生长环境，产量低，价格昂贵。
为改变这一局面，可用冬虫夏草深层发酵的方法生产菌粉。
因发酵菌粉在化学成份、药理作用及临床效果上与天然冬虫夏草基本一致。
因此可作为代用品。
但目前的冬虫夏草菌粉生产多用蚕蛹粉培养基进行培养，产量低且生产成本高，难以获得理想效果。
关键词：冬虫夏草菌丝；液体培养；培养基；优化一、材料与方法1.1菌种实验用菌种是由青海省畜牧兽医科学院冬虫夏草研究室于2008年在青海省玉树州从野生冬虫夏草体内分离出的野生菌株，经分离纯化后获得，编号为YS一08～4（自编号），经中国科学院微生物研究所鉴定为冬虫夏草无性型——中国被毛孢（HirsutellasinensisLiu，Guo，YuetZeng.），菌种保藏于青海省畜牧兽医学院。
1.2培养基1.2.1斜面培养基牛肉水（1：2）50％，蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，葡萄糖3％，牛奶10％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.1％，琼脂1.5％，pH6.8。
1.2.2液体培养基各组分见表2，pH6.8。
1.3方法1.3.1种子液的制备将斜面菌种活化2.3次，取长势良好的斜面菌种刮取菌苔，用无菌水稀释制成菌悬液，备用。
浅谈冬虫夏草液体培养基的优化
壳，埋在土壤里 。到第二年春天 ，菌丝逐渐生长 ，到夏天 基本 长 出地 面 ，长 成 小 苗 ，幼虫 的躯 壳 与小 苗一 起 合称 为
冬虫 夏草 。
实验方法与步骤
冬 虫夏草培 养 方法
各 组实验 均 取 ２ ５ ｏ ｍ１的锥形 瓶 若干 ，编号 后 ，分 别加 入 １ ０ ０ ｍ］ 拟定 培养 基 ，于 ０ ． ８ ｋ ｇ ／ ｃ ｍ。蒸汽 灭菌 ２ ０ ａｉ ｒ ｎ ；用
ｃ ｍ２ 蒸汽 灭 菌 ２ ０ ａｉ ｒ ｎ ，用 于母 种活 化培 养 。 拟 定液体 培养 基
ＫＨ２ Ｐ Ｏ４ ０ ． ３ ％，Ｍｇ Ｓ Ｏ４ ０ ． １ ５ ％，酵母 粉 ０ ． ５ ％，豆粕 １ ． ０ ％，葡 萄糖 ２ ． ０ ％。 主要 仪 器及设 备
冬 虫 夏草 是 我 国传 统名 贵 的 珍稀 药 用植 物 ，是 中药 领 域 三 大补 药之 一 ， 很早 就 引起 重视 】 。由于生长 环境 特殊 ， 冬 虫夏草 的来源 以野 外采 集 为主 ，多年 来 由于 自然 环境 的 日 益 破 坏 ，野生 冬 虫 夏草 十分 稀 少 。虫 草 多糖 为冬 虫夏 草 活性物质中的主要成分，含量 比较高 。冬虫夏草的抗肿瘤 效 果 已引起 科研 工作 者 的关 注 ，作 为抗 肿瘤 药 物 ，冬 虫夏 草的 研究 开发 具有 良好 的产 业化 前景 Ｊ 。 冬 虫夏 草分 布在 我 国青 藏高 原 ３ ５ ０ ０ ｍ 以上 的高 原寒 区 冬 天 是 虫 态 ，夏 天 虫 产 ＿ 于 草 丛 的 花 叶上 ，随 落叶 于
推广技术
石 看 边
中 国 科 技 信 恩 ２ ０ ｛ ４ 年 第１ ２ 期・ Ｅ Ｈ Ｉ Ｎ Ａ ｓ ｃ ｌ Ｅ Ｎ Ｅ Ｅ Ａ Ｎ Ｄ Ｔ Ｅ Ｃ Ｈ Ｎ Ｏ Ｌ Ｏ Ｇ Ｙ Ｉ Ｎ Ｆ Ｏ Ｒ Ｍ Ａ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ Ｊ ｕ ｎ ． ２ ｏ １ ４
冬虫夏草菌人工培养研究进展
冬虫夏草菌人工培养研究进展黄宝菊;王忠;李菲;黄雪峰;郑方毅【摘要】Research progress in the isolation and purified culture,artificial solid culture and artificial liquid fermentation conditions of Ophiocordyceps sinensis in recent years were summarized,and the research tendency for artificial culture of Ophiocordyceps sinensis was investigated in this paper.%综述了近年来关于冬虫夏草菌的分离纯化培养、人工固体培养、人工液体发酵条件的研究进展，探讨了冬虫夏草菌人工栽培研究趋势。
【期刊名称】《福建农业科技》【年(卷),期】2015(000)012【总页数】4页(P34-37)【关键词】冬虫夏草菌;人工固体培养;人工液体发酵【作者】黄宝菊;王忠;李菲;黄雪峰;郑方毅【作者单位】安发福建生物科技有限公司 352100;安发福建生物科技有限公司352100;安发福建生物科技有限公司 352100;安发福建生物科技有限公司352100;安发福建生物科技有限公司 352100【正文语种】中文冬虫夏草是真菌界子囊菌纲肉座菌目麦角菌科冬虫夏草属的冬虫夏草菌，冬虫夏草为冬虫夏草属冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾幼虫上的具有成熟子囊壳的子座及蝙蝠蛾幼虫尸体的复合体［1］，是国家Ⅱ级保护物种［2］，其药性温和，老、少、病、弱、虚者皆宜，可以降低血液中的胆固醇和甘油三酯，提高对人体有利的高密度蛋白，减轻动脉粥样硬化。
冬虫夏草还具有直接抗病毒、调节中枢神经系统功能和调节性功能等作用。
入肺、肾二经，甘温不燥，能滋肺补精益气，具有补虚损、抗癌症、抗衰老，增强人体免疫功能的作用。
培养基成分对冬虫夏草菌生长的影响及其优化
既能满 足 市场 需 求又 能不 破 坏 野 生 虫草 资源 的有 效方 法 目前 , 对虫草的人工培养方法主要有 人工栽培和液体
人工栽培周期长 , 获得 的虫草产量低 , 深层培养2种方法
本研 究 首 先利 用
n P) a ( B 试 验设 计筛 选 出影响 虫草菌 生长 的
an d t e o P ti u h m m eom P o sitio n o f m ed iu m w a s d e te r m i e d w it n h h t e
st est a eent m et od a d C en t C om po sie D esi ( C D ) T he r s l show ed t glueose, K H Z O a d y eas ext act h ad t m ost si i ea t eep s h n er t n g C e ut s hat P n t r he n i g f n
a lle 唱e n le su b sta ee In m o d e ls o f p r ee ssed f o d s b y a n e ste d p C R n o o
o he f r t det t 一 of b t l t obuli t ees i baby f o s J J A g e ec on e a a ogl - c nr a n od i r F 侧 d 伪 em , 20 10, 58(3):166 一 1. 4 167
v e lo P m e nt o f a n
o P tim ize d E L IS A an d a sa m
P le P reP a r
冬虫夏草菌丝体发酵营养液对鸡肉品质的影响
（Qinghai Everest Cordyceps Sinensis Engineering Technology Research Co., Ltd., Xining 810000, China）
Abstract: To research the effects of active ingredient in zymotic fluid of Cordyceps sinensis mycelium on the meat quality in broiler, feeding experiments were carried out on broiler with the additive of zymotic fluid of cordyceps sinensis mycelium. In the experiment, Three hundred Broilers of similar batch hatching and body mass and six months old were randomly divided into two groups. Between them, the control group was fed with basal diet and the treatment group with improved diet (substituted 10% zymotic fluid of Cordyceps sinensis mycelium based on basal diet). In the experiment, pre-feeding period was seven days and the formal period was 30 days. At the end of the experimen, five broilers were randomly selected from each group and slaughtered to determine the meat quality. The results showed that the protein, flavor amino- acid, essential amino- acid, total amino- acid, Ca and P and unsaturated-fatty-acid contents in the muscle of the experimental group were significantly higher than the control group; The cholesterol content was significantly lower than that of the control group; VA, taurine, selenium contents were not significant the difference in selenium content.
(液体)人工冬虫夏草发酵培养基的优化研究_王化河
收稿日期:2004205221 3河南省医药学校参 考 文 献1 黎磊石,郑平,田劲,等1冬虫夏草防治肾毒性急性肾功能衰竭的实验研究1解放军医学杂志,1991,16(5):32312 潘晓勤,王晓燕,姜新蝤1肾小球系膜细胞培养及鉴定1南京大学学报,1995,15,222～22413 谈培毅,高蓉,高扬1凉山虫草和冬虫夏草化学成分比较1中草药,1985,16(5):414 M ullerW E ,Seibert G ,Beyer R ,et al.Effect of co rdycep s on nucleic acidm etabo li m in L 5178cells and on nucleic acid syn the sizing enzym e system s .Cancer R es ,1977,37:3824.5 王莜霞,吴兆龙1冬虫夏草对离体人肾小球系膜细胞增殖的影响1中国临床药学杂志,2001,10(1):24～2616 M iyazak i T ,O ikaw a N ,Yam ada H ,Studies onfangalpo lysaceharides.xx .galactom anan of co rdycep s sinersis .Chem Phar m Bull ,1977,25(12):33241 文章编号:100424337(2005)0320251202 中图分类号:S 56713+5 文献标识码:A・药学研究・人工冬虫夏草发酵培养基的优化研究王化河 李明奇3(河南大学药学院 开封475001)摘 要: 采用正交试验法对冬虫夏草子实体发酵培养基实施优化,使菌丝体干重收率达2%以上,化学主成分虫草酸含量不低于12%,腺苷含量不少于114%,且成本降低,发酵周期缩短。
关键词: 正交试验设计; 发酵培养基; 菌丝体干收率 天然冬虫夏草系名贵中草药,具有补肝益肾之功效。
冬虫夏草等药用真菌液体发酵研究进展
冬虫夏草等药用真菌液体发酵研究进展摘要：文章论述了药用真菌深层发酵研究进展，包括目前药用真菌深层发酵培养方法、药用真菌液体发酵产物主要用途、菌种的优化、发酵产物的分析测定。
目录1 药用真菌发酵培养方法2 药用真菌液体发酵产物主要用途3 菌种的优化4 发酵产物的分析测定5 总结关键词：药用真菌液体发酵随着生活水平及科技水平的提高和市场对许多药用真菌产品需求的增大，传统的药用真菌栽培方式已不能满足市场对药用真菌产品的需求，液体发酵技术在药用苗上的应用便应运而生。
液体发酵技术是在抗生素工业发展起来后才运用到药用真菌发酵中的。
其优点是可以进行工业化连续生产、规模大、产量高、发酵周期短、生产效率高。
药用真菌在液体发酵过程中，除菌丝或孢子会大量增殖外，还会在发酵液中产生多糖、多肽、生物碱、萜类化合物、甾醇、酶、核酸、氨基酸、维生素、植物激素及具有抗生素作用的各种化合物等多种具有生理活性的物质。
这些物质分别对心血管、肝脏、神经系统、肾脏、性器官等人体器官具有防病治病的作用。
并有抗癌、抗炎、抗菌、抗衰老、抗溃疡等功效。
在液体发酵领域内，研究人员正在试用不同的方法来实现改进发酵过程的条件，促进发酵过程朝向提高目的产物的方向进行，提高产物品质，降低发酵成本，使投入产出比达到最小的目标。
1 药用真菌发酵培养方法药用真菌液体发酵生产工艺流程沿用了传统的发酵生产工艺，即试管斜面菌种→一级摇瓶种→二级种→三级种→发酵罐。
有关培养基配方方面的研究包括碳源、氮源碳氮比、pH值、无机盐、微量元素、维生素、生长因子、增粘剂等；有关发酵过程中参数控制的研究包括接种量、温度、搅拌速度、空气流量、糖含量、pH值、纯度、活力、菌丝形状、发酵罐中菌丝体个数和重量等。
在这些方面，人们对不同药用真菌的深层发酵进行了研究。
1.1 灵芝改变灵芝液体发酵条件，结果表明其最适温度、摇瓶装量、转速、培养初始pH分别为25℃、100～120 ml／500 ml三角瓶、120～150 rpm、4.5～5.0，适宜的碳、氮源分别是玉米粉、黄豆饼粉，最适浓度分别为3% 、2.5%。
冬虫夏草发酵培养基的优化
Ｍｇ Ｓ Ｏ ４ ・ ７ Ｈ２ Ｏ １ ． ５ ｇ ／ Ｌ ａ ｎ ｄ ｐ ｏ ｔ ａ ｔ ｏ ２ ０ ０ ｇ ｅ Ｌ ． Ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｕ ｍ ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ， ｔ ｈ ｅ ｍａ ｘ ｉ ｍｕ ｍ ｂ ｉ ｏ ｍａ ｓ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｍａ ｘ ｉ ｍｕ ｍ ｙ ｉ ｅ ｌ ｄ ｏ ｆ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａ ｒ ｐ ｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｗ ｅ ｒ ｅ ２ ４ ． ９ ９ ｇ ／ Ｌ ａ ｎ ｄ ２ ． ８ ０ ｇ ／ Ｌ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｓ ｕ ｂ ｍｅ ｒ ｇ ｅ ｄ ｃ ｕ ｌ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ
３ ． 瑞奇外科器械 （ 中国） 有 限公司 ， 天津 ３ ０ ０ ４ ５ ７ ）
摘 要： 在摇瓶液体培养条件 下， 优 化冬 虫夏草发酵培养基 ， 采 用单 因素试验 法， 研 究 了不 同培养基 成分对冬 虫夏草
细胞 生长和胞外 多糖 生产 的影响 。 实验结果表明 ， 冬 虫夏草液体培养 的最优培养基 为： 葡萄糖 ３ ０ ｇ ／ Ｌ 、 蛋 白胨 １ ５ ｇ ｅ Ｌ 、 Ｋ Ｈ ２ Ｐ Ｏ ３ ． ０ ｇ ／ Ｌ 、 Ｍｇ Ｓ Ｏ ４ ＂ ７ Ｈ ２ ０ １ ． ５ ｇ ／ Ｌ和土豆 ２ ０ ０ ｇ ／ Ｌ 。 采用最优 发酵培养基 ， 在摇瓶培养条件 下 ， 获得 的最大生物量和
３ ． Ｒｅ ａ ｃ ｈ Ｓ ｕ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ， Ｉ ｎ ７ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｂｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ａｔ ｔ ｈ ｅ ｓ ｕ ｂ ｍｅ ｒ ｇ ｅ ｄ ｃ ｕ ｌ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｈ ａ ｋ ｅ ｌａ ｆ ｓ ｋ， ｔ ｏ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ｆ ｏ ｒ
冬虫夏草液体发酵产多糖条件优化及饮料研制
Ｔｍ值为１２３℃）和相变热焓值（纯ＴＧａｓｅ的△Ｈ为１７．９Ｊ／ｇ），同时导致失重率降低（纯酶失重率为３５．０％）。
同时海藻糖的存在大大延长了ＴＧａｓｅ热变性开始的时间，即从对照的１５８ｓ延长至７６０ｓ。
从２．２和２．３的结果，对于葡萄糖和蔗糖而言则未表现出上述影响趋势。
当然，糖的加入对酶蛋白稳定性的影响和作用因素是多方面的，如糖分子的水合作用可以在生物分子的失水部位以羟基和生物大分子形成氢键，取代水的作用［１０］，因此糖分子羟基的数目和空间伸展会对酶蛋白在受热情况下维持其空间构象和活性中心产生不同程度的影响。
加入糖的蛋白质溶液体系去折叠的自由能增加，蛋白质的天然构象会保持一定程度上的稳定［１１］，因此，葡萄糖和蔗糖在一定程度上也表现出对ＴＧａｓｅ的弱保护作用，不过说明该方面的保护机理仍待进一步深入研究。
参考文献：［１］郑美英， 陈坚， 陈世伦． 谷氨酰胺转胺酶－理化性质、生产方法及其在食品工业中的应用［Ｊ］． 生物工程进展， ２００１， ２１（１）： ３３－３７．［２］ＤＵＲＡＮ Ｒ， ＪＵＮＱＵＡ Ｍ， ＳＣＨＭＩＴＴＥＲ Ｊ Ｍ， ｅｔ ａｌ． Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ ｆｒｏｍＳｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｍ ＣＢＳ ６８３ ６８［Ｊ］． Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ， １９９８， ８０：３１３－３１９．［３］常忠义， 江波， 王璋． 微生物谷氨酰胺转胺酶的应用进展［Ｊ］． 食品科学， ２０００， ２１（９）： ６－８．［４］王璋， 许时婴， 汤坚． 食品化学［Ｍ］． 北京： 中国轻工业出版社， １９９９：４８－６９．［５］ＧＲＯＳＳＯＷＩＣＺ Ｎ， ＷＡＩＮＦＡＮ Ｅ， ＢＯＲＥＫ Ｅ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｅｎｚｙｏｎａｔｉｃｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ ａｃｉｄｓ ｆｒｏｍ ｇｌｕｔａｍｉｎｅ ａｎｄ ａｓｐａｒａｇｉｎｅ［Ｊ］． ＢｉｏｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ， １９５０， ７（１）： １１１－１２５［６］刘云娜． 鸡卵清白蛋白的示差扫描量热法研究［Ｊ］． 现代科学仪器，２０００（４）： ５９－６０．［７］荣绍丰， 张海平， 毛忠贵． 合成海藻糖的新型非磷酸化酶［Ｊ］． 生物工程进展， ２００１， ２１（２）： ５４－５７．［８］李余增． 热分析［Ｍ］． 北京： 清华大学出版社， １９８７： ２２０－２９２．［９］易薇， 胡一桥． 差式扫描量热法在蛋白质热变性研究中的应用［Ｊ］． 中国药学杂志， ２００４， ３９（６）： ４０１－４０３．［１０］ＭＯＴＯＫＩ Ｍ， ＳＥＧＵＲＯ Ｋ． Ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｕｓｅ ｆｏｒ ｆｏｏｄ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ［Ｊ］． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １９９８（９）： ２０４－２１０．［１１］曲红， 焦克芳． 蛋白质与糖的相互作用［Ｊ］． 国外医学： 药学分册， １９９９，２６： ９５－９８．收稿日期：２００５－１１－２９基金项目：河南科技学院重点科研基金资助项目作者简介：武忠伟（１９７９－），男，硕士，主要从事应用微生物学研究。
冬虫夏草菌种的制备及液体培养基的优化研究
冬虫夏草菌种的制备及液体培养基的优化研究
王祖华;张柯;李永程
【期刊名称】《洛阳理工学院学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2010(020)004
【摘要】通过改变传统的冬虫夏草菌种制备的方法,利用其菌索来制备,并对其菌丝体的液体培养基的配方进行优化.结果表明,冬虫夏草生长最适宜液体培养基的配方为葡萄糖7.5%、蔗糖7.5%、蛋白胨0.12%、酵母粉0.375%、KH2PO40.15%、MgSO4·7H2O0.075%、VB10.015%、pH自然,20℃条件下培养菌丝体192 h,菌丝的量达到4.242g/L,并且在以后的二、三级菌种培养过程中,菌丝的性状表现优良,生长速度较快.
【总页数】3页(P10-12)
【作者】王祖华;张柯;李永程
【作者单位】洛阳理工学院,环境工程与化学系,河南,洛阳,471023;洛阳理工学院,环境工程与化学系,河南,洛阳,471023;洛阳理工学院,环境工程与化学系,河南,洛
阳,471023
【正文语种】中文
【中图分类】S567.3+5
【相关文献】
1.冬虫夏草与蛹虫草融合子菌丝体液体培养基筛选 [J], 曲鸿雁;郭成金
2.冬虫夏草菌丝体液体培养基的优化 [J], 赵润;郭成金
3.北冬虫夏草液体菌种制备工艺研究 [J], 方华舟;李淑玲;左雪枝;安冬梅;路彩云;李文君;姚书兵
4.浅谈冬虫夏草液体培养基的优化 [J], 石岩;边栋
5.纸桥法液体培养基替代琼脂固体培养基用于食用菌菌种培养的初步探索 [J], 栗志
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收稿日期:2004205221 3河南省医药学校
参 考 文 献
1 黎磊石,郑平,田劲,等1冬虫夏草防治肾毒性急性肾功能衰竭的实
验研究1解放军医学杂志,1991,16(5):3231
2 潘晓勤,王晓燕,姜新蝤1肾小球系膜细胞培养及鉴定1南京大学
学报,1995,15,222～2241
3 谈培毅,高蓉,高扬1凉山虫草和冬虫夏草化学成分比较1中草药,
1985,16(5):41
4 M ullerW E ,Seibert G ,Beyer R ,et al
.Effect of co rdycep s on nucleic acidm etabo li m in L 5178cells and on nucleic acid syn the sizing enzym e system s .Cancer R es ,1977,37:3824.
5 王莜霞,吴兆龙1冬虫夏草对离体人肾小球系膜细胞增殖的影响1
中国临床药学杂志,2001,10(1):24～261
6 M iyazak i T ,O ikaw a N ,Yam ada H ,Studies on
fangal
po lysaceharides
.xx .galactom anan of co rdycep s sinersis .Chem Phar m Bull ,1977,25(12):33241
文章编号:100424337(2005)0320251202 中图分类号:S 56713+5 文献标识码:A
・药学研究・
人工冬虫夏草发酵培养基的优化研究
王化河 李明奇3
(河南大学药学院 开封475001)
摘 要: 采用正交试验法对冬虫夏草子实体发酵培养基实施优化,使菌丝体干重收率达2%以上,化学主成分虫草酸含量不低于12%,腺苷含量不少于114%,且成本降低,发酵周期缩短。
关键词: 正交试验设计; 发酵培养基; 菌丝体干收率
天然冬虫夏草系名贵中草药,具有补肝益肾之功效。
对支气管炎、肾炎及高血脂症等疾病也具有明显临床疗效。
近年来,人们对人工驯化冬虫夏草开展了应用开发研究。
我们所用冬虫夏草菌种,是从青海天然冬虫夏草子实体中经组织分离而获得,属蝙蝠蛾拟青霉变株。
人工驯化后经深层发酵,制得的冬虫夏草菌丝体的化学成分与药理作用类似天然,可替代天然冬虫夏草入药。
研究中发现,深层发酵培养基的配比,直接影响所得菌丝体的收率和化学成分及理化指标。
从发挥菌种生产能力和经济角度及药理类似程度考虑,经反复多次摸索,拟用正交试验法综合考察和优化[1]。
1 因素水平
因素水平见表1。
原借鉴培养基配方中碳源用葡萄糖
315%,但菌丝生长一般且主要化学成分不大理想且成本高。
蔗糖价廉且含有大量多种微量元素和维生素,欲以蔗糖代替部分葡萄糖,因此,安排6个水平详加考察。
酵母粉、鱼粉、石膏粉及K 2H PO 4,希望能在新配方中去掉一、两个,以简化培养基。
表1 因素水平表
因素蔗糖+葡萄糖(%)蛋白胨(%)酵母粉(%)鱼粉(%)黄豆饼粉(%)石膏粉(%)K 2HPO 4
(%)
水平1
0+41000.100水平20+30.50.50.100.10.1水平30+20
0.1
0.3
0.5
0.05
0.05
水平40.5+1水平51+0.5水平6
1.5+0
2 利用正交表确定试验方案
用L 18(61×36)安排试验。
试验方案、试验结果与计算结果列于表2。
表2中每个试验号代表一种发酵培养基配方。
各配方分别配制600m l ,分3瓶装,每瓶200m l ,湿热蒸汽120℃灭菌后,冷却至30℃即可在无菌操作间接种,接种量控制在5%以上,然后置长征ZP 296摇瓶机上,180rp m ,28℃湿培养5d ～8d ,每瓶取其100m l 发酵液,离心甩干后70℃干燥后称重。
菌丝体干重收率为该配方下3瓶之平均值。
・
152・数理医药学杂志
2005年第18卷第3期
表2 实验结果与计算结果
试验号
蔗糖+葡萄糖
(%)蛋白胨
(%)酵母粉
(%)鱼粉
(%)黄豆饼粉
(%)石膏粉
(%)K 2HPO 4(%)菌丝体干重
1
234567g 100m l 11(0%+4%)
1(1%)
3(0.1%)2(0.1%)2(0)1(0)2(0.1%)1.3212(0.5%)1(0)1(0)1(0.1%)2(0.1%)1(0)1.2313(0)2(0.5%)
3(0.3%)
3(0.5%)
3(0.05%)
3(0.05%)
242(0%+3%)
1212311.852*******.7623123221.373(0%+2%)
1131321.6832223111.2933312231.1104(0.5%+1%)
1113131.61142232221.81243321311.0135(1%+0.5%)
1333211.81452122331.61553211121.4166(1.6%+0%)
1221231.31762313321.218
6
3132111.0 =水平1菌丝体干重之和4.5
9.48.38.28.38.38.0T =25.9
=水平2菌丝体干重之和4.88.79.58.67.78.48.6 =水平3菌丝体干重之和3.97.8
8.1
9.1
9.9
9.2
9.3
=水平4菌丝体干重之和4.4 =水平4菌丝体干重之和4.8 =水平4菌丝体干重之和3.5极差R =最大数-最小数1.3
1.61.40.9
2.20.91.3极差修正数1.3×1.6=2.08
1.6
1.4
0.9
2.2
0.9
1.3
3 试验结果分析
由修正极差[2]
可看出,蔗糖+葡萄糖、黄豆饼粉、蛋白胨、酵母粉、K 2H PO 4、
鱼粉及石膏粉其用量重要程度依次排列。
从表2还可看出,第3号配方菌丝体干重收率为2%,但配方中葡萄糖加4%,且鱼粉用量大,据经验知培养基成本高且结果重现性差,石膏粉的加入使菌丝体虫草酸含量降低。
由试验结果可知,鱼粉及石膏粉均为次要因素。
因此,经趋势图分析(为节省篇幅略去分析过程)对配方[3]加以展望和调整得优化配方:
蔗糖+葡萄糖蛋白胨酵母粉鱼粉
黄豆饼粉K 2H PO 4
1%+0.5
1%
0.5%
0.1%
0.5%
0.05%
按该配方进行多次放大试验,并采用孢子接种,同步发酵技术,菌丝生长旺盛,所得冬虫夏草菌丝体干重收率达2%以上,经分析测定虫草酸可达12%,腺苷含量达114%以上,其它理化指标均达入药标准。
同时发酵周期也由原来的5d ～8d ,缩短为4d ～5d ,达到国内先进水平。
该配方的优选为冬虫夏草的工业大生产工艺提供了可靠的科学依据
参 考 文 献
1 中国现场统计研究会三次设计组编著1正交法与三次设计1科学
出版社,19871
2 张建方1混合位级试验设计的极差分析方法1数理统计与管理,
1998,29(6)1
3 沙静姝,毛洪奎1金水宝胶囊(发酵虫草菌粉)1中国药学杂志,
1994,17(4)1
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252・Journal of M athem aticalM edicine V o l
.18 NO .3 2005。