中药化学常用检出试剂的配制方法
常用鉴定试剂的配制和应用

常用鉴定试剂的配制和应用常用鉴定试剂的配制和应用一、通用试剂1、碘试剂检查一般有机化合物。
(1)碘蒸气预先将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内,使容器空间被碘蒸气饱和,将薄层置于容器内数分钟即显棕色斑点。
有时,于容器中加放一小杯水,增加容器内的湿度,可提高显色的灵敏度。
(2)0.5%碘的氯仿溶液喷洒试剂,置空气中待过量的碘挥发后,喷1%淀粉溶液,斑点由棕色转为蓝色。
2、硫酸试剂检查一般有机化合物。
5%硫酸乙醇溶液作为色谱显色剂用。
喷洒后,置空气中干燥15min,100℃烤至斑点呈色(不同化合物呈不同颜色)。
3、重铬酸钾—硫酸试剂检查一般有机化合物。
5g重铬酸钾溶于l00ml40%硫酸中。
喷该试剂后,150℃加热至斑点出现(不同化合物呈不同颜色)。
4、磷钼酸试剂检查还原性成分。
5%磷钼酸乙醇溶液。
喷洒后,120℃加热至呈蓝色斑点。
5、磷钨酸试剂检查还原性成分20%磷钨酸乙醇溶液。
喷洒后,120℃烘烤,还原性物质呈蓝色斑点。
6、硝酸银—氢氧化铵试剂检查还原性成分。
溶液I:0.1mol/L硝酸银溶液。
溶液Ⅱ:10%氢氧化铵溶液。
临用前溶液I和Ⅱ以1︰5混合。
喷洒后105℃加热5~l0min,至深黑色斑点出现。
7、中性高锰酸钾试剂检查易还原性成分。
0.05%高锰酸钾溶液。
喷洒后粉红色背景上显黄色斑点。
8、碱性高锰酸钾试剂检查还原性成分。
溶液I:1%高锰酸钾溶液。
溶液Ⅱ:5%碳酸钠溶液。
溶液I和Ⅱ等量混合使用,喷洒后,粉红背景上显黄色斑点。
9、四唑蓝试剂检查还原性成分。
溶液I:0.5%四唑蓝甲醇溶液。
溶液Ⅱ:25%氢氧化钠溶液。
临用前两液等量混合。
喷洒后,微热或室温放置显紫色斑点。
10、荧光素—溴试剂检查不饱和化合物。
溶液I:0.1g荧光素溶于l00ml乙醇中。
溶液Ⅱ:5g溴溶于l00ml 四氯化碳中。
先喷洒溶液I,然后将薄层板放入盛有溶液Ⅱ的缸内,黄色斑点出现后,于紫外光灯下检视,红色底板上显黄色荧光斑点。
常用试剂配制方法

常用试剂配制方法氨试液取浓氨水200ml,置1000ml量杯中,加水稀释至500ml。
碱性酒石酸铜试液:配600ml。
(1)取硫酸铜结晶20.8g,置500ml量杯中,加水使溶解成300ml,转移至500ml 试剂瓶中备用。
(可长期保存)(2)取酒石酸钾钠结晶103.8g与氢氧化钠30g,置500ml量杯中,加水使溶解成300ml,转移至500ml 试剂瓶中备用。
(需新鲜配制)临用前将两液等量混合,即得。
0.2%酚酞指示液:配500ml。
(可长期保存)粗称酚酞1g,置500ml量杯中,加95%乙醇500ml,使溶解,即得。
0.02mol/l氢氧化钠滴定液:配500ml。
(可长期保存)取氢氧化钠0.4g,置500ml量杯中,加水使溶解成500ml。
稀硝酸:配4000ml。
(可长期保存)取硝酸(16mol/L)210ml,置3000ml烧杯中,加水稀释至2000ml。
配2次。
标准氯化钠溶液(10ug/ml):配1000ml。
(可长期保存)精称氯化钠16.5mg,置100ml量瓶中,加水适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为储备液。
(100μg/ml)临用前,精密量取储备液100.0mL,置1000ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。
8.硝酸银试液:配500ml。
(需新鲜配制)取硝酸银8.75g,置500ml量杯中,加水溶解至500ml。
9.稀盐酸:配3000ml。
(可长期保存)取盐酸(12.5mol/L)702ml,置5000ml烧杯中,加水稀释至3000ml。
10.标准硫酸钾溶液(100ug SO4-2/ml):配500ml。
(可长期保存)精称硫酸钾90.5mg,置100ml烧杯中,加水溶解后,转移至500ml量瓶中。
11.25%氯化钡:配3000ml。
(可长期保存,第二年如混浊,过滤)粗称BaCl2750g,置5000ml烧杯中,加水超声溶解并稀释至3000ml(澄清)。
12.标准铅溶液(10ugPb/ml):配600ml 。
试剂的配制方法

试剂的配制方法常用试剂配制方法目录一.试液1.亚铁氰化钾试液2.过氧化氢试液3.变色酸试液4.草酸铵试液5.氢氧化钙试液6.氢氧化钠试液7.氢氧化钡试液8.氢氧化钾试液9.重铬酸钾试液10.氨试液11.浓氨试液12.高锰酸钾试液13.硝酸银试液14.硫化钠试液15.硫代乙酰胺试液16.硫酸铁试液17.硫氰酸铵试液18.氰化钾试液19.氯化钡试液20.氯化亚锡试液21.稀乙醇22.稀盐酸23.稀硫酸24.稀硝酸25.稀醋酸26.碘试液27.碘化钾试液28.酸性氯化亚锡试液29.碱性碘化汞钾试液30.醋酸铅试液二.缓冲液1.氨-氯化铵缓冲液(pH8.0)2.氨-氯化铵缓冲液(pH10.0)3.醋酸盐缓冲液(pH3.5)4.磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8)5.磷酸盐缓冲液(pH6.8)6.磷酸盐缓冲液(pH7.6)7.邻苯二甲酸盐缓冲液(pH4.0)8.中性磷酸盐缓冲液(pH6.86)9.硼酸钠缓冲液(pH9.18)三.指示剂与指示液1.二甲酚橙指示液2.甲基红指示液3.甲基红-溴甲酚绿混合指示液4.甲基橙指示液5.荧光黄指示液6.酚红指示液7.酚酞指示液8.铬黑T指示剂9.淀粉指示液10.溴甲酚紫指示液11.溴麝香草酚蓝指示液12.结晶紫指示液13.碱性蓝6B指示液14.硫酸铁铵指示液四.其他试剂1.标准硝酸盐溶液2.无硝酸盐的水3.无亚硝酸盐的水4.无氨水5.对氨基苯磺酰胺(磺胺)的稀盐酸溶液6.盐酸萘乙二胺溶液7.标准亚硝酸盐溶液8.氯化铵溶液9.标准铅溶液10.标准砷溶液11.标准砷斑12.标准甲醇溶液13.饱和溶液的配制14.盐酸羟胺溶液15.硫酸试剂16.双硫腙提取溶液17.枸橼酸铵溶液18.盐酸羟胺溶液19.稀焦糖溶液20.醋酸铅棉花五.滴定液1.乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)2.氢氧化钠滴定液(1mol/L、0.5mol/L或0.1mol/L)3.重铬酸钾滴定液(0.016 67mol/L)4.盐酸滴定液(1mol/L、0.5mol/L、0.2mol/L或0.1mol/L)5.高锰酸钾滴定液(0.02mol/L)6.硝酸银滴定液(0.1mol/L)7.硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)8.硫酸滴定液(0.5mol/L、0.25mol/L、0.1mol/L或0.05mol/L)9.锌滴定液(0.05mol/L)10.碘滴定液(0.1mol/L)11.醋酸钠滴定液(0.1mol/L)12.乙醇制氢氧化钾滴定液(0.5mol/L)13.硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)一.试液除另有规定外,试液的有效期为半年(从配制日起),但如有混浊,变色等现象时不能继续使用。
常用试剂的配制

常用试剂的配制1、2,4-二硝基苯肼溶液I.在15mL浓硫酸中,溶解3克2,4-二硝基苯肼。
另在70mL95%乙醇里加20mL 水,然后把硫酸苯肼倒入稀乙醇溶液中,搅动混合均匀即成橙红色溶液(若有沉淀应过滤)。
Ⅱ.将1.2克2,4一二硝基苯肼溶于50mL30%高氯酸中,配好后储于棕色瓶中,不易变质。
I法配制的试剂,2,4-二硝基苯肼浓度较大,反应时沉淀多便于观察。
Ⅱ法配制的试剂由于高氯酸盐在水中溶解度很大,因此便于检验水中醛且较稳定,长期贮存不易变质。
2、卢卡斯(Lucas)试剂将34克无水氯化锌在蒸发皿中强热熔融,稍冷后放在干燥器中冷至室温。
取出捣碎,溶于23mL浓盐酸中(比重1.187)。
配制时须加以搅动,并把容器放在冰水浴中冷却,以防氯化氢逸出。
此试剂—般是临用时配制。
3、托伦(Tollens)试剂I.取0.5mL10%硝酸银溶液于试管里,滴加氨水,开始出现黑色沉淀,再继续滴加氨水,边滴边摇动试管,滴到沉淀刚好溶解为止,得澄清的硝酸银氨水溶液,即托伦试剂。
Ⅱ.取一支干净试管.加入1mL5%硝酸银,滴加5%氢氧化钠2滴,产生沉淀,然后滴加5%氨水,边摇边滴加,直到沉淀消失为止,此为托伦试剂。
无论I法或Ⅱ法,氨的量不宜多,否则合影响试剂的灵敏度。
I法配制的Tollens试剂较Ⅱ法的碱性弱,在进行糖类实验时,用I法配制的试剂较好。
4、谢里瓦诺夫(Seliwanoff)试剂将0.05g间苯二酚溶于50mL浓盐酸中,再用蒸馏水稀释至100mL。
5、希夫(Schiff)试剂在100mL热水中溶解0.2g品红盐酸盐,放置冷却后,加入2g亚硫酸氢钠和2mL浓盐酸,再用蒸馏水稀释至200mL。
或先配制l0mL二氧化硫的饱和水溶液,冷却后加入0.2g品红盐酸盐,溶解后放置数小时使溶液变成无色或淡黄色,用蒸馏水稀释至200mL。
此外,也可将0.5g品红盐酸盐溶于l00mL热水中,冷却后用二氧化硫气体饱和至粉红色消失,加入0.5g活性炭,振荡过滤,再用蒸馏水稀释至500mL。
中药化学成分预实验实验报告

中药化学成分预实验实验报告
一、实验目的
通过对中药化学成分的预实验,初步了解中药中所含有的化学成分,为后续的分离和鉴定工作提供依据。
二、实验材料
1. 中药样品(例如:丹参、黄连、甘草等)
2. 实验试剂:乙醇、石油醚、乙酸乙酯、甲醇、氯仿等
3. 实验仪器:索氏提取器、薄层色谱板、紫外灯、试管、滴管等
三、实验步骤与观察
1. 索氏提取法:采用索氏提取器,以乙醇作为溶剂,提取中药样品中的脂溶性成分。
观察提取液的颜色和质地,记录提取液中可能存在的成分。
2. 溶剂萃取法:将中药样品分别用石油醚、乙酸乙酯、氯仿进行萃取,观察不同溶剂萃取后得到的萃取液的颜色和质地,初步判断各萃取液中所含有的化学成分。
3. 薄层色谱法:将中药样品进行薄层色谱分离,在紫外灯下观察斑点的颜色和位置,初步确定样品中可能存在的化合物。
四、实验结果与讨论
根据实验观察和记录,初步确定中药样品中可能含有的化学成分。
例如,丹参可能含有丹参酮类化合物,黄连可能含有小檗碱类化合物,甘草可能含有甘草甜素等。
讨论这些成分的生理活性及其在中药中的作用。
五、实验结论
通过本次预实验,初步了解了中药中所含有的化学成分,为后续的分离和鉴定工作提供了依据。
在实验过程中,应进一步优化实验条件和方法,提高分离和鉴定的准确性和可靠性。
常用化学试剂的配制方法

常用试剂配制的具体操作1.HCL(1+1):在1000ml棕色瓶或白色瓶中,先倒入用500ml量杯量取的500ml纯净水,然后再缓慢加入盐酸,摇匀,密封备用。
(打开盐酸时,需要用纸,盖在瓶盖上再打开。
因为里面可能存在压力,若是直接打开,可能会因为压力过大,造成液体冲出,伤害到眼睛)也可以放置少量在白色滴瓶中待用。
2.抗坏血酸(5%):用一次性塑料杯,称取抗坏血酸1g,硫脲0.1g,加入20ml纯净水,在超声器中用玻璃棒搅匀,再倒入30ml小棕色瓶中保存。
(在实验前需要看颜色变化,如果颜色变深,则代表试剂过期)。
3.盐酸—硼酸混合酸:用一次性塑料杯称取硼酸25g,500ml量杯分2次量取900ml纯净水,清洗塑料杯,并倒入1000ml烧杯中,再加入HCL(1+1)70ml,放置在超声器中,用玻璃棒搅匀溶解,再倒入1000ml的棕色瓶中保存(也可以用500ml白色塑料瓶,插10ml刻度移液管)4.钼酸钠(6%):用一次性塑料杯称取钼酸钠30g,500ml量杯量取500ml纯净水,边清洗塑料杯边倒入500ml烧杯中,然后放置在超声器中,用玻璃棒搅匀,再倒入至500ml白色塑料瓶中,密封保存。
(插5ml刻度移液管)5.H₂O₂(1+20):全名为过氧化氢或者双氧水。
用1ml刻度移液管,吸取1ml过氧化氢至一次性塑料杯中,20ml量杯量取20ml纯净水,倒入塑料杯中,摇匀,再倒入至30ml的小棕色瓶中。
(容易失效,所以做溶液和检测时都需要速度快)6.三乙醇胺(TEA)(1+1):在1000ml棕色瓶中,先倒入用500ml量杯量取的500ml纯净水,然后再缓慢倒入500ml三乙醇胺,摇匀备用。
(也可以用白色塑料瓶,加黑色外袋保存,插5ml刻度移液管)7.H2SO4(1+1):带橡胶手套及口罩。
用500ml量杯先量取300ml纯净水,在1000ml烧杯内,先倒入300ml纯净水。
用脸盆装半脸盆自来水,将烧杯先放入脸盆中,再用500ml量杯量取300ml浓硫酸,缓缓倒入浓硫酸,并用玻璃棒不停搅拌。
中药化学提取、分离和鉴定方法

中药化学提取、分离和鉴定方法中药化学提取、分离和鉴定方法(一)溶剂提取法:1.溶剂提取法的原理:溶剂提取法是根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性质,选用对活性成分溶解度大,对不需要溶出成分溶解度小的溶剂,而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。
当溶剂加到中草药原料(需适当粉碎)中时,溶剂由于扩散、渗透作用逐渐通过细胞壁透入到细胞内,溶解了可溶性物质,而造成细胞内外的浓度差,于是细胞内的浓溶液不断向外扩散,溶剂又不断进入药材组织细胞中,如此多次往返,直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡时,将此饱和溶液滤出,继续多次加入新溶剂,就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。
中草药成分在溶剂中的溶解度直接与溶剂性质有关。
溶剂可分为水、亲本性有机溶剂及亲脂性有机溶剂,被溶解物质也有亲水性及亲脂性的不同。
有机化合物分子结构中亲水性基团多,其极性大而疏于油;有的亲水性基团少,其。
极性小而疏于水。
这种亲水性、亲脂性及其程度的大小,是和化合物的分子结构直接相关。
一般来说,两种基本母核相同的成分,其分子中功能基的极性越大,或极性功能基数量越多,则整个分子的极性大,亲水性强,而亲脂性就越弱,其分子非极性部分越大,或碳键越长,则极性小,亲脂性强,而亲水性就越弱。
各类溶剂的性质,同样也与其分子结构有关。
例如甲醇、乙醇是亲水性比较强的溶剂,它们的分子比较小,有羟基存在,与水的结构很近似,所以能够和水任意混合。
丁醇和戊醇分子中虽都有羟基,保持和水有相似处,但分子逐渐地加大,与水性质也就逐渐疏远。
所以它们能彼此部分互溶,在它们互溶达到饱和状态之后,丁醇或戊醇都能与水分层。
氯仿、苯和石油醚是烃类或氯烃衍生物,分子中没有氧,属于亲脂性强的溶剂。
这样,我们就可以通过时中草药成分结构分析,去估计它们的此类性质和选用的溶剂。
例如葡萄糖、蔗糖等分子比较小的多羟基化合物,具有强亲水性,极易溶于水,就是在亲水性比较强的乙醇中也难于溶解。
淀粉虽然羟基数目多,但分子大大,所以难溶解于水。
天然药物化学成分检出试剂配制法

天然药物化学成分检出试剂配制法一、生物碱沉淀试剂:1.碘化铋钾(Dragendorff)试剂:取次硝酸铋3g溶于30%硝酸(比重1.18)17ml中,在搅拌下慢慢加碘化钾浓水溶液(27克碘化钾溶于20ml水),静置一夜,取上层清液,加蒸馏水稀释至100ml 附:改良的碘化铋钾试剂:甲液:0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸,加水40ml。
乙液:8g碘化钾溶于20ml水中。
溶液甲和乙等量混合,于棕色瓶中可以保存较长时间,可作沉淀试剂用,如作层析显色剂用,则取上述混合液1ml与醋酸2ml,混合即得。
目前市场上碘化铋钾试剂可直接供配制:7.3g碘化铋钾,冰醋酸10ml,加蒸馏水60ml。
2碘化汞钾(Mayer)试剂:氯化汞1.36g和碘化钾5g各溶于20ml水中,混合后加水稀释至100ml。
3.碘一碘化钾(Wagner):试剂:1g碘化钾液于50ml,加热,加2ml醋酸,再用水稀释至100ml。
4.硅钨酸试剂:5g硅钨酸溶于100ml水中,加盐酸少量至pH2左右。
5.苦味酸试剂:1g苦味酸溶于100ml水中。
6.鞣酸试剂:鞣酸1g加乙醇1 ml溶解后再加水至10ml。
7.碱酸铈——硫酸试剂:0.1g硫酸铈混悬于4ml水中,加入1g三氯醋酸,加热至沸,逐滴加入浓硫酸至澄清。
二、苷类检出试剂:(一)糖的检出试剂:1.碱性酒石酸铜(Fehiling)试剂:本口分甲液与乙液,应用时取等量混合。
甲液:结晶硫酸酮6.23g,加水至100ml。
乙液:酒石酸钾钠34.6g,及氢氧化钠10g,加水至100ml。
2.ɑ-萘酚(Molisch)试剂。
甲液:ɑ-萘酚1g,加75%乙醇至10ml。
乙液:浓硫酸3.氨性硝酸银试剂:硝酸银1g,加水20ml溶解,注意滴加适量的氨水,随加随搅拌,至开始产生的沉淀将近全溶为止,过滤。
4.ɑ-脱氧糖显色试剂(1)三氯化铁冰醋酸(Keller-Kiliani)试剂甲液:1%三氯化铁溶液0.5ml,加冰醋酸至100ml。
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常用检出试剂的配制方法(一)生物碱沉淀试剂1.碘化铋钾试剂取8g次硝酸铋溶于17ml 30%硝酸(相对密度1.18)中,在搅拌下缓慢滴加碘化铋钾水溶液(碘化钾27g溶于20ml水中),静置过夜滤过,加蒸馏水稀释至100ml。
附:改良碘化铋钾试剂甲液:取0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸中,加40ml水。
乙液:取8g碘化钾溶于20ml水中。
将溶液甲和乙等量混合,置棕色瓶中能保存较长时间,可作生物碱沉淀试剂用。
如作色谱显色剂用,需取上述混合液1ml与2ml醋酸、10ml水的比例混合即得。
2.碘化汞钾试剂取1.36g氯化汞和5g碘化钾各溶于20ml水中,将两液混合后再加水稀释至100ml。
3.碘-碘化钾试剂取1g碘和10g碘化钾,溶于50ml水中,加热溶解,加2ml醋酸,再加水稀释至100ml。
4.苦味酸试剂取1g苦味酸,溶于100ml水中即得。
5.硅钨酸试剂取5g硅钨酸,溶于100ml水中,用盐酸调pH2。
6.磷钨酸试剂取20g钨酸钠、10g磷酸(相对密度为1.13)与水混合后,加热煮沸20分钟,稍冷后加盐酸至酸性。
7.鞣酸试剂取1g鞣酸,加1ml乙醇,溶解后加水至10ml。
(二)苷类检出试剂1.糖的检出试剂(1)斐林试剂甲液:取6.93g结晶硫酸铜,加水至100ml。
乙液:取34.6g酒石酸钾钠及10g氢氧化钠,加水至100ml。
使用时甲、乙两液等量混合。
(2)α-萘酚-浓硫酸试剂甲液:取1gα-萘酚,加95%乙醇至10ml。
乙液:浓硫酸。
使用时分别加入两液。
(3)氨性硝酸银试剂取1g硝酸银,加20ml水溶解,小心滴加适量氨水,随加随搅拌,至开始产生的沉淀将近全部溶解为止,滤过即得。
(4)苯胺-邻苯二甲酸试剂取0.93g苯胺及1.6g邻苯二甲酸,溶于100ml 水饱和的正丁醇中。
(5)α-去氧糖试剂1)三氯化铁-冰醋酸试剂甲液:取0.5ml 1%三氯化铁水溶液,加冰醋酸至100ml。
乙液:浓硫酸。
使用时分别加入两液。
2)呫吨氢醇冰醋酸试剂:取10mg呫吨氢醇溶于100ml冰醋酸(含1%盐酸)中。
2.酚类检出试剂(1)三氯化铁试剂:5%三氯化铁水溶液或乙醇溶液。
(2)三氯化铁-铁氰化钾试剂甲液:2%三氯化铁水溶液。
乙液:1%铁氰化钾水溶液。
应用时甲、乙两溶液等量混合或分别滴加。
(3)香草醛-盐酸试剂:取0.5g香草醛,溶于50ml盐酸中。
(4)重氮化试剂甲液:取0.35g对硝基苯胺,溶于5ml浓盐酸中,加水至50ml。
乙液:取5g亚硝酸钠,加50ml水溶解。
应同时取甲、乙两液等量在冰水浴中混合后备用。
本试剂系由对硝基苯胺和亚硝酸钠在强酸性条件下经重氮化作用而成。
由于重氮盐不稳定,故本试剂应在临用时配制。
(5)4-氨基安替比林-铁氰化钾试剂甲液:2%4-氨基安替比林乙醇溶液。
乙液:8%铁氰化钾水溶液(或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%铁氰化钾水溶液)。
应用时分别加入。
3.黄酮类检出试剂(1)盐酸-镁粉试剂:浓盐酸和镁粉。
(2)三氯化铝试剂:2%三氯化铝乙醇或甲醇溶液。
(3)碱式醋酸铅(或醋酸铅)试剂:饱和碱式醋酸铅(或饱和醋酸铅)水溶液。
(4)醋酸镁试剂:1%醋酸镁甲醇溶液。
(5)氢氧化钾试剂:10%氢氧化钾水溶液。
(6)锆-柠檬酸试剂甲液:2%二氯氧锆甲醇溶液。
乙液:2%柠檬酸甲醇溶液。
应用时分别加入。
4.蒽醌类检出试剂氢氧化钾试剂、醋酸镁试剂、碱式醋酸铅试剂参见黄酮类检出试剂(5)、(4)、(3)。
5.香豆素类及内酯类检出试剂(1)异羟肟酸铁试剂甲液:新鲜配制的1mol/L羟胺盐酸盐的甲醇溶液。
乙液:1.1mol/L氢氧化钾甲醇溶液。
丙液:取1g三氯化铁溶于100ml1%盐酸中。
应用时甲、乙、丙三溶液按次序滴加,或甲、乙两溶液等量混合滴加后再加丙液。
(2)内酯环的开环-闭环试剂甲液:1%氢氧化钠水溶液。
乙液:2%盐酸溶液。
(3)重氮化试剂:参见酚类检出试剂(4)。
(4)4-氨基安替比林-铁氰化钾试剂:参见酚类检出试剂(5)。
进行3、4试验时,试样应先加3%碳酸钠水溶液,加热处理后再分别滴加试剂。
(5)间硝基苯试剂:2%间硝基苯乙醇液。
6.强心苷类检出试剂(1)碱性3,5-二硝基苯甲酸试剂甲液:2%3,5-二硝基苯甲酸甲醇溶液。
乙液:1mol/L氢氧化钾水溶液。
应用前甲、乙两液等量混合。
(2)碱性苦味酸试剂甲液:1%苦味酸水溶液。
乙液:10%氢氧化钠水溶液。
应用前甲、乙两液以9∶1混合。
(3)碱性亚硝酰铁氰化钠试剂甲液:吡啶。
乙液:0.5%亚硝酰铁氰化钠水溶液。
丙液:10%氢氧化钠水溶液。
7.皂苷类检出试剂(1)溶血试验2%血细胞生理盐水混悬液:取新鲜兔血(由心脏或耳静脉取血)适量,用洁净小毛刷迅速搅拌,除去纤维蛋白,用生理盐水反复离心洗涤至上清液无色后,量取沉降的红细胞,加入生理盐水配成2%混悬液,贮存于冰箱内备用(贮存期2~3天)。
(2)醋酐-浓硫酸试剂甲液:醋酐。
乙液:浓硫酸。
8.氰苷类检出试剂(1)苦味酸钠试纸:取适当大小的滤纸条,浸入苦味酸饱和水溶液中,浸透后取出晾干,再浸入10%碳酸钠水溶液内,迅速取出,晾干即得。
(2)亚铁氰化铁(普鲁士蓝)试剂甲液:10%氢氧化钾水溶液。
乙液:10%硫酸亚铁水溶液。
丙液:10%盐酸水溶液。
丁液:5%三氯化铁水溶液。
(三)甾体和三萜类检出试剂1.醋酐-浓硫酸试剂参见皂苷类检出试剂(2)。
2.氯仿-浓硫酸试剂甲液:氯仿(溶解试样)。
乙液:浓硫酸。
3.三氯化锑试剂取25g三氯化锑,溶于75g氯仿中(亦可用氯仿或四氯化碳的饱和溶液)。
4.五氯化锑试剂五氯化锑和氯仿(或四氯化碳)按1∶4于用前配制。
5.间二硝基苯试剂甲液:2%间二硝基苯乙醇溶液。
乙液:14%氢氧化钾乙醇溶液。
用前等量混合。
6.三氯醋酸试剂取3.3g三氯醋酸,溶于10ml氯仿中,再加入过氧化氢1~2滴。
7.香草醛-硫酸试剂1%香草醛60%硫酸液或取0.5g香草醛溶解于100ml 硫酸-乙醇(4∶1)混合液中。
(四)鞣质检出试剂1.氯化钠-明胶试剂取1g白明胶,溶于100ml 10%氯化钠水溶液中。
2.醋酸铅试剂饱和醋酸铅水溶液。
3.咖啡碱等生物碱试剂0.1%咖啡碱水溶液。
4.三氯化铁-铁氰化钾试剂参见酚类检出试剂(5)。
(五)氨基酸、多肽和蛋白质检出试剂1.双缩脲试剂甲液:1%硫酸铜水溶液。
乙液:10%氢氧化钠水溶液。
2.茚三酮试剂:取0.3g茚三酮,溶解于100ml正丁醇中,再加3ml醋酸即得。
或取0.2g茚三酮,溶于100ml丙酮或乙醇中。
3.鞣酸试剂:参见生物碱检出试剂(8)。
(六)有机酸检出试剂1.溴酚蓝试剂0.1%溴酚蓝乙醇溶液。
(七)通用试剂1.重铬酸钾-硫酸试剂检查一般有机物。
显色剂:取5g重铬酸钾,溶于100ml 40%硫酸中。
薄层检查:喷洒后加热至150℃至斑点出现。
2.荧光素-溴试剂检查不饱和化合物。
甲液:0.1%荧光素乙醇溶液。
乙液:5%溴的四氯化碳溶液。
喷甲液后,再用乙液熏。
喷洒后处理:喷洒荧光素溶液后,放置存有溴溶液的缸内,可于紫外灯下检查荧光,荧光素与溴化合成曙红(无荧光),而不饱和化和物则成溴加成物,保留了原有荧光;若点样量较多,则呈黄色斑点,底板呈红色。
3.碘试剂检查一般有机物,方法有二。
(1)将层析板放密闭缸内或瓷盘内,缸内预先放有碘结晶少许,大部分有机化合物呈棕色斑点。
(2)层析板放碘蒸汽中5分钟(或喷5%碘的氯仿溶液),取出置空气中待过量的碘蒸气全部挥发后,喷1%淀粉的水溶液,斑点转成蓝色。
4.硫酸试剂显色剂:5%的浓硫酸乙醇溶液,或15%浓硫酸正丁醇溶液,或浓硫酸-醋酸(1∶1)。
喷洒后处理:空气中干燥15分钟,再加热至110℃直至出现颜色或荧光。
四、常用实验操作技术(一)浸渍法操作冷浸法取药材粗粉,置适宜容器中,加入一定量的溶剂如水、酸水、碱水或稀醇等,密闭,时时搅拌或振摇,在室温条件下浸渍1~2天或规定时间,使有效成分浸出,滤过。
药材再加入适量溶剂浸泡2~3次,使有效成分大部分浸出。
然后将药渣充分压榨、滤过,合并滤液,经浓缩后可得提取物。
温浸法具体操作与冷浸法基本相同,但温浸法的浸渍温度一般在40~60℃之间,浸渍时间短,却能浸出较多的有效成分。
由于温度较高,浸出液冷却后放置贮存常析出沉淀,为保证质量,需滤去沉淀后再浓缩。
(二)渗漉法操作1.渗漉装置常用的渗漉装置(实图-2),渗漉筒一般为圆柱形或圆锥形,筒的长度为筒直径的2~4倍。
渗漉提取膨胀性不大的药材时用圆柱形渗漉筒;圆锥形渗漉筒则用于膨胀性大的药材渗漉提取。
2.操作方法将药材粗粉放在有盖容器内,再加入药材粗粉量60%~70%的浸出溶剂均匀湿润后,密闭,放置15分钟至数小时,使药材充分膨胀后备用。
另取脱脂棉一团,用浸出液润湿后,铺垫在渗漉筒的底部,然后将已湿润膨胀的药材粗粉分次装入渗漉筒中,每次装药后,均须摊匀压平。
松紧程度视药材质地及浸出溶剂而定,若为含水量较多的溶剂宜压松些,含醇量高的溶剂则可压紧些。
药粉装完后,用滤纸或纱布将药材面覆盖,并加一些玻璃珠或碎瓷片等重物,以防加入溶剂时药粉被冲浮起来。
然后向渗漉筒中缓缓加入溶剂,并注意应先打开渗漉筒下方浸液出口之活塞,以排除筒内空气,待溶液自下口流出时,关闭活塞。
流出的溶剂应再倒回筒内,并继续添加溶剂至高出药粉表面数厘米,加盖放置24~48小时,使溶剂充分渗透扩散。
开始渗漉时,漉液流出速度如以1000g药粉计算,每分钟流出1~3ml或3~5ml为宜。
渗漉过程中需随时补充新溶剂,使药材中有效成分充分浸出。
渗漉溶剂的用量一般为1∶4~8(药材粉末∶渗漉溶剂)。
实图-2渗漉装置3.注意事项(1)供渗漉用的药材粉末不能太细,以免堵塞药粉颗粒间孔隙,妨碍溶剂通过。
一般大量渗漉时药材切成薄片或0.5cm左右的小段;小量渗漉时粉碎成粗粉。
若粉碎时残留的细粉较多时,应待粗粉充分湿润后将其拌入一起装筒,这样可避免堵塞渗漉筒现象。
(2)药粉装筒前一定要先放入有盖容器中用溶剂湿润,且经放置一定时间,使药粉充分湿润膨胀,以免在渗漉筒中膨胀后造成堵塞,或膨胀不均匀造成浸出不完全。
(3)装筒时药粉的松紧及使用压力是否均匀,对浸出效果影响很大。
药粉装得过紧会使出口堵塞,溶剂不易通过,无法进行渗漉。
药粉装得过松,溶剂很快流过药粉,造成浸出不完全,消耗的溶剂量多。
因此装筒时,要分次一层一层地装,每装一层,要用木槌均匀压平,不能过松过紧。
(4)渗漉筒中药粉量装得不宜过多,一般为渗漉筒容积的2/3,留有一定的空间以存放溶剂,可连续渗漉和便于操作。
(5)药粉填装好后,应先打开渗漉筒下口活塞,再添加溶剂,否则会因加溶剂造成气泡,冲动粉柱而影响浸出。
渗漉过程中,溶剂必须保持高出药面,否则渗漉筒内药粉干涸开裂,再加入溶剂时则会从裂隙间流过而影响浸出。