细胞裂解
细胞裂解的方法
细胞裂解的方法引言细胞裂解是生物学和生物工程领域中非常重要的实验技术，用于破坏细胞膜，释放细胞内的有机物质和细胞器。
细胞裂解的方法有多种，本文将详细介绍几种常用的细胞裂解方法。
物理方法高压破碎法高压破碎法是通过机械力将细胞迅速破碎，常用的设备有高压均质机和球磨机。
高压均质机通过高压力和剪切力将细胞破碎，适用于细胞数量较少的样品。
球磨机则是通过球体的碰撞和摩擦力将细胞破碎，适用于大批量的样品处理。
超声波法超声波法利用超声波的机械振动作用将细胞破碎。
超声波振荡产生的高压缩力和剪切力可以破坏细胞膜和细胞壁，释放细胞内的成分。
超声波法操作简便，对样品的污染较小，常用于小型实验室中。
静电法静电法是利用静电场的力作用将细胞破碎。
细胞在强静电场的作用下，细胞膜受到外力破坏，细胞内容物溢出。
静电法对样品量大、浓缩度低的样品处理效果较好，但操作较为复杂，需要专门的设备。
化学方法渗透裂解法渗透裂解法是利用高渗透溶液将细胞破坏。
高渗透溶液能够快速渗透进入细胞内，造成胞内外浓度差，从而使细胞溶胀破裂。
常用的渗透溶液有甘油、尿素和高浓度盐溶液。
酶解法酶解法是利用酶的作用将细胞破坏。
酶可以降解细胞膜和细胞壁的主要成分，从而导致细胞破裂。
常用的酶有蛋白酶、葡萄糖酶和纤维素酶。
酸碱裂解法酸碱裂解法是利用强酸和强碱的腐蚀作用将细胞破坏。
酸性条件下，细胞膜和细胞壁的主要成分被腐蚀，细胞破裂。
碱性条件下，细胞膜和细胞壁的脂质成分被皂化，导致细胞破裂。
生物方法热裂解法热裂解法是利用高温将细胞破坏。
高温会导致细胞膜和细胞壁的熔化，使细胞破裂。
热裂解法操作简单，但温度和时间的控制较为关键。
冻融裂解法冻融裂解法是利用低温冷冻和溶解的循环作用将细胞破坏。
冻结过程中，水结晶会导致细胞膜和细胞壁破裂，溶解过程中溶液的渗透作用进一步破坏细胞。
震荡法震荡法是利用机械震动将细胞破碎。
通过高频率的震动作用，细胞膜和细胞壁会受到破坏，释放细胞内的物质。
震荡法操作简便，但需要注意震动频率和时间的控制。
细胞破碎的名词解释
细胞破碎的名词解释细胞，作为生物体的基本结构和功能单位，广泛存在于生物界的各个领域。
从单细胞的原核生物到多细胞的复杂生物系统，细胞在构建和维持生命过程中起到了至关重要的作用。
然而，有时候，细胞会经历破碎这一过程，这是细胞学中一个具有重要意义的现象。
细胞破碎，又被称为细胞溶解、细胞裂解或细胞破裂，是指细胞结构完整地被瓦解并释放细胞内的内容物。
这一过程通常在特定的生理或病理情况下发生，在整个生命过程中具有重大影响，并在多个领域得到广泛研究。
细胞破碎可以采取不同的形式和机制，其中包括细胞溶解和细胞裂解。
细胞溶解是细胞膜破裂，细胞内部的各种细胞器被释放到细胞外环境中，细胞溶解往往发生在细胞死亡或损伤的过程中。
而细胞裂解则是指细胞内部膜系的破裂，导致细胞内的亚细胞结构和细胞器被释放出来。
细胞裂解常见于实验室研究和技术操作中，以获得特定的细胞组分。
细胞破碎有多种触发机制。
其中一个重要的机制是细胞凋亡，也被称为程序性细胞死亡。
细胞凋亡是一个高度调控的过程，在生理和病理情况下发挥重要的作用。
在细胞凋亡中，细胞会收缩和凝聚，细胞膜表面的脂质二层会破裂，释放出凋亡体，这些细胞内的有害物质最终会被引发和清除。
细胞破碎还可以通过机械力、热力以及化学刺激等方式来实现。
在生理和病理情况下，细胞受到外部刺激或压力时，细胞膜的完整性可能会受到破坏，导致细胞破碎。
此外，高温、酸碱度的改变，以及化学物质的作用也可能导致细胞破碎。
细胞破碎在生物学领域中有着广泛的应用。
例如，在实验室中，研究者通常需要获得特定的亚细胞结构或细胞器，以便进行进一步的研究和分析。
细胞破碎技术可以帮助研究者获得所需的细胞组分。
此外，在生物工程和生物医学研究中，细胞破碎也被应用于细胞组织工程、药物递送和基因治疗等领域。
然而，对于细胞破碎的机制和影响还有很多需要深入研究的问题。
例如，细胞破碎对周围环境的影响以及细胞破碎的遗传稳定性等问题需要进一步研究。
同时，对于细胞破碎的控制和调控机制的研究也具有重要意义。
常用脱细胞试剂及技术
常用脱细胞试剂及技术细胞是生物体的基本组成单位，研究细胞的形态和功能对于理解生物学过程具有重要意义。
然而，有些研究需要使用脱细胞技术，即去除细胞内部的细胞器和细胞核，以便研究细胞外部的结构和功能。
常用的脱细胞试剂及技术包括细胞裂解、离心、裂解液和脱细胞剂等。
一、细胞裂解技术细胞裂解是脱细胞的第一步，它可以通过物理或化学方法实现。
常见的物理方法包括超声波破碎法和高压破碎法。
超声波破碎法利用超声波的高能量震荡作用，使细胞破碎。
高压破碎法则是利用高压力将细胞压碎。
这些物理方法可以快速有效地裂解细胞，但可能会对细胞内部的分子结构造成一定的损伤。
化学方法包括冻融法和化学裂解法。
冻融法是将细胞冷冻后迅速解冻，通过冻融过程中的温度变化来破坏细胞膜和细胞器。
化学裂解法则是使用化学试剂，如表面活性剂或酶，来破坏细胞膜和细胞器。
这些化学方法相对温和，对细胞内部分子结构的损伤较小。
二、离心技术离心是脱细胞过程中的关键步骤，它可以通过离心机将细胞碎片和细胞器分离。
离心的基本原理是利用离心力的作用，使重质组分在离心管底部沉积，而轻质组分在上层悬浮。
常用的离心方法包括差速离心和密度梯度离心。
差速离心是根据细胞器的大小和密度差异进行分离。
离心过程中，细胞器会根据其大小和密度的不同在不同的离心力下分层沉积，从而实现细胞器的分离。
密度梯度离心是根据细胞器的密度差异进行分离。
在离心管中制备密度梯度，离心过程中，细胞器会根据其密度的不同在不同密度的梯度上分层沉积，从而实现细胞器的分离。
三、裂解液裂解液是细胞裂解过程中的重要试剂，它可以破坏细胞膜和细胞器，释放出细胞内的分子。
常用的裂解液包括裂解缓冲液、蛋白酶抑制剂和核酸酶抑制剂等。
裂解缓冲液的选择要根据实验的需要来确定。
常见的裂解缓冲液包括生理盐水、磷酸缓冲液和Tris缓冲液等。
蛋白酶抑制剂可以避免蛋白酶在细胞裂解过程中的活性，保护细胞内的蛋白质不被降解。
核酸酶抑制剂则可以避免核酸酶降解细胞内的核酸。
分离细胞器的方法
分离细胞器的方法分离细胞器是生物学研究中常用的实验方法之一，它可以帮助科学家们更好地了解不同细胞器的功能和结构，进一步揭示细胞的工作机理。
本文将介绍几种常见的细胞器分离方法。
一、细胞裂解法细胞裂解法是最常用的细胞器分离方法之一，其基本原理是通过破坏细胞膜，释放细胞器到细胞质中。
常见的细胞裂解方法有三种：机械裂解、超声波裂解和温和洗脱。
机械裂解是通过机械力破碎细胞，如玻璃棒破碎、高压均质器等。
超声波裂解是利用超声波的机械能来破坏细胞膜，释放细胞器。
温和洗脱是将细胞置于温和的缓冲液中，使细胞膜溶解，释放细胞器到溶液中。
二、差速离心法差速离心法是一种通过不同离心速度来分离不同细胞器的方法，其原理是根据细胞器的大小和密度的不同，使其在不同的离心速度下沉积和分离。
离心过程中，较重的细胞器会沉积到离心管底部，而较轻的细胞器则会沉淀到上层。
通过逐步增加离心速度，可以分离得到不同种类的细胞器。
三、密度梯度离心法密度梯度离心法是一种根据细胞器密度差异来分离细胞器的方法，其基本原理是将细胞或细胞裂解液加载到具有密度梯度的离心管中，通过离心使不同密度的细胞器均匀分布在密度梯度上。
离心后，细胞器会沉积到相应密度梯度的位置上，从而实现分离。
常用的密度梯度物质包括葡聚糖、硝基苯基乙醇和碘巴比妥酸钠等。
四、冷冻断裂法冷冻断裂法属于特殊的细胞分离方法，它的原理是通过将生物样品迅速冷冻至极低温度，然后通过冷冻样品的断裂面来分离细胞器。
冷冻断裂法可以保持细胞的原始结构和组织，使科学家们能够观察到细胞器的真实形态和互相之间的关系。
冷冻断裂法在电子显微镜下应用较为广泛。
综上所述，细胞器分离方法有很多种，科学家们可以根据实验需求选择适合的方法。
这些方法可以帮助我们深入研究细胞器的功能和结构，对于揭示细胞的工作机理和相关疾病的病理过程具有重要的意义。
希望通过不断改进和创新，能够开发出更加高效和准确的细胞器分离方法，为生物学研究提供更好的工具和技术支持。
原核蛋白表达细胞裂解方法
原核蛋白表达细胞裂解方法原核蛋白表达细胞裂解是获取目标蛋白的重要步骤之一，以下是具体方法：一、试剂准备1.Triton X-100：1 % (w/v)，溶于异丙醇中；2.EDTA：0.5 mol/L，pH 8.0；3.100 mmol/L Tris-HCl，pH 8.0；4.150 mmol/L NaCl；5.1 mmol/L PMSF；6.50 μg/mL溶菌酶。
二、细胞裂解1.将表达目标蛋白的细菌接种于适量的LB培养基中，37℃振荡培养至对数生长期；2.将细菌转移到离心管中，离心收集菌体；3.用预冷的PBS洗涤菌体2次，去除上清；4.重悬菌体于适量的细胞裂解缓冲液中，加入溶菌酶，使终浓度为50 μg/mL，37℃孵育1 h；5.加入Triton X-100，使终浓度为1 % (v/v)，轻柔混匀，冰浴30 min；6.4℃离心，转速为12000 g，离心15 min；7.取上清液，即为包涵体。
三、洗涤包涵体1.将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的洗涤液(由2 % Triton X-100、20 mmol/L Tris-HCl、pH 8.0和250 mmol/L NaCl配制而成)，轻柔混匀，冰浴30 min；2.4℃离心，转速为12000 g，离心15 min；3.重复洗涤2-3次，直至洗涤液不再浑浊。
四、包涵体溶解与重折叠1.将洗涤后的包涵体悬浮于适量的溶解液(由2 mol/L尿素、50 mmol/L Tris-HCl、pH 8.0和1 mmol/L DTT配制而成)中，4℃孵育过夜；2.4℃离心，转速为12000 g，离心15 min；3.取上清液，即为溶解后的包涵体溶液。
重折叠操作是将溶解后的包涵体溶液进行透析，去除尿素，使蛋白质重新折叠成天然构象。
五、蛋白质纯化根据目标蛋白的性质选择合适的纯化方法进行进一步纯化。
常用的纯化方法包括离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等。
在纯化的过程中，可以加入适量的还原剂(如DTE)和氧化剂(如H2O2)来维持蛋白质的稳定性。
细胞裂解
Buffer B
5 mM HEPES
1.5 mM MgCl2
0.2 mM EDTA
0.5 mM DTT
26% glycerol (v/v)， pH 7.9
2. 核蛋白裂解操作步骤
Method
细胞裂解时间把握问题：孔板里细胞用PBS洗2次后，加入细胞裂解液，然后去测总蛋白含量和酶的活力，不知道细胞要裂解到什么程度?
答：因为所用的细胞类型不一样，所以实验的条件也需要摸索，建议这样来做：加入细胞裂解液后，不同时间取样，以时间和总蛋白含量和酶的活力作曲线，这样就可以找到裂解的最佳时间，仅供参考。
一、机械裂解法主要有以下两种：
1. 热休克(Thermal shock)，既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成(freezing and thawing)，。原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或-20 ℃ 冰上进行，解冻可以在37、50、65 或100 ℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。
1. Prepare 1 ml of buffer A with added cocktail of usual inhibitors from frozen stock and store on ice.
2. Add 500 μl of buffer a per large petri dish on ice and scrape thoroughly， leave on ice for 10 min.
细胞裂解方法
细胞裂解方法
细胞裂解是指将细胞的细胞膜和细胞器溶解，使得细胞内的生物大分子如蛋白质、核酸等能够释放出来。
常用的细胞裂解方法有以下几种：
1. 高效液体剪切：将细胞悬浮液通过高速搅拌或高压通过狭窄通道，利用液体剪切力破碎细胞膜。
2. 超声波裂解：利用超声波的震荡作用，使细胞膜和细胞器发生振动和破裂，释放内部分子。
3. 冻融法：将细胞悬浮液在低温下冷冻，然后迅速解冻，细胞内液体的膨胀和收缩作用导致细胞膜破裂。
4. 增强溶解法：在细胞裂解缓冲液中添加清洁剂或洗涤剂如Triton X-100、SDS等，使细胞膜溶解。
5. 高压裂解：利用高压力将细胞悬浮液通过细孔或管道，细胞膜及细胞器因细孔的突然变化而破裂。
6. 酶切法：利用特定的酶如裂解酶、蛋白酶等作用于细胞膜和细胞器，使其溶解。
以上是常用的细胞裂解方法，根据细胞类型和需要纯化的分子类型，可选择合适的方法。
蛋白质提取操作流程(细胞裂解)
蛋白质提取操作流程(细胞裂解)1. 引言在生物学和生物化学研究中，蛋白质提取是一项重要的实验操作。
细胞裂解是蛋白质提取的第一步，它是将细胞破坏并释放细胞内的蛋白质。
本文档旨在说明细胞裂解的操作流程，以帮助研究人员正确、高效地执行该实验步骤。
2. 实验材料- 细胞悬液- 低渗盐溶液 (如PBS)- 细胞裂解缓冲液（含有蛋白酶抑制剂）- 离心管- 超声细胞破碎仪或高压胞破机3. 实验步骤3.1 样品制备将培养的细胞收集到离心管中，尽量避免细胞沉积。
3.2 细胞洗涤使用低渗盐溶液（如PBS）洗涤细胞，去除培养基中的蛋白质、代谢产物和细胞碎片。
3.3 细胞裂解缓冲液添加将细胞沉淀洗涤后，用适量的细胞裂解缓冲液悬浊细胞。
细胞裂解缓冲液含有蛋白酶抑制剂，以防止蛋白质被降解。
3.4 细胞破碎将细胞裂解液置于超声细胞破碎仪或高压胞破机中，进行细胞破碎。
超声细胞破碎仪可通过高频声波震荡来破坏细胞膜，释放蛋白质。
高压胞破机通过高压力将细胞挤压破碎。
3.5 细胞碎屑去除使用离心机离心细胞裂解液，去除其中的细胞碎屑和细胞核，以获取纯净的蛋白质溶液。
3.6 蛋白质收集收集上一步离心后的上清液，其中包含提取的蛋白质。
将上清液转移至新的离心管中，即得到蛋白质溶液。
3.7 蛋白质浓度测定使用比色法、BCA法等方法对蛋白质溶液进行浓度测定，以获得蛋白质提取的量和浓度信息。
4. 结论通过细胞裂解的操作流程，可以高效地破坏细胞膜，释放细胞内的蛋白质。
正确的细胞裂解步骤可以确保蛋白质提取的质量和数量。
然而，在实验中需要注意的是，不同类型的细胞可能需要不同的裂解条件。
因此，在进行蛋白质提取实验时，需要根据具体情况优化裂解缓冲液的成分和细胞破碎的方法。
希望本文档能为您的实验提供有价值的指导和参考。
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我以前做蛋白大量表达超声破碎时，总体积为200ml，功率300瓦，超3秒，停3秒，60次为一个循环，每个循环之间停5min，共作了3个循环，效果很好。
不知你的“原来的80倍”是多少，如果和我的差不多，是要延长总时间，但要注意样品要放在冰上，中间停一会，防止产生的热量太多，使蛋白变性。
我的方案是：1 细胞先用无菌PBS洗二次；2 吹下细胞后，4度12000rpm/min离心10min，再用无菌PBS悬浮，重复离心一次；3 常规超声波处理。
注意事项：1 全部处理过程一定要在冰上进行；2 超声波时，一定不要有泡沫产生；3 在冰上超声波处理。
由于上次求助无人回应，一气之下遍找资料，汇总出菌体/细胞裂解的常用方法和配方，希望能对其它求助兄弟有所帮助。
菌体/细胞裂解法汇总一、反复冻融法：1、将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。
/c?word=%B4%F3%B3%A6%3B%B8%CB%BE%FA%2C%C1%D1%BD%E2&url=http%3A//www%2E bioon%2Ecom/experiment/mb/mb1/200410/80878%2Ehtml&b=0&a=3&user=baidu2、至少3次以上冻溶。
/bbs/actions/archive/post/3895899_0.html3、IFCC推荐法：收集细胞悬液，4℃低温离心（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-200C 冷冻30 min，370C 解冻，如此反复3次，可形成细胞裂解液。
/bbs/actions/archive/post/252157_0.html4、用液氮冻融三四次就可以了，细胞冻住后，取出放37度水浴，溶解后震荡，再冻/dispbbs.asp?BoardID=89&ID=142945&replyID=597858&skin=1二、超声波处理法1、要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。
我的实验超声时间5秒、间隙时间10秒、工作次数20次。
/bbs/actions/archive/post/3895563_0.html2、每个样本超声时间5秒,每个间隔5秒,粉碎5次。
/bbs/actions/archive/post/3895899_0.html3、100ml菌液离心，用8ml缓冲液悬浮，加8mg溶菌酶，冰浴30min，然后超声处理。
750W 40％功率。
5秒超声，9秒间隔。
超声至少90min。
/bbs/actions/archive/post/1861187_0.html4、综合冻融和超声的方法：1500g离心，弃除上清。
冰上，用小体积PBS重悬细胞。
将重悬液集中，1500g离心浓缩，弃除上清。
液氮骤冷。
用约5倍体积的PBS缓冲液重悬细胞，并搅拌。
可选择：4℃下超声破碎细胞。
加入终浓度为0.25M的KCl，15mM的DTT。
4℃下111500g×60min离心裂解液。
取出上清。
过柱子。
Purification of GST-Fusion Proteins from E. coli-Alternate Protocol三、渗透法：冰冷的20 mmol/L Tris-Cl（pH8.0），2.5 mmol/L EDTA处理，冰浴放置10min。
《精编分子生物学实验指南》四、裂解液处理法：1、细胞裂解液：50 mmol/L Tris-Cl pH 6.8，100 mmol/L DTT，2% SDS，0.1%溴酚蓝，10%甘油。
SDS是阴离子型表面活性剂、极易促溶、强变性作用。
/bbs/actions/archive/post/1166442_0.html2、在loading buffer加SDS，100度5分钟，是变性方法。
SDS与蛋白等量结合，可以通过条带位移判断蛋白大小，考染不会影响结果。
/bbs/post/view?bid=65&id=4936753&sty=3&keywords=SDS+%C1%D1%BD%E23、如果是做小量菌液，跑PAGE胶看其表达情况的话，可以直接加蛋白loading buffer煮沸5分钟即可，需注意的是上样前要离心12000rpm至少5分钟，然后上样时，枪头别吸最底下的。
/bbs/actions/archive/post/2524891_0.html4、20毫升细胞裂解液配方:40 μL 0.5M EDTA (PH8.0)，4 ml 10% SDS，1 ml 1M Tris-cl(PH6.8)，14.96 ml 蒸馏水。
/bbs/actions/archive/post/196557_1.html5、我始终未明白楼主如果想收集全蛋白，而不考虑包涵体的话，为何要用超声呢？直接水煮不就可以了吗？/bbs/actions/archive/post/2492252_0.html6、将1ml菌离心弃上清，留大概50ul，再加50ul 2×上样缓冲液，煮10min，取20ul上样，就可以了。
/bbs/post/view?bid=65&id=4591035&sty=3&age=0&tpg=1&ppg=1#45910357、检测蛋白诱导：从培养的不同时期各取出1ml，12000g×1min离心。
将沉淀重悬于100ul 1×SDS上样缓冲液（50mM Tris-Cl （pH6.8），100mM DTT，2％SDS，0.1％溴酚蓝，10％甘油）中，100℃加热3min，然后12000g×1min离心。
上样15ul，6％SDS-PAGE电泳。
《分子克隆》P8268、5-10秒离心，弃除上清，用50ul蒸馏水重悬沉淀。
加入1ul PMSF，再加入50ul热的2×SDS上样缓冲液（100℃加热）。
迅速混匀后100℃加热3-5min。
将样品冰上放置（或-20℃放置），然后再溶解，煮沸1min。
离心30秒。
上样5ul进行SDS-PAGE电泳。
2×SDS上样缓冲液：250mM Tris-Cl，6.2％（w/v）DTT，8％SDS，0.002％（w/v）溴酚蓝，40％甘油。
Purification of GST-Fusion Proteins from E. coli。
9、裂解液：50mMTris-HCl(pH8.5~9.0)，2mMEDTA，100mMNaCl，0.5%TritonX-100，1mg/ml溶菌酶。
/c?word=%B4%F3%B3%A6%3B%B8%CB%BE%FA%2C%C1%D1%BD%E2&url=http%3A//www%2E bioon%2Ecom/experiment/mb/mb1/200410/80878%2Ehtml&b=0&a=3&user=baidu10、我们用NP40（NP40：NONIDET p-40 乙基苯基聚乙二醇，是一种非离子表面活性剂。
）加DTT和蛋白酶抑制剂裂解细胞，冰上放30－60min，然后13000rpm离心15min，取上清定量。
/dispbbs.asp?BoardID=89&ID=112749&replyID=421724&skin=111、裂解液配方是：50mmol/L Tirs-HCI (PH 8.0)，150mmol/L NaCI，0. 02% 叠氮钠，100μg/ml PMSF，1μg/ml Aprotinin，1% Triton X-100 ( or NP-40)。
/bbs/actions/archive/post/1168826_0.html12、对于组织培养中生长的细胞，最有效的裂解方法是用去污剂（表面活性剂）进行处理，溶解细胞膜并溶解蛋白质。
50mmol/L Tirs-HCl(PH 8.0)、150mmol/L NaCl、0. 02% 叠氮钠、100μg/ml PMSF、1μg/ml Aprotinin、1% Triton X-100 ( or NP-40) ，这种裂解液可能是最常用的裂解缓冲液。
/bbs/actions/archive/post/1172173_0.html13、细胞裂解液的主要目的：（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白变性使其稳定；（4）抑制蛋白酶活性。
推荐RIPA buffer:50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系），150 mM NaCl（等渗体系），1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），5 µg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），5 µg/ml Leupeptin （蛋白酶抑制剂），1% Triton x-100（破坏细胞），1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂），0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）。
/bbs/actions/archive/post/532062_0.html14、裂解buffer：50mM HEPES pH7.0，1mM 甘油，1mM DTT（还原剂），7M 尿素，2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解），1mM EDTA(金属鏊合剂），1mM PMSF，1mg/ml leupeptin，1mg/ml aprotinin，1mg/ml pepstatin(蛋白酶抑制剂），50mM NaF(ph7.0)（anti hemoaggulating），1mM Na3VO4(ph7.0)（inhibitor of phosphatases），2mM benzamidine（inhibitor of trypsin）。
/bbs/actions/archive/post/1049377_0.html15、可选择：取0.5ml诱导的细胞并离心2min。
弃除上清，用100ul 1×SDS上样缓冲液重悬，冰上放置。
6000rpm×10min离心培养物。
弃除上清，用10ml预冷的裂解液重悬沉淀。
液氮骤冷细胞或-20℃冷冻细胞。
在冷水中溶解细胞。
15秒、4次超声处理细胞。
冰浴降温。
4℃，9000g×30min离心。
取上清。
裂解液：5 mM DTT，15 mM KCl，5 mM MgCl2，50 mM HEPES, pH 7.9，1 mM EDTA，10 mg/ml溶菌酶（临用前加上DTT和溶菌酶）。