裂解液配制方法
组织裂解液和细胞裂解液如何配制
组织裂解液和细胞裂解液如何配制组织裂解液和细胞裂解液是在实验室中用于将组织或细胞中的生物分子（如蛋白质、核酸等）裂解或溶解的溶液。
这些液体通常包含一系列试剂和缓冲液，以帮助维持理想的酸碱平衡和溶解条件。
以下是组织裂解液和细胞裂解液常见的配制方法。
1. 常用的组织裂解液配方为RIPA裂解液（RIPA lysis buffer），其成分包括：- 50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）-150mM氯化钠（NaCl）- 1% NP-40或Triton X-100-0.5%钠脱氧胆酸或SDS-0.1%SDS-1mMEDTA-1mM苯甲硫酸酯（PMSF）2.配制方法：a. 称取所需量的Tris-HCl缓冲液和NaCl溶解于蒸馏水中；b. 加入适量的PMSF和其他表面活性剂（如NP-40、Triton X-100）；c.配制完毕后，pH应调整至理想值；d.将裂解液过滤或使用高速离心去除悬浮物。
细胞裂解液的配制：1.常用的细胞裂解液配方为RIPA裂解液（同组织裂解液配方）或RIPA缓冲液（不含表面活性剂），以避免破坏裂解液中的蛋白质。
2.配制方法：a.同组织裂解液的步骤1；b.不加入表面活性剂，方便后续蛋白质的分析。
同时，裂解液的配制可以根据实验需要做出适当更改，以满足特定的研究目的和条件。
在裂解液的配制过程中，需要注意以下几点：1.所选择的缓冲液的pH应调整到适合所需实验的范围内，以确保溶液的稳定性；2.表面活性剂的添加量应适中，以满足蛋白质溶解的需要，但过多的添加会造成裂解液的稀释和稳定性下降；3.裂解液的配制应注意在低温下进行，以防止试剂的降解和活性的损失；4.在裂解液的使用过程中，最好将裂解液与细胞/组织充分接触，并且较长时间地孵育，以满足完整的裂解过程。
组织裂解液
1.组织裂解液(500ml)：1MTris.Cl (PH=8) 25ml;0.5M EDTA(PH=8) 100ml; 2M Nacl 25ml;加入这三者后再加双蒸水定容至450ml,再进行高压灭菌，等冷却后再加入10%SDS(PH=7.2) 50ml（SDS不能高压灭菌）配成500ml组织裂解液。
2.1M Tris.Cl (PH=8)：称取60.57g Tris溶于400ml双蒸水，用Hcl调PH至8.0，定容至500ml，高压灭菌。
3.0.5M EDTA:称取EDTA.Na2.2H2o 93.05g溶于400ml双蒸水中，用氢氧化钠调PH至8.0，定容至500ml，高压灭菌。
4.10% SDS称取SDS50g,溶于500ml双蒸水中，高压灭菌。
5.2M Nacl:称取Nacl58.44g，溶于500ml双蒸水中，高压灭菌。
您好！这周已经过去了，在这里向你汇报下这个礼拜的工作情况及甲基化实验的一般思路。
本周工作情况：1.帮洪渊做了PCR实验，有关SOX9的，其中有两个有问题，做完洪渊拿去测序。
2.帮助徐盼提取RNA(十一期间抚州采的样）26个样3.对肝、脾、肾、膀胱、大脑、小脑（赵雪艳的样）进行匀浆，准备做ELISA试验。
甲基化实验：目的：转FSHb基因猪甲基化水平是否异常，对转基因猪有什么影响（对于具体目的有点不清楚）方法：转FSHb基因阴性猪与阳性猪甲基化水平进行对比实验思路：1.对转FSHb基因阴性猪与阳性猪脏器（心肝脾肺肾等，选取有关脏器还是？）做甲基化水平检测。
2.选取不同日龄（同一猪）进行甲基化水平检测，看随日龄的增加，甲基化水平发生怎样变化（正相关或负相关）？3.转FSHb基因猪外源FSHb基因甲基化异常（高甲基化，导致FSHb基因沉默，功能缺失）与转入外源基因后是否引起内源基因甲基化异常（某些功能异常）？4..转FSHb基因猪发生低甲基化还是高甲基化？过表达还是基因沉默？5.外源基因整合位点甲基化水平？6.启动子区域甲基化？7.CPG岛不易发生甲基化，转基因猪会否发生高甲基化？实验操作：1.DNA的提取及亚硫酸氢盐转化基因组 DNA（ EZ DNAMethylation-Gold TM Kit 试剂盒处理）2.使用数据库寻找CPG岛，设计亚硫酸盐测序 PCR引物，做MS-PCR3.PCR 扩增产物回收、连接、转化和测序鉴定4.提取mRNA，验证甲基化异常对转录的影响5.做蛋白有关实验，进一步验证甲基化异常对蛋白表达的影响（是否导致基因沉默，造成功能缺失）问题：1.某些数据库的使用及分析软件的应用2.是对基因组进行甲基化水平检测还是部分染色体基因进行甲基化检测或者与FSH基因有关进行甲基化检测3.目前思路还不是很清晰，有点理不顺，还有点混乱。
全蛋白提取组织裂解液配方
全蛋白提取组织裂解液配方------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxxWestern-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方1.储备液1.110% Triton X-100Triton X-100 10ml蒸馏水90ml混合后37℃-40℃水浴中2-3hr，使其充分混匀1.210% 去氧胆酸纳去氧胆酸纳1g蒸馏水10ml避光保存1.3200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)异丙醇5ml分装，-20℃保存1.4100mmol/L EDTA蒸馏水10ml1.51mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)亮抑酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.61mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)抑蛋白酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.71mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)胃蛋白酶抑制剂2mg甲醇2ml分装，-20℃保存2.工作液2.1Tris-base (50mmol/L，pH 7.4)：Tris-base 605mgNaCl 900mg蒸馏水75ml2.210% Triton X-100 10mL2.32.4100mmol/L EDTA 1mL2.5用前加入：1mg/mL亮抑酶肽100μl1mg/mL 抑蛋白酶肽100μl1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂100μl200mmol/L PMSF 500μl各成分的终浓度Triton X-100 1%去氧胆酸纳0.25%NaCl 150mmol/L EDTA 1 mmol/L 亮抑酶肽1μg/mL抑蛋白酶肽1μg/mL胃蛋白酶抑制剂1μg/mL PMSF 1mmol/L。
如何配置细胞裂解液
如何配置细胞裂解液
组织裂解液（全细胞蛋提取）：
1：Tris-HCL 50mmoL/L PH 7.4
2: Nacl 150 mmoL/L
3: 去氧胆酸钠0.25%
4：NP-40或Triton-x-100 1%
5: EDTA 1 mmoL/L
6：PMSF 1 mmoL/L
7：Aprotinin 1μg/ml
8: leupeptin 1μg/ml
9: pepstain 1μg/ml
其中:7,8,9作用不持久，要使用前加入。
细胞裂解液：1：NP-40裂解体系：150 mmoL/L Nacl 1.0%NP-40或Triton-x-100
50 mmoL/L Tris(PH8.0)
2：RIPA裂解体系：150 mmoL/L Nacl
1.0%NP-40或Triton-x-100
0.5%脱氧胆酸钠
0.1%SDS
50 mmoL/L Tris( ph8.0)
如何配置细胞裂解液 如何配置细胞裂解液 组织裂解液(全细胞蛋提取): 1:tris-hcl 50mmol/l ph 7.4 2: nacl 150 mmol/l 3:去氧胆酸钠0.25% 4:np-40或triton-x-100 1% 5: edta 1 mmol/l 6:pmsf 1 mmol/l 7:aprotinin 1μg/ml 8: leupeptin 1μg/ml 9: pepstain 1μg/ml 其中:7,8,9作用不持久,要使用前加入. 细胞裂解液:1:np-40裂解体系:150 mmol/l nacl 1.0%np-40或triton-x-100 50 mmol/l tris(ph8.0) 2:ripa裂解体系:150 mmol/l nacl 1.0%np-40或triton-x-100 0.5%脱氧胆酸钠 0.1%sds 50 mmol/l tris( ph8.0) 下载文档原格式( word原格式 ,共1页)
磁珠法裂解液配方
磁珠法裂解液配方
磁珠法裂解液配方可能会因具体的应用和实验需求而有所不同。
一般来说，磁珠法裂解液的配方包括一些能够裂解细胞、保护核酸免受氧化、避免DNA自身二聚体形成的试剂。
一种常见的磁珠法裂解液配方包括以下成分：
(1)0.2～0.4N氢氧化钠
(2)0.3～0.6M氯化钾
(3)0.01～0.05%N-月桂酰肌氨酸钠
(4)5mM EDTA
(5)0.3～0.6M Tris-HCL
(6)1～2%曲通X-100
请注意，这只是一个常见的配方示例，实际的配方可能会根据具体的应用和实验需求进行调整。
在配置和使用磁珠法裂解液时，建议遵循相关的实验指南和安全操作规程，以确保实验的准确性和安全性。
ripa裂解液
RIPA裂解液产品简介：RIPA主要从动物组织和动物细胞中抽取可溶性蛋白。
组成：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40,0.1% SDS.(配有一支PMSF).使用RIP A裂解达到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。
由于含有较高浓度的去污剂，不能用Bradford法测定RIPA裂解后的蛋白浓度。
保存：4℃;避光RIPA简介RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。
RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
关于不同的RIPA裂解液以及我们生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考附录。
RIPA成分deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate（焦磷酸钠），25mM β-glycerophosphate （β-甘油磷酸钠），1mM EDT A，1mM Na3VO4（钒酸钠），0.5 ug/ml leupeptin(l亮肽素)等多种抑制剂。
可以有效抑制蛋白降解。
RIPA裂解液(中)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDT A，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。
RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDT A，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。
DNA裂解液配制
DNA裂解液配制
配制100mL裂解液：
1M Tris-Hcl(PH8.0) 5ml
0.5M EDTA(PH 8.0) 5ml
5M NaCl 2ml
10%SDS 10ml
去离子水或双蒸水补至100ml
母液配制：
1. 1M Tris-Hcl（PH=8.0）
(1) 称取12.11g Tris。
(2) 加入80mL 双蒸水或去离子水，充分搅拌。
(3) 加入约4.2ml浓HCL调PH至8.0。
(4) 加入双蒸水或去离子水定容至100ml。
(5) 高压灭菌，常温保存。
2. 0.5 M EDTA
(1) 称取18.61g Na2EDTA﹒2H2O置于100~200ml烧杯中。
(2) 加入约80mL 蒸馏水，充分搅拌。
(3) 调PH至8.0，(约2.5g NaOH)，注意：EDTA在pH=8.0时才能完全溶解。
(4) 加入双蒸水或去离子水定容至100ml
(5) 高温高压灭菌，室温保存。
3. 5 M NaCl
(1) 称取29.22g NaCl置于100ml~200ml烧杯中。
(2) 加入80mL 去离子水或双蒸水，充分搅拌。
(3) 加去离子水或双蒸水定容至100mL。
高温高压灭菌，4℃保存
4. 10% SDS
(1) 称取10g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，
(2) 加入80mL双蒸水或去离子水，68℃加热溶解。
(3) 滴加浓HCL调PH=7.2。
加去离子水或双蒸水定容100ml，室温保存。
全蛋白提取组织裂解液配方
Western-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方1.储备液1.110% Triton X-100Triton X-100 10ml蒸馏水90ml混合后37℃-40℃水浴中2-3hr，使其充分混匀1.210% 去氧胆酸纳去氧胆酸纳1g蒸馏水10ml避光保存1.3200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)PMSF 174.2mg异丙醇5ml分装，-20℃保存1.4100mmol/L EDTAEDTA 372.24mg蒸馏水10ml1.51mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)亮抑酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.61mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)抑蛋白酶肽2mg蒸馏水2ml分装，-20℃保存1.71mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)胃蛋白酶抑制剂2mg甲醇2ml分装，-20℃保存2.工作液2.1Tris-base (50mmol/L，pH 7.4)：Tris-base 605mgNaCl 900mg蒸馏水75ml用HCl调整pH值为7.42.210% Triton X-100 10mL2.310% 去氧胆酸纳 2.5mL2.4100mmol/L EDTA 1mL2.5用前加入：1mg/mL亮抑酶肽100μl1mg/mL 抑蛋白酶肽100μl1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂100μl200mmol/L PMSF 500μl各成分的终浓度Tris-base 50mmol/L，pH 7.4Triton X-100 1%去氧胆酸纳0.25%NaCl 150mmol/LEDTA 1 mmol/L亮抑酶肽1μg/mL抑蛋白酶肽1μg/mL胃蛋白酶抑制剂1μg/mLPMSF 1mmol/L。
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裂解液配制方法 The manuscript was revised on the evening of 2021
1、红细胞裂解液（去除红细胞）
配制试剂所需材料：
1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solution
a) NH4Cl (1.5 M) 80 g
b) KHCO3 (100 nM) 10 g
c) Na4EDTA (10 nM) 3.7 g
d) Distilled H2O 1000 mL
2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）
配制步骤：
1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；
2.调节溶液pH值到，加去离子水定容到1000ml；
3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。
保存：
储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；
2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。
2、ripa裂解液
NP-40 or Triton-100 1%
TrisHCl (pH 50mmol/L
NaCl 150mmol/L
PMSF（苯甲基磺酰氟） L(100μg/ml)
Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/Lμg/ml)
Leupeptin（亮抑制肽） ml
Aprotinin（抑蛋白酶肽）μmol/L(1μg/ml)
（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即ml于异丙醇中；
Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于LHEPES；
Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；
Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）
3、细胞裂解液（Tris－HCL）
1．1M Tris 溶液的配置
取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。
2．1M Tris－HCL Ph=溶液的配置
取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=（需浓盐酸约），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。
3. 0.5M EDTA溶液的配置
称EDTA－Na2 37.2g 先用140ml ddH2O溶解，加入14ml NaOH（10M）使EDTA－Na2溶解，再用NaOH（10M）溶液调至Ph=，加ddH2O定容至
200ml，高压灭菌备用。
4. 细胞裂解液的配制
称15gCTAB（Hexadecyltrimethylammonium bromide）（先用约600ml ddH2O 加热溶解）放入烧杯中，加入75ml 1M Tris－HCL（Ph=），58.5g NaCL（先用少量ddH2O溶解），30ml 0.5M EDTA，定容至1000ml，混合均匀备用。
4、组织裂解液配方：`
7M Urea(60. 06)
4.2042 g
2M thiourea g
100mM DTT? g
4% CHAPS
g
0.5mM EDTA? 0.00146 g
40Mm Tris? g
2%(v/v) NP-40
ml
1%(v/v) Triton X-100
ml
5mM PMSF用前加
0.00871 g
2% pharmalyte
共10ml分装成400μl/每管（可应用于30-80毫克组织裂解）
蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选择：
全细胞：NP-40或RIPA
细胞质（可溶）：Tris-HCl
细胞质（细胞骨架）：Tris-Triton
细胞膜：NP-40或RIPA
细胞核：RIPA
线粒体：RIPA。