瑞氏染色【精品】
简述瑞氏染色原理及步骤
简述瑞氏染色原理及步骤
瑞氏染色啊，这可真是个神奇的玩意儿！它就像是一位魔法师，能让细胞在显微镜下展现出它们独特的模样。
瑞氏染色的原理其实挺有趣的。
细胞里有各种各样的成分，就像一个小世界。
而瑞氏染料就像是有一双神奇的眼睛，能分辨出这些成分的不同。
它可以和细胞内的物质结合，产生不同的颜色反应，从而让我们能清楚地看到细胞核啦、细胞质啦等等的细节。
这难道不神奇吗？就好像它能读懂细胞的“心思”一样！
那瑞氏染色的步骤呢，可得仔细说说。
首先要准备好涂片，这就像是给细胞搭好一个舞台。
然后把染料滴上去，让它慢慢地渗透进去，和细胞来一场亲密的接触。
接下来就是等待，就像等待一场精彩演出的开场。
在这个过程中，染料会和细胞发生奇妙的反应，颜色逐渐显现出来。
之后要进行冲洗，把多余的染料冲掉，让细胞的真面目更加清晰。
最后，在显微镜下观察，哇哦，一个微观的奇妙世界就展现在眼前了！
你想想看，通过瑞氏染色，我们能看到细胞的各种形态和结构，这对于医学诊断和研究来说是多么重要啊！它就像是一把钥匙，能打开细胞世界的大门，让我们了解那些隐藏在微小世界里的秘密。
如果没有瑞氏染色，我们怎么能知道细胞有没有生病，有没有发生变化呢？
瑞氏染色真的是太了不起了，它为我们揭示了一个又一个微观的奥秘，让我们对生命有了更深入的认识。
它就像是黑暗中的一盏明灯，照亮了我们探索细胞世界的道路。
所以啊，我们真应该好好感谢瑞氏染色这个神奇的技术，它可真是为我们的医学事业做出了巨大的贡献呢！。
瑞氏染色_精品文档
瑞氏染色摘要：瑞氏染色（Rayleigh staining）是一种常用于生物学研究的染色方法，特别适用于染色细胞核。
该方法以嗜碱性染料瑞氏蓝（Rayleigh blue）为主要染料，通过与细胞核中的核酸结合，实现对细胞核的染色。
本文将详细介绍瑞氏染色的原理、步骤以及应用领域，并简要回顾其在生物学研究中的应用。
一、引言细胞核是细胞中最重要的器官之一，它包含着遗传信息和控制细胞功能的调节因子。
因此，对细胞核的研究对于揭示生物体内各种生理和病理过程具有重要意义。
而实现对细胞核的染色是研究细胞核的基础，其中瑞氏染色是一种被广泛应用的方法。
二、瑞氏染色的原理瑞氏蓝是一种嗜碱性染料，它具有较高的亲和力和选择性地形成与DNA分子间的氢键。
在染色过程中，瑞氏蓝能够与细胞核内的DNA结合，形成稳定的染色复合物。
瑞氏蓝通过与DNA结合，呈现出特殊的荧光性质，可以在显微镜下观察和分析细胞核的结构和形态。
三、瑞氏染色的步骤1. 准备标本：通常使用组织切片或细胞涂片作为瑞氏染色的标本。
标本应保持良好的完整性和透明度。
2. 固定标本：将标本用适当的固定液进行固定，以保持其形态和结构。
通常使用乙醛、甲醛等固定液进行固定。
固定液的浓度和固定时间根据标本的类型和研究要求来确定。
3. 染色：将固定的标本浸入瑞氏蓝染液中，使细胞核充分染色。
染色液的浓度和时间应根据标本的大小和浓度来确定。
4. 清洗：将染色后的标本轻轻洗净，去除多余的染料和杂质。
5. 干燥：将洗净的标本晾干或利用吹风机等设备加速干燥。
6. 封片：将干燥的标本放置在显微镜玻片上，并用适当的封片剂（如封片胶）密封。
四、瑞氏染色的应用领域1. 细胞生物学研究：瑞氏染色可以用于观察和分析细胞核的形态结构和细胞周期的变化。
2. 组织学研究：瑞氏染色可以用于观察和分析组织中细胞核的分布和形态，从而揭示组织的结构和功能。
3. 病理学研究：瑞氏染色可以用于诊断和鉴定各种疾病，如肿瘤、炎症等。
瑞氏染色
1．检验目的指导瑞氏染色的操作，进行各种涂片的分类。
2．方法原理瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。
各种细胞成分化学性质不同，对刘氏染液（改良的瑞氏染液）中酸性染料曙红和碱性染料亚甲蓝的亲和力也不一样，标本涂片经过刘氏染液染色后，各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态、特征的目的。
3．方法性能参数（如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵敏度和特异性）3.1染色速度快，效果好。
3.2仅供形态学初学者初检观察染色使用。
3.3是临床最常用的染色技术之一，用于细胞分类、寄生虫检出及分类。
4．标本类型（如血浆、血清、尿液等）4.1血细胞涂片、脱落细胞学标本（脑脊液、胸腹水等）。
4.2标本采集后要及时制片，以免时间久细胞形态发生退化改变。
5．要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统5.1试剂组分：试剂组成主要成分刘氏快染A液曙红、甲醇刘氏快染B液亚甲蓝5.2试剂存储和有效期：试剂组成储存条件有效期开封稳定性储存位置刘氏快染A液室温 2年 6个月存货柜/染色操作台刘氏快染B液室温 2年 6个月存货柜/染色操作台6．校准程序（计量学溯源性）7．质量控制，控制品使用水平和频率，允许限的纠正措施8．程序步骤8.1标准方法：8.1.1加刘A（0.5-0.8ml）染色30S。
8.1.2再将刘B滴加于A液上面（滴量为A液的两倍）。
以洗耳球轻吹，让两液充分混合，染色1min。
8.1.3水洗（不能先倒染色液，以流水轻轻冲去），待干后镜检。
8.2快速染色，适用于脱落细胞学标本：8.2.1加刘A（0.5-0.8ml）后，立即将刘B滴加于A液上面（滴量为A液的两倍）。
以洗耳球轻吹，让两液充分混合，染色10-20S。
8.2.2水洗（不能先倒染色液，以流水轻轻冲去），待干后镜检。
9．计算结果原理10．生物参考区间11．警告值、危急值（适用时）12．检验结果可报告区间12.1红细胞呈淡红色，白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
瑞氏染色(专业知识)
瑞氏染色瑞氏染色是目前最常用而又最简单的染色方法。
1原理：瑞氏试剂中之酸性伊红和碱性美篮混合经化学作用后，变成中性之伊红化美蓝，久置后，经氧化而含有天青。
此三种染料分别和细胞核及浆中的NH3+和COO-等结合，使细胞核及胞浆着色。
由于系中性染料，又有缓冲液调节酸碱度，所以细胞受染后，蓝红等颜色都较适中，核染质、胞浆及其中之颗粒显色较为清楚。
2 试剂配制：1、瑞氏试剂瑞氏染料（粉）1克，加不含醋酮之甲醇600毫升溶解过滤后即成。
混合方式可将瑞氏染料置于研钵内，加适量甲醇混合研磨，使染料溶解，将已溶解的液体倒入清洁玻瓶，再放入甲醇继续溶解剩下染料，直至染料及甲醇均用完为止，然后过滤，以深色中性之玻璃瓶储备待用。
亦可将1克染料一次加入600毫升甲醇中，盛深色玻璃瓶内，塞好瓶口，置于温暖而黑暗之处或37度温箱内，每日振荡5min，连续7天以上，然后过滤储备用。
染液宜久置后使用，通常存放愈久，染色效果愈好。
2、缓冲液由1%的磷酸氢二钠和1%的磷酸二氢钾各30毫升加蒸馏水1000毫升配成，或以上两药各1克加2500毫升左右蒸馏水制成。
以石蕊试纸检验、调整酸碱度，使PH在6.5-7之间即可。
缓冲液亦可永新鲜蒸馏水或煮沸后密闭保存的蒸馏水。
如蒸馏水与空气过多接触，则可因吸收空气中之二氧化碳而使PH值变低，影响染色，故不宜使用。
3、染色步骤1 将已编号之涂片水平置于染色板或者染色架上，涂片两端各划一道蜡笔线，主要防止染液外溢。
2 滴加瑞氏染色液。
其多少依标本所占面积大小而定，一般为4-8滴，至染液将标本完全盖住为止。
染液不宜过少，否则，甲醛挥发后，易产生沉淀；不可过多，以免因过盛而流失，影响染色。
3 1-2分钟后，滴入缓冲液（染液与缓冲液的比例约为1：1.5，冬季1：1，夏季1：2）。
以气囊向玻璃片上轻轻打气，使染液和缓冲液混合均匀，一般不宜口吹起，以免呼出二氧化碳改变缓冲液酸碱度而影响染色。
4 自缓冲液滴入10-15分钟后，用自来水冲洗。
瑞氏染色
瑞氏染色瑞氏（Wright ' s stain ；美蓝－伊红Y）染色：1 ．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue ）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y ）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Y）染料。
伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。
美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。
过敏反应过敏反应是指已产生免疫的机体在再次接受相同抗原刺激时所发生的组织损伤或功能紊乱的反应。
反应的特点是发作迅速、反应强烈、消退较快；一般不会破坏组织细胞，也不会引起组织损伤，有明显的遗传倾向和个体差异。
机理过敏反应发生的机理是一个复杂和抽象的过程，将I型过敏反应发生的机制划分为三个阶段：1、致敏阶段：过敏原进入机体后可选择诱导过敏原特异性B细胞产生抗体应答，此类抗体与肥大细胞和嗜碱性粒细胞（即课本上所说的皮肤、呼吸道或消化道黏膜以及血液中的某些细胞，其中肥大细胞分布于皮下小血管周围的结缔组织中和黏膜下层，而嗜碱性粒细胞主要分布于外周血中）的表面相结合，而使机体处于对该过敏原的致敏状态。
通常这种致敏状态可维持数月或更长，如果长期不接触该过敏原，致敏状态可自行逐渐消失。
2、激发阶段：指相同的过敏原再次进入机体时，通过与致敏的肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的抗体特异性结合，使这种细胞释放生物活性介质的阶段。
在这个阶段中，释放的生物活性介质除了组织胺以外，还可以是前列腺素D、白三烯、血小板活化因子等，但它们的作用都相似，都可引起平滑肌收缩，毛细血管扩大和通透性增强，腺体分泌物增多。
3、效应阶段：指生物活性介质作用于效应组织和器官，引起局部或全身过敏反应的阶段。
根据反应发生的快馒和持续的时间长短，可分为早期相反应和晚期相反应两种类型。
早期相反应主要由组织胺引起，通常在接触过敏原数秒钟内发生，可持续数小时，晚期相反应由白三烯、血小板活化因子等引起，在过敏原刺激后6～12 h发生反应，可持续数天。
瑞氏染色
精选课件
8
5、淋巴细胞(lymphocyte)
形态：呈圆形或卵圆形，大小不等； 胞核呈圆形，一侧常有小凹陷，染色深；胞质 较少，环绕核周围呈一窄带，嗜碱性，呈蔚蓝色
精选课件
9
正常值及临床意义
正常参考值
中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 单核细胞 淋巴细胞
46-63% 0-5% 0-1% 1-7% 24-47%
形态：胞核呈蓝紫色，染色质呈块状，着色深； 成熟的N胞核多为分叶状，一般可分2～5叶，常见 3叶，幼稚的N胞核呈杆状。胞质中含许多散在细 小的颗粒，Wright染色中呈紫红色
嗜天青颗粒 溶酶体 特殊颗粒 分泌颗粒
精选课件
7
4、单核细胞(monocyte)
形态：胞体大，呈圆形或椭圆形；胞核形态多样，可呈 卵圆形、肾形或马蹄形，核常偏位，染色质颗粒 细而松散，故着色浅；胞质较多，呈弱嗜碱性， 常染 涂 片制 作：
推片 血液
载玻片
将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚 薄取决于速度和角度：快、大(厚)。 慢、小（薄）
一张满意的血涂片应厚薄均匀
头
体
尾鲜明
涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号
B 123
李 四
精选课件
3
血 涂 片 染色：
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟
临床意义
外周血中白细胞主要由中性粒细胞和淋巴细胞 所组成，这二种细胞的升高及减低可直接导致 白细胞总数相应的改变。
精选课件
10
中性粒细胞
升高
感染或化脓性炎症 中毒 急性出血 恶性肿瘤
减低
某些感染 化学药物中毒 某些血液病 脾亢和免疫性疾病 放射病
瑞氏染色着色原理
瑞氏染色着色原理
瑞氏染色，也称格林染色，是一种临床常用的组织染色方法，以其简便和稳定性广受医学界的青睐。
该染色方法主要适用于常规病理切片染色，对细胞核和细胞质染色效果都非常良好，因此被广泛应用于肿瘤、炎症、感染等方面的病理诊断。
瑞氏染色的原理是将待染切片用甲醇或其他溶剂固定，使细胞质和细胞核内的蛋白质固定在细胞质和细胞核中。
接着，将待染切片加入格林染料液中，染色剂与细胞核中的核酸结合，使得切片上的细胞核呈现深蓝色，在细胞和染色剂共同作用下，细胞质呈现粉红色。
格林染料是一种碱性染料，可以包容在水溶液中形成阴离子，因此对于亲水性的细胞核具有较强的亲和力，然而对与脂质酸、橙色或粉红色等亲水性较强的细胞质则不具有亲和力。
此外，瑞氏染色还有一个特殊用途，就是在染色剂中加入高度聚合物的阳离子，如聚乙烯亚胺，使得聚合物与细胞表面带负电的组分之间相互吸引，从而加强了对于细胞质的染色效果。
总的来说，瑞氏染色的原理基于染色剂与细胞核中的核酸结合以及染色剂与细胞质的不同亲和性来实现对组织切片的染色，从而使切片呈现出清晰的细胞核和染色的细胞质，为医生进行病理诊断提供了非常有力的工具。
[课件]瑞氏染色PPT
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李 四
血 涂 片 染色：
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟 勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和 Ⅱ液充分混允静置10分钟
直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先到掉染液） 涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 李 四 123
血涂片的观察：
经染色后的血涂片先用低倍镜观察： 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.观察细胞分布情况，选择细胞分布均匀之 处转浸油镜进行白细胞分类计数。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。
白细胞形态异常
主要是指N和L的异常改变。遗传性、感染、中毒、放射 性或造血系统恶性病变等因素是白细胞形态改变的常 见原因。
（1）N 包括毒性变化、巨多分叶核、棒状小体以及 其他的异常形态。
5、淋巴细胞(lymphocyte)
形态：呈圆形或卵圆形，大小不等； 胞核呈圆形，一侧常有小凹陷，染色深；胞质 较少，环绕核周围呈一窄带，嗜碱性，呈蔚蓝色
正常值及临床意义
正常参考值
中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 单核细胞 淋巴细胞 46-63% 0-5% 0-1% 1-7% 24-47%
李 四
1hite blood cell, WBC) 中性粒细胞
嗜酸性粒细胞
白细胞 嗜碱性粒细胞 淋巴细胞 单核细胞
1、中性粒细胞(neutrophilic granulocyte,N)
形态：胞核呈蓝紫色，染色质呈块状，着色深； 成熟的N胞核多为分叶状，一般可分2～5叶，常见
瑞氏染色
血涂片：将血液在载玻片上推制成较薄 的一层血膜。 待干燥后用染色液进行染色，染色液通 常选用瑞氏或瑞-姬氏。
血 涂 片制 作：
推片
血液 载玻片 将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚 薄取决于速度和角度：快、大(厚)。 慢、小（薄）
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瑞氏染色
4、单核细胞(monocyte)
形态：胞体大，呈圆形或椭圆形；胞核形态多样，可呈 卵圆形、肾形或马蹄形，核常偏位，染色质颗粒 细而松散，故着色浅；胞质较多，呈弱嗜碱性， 常染成蓝色，内含许多细小的嗜天青颗粒
观察内容
血小板
对其形态、数量、分布情况进行观察
白细胞分类：一般情况计数100个白细胞，并计算出各种白细胞所 占 的比例。同时观察各种细胞的形态（大小、外形、胞质、胞 核）有无变化。
瑞氏染色
血涂片：将血液在载玻片上推制成较薄 的一层血膜。
待干燥后用染色液进行染色，染色液通 常选用瑞氏或瑞-姬氏。
处转浸油镜进行白细胞分类计数。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。
李 四
瑞氏染色
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白细胞(leukocyte, white blood cell, WBC)
白细胞
中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 淋巴细胞 单核细胞
瑞氏染色
1、中性粒细胞(neutrophilic granulocyte,N)
临床意义
外周血中白细胞主要由中性粒细胞和淋巴细胞 所组成，这二种细胞的升高及减低可直接导致 白细胞总数相应的改变。
瑞氏染色
中性粒细胞
升高
感染或化脓性炎症 中毒 急性出血 恶性肿瘤
减低
某些感染 化学药物中毒 某些血液病 脾亢和免疫性疾病 放射病
淋巴细胞
升高 降低
相对增多 某些传染病 （传淋、传单、结核等） 传染病恢复期 急、慢性淋巴细胞白血病
瑞氏染色
5、淋巴细胞(lymphocyte)
形态：呈圆形或卵圆形，大小不等； 胞核呈圆形，一侧常有小凹陷，染色深；胞质 较少，环绕核周围呈一窄带，嗜碱性，呈蔚蓝色
瑞氏染色
正常值及临床意义
正常参考值
中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 单核细胞 淋巴细胞
46-63% 0-5% 0-1% 1-7% 24-47%
勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和 Ⅱ液充分混允静置10分钟
直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先到掉染液）
123
涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 李 四
瑞氏染色
血涂片的观察：
经染色后的血涂片先用低倍镜观察： 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.观察细胞分布情况，选择细胞分布均匀之
白细胞形态异常
主要是指N和L的异常改变。遗传性、感染、中毒、放射 性或造血系统恶性病变等因素是白细胞形态改变的常 见原因。 （1）N 包括毒性变化、巨多分叶核、棒状小体以及 其他的异常形态。
瑞氏染色
相对减少 传染Байду номын сангаас急性期 放射病 细胞免疫缺陷病
瑞氏染色
血小板(platelet，plt/BPc)
形态：外形呈双凸扁盘状，大小不一，受刺激时， 可伸出突起呈不规则形，血涂片上，常呈星性 或多角形，
结构： 每一血小板周围部分染成浅蓝色， 称透明区，中央部分有紫色颗粒，称颗粒区
瑞氏染色
红细胞形态异常
瑞氏染色
瑞氏染色
血 涂 片制 作：
推片 血液
载玻片
将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚 薄取决于速度和角度：快、大(厚)。 慢、小（薄）
一张满意的血涂片应厚薄均匀
头
体
尾鲜明
涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号
B 123
李 四
瑞氏染色
血 涂 片 染色：
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟