第十章高效液相色谱分析.
高效液相色谱和超高效液相色谱
高效液相色谱和超高效液相色谱高效液相色谱（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）和超高效液相色谱（Ultra High Performance Liquid Chromatography，UHPLC），是现代分析化学中常用的分离技术。
它们可以对复杂的混合物进行分离和定量分析，广泛应用于药物分析、食品分析、环境分析、生物分析等领域。
本文将从原理、仪器、方法和应用等方面，介绍高效液相色谱和超高效液相色谱的基本知识。
一、原理高效液相色谱和超高效液相色谱的原理基本相同，都是利用样品在流动相中的分配系数差异，通过固定相和流动相的作用，将混合物中的化合物分离出来。
不同的是，超高效液相色谱采用了更小的颗粒固定相，使得流动相可以更快地通过固定相，从而提高了分离效率和分离速度。
在高效液相色谱和超高效液相色谱中，样品首先被注入流动相中，然后通过固定相的柱子。
固定相通常是一种多孔的固体材料，如硅胶、C18等。
样品中的化合物在流动相中的分配系数不同，因此在通过固定相时，会被分离出来。
分离出来的化合物，会在检测器中被检测到，从而实现分离和定量分析。
二、仪器高效液相色谱和超高效液相色谱的仪器基本相同，主要由注射器、流动相泵、柱子、检测器和计算机控制系统等组成。
（一）注射器注射器是将样品引入流动相中的关键部分。
常用的注射器有手动注射器和自动进样器。
手动注射器通常用于小样品量的分析，而自动进样器可以实现高精度、高效率的样品进样。
（二）流动相泵流动相泵是将流动相送入柱子中的装置。
其主要功能是控制流动相的流速和流量，并确保流动相的稳定性。
常用的流动相泵有恒压流量泵和梯度流量泵。
恒压流量泵可以保持恒定的流量，适用于等浓度的流动相。
梯度流量泵可以实现不同浓度的流动相混合，从而实现更好的分离效果。
（三）柱子柱子是高效液相色谱和超高效液相色谱的核心部分，用于固定相的分离。
常用的柱子材料有硅胶、C18、C8等。
食品仪器分析-高效液相色谱参考答案
高效液相色谱习题一、填空题1.高效液相色谱分析是将流动相用高压泵输送，使压力高达 5 MPa以上，并采用新型的化学键合固定相，是分离效率很高的液相色谱法。
2.高效液相色谱法的特点是分离性能高、分析速度快、检测器灵敏度高、应用范围广。
3.高效液相色谱法和气相色谱法的共同之处是分离功能、分析功能、在线分析。
4.高效液相色谱分析根据分离机理不同可分为四种类型，即液固色谱、液液色谱、键合相色谱、凝胶色谱。
5.高效液相色谱中的液一液分配色谱采用的新型固定相叫化学键合相，它是利用化学方法将固定液官能团键合在载体表面上的。
6.通常把固定相极性大于流动相极性的一类色谱称为正相色谱。
反之称为反相色谱。
7.高效液相色谱仪通常由储液器、输液泵、梯度淋洗器、进样器、色谱柱、检测器、色谱工作站七部分组成。
8.高效液相色谱仪中使用最广泛的检测器为紫外检测器，另外还有折光检测器、荧光检测器等等。
9.高效液相色谱主要用于分析沸点高的、分子量大的、受热易分解的以及具有生理活性物质的分析。
二、判断题√、√、⨯、⨯、√、√、⨯、√、⨯、√、⨯、√、√、⨯、√、⨯、⨯、√、⨯、√、√、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、⨯、√、⨯1．液一液色谱流动相与被分离物质相互作用，流动相极性的微小变化，都会使组分的保留值出现较大的改变。
（√）2．利用离子交换剂作固定相的色谱法称为离子交换色谱法。
（√）3．紫外吸收检测器是离子交换色谱法通用型检测器。
（×）4．检测器性能好坏将对组分分离产生直接影响。
（×）5．高效液相色谱适用于大分子，热不稳定及生物试样的分析。
（√）6．高效液相色谱中通常采用调节分离温度和流动相流速来改善分离效果。
（×）7．键合固定相具有机械性能稳定，可使用小粒度固定相和高柱压来实现快速分离。
（√）8．在液相色谱中为避免固定相的流失，流动相与固定相的极性差别越大越好。
（×）9．正相分配色谱的流动相极性大于固定相极性。
高效液相色谱分析
高效液相色谱分析一、选择题1.液相色谱适宜的分析对象是( )。
A 低沸点小分子有机化合物B 高沸点大分子有机化合物C 所有有机化合物D 所有化合物2.在液相色谱中,梯度洗脱适用于分离( )。
A 异构体B 沸点相近,官能团相同的化合物C 沸点相差大的试样D 极性变化范围宽的试样3吸附作用在下面哪种色谱方法中起主要作用( )。
A 液一液色谱法B 液一固色谱法C 键合相色谱法D 离子交换法4.在液相色谱中,提高色谱柱柱效的最有效途径是( )。
A 减小填料粒度B 适当升高柱温C 降低流动相的流速D 增大流动相的流速5.液相色谱中通用型检测器是( )。
A 紫外吸收检测器B 示差折光检测器C 热导池检测器D 荧光检测器6.高压、高效、高速是现代液相色谱的特点,采用高压主要是由于( )。
A 可加快流速,缩短分析时间B 高压可使分离效率显著提高C 采用了细粒度固定相所致D 采用了填充毛细管柱7.在液相色谱中,下列检测器可在获得色谱流出曲线的基础上,同时获得被分离组分的三维彩色图形的是( )。
A 光电二极管阵列检测器B 示差折光检测器C 荧光检测器D 电化学检测器8.液相色谱中不影响色谱峰扩展的因素是( )。
A 涡流扩散项B 分子扩散项C 传质扩散项D 柱压效应9.在液相色谱中,常用作固定相又可用作键合相基体的物质是( )。
A 分子筛B 硅胶C 氧化铝D 活性炭11.在液相色谱中,固体吸附剂适用于分离( )。
A 异构体B 沸点相近,官能团相同的颗粒C 沸点相差大的试样D 极性变换范围12水在下述色谱中,洗脱能力最弱(作为底剂)的是( )。
A 正相色谱法B 反相色谱法C 吸附色谱法D 空间排斥色谱法13.在下列方法中,组分的纵向扩散可忽略不计的是( )。
A 毛细管气相色谱法B 高效液相色谱法C 气相色谱法D 超临界色谱法14. 下列用于高效液相色谱的检测器,()检测器不能使用梯度洗脱。
A、紫外检测器B、荧光检测器C、蒸发光散射检测器D、示差折光检测器15. 高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了()A、恒温箱B、进样装置C、程序升温D、梯度淋洗装置二、填空题1.高效液相色谱中的技术类似于气相色谱中的程序升温,不过前者连续改变的是流动相的,而不是温度。
高效液相色谱仪的定性、定量分析(未知样品中苯甲酸含量的测定)
一. 实验目的：
1. 学习高效液相色谱法的测定原理； 2.掌握高效液相色谱仪（HP1100）的定性、定量 分析方法。
二。实验原理： 高效液相色谱法是重要的色谱方法，是在经典液相色谱法 和气相色谱的基础上发展起来的，（经典液相色谱法使用粗粒 多孔固定相，装填在大口径、长玻璃管柱内，流动相仅靠重力 流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度极其缓慢，柱入 口压力低，仅有低的柱效，分析时间长；气相色谱原理类似， 流动相为气体，只能分离小分子量、低沸点的有机化合物，配 合程序升温可分析高沸点的有机化合物。）弥补了经典液相色 谱法和气相色谱的缺点。它使用了多孔微粒固定相，装填在小 口径短的不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高压的色谱 柱，溶质在其中的传质、扩散速度大大加快，从而在短时间内 获得高的分离能力。可分析低分子量、低沸点的有机化合物， 更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化 合物。
4．进样阀从装载转向进样位，同时按进样按扭，工作站 开始记录并出图11。 5．苯甲酸的色谱峰出完后，按照4-5步骤连续操作四次， 获得从最低浓度到最高浓度的标准试液的五张色谱图，分 别为11，12，13，14，15（15为流动相进样，设浓度为0 mg/ml）。 6．按照4-5步骤取25微升的未知样品，进样，出谱图W1。
四．实验步骤：（ESTD法） 1． 标准储备液的配置：准确量取0.144克苯甲酸钠试剂 ， 用 纯 水 或 去 离 子 水 溶 解 ， 定 容 到 100 毫 升 ， 浓 度 为 1.44mg/ml. 分别取此标准液5 ml，2.5 ml，1 ml, 0.5 ml稀 释为10 ml，则浓度分别为0.72 mg/ml，0.36 mg/ml，0.144 mg/ml，0.072 mg/ml。 2． 打开计算机，开仪器，稳定后，打开桌面的ONLINE 工作站。 设定方法：设置泵的流速为1ml/min，柱温为室温（ 40度左右），停止时间为4min，流动相比例（甲醇：水 =60；40），当流动相通过色谱柱约5-10min，记录仪上基 线稳定后，开始进样。 3． 进样：进样阀放在装载的位置上，用注射器取25微升 浓度最低的标准样（比进样阀上的定量环多5-10微升以上 ），注入进样阀中。
高效液相色谱测定法
高效液相色谱测定法
高效液相色谱测定法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和定量技术，可
以用于分离和测定复杂的混合物。
它基于物质在流动相（溶剂）和固定相（色谱柱上的填料）之间的相互作用的差异，利用流动相的流动将待测样品分离成不同的组分。
通过分析组分的保留时间和色谱峰的峰面积或峰高，可以定量不同组分的含量或浓度。
高效液相色谱测定法具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、重复性好等优点，因此在许多分析领域得到广泛应用。
它可以应用于生物医药、环境监测、食品安全等多个领域，用于分析和监测有机化合物、无机化合物、药物、天然产物、食品成分等。
高效液相色谱测定法的基本步骤包括：样品预处理、制备流动相、样品进样、流动相流动、色谱柱分离、检测器检测、结果处理等。
根据样品的性质和分析要求，可以选择不同的检测器，如紫外检测器（UV）、荧光检测器、质谱检测器等。
需要注意的是，高效液相色谱测定法在操作过程中需要注意样品制备和仪器条件的优化，以提高分离效果和分析结果的准确性。
此外，也需要注意流动相成分的选择、色谱柱的使用寿命等因素对分离效果的影响。
高效液相色谱结果分析
测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收 试验法”和“加样回收试验法”。
(1)回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定， 测定值为 M
回收率
M - 空白
R=
X 100%
A
(2)加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已 知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M
回收率 R = M - P X 100% A
数据要求 在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如 高、中、低三个不同浓度样品各测三次.
4.精密度(precision)
（通常采用峰面积A）成比例(正比). 标准曲线的范围确定取决于样品最低浓度与最高浓度. 标准曲线线性一般采用5-9点，并非点越多越好!
3.准确度(accuracy)
准确度 指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近 的程度，用百分回收率表示。
相对回收率 直接反映测定结果与真实值的接近程度,应 控制在100%左右(95%～105%)。
Unacceptable t=2
Awful t=4
正常
前伸
三.液相色谱图名词术语(7)
基线(Baseline): 在正常操作条件下,仅由流动相所产生 的响应信号.
基线噪声(Baseline Noise): 由各种因素所引起的基线波 动.
基线飘移(Baseline Drift): 基线随时间定向的缓慢变化.
分析方法重现性的测定是通过在不同的实验室内不同 的实验者对同一样品的分别测试而获得的。(获得的这 种再与正常检定下的精密度进行比较,从而确定该法的 耐用性,或称粗放度).
高效液相色谱的使用方法
高效液相色谱的使用方法高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种用于分离、分析和测定混合物中组分的技术。
以下是高效液相色谱的使用方法：1. 样品制备：根据需要，样品可以通过溶解、浸提、纯化等方法进行前处理。
确保样品是均匀的，并且符合HPLC分析要求。
2. 选择合适的色谱柱：根据分析目标，选择合适的色谱柱，包括固定相（C18、C8、氨基、芳基等）和柱型（反相、离子交换、排除等）。
色谱柱质量对分离和分析结果至关重要。
3. 准备移动相：根据色谱柱要求和分析目标，选择合适的移动相。
移动相通常由溶剂和缓冲液组成，可以通过改变溶剂的组成和比例来调节色谱条件。
4. 设定色谱条件：根据需要，设定合适的色谱条件，包括流动相速度、柱温、检测波长等。
这些条件将直接影响分离的效果和分析的准确性。
5. 校准仪器：在开始分析之前，校准色谱仪和检测器，确保其准确性和稳定性。
校准通常包括检测器灵敏度、波长、流速等参数。
6. 注样和运行：将样品注入色谱柱，启动色谱仪，使移动相通过柱子，分离出样品中的各组分。
根据需要，通过改变运行时间、流速等参数，调节分离和分析的效果。
7. 数据分析：通过检测器检测样品中各组分的吸光度或荧光强度，并记录数据。
可以使用特定的色谱软件对数据进行处理和解析，以获得准确的分析结果。
8. 数据解释：根据分析结果，对样品中的各组分进行定量或定性的解释。
可以使用标准品进行定量分析，或者与已知数据进行比对，以确认各组分的身份和浓度。
9. 清洗和维护：在完成分析后，及时清洗色谱柱和仪器，以保持其性能和寿命。
根据需要，使用适当的溶剂进行清洗，并使仪器处于良好的工作状态。
总之，高效液相色谱的使用方法包括样品制备、色谱柱选择、移动相准备、色谱条件设定、校准仪器、注样和运行、数据分析、数据解释以及清洗和维护等步骤。
熟练掌握这些方法能够有效地进行高效液相色谱的分离和分析。
高效液相色谱测定含量的方法
高效液相色谱测定含量的方法
高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛用于测定化合物含量的分析技术。
以下是一般的HPLC测定含量的步骤和方法：
1.样品制备：根据分析的目的，准备含有目标化合物的样品。
样
品制备可能涉及提取、溶解、过滤等步骤。
2.标准曲线制备：准备一系列已知浓度的标准溶液，用于建立标
准曲线。
标准曲线上的点数通常越多越好，以提高测定的准确
性。
3.HPLC系统设置：设置HPLC系统，包括选择合适的色谱柱、
移动相（流动相）和检测器。
根据样品性质和目标分析物，选
择适当的柱和检测条件。
4.进样：将标准溶液和待测样品注入HPLC系统。
通常使用自动
进样器，以提高精度和重复性。
5.色谱条件优化：通过调整流速、温度等条件，优化色谱分离，
使目标化合物得到良好的分离和峰形。
6.数据采集和分析：使用检测器（如紫外-可见（UV-Vis）检测
器）记录样品在色谱柱中的吸收峰，并使用标准曲线计算目标
化合物的浓度。
7.质量控制：包括在分析中加入质量控制样品，以确保实验的准
确性和可靠性。
8.结果报告：报告目标化合物的浓度，通常以样品中目标化合物
的峰面积或峰高度与标准曲线的关系来表示。
需要注意的是，HPLC分析的方法会因分析的具体目的和分析物的性质而有所不同。
因此，在进行HPLC分析之前，建议参考相关的方法学文献、标准操作程序（SOP）或咨询有经验的分析师。
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Hm
2 Cm d p
Dm
u
式中Cm是常数(与k有关)，Dm 为组
分分子在流动相中的扩散系数。
H sm
2 Csm d p
Dm
u 式中Csm为一常数；
综上所述，由柱内色谱峰扩展所引起的塔板高度 的变化可归纳为：
将上式简化：
H= A + B/u + Cu
可见，减小填料的孔径和粒度，采用低粘度
及低流速流动相，适当提高温度等方法都可提高
紫外检测器的缺点：不适用于紫外光完全不吸
收的试样，溶剂的选用也受到一定的限制。
光电二极管阵列(photo-diode array detector)检测器是紫外检测器的重要进展。 1024个二极管阵列，各检测特定波长，通过计 算机快速处理，形成三维立体谱图，如图所示。
(2)差示折光检测器：
该检测器是继UV检测器之后，第二种广泛使
到排阻，就直接通过柱子首先在色谱图
上出现；另外一些小分子可以进入胶孔
并渗透到颗粒中，这些组分在柱上的保
留值最大，在色谱图上最后出现。
排阻色谱法中，载液
分子通常都很小，它们一
般最后被洗脱(tM最大)，
结果是：整个试样都在tM (死时间)以前洗脱。 由于排阻色谱法的 分离机理与其他色谱法 不同，具有几个突出的 特点：
而HPLC中，当固定相选定时，流动相的种类 、配比能显著地影响分离效果。选择流动相时应 注意以下几方面因素： (1)纯度 如溶剂不纯，则长期积累杂质会导致检测器 噪声增加，同时也影响收集的馏分纯度。
(2)避免使用引起柱效损失或保留特性变化的溶
剂。
(3)对试样要有适宜的溶解度，否则在柱头易产 生沉淀。 (4)考虑到泵压，流动相的粘度小些为好。 (5)应与检测器相匹配，如紫外光检测器，就不 能使用对紫外光吸收的溶剂。
排阻色谱所用的溶剂必须与凝胶本身非常 相近，以润湿凝胶并防止吸附作用。对分离大分 子化合物，易采用粘度小的溶剂作流动相如四氢 呋喃、甲苯等。对分离生物物质，主要采用水、 缓冲盐溶液等。 §3-7 HPLC分离类型的选择
应用HPLC对试样进行分离、分析方法的选择， 应考虑几种因素，包括：试样性质(分子量、结 构、极性、溶解度等)、HPLC分离方法类型的特 点及应用范围等。
正相色谱中，底剂采用低极性溶剂如正己
烷、苯、氯仿等；而洗脱剂则根据试样的性质
选取极性较强的针对性溶剂如醚、酯、酮、醇
和酸等。
反相色谱中，底剂一般采用水，洗脱剂常 采用有机溶剂如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。 而离子交换色谱法主要在含水介质中进行 ，组分的保留值可通过调节流动相中的离子强 度和pH来控制。
(steric exclusion chromatograph)
空间排阻色谱法以凝胶(gel)为固定相。分 离机理与其它色谱法完全不同。 该方法分离的机理类似分子筛的作用，但孔 径比分子筛要大，为数纳米到数百纳米。溶质在 两相间的分离不是由于相互作用力的不同，而是 按分子大小进行分离。
试样中的大分子不能进入胶孔而受
该方法的几个突出特点： (1)高压：
液相色谱以液体作为流动相(称为载液)，液
体流经色谱柱受到的阻力较大，为使载液迅
速通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般
可达到150~300kg/cm2。
(2)快速： 由于使用了高压，HPLC所需的时间较之经典 液相色谱短得多，如分离苯的羟基化合物七 个组分，只需1分钟；对氨基酸的分离，
可达10-11克；所需试样为微升级。 HPLC与GC相比较的突出优点： • 用GC法分析样品须先气化，目前已知的有机
物中，能直接采用GC法进行分析的仅占20%。
而HPLC法则不受此限制，尤其适合于分析生
物、医学方面的大分子及离子型化合物。
• HPLC方法中，有两个相与样品分子相互作用 ，而GC方法中一般认为只有一个相与样品分 子相互作用。所以HPLC的选择性大大提高。
固定相传质阻力Hs—主要发生在液液分配色谱
中，类似于气液色谱中的液相传质阻力项。
Hs
Cs d 2 f Ds
u
式中Cs 为常数(与k有关)；Ds为组
分分子在固定液内的扩散系数；
由上式可见，Hs与GC中的CL含义是一致的。 流动相传质阻力—HPLC中该项有两种形式，分为 分别用Hm和Hsm表示。
在流动的流动相中和滞留的流动相中的传质阻力，
由贮液瓶、高压泵(梯度洗提装置)、进样器、 色谱柱(恒温器)、检测器和记录仪组成。
主要部件简述： 1.高压泵 其作用是输送载液(流动相)。由于色谱柱很细 (1~6mm)，填充剂粒度小(几十微米)，因此要 达到快速高效的分离效果，要求压力为150~ 200kg/cm2。 2.梯度洗提装置 又称梯度洗脱(gradient elution)和气相色谱 法中的程序升温类似，对复杂混合物的分离带 来方便。
用的液相色谱检测器。图示： 光源1射出光线由 透镜2聚焦,透过遮 光板4的狭缝,经反
射镜5反射后,由透
镜6汇聚两次,穿过
工作池7和参比池8
偏转式差示折光检测器光路图
被平面反射镜9反射出来，成像于棱镜11的棱口
上，光束均匀分为两束，到达对称的光电管12上。 如果工作池和参比池皆通过纯流动相，光 束无偏转，左右两个光电管的信号相等；
经典液相色谱需用20小时才能分离出20种氨基
酸，而HPLC只需1小时即可完成。载液在色谱柱
内的流速可达1~10mL∙min-1。 (3)高效：
气相色谱的柱效（n值）约为2000塔板/m，而
高效液相色谱约为5000塔板/m以上；一根高效液
相色谱柱可同时分离多达100种以上的组分。
(4)高灵敏度： 由于在HPLC中使用高灵敏度的检测器，如紫 外检测器的最小检测量可达10-9g，荧光检测器
效以理论塔板数计大约7000~10000。其发展趋势
是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
5.检测器 常用的检测器： (1)紫外光度检测器(UV)： 它的作用原理是基于被分析试样对特定波长 紫外光的选择性吸收。池内样品浓度与吸收的 光强度服从比耳定律。P.304. 最小检测量为10-9g∙mL-1，对流量和温度的波 动不敏感，可用于梯度洗脱。
如果分子量较低，挥发性较高且热稳定的
试样，适用于GC法进行测定。HPLC法适用于相
对分子质量为200到2000的试样测定，大于2000
的宜用空间排阻色谱。
另外，了解试样在多种溶剂中的溶解情况，
有利于分离类型的选择。 如溶解于水的试样可采用液液色谱法；溶解 于酸或碱性水溶液的，则表示试样为离子型化 合物，可采用离子交换色谱法、离子对色谱法 等。
3.离子交换色谱法
(ion-exchange chromatography) 该方法是基于离子交换树脂上可电离的离
子与流动相中携带相同电荷的组分离子进行可
逆交换，依据这些离子对交换剂的不同亲和力
而进行分离。
凡是在溶剂中能电离的物质通常都可用离子交 换色谱法进行分析。
阳离子交换：
M ( Na O3 S —树脂) ( M O S — 树脂 ) + Na 3
所谓梯度洗提，指载液中含有两种或两种以
上不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序
连续改变载液中各溶剂的配比。由此通过改变
载液的极性来达到分离组分，提高分离效果。 3.进样装置
因为流路中为高压力工作状态，通常使用耐高
压的六通阀进样装置。
4.色谱柱 常用的标准柱型是内径4.6或3.9mm，长度为
15~30cm的直形不锈钢管。填料粒度5~10m，柱
(1)试样峰全部在溶剂的保留时间前出峰，它们
在柱内的停留时间短，故柱内产生的峰扩展
比其他方法小得多。
(2)固定相和流动相的选择简便。 (3)适用于分离相对分子质量差别在10%以上的
分子。
§3-6 HPLC的流动相
GC中可供选择的载气只有三四种，它们的
性质差异不大。要提高柱的选择性，主要是改
变固定相的性质。
如果工作池中有试样通过，由于折射率改变， 左右两个光电管接受的光能量不等，其差值正比 于试样的浓度。
造成光束偏转，从而使到达棱镜的光束偏离棱口，
每种物质都有各自不同的折射率，因此都可
用差示折光检测器进行检测，所以是一种通用型
的浓度检测器。灵敏度为10-7g∙mL-1。 缺点：对温度变化很敏感，此检测器不能 用于梯度洗提。 §3-3 HPLC的理论基础简述 高效液相色谱法的理论基础基本与气相色 谱法相同，但有其不同之处。两者的主要区别 在于流动相的不同。
载液中
载液中
阴离子交换：
- X - (Cl R4 N —树脂) ( X R N — 树脂 ) + Cl 4
载液中
载液中
离子交换色谱法主要用来分离离子或可离 解的化合物，20世纪60年代前后，已成功分离 了氨基酸、核酸、蛋白质等，在生物化学领域 得到了广泛的应用。
4.空间排阻色谱法
• HPLC方法中，因为在常温下进行分析，因此 固定相的选择比GC多；另一方面可提高色谱 的分离效率。 • HPLC方法中，可使用灵敏度较高的光度检测 器，而在GC方法中则无法使用。 • HPLC方法中，样品可以回收，而GC方法中样品 回Байду номын сангаас则较困难。 §10-2 HPLC色谱仪
高效液相色谱仪的结构如下：
根据分离机制的不同，HPLC可分为下述几种主
要类型：
液-液色谱法、液-固色谱法、离子交换色谱法、
离子对色谱法、离子色谱法和空间排阻色谱法
等。 1.液-液分配色谱法 (L-L partition chromatograph) 流动相和固定相都是液体，其分离原理为试 样组分在固定相和流动相之间的相对溶解度存 在差异。当浓度分配达到平衡时，应服从于下 Cs VM 式： K k k CM Vs