液体菌种的制作及使用方法
(完整)食用菌液体菌种的制作
食用菌液体菌种的制作
2009—5-5 8：23:26
在无菌的条件下把菌种投放到培养基里。
安装通气管后用输氧机给培养基输入氧气。
把培养基放置在摇床机上进行振荡培养.
食用菌液体菌种具有生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、发酵快、适宜于工厂化生产等优点。
食用菌液体菌种的生产方式一般可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧)法、发酵罐法。
据省农科院食用菌站工作人员介绍，摇瓶机法不仅接种简单，管理方便，而且生产量根据机器的设定而不同，投资20 00～3000元即可。
配制液体培养基先把马铃薯煮到熟而不烂时提取上清液，然后配制3％葡萄糖、1%玉米粉、0。
05%硫酸镁、0。
1％磷酸二氢钾，最后将马铃薯上清液和上述溶液及水混合即可。
液体培养基适用于多种食用菌菌种的培养.
摇瓶振荡培养液体培养基配制好后,装入容量为500毫升的三角烧瓶中，每瓶装入100毫升，并加入1～15粒小玻璃珠，瓶口用棉塞、牛皮纸密封,在1.5千克/平方厘米压强下灭菌30分钟。
然后投入一块约2平方厘米的斜面菌种，于2 3℃～25℃下静置培养24小时。
待菌丝萌发时再放置在往复式摇床上振荡培养，振荡频率为每分钟80～100次，振幅为6～10厘米。
摇床室的温度控制在24℃～2 5℃,培养时间因菌类不同而异，一般是5天左右。
将振荡好的培养基倒入大容器里，经过扩容后，在无菌条件下安装通气管，用输氧机通入适量氧气后培养48小
时.培养结束的标准:培养液清澈透明,其中悬浮着大量小菌丝球，并伴有各种菇类特有的香味。
培养好的液体菌种应放入培养箱中保存。
北虫草液体菌种制作方法
北虫草液体菌种制作方法北虫草的菌种怎样制作培育？北虫草是一种富含虫草素、氧基酸等营养物质的虫、菌结合的食用菌类，因为营养物质种类多、含量高，是人们生活中的上等滋补佳品，在市场上销售情况一直较佳，人工种植前景看好。
而今天给大家介绍一下关于北虫草液体菌种制作方法，如下：一、培养基配方配方：玉米粉1%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、磷酸二氢钾0.1%、水95.35%、硫酸镁0.05%、维生素B110mg、PH值调至6.5左右。
二、制作培养方法1.制作一级摇瓶种：将这些原料溶于水后装在500毫升三角瓶中，每个三角瓶装量200毫升，放入玻璃珠3粒左右，塞紧棉塞，然后用4层纱布罩住棉塞、瓶口扎紧，放在高压灭菌锅内进行消毒，待压力表上升至0.5kg/cm2压力时，即放净冷气待指针降至0后，再关掉放气阀门，待温度表指针逐渐上升至1.1kg/cm2后就开始保温30分钟后，慢慢下降指针至0，然后开盖冷却至常温，再移入接种箱或超净工作台等待接种。
2.接种方法：先把灭菌后的北虫草液体菌种培养基移放在超净工作台上，并把北虫草母种和接种勾、酒精灯、酒精棉球等接种物品也放在超净工作台上，工作服挂在接种室消毒。
然后在接种室点燃烟雾剂（用臭氧消毒器更好），立即关闭所有门窗密闭消毒同时打开紫外线灯。
待40min后，将烟雾放净，关闭紫外线灯，接种人员就可进行接种。
接种的方法是穿好工作服，打开超净工作台风机，点燃酒精灯，左手拿着母种试管对准火焰口，右手拿着铁勾在酒精灯火焰消毒3-5秒种后立即伸进母种试管内把菌种分成5-7段，再用左手迅速将纱布瓶盖打开，右手立即把一段菌块勾入瓶内（每瓶接入5-6片0.5平方厘米大小菌种）速将瓶盖按原样盖紧。
当北虫草菌种接好后，移入22-24℃恒温培养室，摇床震荡发菌培养。
摇床转速140r/min，经过4-6天的发菌培养，经检查北虫草菌液的颜色开始清亮、菌球密集，瓶口闻有很浓的北虫草气味，可判断为菌种优良。
怎样生产和使用平菇液体菌种？
怎样生产和使用平菇液体菌种？我国最早于20世纪60年代（陈幸美等，1963)试用深层培养（液体培养）平菇、香菇、草菇等15种食用菌的菌丝体，并取得成功。
其后，上海师范大学杨庆尧教授等进一步将其完善、定型，并在平菇、香菇等食用菌栽培上推广利用。
下面介绍一种浅层培养平菇液体菌种的工艺。
(1)准备菌种平菇母种若干支。
（2)配制培养基配方一：蛋白陈2.0克，酵母膏2.0克，硫酸镁0．5克，磷酸二氢钾。
．5克，磷酸氢二钾1.0克，葡萄糖20克，加清水至1000毫升。
配方二：蛋白豚2.0克，硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾0.5克，硫酸钙0.1克，维生素B，10微克，加清水至1000毫升。
配方三：玉米粉60克，维生素B：10微克。
先将玉米粉加人适量开水中搅成玉米糊，然后加清水至1000毫升，加人维生素Bi。
将配制好的任何一种培养基分装于250毫升三角瓶中，每瓶50~100毫升，加棉塞或硅橡胶塞后置于121℃、0.11兆帕的条件下灭菌20分钟，冷却后接种。
(3)接种培养按无菌操作要求，每支母种接种4~6瓶。
接种后置于恒温摇床上，在25℃、125转／分钟条件下培养4~6天，合格者即为一级种子液。
(4)质量检查摇培过程中或摇培结束后，均应进行质量检杏．若培养液变混浊、有酸臭味，表示已被细菌污染；若培养液有咐味，菌丝球异常，表示已被霉菌污染。
将污染的培养物重新灭菌后倒掉，以免污染环境。
将具有平菇香味，菌丝球颜色白、球形正常的液体菌种镜检后立即应用于下一步生产，或置4℃条件下短期贮存。
液体菌种使用方法液体菌种（一级种子液）的用途有如下三种。
①用来扩大生产二级种子液，用量为5％（体积比），培养基配方及生产方法同上。
②用来扩大生产原种或栽培种（普通棉籽壳培养基或木屑培养基），每瓶（袋）用种量为5~10毫升。
可用刻度吸管（事先灭菌备用）或5毫升进样器作为接种工具，转接液体菌种。
③用作栽培种，每袋用种量为15~30毫升。
没有恒温摇床的单位，每天用人工振荡4~6次，每次30秒左右，也可收到同样的效果。
液体菌种培训教材(四)液体菌种的制作过程及方法
液体菌种培训教材(节选四)2010年4月10日三、液体菌种的制作过程及方法（一）试管种的生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。
所以要自己会做试管种。
试管种的制作其实很简单，在我们要用种的前三个月，到市场上去看哪个菇符合要求，就买回来（也可以用自己保存的试管种均可）。
在接种箱内进行常规气雾（最好是高锰酸钾和甲醛）消毒，30分钟后，开始分离。
分离时先将用具消毒，然后用手把菇体分开，用镊子夹一小块菇肉（不同的菇取种位置不同），放到试管里。
塞上棉塞就行了。
这样的成功率一般在80%以上。
在菌丝生长阶段，要经常观察菌丝的生长情况。
对菌丝生长不整齐的，有污染的，全部淘汰。
只留下没什么问题的，长满试管后，再取特定部位进行转管（见实操）。
菌丝长到**cm时，从菌丝生长的尖端提取一小块，一般地认为，取****大小就可以了，不过从试验上看，提得**效果越好。
平菇一般提二次就可以了，提到五次，基本上与脱毒菌种效果差不多。
别的品种要多些，最多不超过五次，都可以达到提纯的目的。
（二）三角瓶专用母种生产：专用母种分固体和液体两种。
从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。
整个过程要4-7天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。
液体菌种专用母种的配方就是用PDA加富配方去掉琼脂。
用三角瓶盛装，在高压锅里121℃保持30分钟就行了。
待三角瓶的温度降到30℃以下时，在超净工作台或接种箱内进行接种。
马上就可以进行搅拌或摇瓶了。
固体种生产时间要长些，保存的时间也长，而且方便运输。
固体专用母种一般污染要严重一些，有的人污染率要达到20-30左右。
固体专用母种我们现在一般不用，污染率太高，而且不好发现，最糟糕的是容易堵枪。
配方是把木屑过20-40目的筛，用去掉琼脂的PDA配方拌料，在121℃高压下灭菌2小时，待温度下降到30度以下时，在超净工作台或接种箱内进行常规接种。
一般20多天可以长好。
具有运输和贮存方便等特点。
〖医学〗食用菌液体菌种的制作
食用菌母种（1支/组），马铃薯，葡萄糖，磷酸二氢钾， 硫酸镁，蛋白胨，氯化钠
5、液体菌种质量检查：
（1）培养结束，培养液澄澈透明，悬浮大量菌丝球，并 伴有各种菇类特有的香味，因菇种的不同，培养液的色泽有 一定的差异。平菇、金针菇的培养液为浅黄色；香菇、猴头 菇为黄棕色，清澈透明；木耳为青褐色，粘稠，又香甜味。
（2）菌液的质量检查： a 纯度检查： 镜检或平板培养，无细菌、霉菌； b 活力检测： 菌球边缘菌丝分支细密，结晶紫染色着
色深，菌丝细胞原生质尚未出现凝集现象和空胞；菌球颜色 较浅，变深说明开始或已经老化。老化的液体菌种会自溶成 粘糊粥状物；
c 菌球大小：80%的菌球直径应小于2mm，数量在10001500（500个以上）个/mL，大小均匀，界线分明，不易沉降；
液体菌种使用的培养基根据不同菌类营养要求的特点而 设计，其主要成分为碳源、氮源、矿质元素与维生素。碳源 常用蔗糖和葡萄糖；氮源主要是蛋白胨、酵母粉等；无机盐 常添加硫酸镁、磷酸二氢钾等；维生素多用维生素B1。
液体培养基的粘度与菌丝球的形成关系密切。粘度小， 形成的菌丝球大，数量少；粘度大，形成的菌丝球小，数量 多。在生产中常加入少量的琼脂或玉米粉调节粘度。
d 出菇能力：对于平菇、金针菇、香菇、银耳、木耳等 一些担子菌纲的菌类来说，处于旺盛生长时期的菌丝体会出 现大量锁状联合。
五 思考题
1 制作液体菌种前应注意哪些问题？ 2 从哪几个方面检测液体菌种的好坏？如何检测？ 3 液体菌种有哪些优缺点？它对食用菌栽培技术的应用及 发展有何影响？
草菇液体菌种栽培技术
草菇液体菌种栽培技术一、引言草菇是一种常见的食用菌，其口感鲜美，营养丰富，深受人们喜爱。
液体菌种栽培技术是一种新型的草菇栽培方法，具有生产效率高、周期短、成本低等优点。
本文将详细介绍草菇液体菌种栽培技术。
二、液体菌种制备1. 菌种选择选择高效率的草菇品系作为液体菌种的母本。
常用的品系有松茸型、平顶型和鸡腿型等。
2. 菌丝接种将选好的母本放入无菌环境中进行接种。
可以采取划线法或直接注射法进行接种。
3. 菌丝培养将接种好的母本放入含有适量碳源、氮源和矿物质盐等营养物质的基础培养液中进行培养。
常用的基础培养液有PD（Potato Dextrose）和PDA（Potato Dextrose Agar）等。
4. 液体发酵将培养好的草菇菌丝转移到含有适量碳源、氮源和矿物质盐等营养物质的液体培养基中进行发酵。
常用的液体培养基有PDB（Potato Dextrose Broth）和Czapek-Dox Broth等。
三、液体菌种栽培技术1. 菌种接种将培养好的草菇液体菌种接种到含有适量碳源、氮源和矿物质盐等营养物质的草菇栽培基质中。
常用的草菇栽培基质有稻草、秸秆、木屑等。
2. 保湿在接种后，要及时进行保湿处理，使基质保持适宜的湿度。
可以采用喷水或覆盖湿毛巾等方法进行保湿。
3. 通风换气草菇需要充足的氧气才能生长繁殖，因此要及时进行通风换气。
可以采用开窗通风或安装通风设备等方法。
4. 控制温度草菇生长适宜温度为18℃-25℃，因此要控制好环境温度。
可以采用加热或降温设备等方法进行控制。
5. 控制光照草菇不需要光照，因此要避免阳光直射或强光照射。
可以选择适宜的栽培场所进行栽培。
四、液体菌种栽培技术的优点和应用1. 优点液体菌种栽培技术具有生产效率高、周期短、成本低等优点。
2. 应用液体菌种栽培技术广泛应用于草菇生产中，可以大幅度提高草菇的产量和质量。
五、总结草菇液体菌种栽培技术是一种新型的草菇栽培方法，具有生产效率高、周期短、成本低等优点。
秀珍菇液体菌种制备技术
秀珍菇液体菌种制备技术一、工艺流程母种→原种（液体摇瓶）→生产种（罐体发酵）→料棒接种二、母种的制备1、母种培养基配方马铃薯（去皮）20％，葡萄糖2％，琼脂2％，水1000毫升，pH值5.5～6。
2、母种的制备及注意事项按配方准确称取原料，加热煮沸最后定容，分装试管，装入量约为试管长度的1／4～1／5，塞好棉塞。
使用高压灭菌锅灭菌，在温度121℃、压力0.11Mpa下灭菌半小时，注意一定要放净高压灭菌锅内的冷空气。
灭菌后，待培养基温度下降至60℃时，将成把的试管摆成斜面。
注意，不要让培养基粘湿棉塞。
要严格按照无菌操作规程进行接种，然后置于恒温箱中25℃左右恒温培养10～15天。
三、原种的制备1、原种培养基配方马铃薯（去皮）２０％、麦麸３％、葡萄糖２％、蛋白胨３‰、磷酸二氢钾２‰、硫酸镁１‰。
2、原种的制备及注意事项马铃薯去皮切片后与麦麸一起煮沸20分钟，过滤定容，加入其它原料，全部溶解后装入三角瓶。
三角瓶在使用前除清洗之外，还要进行空灭，灭菌方法与常规灭菌试管培养基相同。
每个瓶中放入5～10粒玻璃球（直径0.5cm），用棉塞塞紧瓶口，再用牛皮纸包裹后扎紧。
使用高压灭菌锅灭菌，在温度121℃、压力0.11Mpa下灭菌45分钟。
冷却后进行无菌接种，然后置于25℃恒温培养箱中静置培养72小时。
摇床培养时，温度25℃，转速140转/分钟，培养时间72～96小时。
四、生产种的制备1、生产种培养基配方马铃薯（去皮）２０％、麦麸２％、蛋白胨３‰、葡萄糖２％、磷酸二氢钾１‰、硫酸镁0.5‰、石膏0.5‰、琼脂２～３ｇ、酵母膏0.5‰、消泡剂１‰。
2、生产种的制备（1）清洗罐体发酵罐在每次使用后都必须进行彻底的清洗，去除罐内残存的菌球、菌块料液等杂物，保证罐内洁净。
（2）配制原料按照生产种培养基配方准确称取各种原料。
马铃薯去皮切片后与麦麸一起煮沸20分钟，过滤定容，再加入其它原料及消泡剂。
（3）灭菌将盛有培养基质的发酵罐推进灭菌仓，通入蒸汽进行灭菌，控制温度在121℃左右、压力为0.11Mpa，灭菌1个小时。
水桶自制液体菌种的方法
水桶自制液体菌种的方法
制作液体菌种有几种方法，以下是其中一种常用的方法：
材料：
1. 容器：可以使用玻璃瓶、腐蚀性物质不会反应的塑料瓶等。
2. 培养基：可以购买已配好的培养基，也可以自制。
3. 菌种：可以使用已购买的菌种，也可以使用自己提取的菌种。
步骤：
1. 准备好容器，清洗消毒后晾干。
2. 配制培养基，如果自己配制，可选择适当的基质（如蔗糖、琼脂等）和必需的营养物质（如氮源、磷源等），按照比例加入适量的水中，搅拌均匀。
3. 把配制好的培养基倒入容器中，留下一定的空间给菌种生长。
4. 添加菌种：如果有已购买的菌种，按照说明书上的指导添加适量的菌种到培养基中；如果使用自己提取的菌种，可以从分离出的单一菌落中取一小块放入培养基中。
5. 盖紧容器盖，避免外界的污染。
6. 将培养基置于适宜的温度和光照条件下，有利于菌种生长（不同的菌种有不同的适宜生长条件）。
7. 定期观察培养基中的菌落生长情况，如果生长良好，可以继续培养；如果发现污染或者其他异常，需要进行相应的处理（如重新进行培养）。
8. 根据需要，可以用培养基菌种进行插播或者扩大规模培养。
需要注意的是，制作液体菌种需要一定的实验室技术和sterile(无菌)操作。
不熟悉实验室操作的人士最好在专业人士的指导下进行。
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液体菌种的制作及使用方法随着食用菌生产的发展,食用菌制种方法在传统固体制作的基础上在不断的改进和提高,其中液体菌种的制作便是其中之一。
液体发酵技术是现代生物技术之一，起源于美国。
它是指在生化反应器中，模仿自然界将食药用菌在生育过程中所必需的糖类、有机和无机含有氮素的化合物、无机盐等一些微量元素以及其它营养物质溶解在水中作为培养基，灭菌后接入菌种，通入无菌空气并加以搅拌，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，进行菌丝大量培养繁殖的过程。
工业化大规模的发酵培养即为发酵生产，亦称深层培养或沉没培养。
液体菌种的制作及使用方法液体菌种由于具有生产规模化、控制自动化、生长无菌化、发菌高速化的生产应用优势,为食用菌产业化的发展提供了良好的种源条件,是食用菌产业化发展的必然方向,已被业内人士所看好。
液体菌种是用液体培养基培养而成的菌种。
近年来，国内外正积极研究液体菌种的培养与利用。
与固体菌种相比，它具有菌种生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、接于固体菌料发酵快、适宜于工厂化生产等优点，因而受到了广大栽培者的欢迎。
目前我国已能进行深层发酵的食用菌有：香菇、平菇、凤尾菇、美味侧耳、鲍鱼菇、金针菇、黑木耳、猴头、草菇、蜜环菌、茯苓、滑菇和冬虫夏草等。
一、液体菌种的培养方法常见的有采用摇床来生产的摇瓶培养法和采用发酵罐来生产的深层培养法。
若少量生产，可以用摇瓶培养法。
深层培养需要一整套工业发酵设备，如锅炉、空气压缩机、空气净化系统、发酵罐等，故投资大，只适用于工厂化的大规模生产。
而摇瓶培养投资少，设备技术简单，适合一般菌种厂生产使用。
本节主要介绍摇瓶培养的技术方法。
1、食用菌液体发酵的培养基根据培养基中组成的不同，可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的组成均为天然有机物。
合成培养基则是采用—些已知化学成分的营养物质作培养基。
在生产上，还根据工艺将培养基分为孢子培养基、种子培养基及发酵培养基。
但无论如何划分，每一种培养基的组成中都离不开碳、氮、无机盐、微量元素、维生素和生长素等。
1. 1、碳、氮比(C/N)碳、氮比指碳源及氮源在培养基中的含量比。
构成菌丝细胞的碳、氮比通常是：8~12:1。
由于菌丝生长过程中，一般需50%的碳源作为能量供给菌丝呼吸，另50%的碳源组成菌体细胞。
因此培养基中理想碳、氮比的理论值为16~24:1。
在液体培养中以菌丝增殖为目的的培养，通常碳、氮比以20:1为宜。
虽然食用真菌的液体培养一般要求较高的碳与氮比，即C:N＝20:1左右生长较好，但许多菌种也能在较宽的碳、氮比范围内生长。
不同的菌种所要求合适的碳、氮比，可通过实验求得。
1. 2、无机盐与微量元素许多无机盐及微量元素对菌种的生理过程的影响与其浓度有关。
不同的菌种，对无机盐及微量元素要求的最适浓度也不同。
1. 2.1．磷磷是细胞中核酸、核蛋白等重要物质的组成部分，又是许多辅酶(或辅基)高能磷酸键的组成部分。
磷是食用菌液体发酵不可缺少的物质，常加入磷酸二氢钾以提供磷，加入量大约为0.1%~0.15%。
1. 2.2．镁镁在细胞中起着稳定核蛋白、细胞膜和核酸的作用，而且是—些重要酶的活化剂，是食用真菌液体培养中不可缺少的营养成分。
一般通过加入硫酸镁以提供镁，浓度通常是0.05%~0.075%。
1. 2.3．钾、钙、钠钾不参与细胞结构物质的构成，但控制原生质的胶态和细脑膜的透性。
钙离子与细胞透性有关。
钠离子能维持细胞渗透压，钠离子可以部分代替钾离子的作用。
三种物质需求量甚微，若采用天然培养基，可不必另加。
1. 2.4．硫、铁硫是菌体细胞蛋白质的组成部分(胱氨酸、半胱氨酸及蛋氨酸中皆含硫)，铁是细胞色素、细胞色素氧化酶和过氧化氢酶的组成部分，亦是菌体有氧代谢中不可缺少的元素。
1. 2.5．锌、锰、钴、铜锌、锰、钴等离子是某些酶的辅基或激活剂。
铜是多元酚氧化酶的活性基。
在配制培养基时应注意，镁和磷的添加不宜过多，否则会带来危害。
菌体对锌、锰、钴、铜等微量元素的需求量甚少，一般天然有机原料中均有，不必另加。
碳酸钙本身不溶于水，但可以调节培养其中的酸碱度。
磷酸盐与碳酸钙不宜混合灭菌，否则会形成不溶于水的磷酸盐，使可溶性的磷酸盐浓度大大降低。
1. 3、维生素维生素在细胞中作为辅酶的成分，具有催化功能。
大多数食用真菌的培养都与B族维生素有关，维生素B1是目前已知对绝大多数食用真菌生长有利的维生素。
其适宜浓度在50~1000µg/L之间。
2、摇瓶振荡培养技术培养液配制好后，装入500mL容量的三角烧瓶中，每瓶装量为100mL，并加入0∼15粒小玻璃珠，加棉塞后再包扎牛皮纸封口，在1.5kg/cm2压力下灭菌30分钟，取出冷却到30℃以下时，接入一块约2平方厘米的斜面菌种，于23℃∼25℃下静置培养48小时，再置往复式摇床上振荡培养，振荡频率为80∼100次/分，振幅6cm∼10cm。
如果用旋转式摇床，振荡频率为200∼220转／分。
摇床室温控制在24℃∼25℃，培养时间因菌类不同而异，一般是在7天左右。
培养结束的标准是：培养液清澈透明，液中悬浮着大量小菌丝球，并伴有各种菇类特有的香味。
二、液体菌种的检验方法对液体菌种进行检验可采用感官检查和取样测验相结合的方法。
2. 1. 感官检查可采用“看、旋、嗅”的步骤进行检查。
看：将样品静置桌上观察。
一看菌液颜色和透明度，正常发酵醪液呈黄色或黄褐色，清澈透明，菌丝颜色因菌种而异，老化后颜色变深；染杂菌的醪液则混浊不透明。
二看菌丝形态和大小，正常的菌丝大小一致，呈球状、片状、絮状或棒状，菌丝粗壮，线条分明；而染杂菌后，菌丝纤细，轮廓不清。
三看上清液与沉淀的比例，菌丝体占比例越大越好，较好的液体菌种，在瓶中所占比例可达80%左右。
四看pH值指标是否变色，在培养液中加入甲基红或复合指标剂，经3∼5天颜色改变，说明培养液pH值到达4.0左右，为发酵点；如果在24小时内即变色，说明因杂菌快速生长而使培养液酸度剧变。
五看有无酵母线，如果在培养液与空气交界处的瓶壁上有灰色条状附着物，说明为酵母菌污染所致，此称为酵母线。
旋：手提样品瓶轻轻旋转一下，观其菌丝体的特点。
醪液的粘稠度高，说明菌种性能好；稀薄者表明菌球少，不宜使用。
菌丝的悬浮力好，放置5分钟不沉淀，表明菌种生长力强；反之，如果菌丝极易沉淀，说明菌丝已老化或死亡。
再次观其菌丝状态，大小不一，毛刺明显，表明是供氧不足；如果菌球缩小且光滑，或菌丝纤细并有自溶现象，说明污染了杂菌。
嗅：在旋转样品后，打开瓶盖嗅气味。
培养好的优质液体菌种，均具有芳香气味；而染杂菌的培养液则散发出酸、甜、霉、臭等各种异味。
2. 2. 取样测验可取液体菌种进行称重检查和粘度检查；生长力测定和出菇试验；化学检查，包括测pH值、糖含量和氧含量等；显微检查，包括细胞分裂状态观察、普通染色和特殊染色等。
三、液体菌种的使用方法液体菌种可作原种使用，也可作栽培使用。
3. 1. 作原种取一支100ml。
兽用注射器，去掉针尖，换一根内径1mm∼2mm，长100mm∼120mm的不锈钢钢管，制成一个菌种接种器。
使用前，洗净接种器并用纱布包好，经高压蒸汽灭菌，冷却后抽取液体菌种即可进行接种。
经灭菌待接入菌种的原种瓶，先要在无菌条件下去掉棉塞，并改换无菌薄膜包扎瓶口。
接种时，将针管插入瓶口上的薄膜，每瓶接种量为10mL∼１5ml，要注意使液体菌种均匀分布在培养基表面，拔出针管后要立即用胶布贴封针孔，竖放在培养室的床架上进行培养。
3. 2. 作栽培种或直接进行栽培液体菌种在作栽培使用时，瓶栽的每瓶接种量为10mL∼15mL；熟料袋栽的每袋接种量为，小袋10mL∼15mL，大袋的20mL∼30mL；开放式床栽的，每平方米接种量为500mL∼1000mL，不需要接种针筒，可直接均匀洒在培养料面，或进行穴播。
在无菌的条件下把菌种投放到培养基里。
安装通气管后用输氧机给培养基输入氧气。
把培养基放置在摇床机上进行振荡培养。
食用菌液体菌种具有生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、发酵快、适宜于工厂化生产等优点。
食用菌液体菌种的生产方式一般可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧）法、发酵罐法。
据省农科院食用菌站工作人员介绍，摇瓶机法不仅接种简单，管理方便，而且生产量根据机器的设定而不同，投资2000~3000元即可。
液体菌种的制作及使用方法配制液体培养基先把马铃薯煮到熟而不烂时提取上清液，然后配制3%葡萄糖、1%玉米粉、0.05%硫酸镁、0.1%磷酸二氢钾，最后将马铃薯上清液和上述溶液及水混合即可。
液体培养基适用于多种食用菌菌种的培养。
摇瓶振荡培养液体培养基配制好后，装入容量为500毫升的三角烧瓶中，每瓶装入100毫升，并加入1∼15粒小玻璃珠，瓶口用棉塞、牛皮纸密封，在1.5千克/平方厘米压强下灭菌30分钟。
然后投入一块约2平方厘米的斜面菌种，于23℃∼25℃下静置培养24小时。
待菌丝萌发时再放置在往复式摇床上振荡培养，振荡频率为每分钟80∼100次，振幅为6∼10厘米。
摇床室的温度控制在24℃∼25℃，培养时间因菌类不同而异，一般是5天左右。
将振荡好的培养基倒入大容器里，经过扩容后，在无菌条件下安装通气管，用输氧机通入适量氧气后培养48小时。
培养结束的标准：培养液清澈透明，其中悬浮着大量小菌丝球，并伴有各种菇类特有的香味。
培养好的液体菌种应放入培养箱中保存。