酵母表达培养基介绍
酵母表达培养基介绍
毕赤酵母表达的培养基配制［5］2.1 LB（Luria－Bertan i）培养基：Trypto n l％YeastExtrac t 0.5％NaCl l％PH 7.0制作平板时加入2％琼脂粉。
121℃高压灭菌 20min。
可于室温保存。
用于培养pP ICZαA原核宿主菌TOP10F’时可加入Ze ocin25ug / ml。
2.2 LLB（Low Salt LB）培养基：Trypto n l％YeastExtrac t 0.5％NaCl 0.5％PH 7.0制作平板时加入2％琼脂粉。
121℃高压灭菌 20min。
可于室温保存数月。
用于培养pP ICZαA 原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeoc in 25ug / ml，可以4℃条件下保存1～2周。
2.3 YPD （又称YEPD）YeastExtrac t Pepton e Dextro se Medium，（YeastExtrac t Pepton e Dextro se Medium，酵母浸出粉/胰蛋白胨/右旋葡萄糖培养基）Trypto n 2%dextro se (glucos e) 2%+agar 2%+Zeocin100μg/ml液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。
加入Zeoc in 100ug/ ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。
2.4 YPDS + Zeocin培养基（YeastExtrac t Pepton e Dextro se Medium）：yeastextrac t 1%pepton e 2%dextro se (glucos e) 2%sorbit ol （山梨醇）1 M+agar 2%+ Zeocin100μg/ml不管是液体YPDS培养基，还是YPDS + Zeocin培养基，都必须存放4℃条件下，有效期1～2周。
培养基酵母粉规格要求
培养基酵母粉规格要求培养基酵母粉规格要求概述导言培养基酵母粉是一种常用的实验室培养基，广泛应用于微生物学、细胞生物学和生物化学等领域。
它是由培养基配方和培养基酵母粉两部分组成的，其中培养基酵母粉扮演着提供营养和生长因子的重要角色。
在本文中，我将全面评估培养基酵母粉的规格要求，并根据其深度和广度的要求探讨这一主题。
1. 培养基酵母粉的基本概念和背景（提及主题文字）在开展相关研究之前，了解培养基酵母粉的基本概念和背景是至关重要的。
培养基酵母粉是从酵母菌中提取得到的含有丰富营养和生长因子的粉末。
其主要成分包括蛋白质、碳水化合物、维生素和矿物质等，这些都是酵母菌正常生长和繁殖所必需的。
培养基酵母粉在实验室中作为培养基的重要组成部分，可以为酵母菌提供充足的营养和适宜的环境条件。
2. 培养基酵母粉的规格要求和选择（提及主题文字）在选择培养基酵母粉时，我们需要考虑几个重要的规格要求。
酵母菌的种类和应用领域将决定我们选择的培养基酵母粉的类型。
对于酿酒业或食品产业中的酵母菌，我们可以选择专门用于这些应用领域的培养基酵母粉。
培养基酵母粉的营养成分也是选择的重要因素。
我们需要保证培养基酵母粉含有充足的蛋白质、碳水化合物、维生素和矿物质等，以满足酵母菌的生长需求。
培养基酵母粉应该是纯净的，不含有杂质和其他微生物，以避免对实验结果的影响。
培养基酵母粉的稳定性和保存性也是我们需要考虑的因素。
良好的培养基酵母粉应该具有较长的保存期限，并且在常规的保存条件下不易受到污染或降解。
3. 培养基酵母粉的制备和使用方法（提及主题文字）对于制备和使用培养基酵母粉，我们需要遵循一定的方法和步骤。
我们需要根据所选培养基酵母粉的规格要求以及实验要求来选择合适的载体。
按照规定的比例将培养基酵母粉溶解在适量的溶液中，并加热或搅拌以促进溶解。
接下来，我们可以根据实验需求来添加其他成分，例如抗生素或诱导物，以调整培养基的特性。
完成后，将溶液进行高温或高压灭菌处理，以确保培养基酵母粉中的微生物被杀死。
酵母菌培养基
麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。
马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。
豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基。
察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。
麦芽汁培养基为天然培养基，马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基。
培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。
(一)麦芽汁培养基的配制1．培养基成分新鲜麦芽汁一般为10-15波林。
2．配制方法 (1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。
(2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。
(3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。
(4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调p H至6．4。
如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。
(5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。
(6)分装、加塞、包扎。
(7)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 mi n。
（二)马铃薯葡萄糖培养基的配制1、培养基成分马铃薯20g 葡萄糖2 g 琼脂1.5-2g 水100ml自然pH 2．配制方法(1)配制20％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000m1。
毕赤酵母常用培养基与载体
毕赤酵母常用培养基与载体一、毕赤酵母表达常用载体：典型的巴斯德毕赤酵母表达载体载体包含醇氧化酶－1（AOX1）基因的启动子和转录终止子（5'AOX1和3'AOX1），它们被多克隆位点（MCS）分开，外源基因可以在此插入。
此载体还包含组氨醇脱氢酶基因（HIS4）选择标记及3'AOX1区。
当整合型载体转化受体时，它的5'AOX1和3'AOX1能与染色体上的同源基因重组，从而使整个载体连同外源基因插入到受体染色体上，外源基因在5'AOX1启动子控制下表达。
毕赤酵母本身不分泌内源蛋白，而外源蛋白的分泌需要具有引导分泌的信号序列。
而由89个氨基酸组成的酿酒酵母的分泌信号—α交配因子(α-factor)引导序列已经成功地引导了几种外源蛋白的分泌。
分泌表达载体主要有：pPIC9，pPIC9K，pHIL-S1，pPICZα A，pYAM75P等。
胞内表达载体主要有：pHIL-D2，pA0815，pPIC3K，pPICZ，pHWO10，pGAPZ，pGAPZa(Invitrogen)，pPIC3.5K等。
工程菌株Y11430，MG1003，GS115 （AOX1），KM71，SMD1168。
毕赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71两种，都具有HIS4营养缺陷标记。
其中，GS115茵株具有AOX1基因，是Mut＋，即甲醇利用正常型；而KM71菌株的AOX1位点彼ARG4基因插入，表型为Muts，即甲醇利用缓慢型，两种菌株都适用于一般的酵母转化方法。
多拷贝表达菌株的获得方式：与自主复制的质粒型表达载体不同，整合型表达载体的拷贝数可以有很大的变化。
含多拷贝外源基因的表达菌株合成蛋白的量也较多。
体内整合可通过高遗传霉素抗性，筛选可能的多拷贝插入；而体外整合可通过连接产生外源基因的串联插入。
多拷贝表达菌株的获得方式有两种：一种是利用SDS-PAGE 电泳、免疫杂交或菌落点杂交方法在大量的转化子中进行自然筛选。
毕赤酵母表达系统资料整理
Mut+ 和Muts毕赤酵母中有两个基因编码醇氧化酶一一A0X1及A0X2细胞中大多数的醇氧化酶是AOX1基因产物，甲醇可紧密调节、诱导AOX1基因的高水平表达，较典型的是占可溶性蛋白的30%以上。
AOX1基因调控分两步：抑制/去抑制机制加诱导机制。
简单来说，在含葡萄糖的培养基中，即使加入诱导物甲醇转录仍受抑制。
为此，用甲醇进行优化诱导时，推荐在甘油培养基中培养。
注意即使在甘油中生长（去抑制）时，仍不足以使AOX1基因达到最低水平的表达，诱导物甲醇是AOX1基因可辨表达水平所必需的。
AOX1基因已被分离，含AOX1启动子的质粒可用来促进编码外源蛋白的目的基因的表达。
AOX2基因与AOX1基因有97%的同源性，但在甲醇中带AOX2基因的菌株比带AOX1基因菌株慢得多，通过这种甲醇利用缓慢表型可分离Muts菌株。
在YPD酵母膏、蛋白豚、葡萄糖）培养基中，不论是Mut+还是Muts其在对数期增殖一倍的时间大约为2h ° Mut+和Muts菌株在没有甲醇存在的情况下生长速率是一样的，存在甲醇的情况下，Mut+在对数期增殖一倍的时间大约为4至6个小时，Muts在对数期增殖一倍的时间大约为18个小时。
菌株GS115 > X- 33、KM71 和SMD1168 的区另I]GS115、KM71和SMD1168等是用于表达外源蛋白的毕赤酵母受体菌，与酿酒酵母相比，毕赤酵母不会使蛋白过糖基化，糖基化后有利于蛋白的溶解或形成正确的折叠结构。
GS115 > KM 71 ' SMD1168在组氨酸脫氢酶位点（His4）有突变，是组氨酸缺陷型，如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。
这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于10-8。
GS115表型为Mut+，重组表达载体转化GS115后，长出的转化子可能是Mut+，也可能是Muts （载体取代AX01基因），可以在MM和MD培养基上鉴定表型。
毕赤酵母的培养基1
毕赤酵母的培养巴斯德毕赤酵母是甲醇营养型酵母中的一类能够利用甲醇作为唯一碳源和能源的酵母菌。
与其它酵母一样，在无性生长期主要以单倍体形式存在，当环境营养限制时，常诱导2个生理类型不同的接合型单倍体细胞交配，融合成双倍体。
比赤酵母表达常用的培养基：1 LB培养基胰蛋白胨1% 酵母粉0.5% 氯化钠1% PH 7.0----------------大肠杆菌培养制作平板加入2%的琼脂粉，121摄氏度20分钟，可于室温保存。
用于培养pPICZ αA 原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / mL（博来霉素，抗菌素）宿主细胞His- -----------诱变造成的。
MD------------酵母转化筛选培养基（营养缺陷型His-）13.4g/L酵母基本氮源；0.4mg/L生物素；20g/L葡萄糖用于表达的毕赤酵母都属于组氨酸缺陷型的只有染色体上成功整合入重组质粒载体基因的毕赤酵母菌株才能在组氨酸缺失的MD培养基生长，以此筛选出重组子。
MM--------------酵母转化进一步筛选培养基仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，成为基本培养基（minimal medium,MM），有时用符号“[ －]”来表示。
不同微生物的基本培养基是不相同的。
2 LLB 培养基胰蛋白胨1% 酵母粉0.5% 氯化钠0.5%PH 7.0制作平板时加入2％琼脂粉。
121℃高压灭菌20min。
可于室温保存数月。
用于培养pPICZ αA 原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeocin 25ug / ml，可以4℃条件下保存1～2 周.3 YPD培养基酵母粉1%，胰蛋白胨2%，葡萄糖2%，固体加2%的琼脂粉，YPD 培养基可常温保存,是毕赤酵母的最基本培养基，琼脂YPD 平板在4℃可保存几个月。
加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ 培养基，可以4℃条件下保存1～2 周。
4 BMGY培养基酵母粉1% 蛋白胨2%，磷酸钾缓冲溶液平PH 6 100mmol/L YNB（酵母氮源）1.34% 生物素（4×10 -5）%甘油1%，毕赤酵母诱导表达前培养基，YNB和Biotin过滤除菌。
酵母菌表面展示的酵母细胞的培养与表达步骤
酵母菌表面展示的酵母细胞的培养与表达步骤酵母菌表面展示技术是一种重要的生物工程技术，可以通过将目标蛋白质或多肽序列表面展示在酵母菌细胞表面，从而实现蛋白质的高效表达和展示。
本文将介绍酵母菌表面展示的酵母细胞的培养和表达步骤。
1.准备培养基首先，准备含有所需营养物质的培养基。
常用的培养基包括YPD培养基（酵母粉蛋白质培养基）、SD培养基（合成蛋白质培养基）和SC培养基（选择性培养基）。
根据实验需要选择合适的培养基，并按照相关文献或方法指南进行配置。
2.酵母细胞传代培养将酵母细胞的初始培养物接种到含有适当培养基的无菌试管或烧瓶中。
根据实验需要，可以选择不同规模的培养容器，如试管、烧瓶或发酵罐。
在适当的温度下，用摇床或震荡培养器进行培养，保持适当的培养条件（如温度、pH值和氧气供应），直至菌液达到合适的菌密度。
3.感应表达载体将要表达的目标蛋白质或多肽序列插入相应的表达载体中，并将这些载体转化到酵母细胞中。
常用的表达载体包括pYD1和pYD2。
将重组载体和酵母细胞一同处理，使其进行感应表达。
4.酵母菌表达培养接种已感应表达的转化菌落到含有选择性培养基的培养容器中。
根据实验需要，可以选择添加相应的抗生素进行筛选。
将菌液继续在适当的培养条件下培养，并监测菌液的生长情况。
5.表达蛋白质的定量和纯化通过Western blot、ELISA等技术验证目标蛋白质或多肽序列的表达情况，并定量蛋白质的表达水平。
根据实验需要，可以采用亲和层析、离心和蛋白质纯化技术对表达的蛋白质进行纯化。
6.酵母菌表面展示将纯化的蛋白质重新悬浮于含有适当培养基的培养液中，并与酵母细胞进行共培养。
通过培养时的适当处理（如温度的改变、pH值的调整、特定培养基成分的添加等），使表达的蛋白质或多肽序列能够准确地定位和展示在酵母细胞表面。
7.酵母菌表面展示的验证通过免疫荧光、流式细胞术和酵母菌表面结构的特异性分析等方法，检测和验证酵母菌表面展示的效果。
酵母培养基
一种抗菌肽基因及其制备方法和该基因在毕赤酵母载体中的表达质粒的构建2.2.7 酵母表达常用缓冲液10×YNB(13.4%无氨基酸酵母氮源)，13.4gYNB粉末溶于100mL蒸馏水，0.22µm 过虑除菌，4℃保存；500×B(0.02%生物素)，生物素20mg/100mL水，0.22µm过滤灭菌，4℃保存；10×D(20%葡萄糖)，200gD-葡萄糖溶于1L水中，0.22µm过滤灭菌，4℃保存；10×M，5mL甲醇与95mL灭菌水混匀，0.22µm的有机滤膜灭菌，4℃保存；10×GY(10%的甘油)，100mL甘油溶于900mL水，过滤灭菌，4℃保存；1M的磷酸缓冲液(pH6.5)，将132mL 1M的磷酸氢二钾(K2HPO4)和868mL的磷酸二氢钾(KH2PO4)，用磷酸和氢氧化钾pH值到6.5，过滤灭菌，4℃保存；2.2.8 酵母转化常用培养基YPD完全培养基：Yeast Extract 10g/LBacteriological peptone 20g/LGlucose 20g/L(固体培养基1.5%琼脂)115℃ 20min；100mL选择固体培养基MD平板的配制：向80mL水中加入琼脂粉1.5g，121℃灭菌20min然后待温度降至60℃在超净台上加入10mL 10×YNB(134g/L)，10mL 10×D (20g/L)，500×B0.2mL(4×10-4)100mL选择固体培养基MM平板的配制：向80mL水中加入琼脂粉1.5g，121℃灭菌20min然后待温度降至60℃在无菌超净台上加入10mL 10×YNB(134g/L)，10mL 10×M(5%的甲醇)，500×B0.2mL(4×10-4)2.2.9 酵母诱导培养基100mL诱导表达培养基BMGY的配制：70mL水中加入1g Yeast Extract，2g Bacteriological Peptone，高压灭菌20min 后待温度降至60℃在超净台上加入10mL 10×YNB(134g/L)，10mL 1M的磷酸盐缓冲液PH6.5，10mL 10×GY，500×B 0.2mL(4×10-4)；100mL诱导表达培养基BMMY的配制：70mL水中加入1g Yeast Extract，2g Bacteriological peptone，高压灭菌20min 后待温度降至60℃在超净台上加入10mL 10×YNB(134g/L)，10mL 1M的磷酸盐缓冲液PH6.5，10mL 10×M，500×B 0.2mL(4×10-4)；。
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毕赤酵母表达的培养基配制［5］2.1 LB（Luria－Bertani）培养基：Trypton l％Y east Extract 0.5％NaCl l％PH 7.0制作平板时加入2％琼脂粉。
121℃高压灭菌20min。
可于室温保存。
用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / ml。
2.2 LLB（Low Salt LB）培养基：Trypton l％Y east Extract 0.5％NaCl 0.5％PH 7.0制作平板时加入2％琼脂粉。
121℃高压灭菌20min。
可于室温保存数月。
用于培养pPICZαA 原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeocin 25ug / ml，可以4℃条件下保存1～2周。
2.3 YPD （又称YEPD）Y east Extract Peptone Dextrose Medium，（Y east Extract Peptone Dextrose Medium，酵母浸出粉/胰蛋白胨/右旋葡萄糖培养基）Trypton 2%dextrose (glucose) 2%+agar 2%+Zeocin 100 μg/ml液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。
加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。
2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Y east Extract Peptone Dextrose Medium）：yeast extract 1%peptone 2%dextrose (glucose) 2%sorbitol （山梨醇）1 M+agar 2%+ Zeocin 100 μg/ml不管是液体YPDS培养基，还是YPDS + Zeocin 培养基，都必须存放4℃条件下，有效期1～2周。
2.5 MGYMinimal Glycerol Medium （最小甘油培养基）（34%YNB；1%甘油；4*10-5%生物素）。
将800ml灭菌水、100ml的10*YNB母液、2ml 的500*B母液和100ml的10*GY母液混匀即可，4℃保存，保存期为2个月。
2.6 MGYHMinimal Glycerol Medium + Histidine （最小甘油培养基+ 0.004%组氨酸）在1000ml的MGY培养基中加入10ml的100*H母液混匀，4℃保存，保存期为2个月。
2.7 RDRegeneration Dextrose Medium （葡萄糖再生培养基）（含有：1mol/L的山梨醇；2%葡萄糖；1.34%YNB；4*10-5%生物素；0.005%氨基酸）1. 将186g的山梨醇定容至700ml，高压灭菌；2. 冷却后于45℃水浴；3. 将100ml的10*D、100ml的10*YNB；2ml的500*B；10ml的100*AA等母液和88ml 无菌水混匀，预热至45℃后，与步骤2 的山梨醇溶液混合。
4℃保存。
2.8 RDHRegeneration Dextrose Medium + Histidine （葡萄糖再生培养基+ 0.004%组氨酸）在RD培养基配制的第三步中，在加入10ml的100*H母液，同时无菌水的体积减少至78ml 即可，其余配制方法与RD相同。
4℃保存。
2.9 RD及RDH平板的制备1. 将186g的山梨醇和15-20g琼脂粉定容至700ml，高压灭菌；冷却后于60℃水浴；2. 参照RD/RDH液体培养基配制的步骤4，将100ml的10*D、100ml的10*YNB；2ml的500*B；10ml的100*AA等母液、（10ml的100*H母液）和88（78）ml无菌水混匀，预热至45℃后，与步骤1的山梨醇/琼脂液混匀；3. 迅速制备平板。
4℃可保存数月。
2.10 RD及RDH 的TOP 琼脂的制备（常用于酵母菌的包被）1.将186g的山梨醇和7.5~10g琼脂粉定容至700ml，高压灭菌；冷却后于60℃水浴；2.参照RD/RDH液体培养基配制的步骤4，将100ml的10*D、100ml的10*YNB；2ml的500*B；10ml的100*AA等母液、（10ml的100*H母液）和88（78）ml无菌水混匀，预热至45℃后，与步骤1的山梨醇/琼脂液混匀；3.将该TOP琼脂置于45℃水浴冷却、保温，备用。
2.11 MD与MDHMinimal Dextrose Medium +（Histidine）最小葡萄糖培养基+（0.004 %组氨酸）（含有：1.34%YNB；；4*10-5% 生物素；2%葡萄糖）1. 100ml的10*YNB；2ml的500*B和100ml10*D母液，用800ml的无菌水定容至1000ml 即可；2. 如配制MDH，可在上述的MD中加入10ml的100*H即可；3. 如配制平板，可无菌水的灭菌前，加入15~20g的琼脂。
4℃可保存数月。
2.12 SOC培养基：Trypton l％Y east Extract 0.5％NaCl 0.05％Glucose (1mol / L) 2%121℃高压灭菌20min，冷却后，4℃保存2.13 MM培养基：M9母液：64g磷酸氢二钠，15g磷酸二氢钾，2.5g氯化钠，5.0g氯化铵加1L水灭菌取M9母液200ml加水700ml,加2ml1mol/l已灭菌的硫酸镁，加100微升已灭菌的1mol/l氯化钙（可加可不加）。
注意硫酸镁和M9母液要分开灭菌不然会有沉淀。
在M9培养基基础上添加0.5%葡萄糖即为MM培养基。
2.14 BMGY /BMMY培养基：酵母粉：1.0克，蛋白胨：2.0克，YNB：1.34克，0.1mol/L pH6.0(或者pH7.0)磷酸缓冲液，甘油：1.0毫升，加蒸馏水到100mL2.15 BMM培养基，全称：Buffered minimal methanol 即最小缓冲甲醇培养基，常用于表达分泌型蛋白的培养基。
配制：100mM pH6.0磷酸钾 1.34%YNB 4×10-5%生物素0.5%甲醇1. 灭菌700ml 水，2. 冷至室温，加入下列：100ml 1M pH6.0磷酸钾缓冲液, 100ml 10×YNB, 2ml 500×B, 100ml 10×M3. 放置于4 度，可放2 个月10×YNB （13.4%酵母氮源碱（YNB）含硫酸铵不含氨基酸）溶解134gYNB于1000ml水中，过滤除菌，加热至YNB 完全溶解，存于4 度。
或者用34gYNB （不含硫酸铵不含氨基酸），100g 硫酸铵进行配制，可放1年。
注意毕赤酵母在高浓度YNB 下生长更好。
YPD：最基本的培养用；BMGY：诱导表达前培养用；BMMY：诱导表达用；MD：电转化后筛选his＋用。
YEPD是不能代替BMGY的，因为有葡萄糖，这样残留的葡萄糖会影响下一步的诱导表达。
不过有一种方法是可行的，就是用YPG培养基代替，只是把YEPD中的葡萄糖用3%的甘油代替，也可以降低成本。
摇瓶毕竟不能和发酵罐比，甘油残余会抑制甲醇利用。
BMGY、BMMY灭菌后才能加甲醇、磷酸钾、生物素。
配制BMMY时也没必要用5%过滤除菌的甲醇，在灭菌后使用前加100%甲醇至你要的浓度。
YNB可以高压灭菌，没问题的，也可以0.22um过滤处理，天冬氨酸和苏氨酸要待培养基高压灭菌后加入；配YPD时可以加入YPD一起灭菌，但时间不能太长，温度不能太高，一般121-125度12-15分钟足够了。
若时间过长，温度过高，可能导致YPD焦化。
glucose和含氮化合物在一起容易产生美拉德反应，这是配制培养基中的禁忌。
颜色很深的话，基本不能使用了。
或者含有葡萄糖和/或YNB的培养基108度35min高压灭菌。
小量发酵其实可以把培养基成分中的YNB和生物素去除，培养基价格便宜，操作又方便，可以直接灭菌，效果也很好（效果不比含YNB的差）。
如果是用自己配置的培养基，如玉米浸提液、麦芽浸提液、麦麸浸提液等等，可以不用换液，采取添料来维持酵母对培养基的营养需要。
用无机盐进行大规模发酵，更省钱。
大规模发酵时，甲醇的流加速度增加不要太快。
另外使用纯氧并不昂贵，在武汉买个钢瓶600元左右，一瓶纯氧20元。
一个批次100h左右估计3－4瓶氧气。
关于Tryptone和Peptone的选择：1）用培养E.coli的Tryptone替代Peptone对有些酵母菌可以,例如一般的表达酵母.但是对有酵母菌些绝对不行.例如做双杂交的AH109,Y187之类表达酵母，根本就长不好．2）Tryptone和Peptone虽然都是营养胨，但营养成分不一样．即使是一般的表达酵母可以在Tryptone生长，生长状态也没有在Peptone中好．但tryptone和peptone就是含量上有点不同外，其他没什么区别，用peptone的目的不是为了提供氮源，提供氮源的是培养基里面的YNB。
3）如果要求不高，一般使用也还凑合．尽可能的用Peptone，difco公司的，晶美公司代理的，甚至是其它国产的蛋白胨都可以很正常的培养绝大多数酵母菌．4）用含Peptone的培养基颜色很深，纯化表达蛋白时颜色要去掉，所以还要进行麻烦的后续处理。
而改用Tryptone后，培养基颜色变得很浅，和LB（液体）颜色差不多，后续处理要简单些。
invitrogen说明书说peptone的作用是防止目的蛋白被一些酶类水解，加入peptone 的目的就是竞争性抑制目的蛋白的水解，因为peptone是一些小的短肽，是一些酶作用的底物。
培养毕赤酵母,书上说BIOTIN储液是水溶液,但事实上BIOTIN很难溶于水, 可以稍稍水浴加热一下。
配制500×BIOTIN stock solution（0.02％）有这么3种方案：1）、懒人是将Biotin直接溶在去离子水中，放过夜，基本就能溶；2）、急性子是将溶液配成0.02N的NaOH，就很容易溶解了；3）、水浴加热，温度不能高于50度。
D－生物素是具有生物活性的生物素，也就是vitaminH。
在毕赤酵母代谢过程中，作为多种酶的辅基起作用。
天然培养基中一般可以不单独添加，因为YNB中、酵母粉、蛋白胨中均含有一定量的生物素，但是做高密度发酵还是必须要添加的。
MD、MM属于基础培养基，没有哪种成分会含有微量生长因子（如生物素）。
所以肯定要加的。
附：无机培养基配方BSM无机培养基：85% H3PO4 26.7ml/LCaSO4 ?2H2O 0.93g/LK2SO4 18.2g/LMgSO4?2H2O 14.9g/LKOH 4.13g/L甘油40g/LPMT1 4.0ml/L100%氨水调pH5.0(1瓶50ml加800ul氨水)或10g/L硫酸铵调pH5.0，氨水用于上罐调pH（便宜，方便）。