A549细胞培养方案——适用于各种细胞培养
肿瘤实验报告实验结论
一、实验背景肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病，其发生发展与细胞增殖和凋亡密切相关。
细胞凋亡是细胞程序性死亡的过程，对于维持生物体内环境稳定、消除异常细胞具有重要作用。
本研究旨在通过实验探讨肿瘤细胞增殖与凋亡的关系，为肿瘤的防治提供理论依据。
二、实验目的1. 观察肿瘤细胞在体外培养条件下的增殖情况；2. 评估肿瘤细胞凋亡水平；3. 分析肿瘤细胞增殖与凋亡的关系。
三、实验方法1. 细胞培养：采用人肺腺癌细胞系A549进行体外培养，置于含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
2. 细胞增殖实验：采用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖。
将A549细胞以每孔2×10^3个细胞的密度接种于96孔板，分别培养0、24、48、72、96小时，每组设置3个复孔。
每孔加入10μl CCK-8试剂，孵育2小时后，用酶标仪检测各孔的吸光度值（OD值）。
3. 细胞凋亡实验：采用Annexin V-FITC/PI双染法检测肿瘤细胞凋亡。
将A549细胞以每孔1×10^5个细胞的密度接种于6孔板，分别培养24、48、72小时，每组设置3个复孔。
收集细胞，用Annexin V-FITC/PI双染液染色，流式细胞仪检测细胞凋亡率。
4. 数据分析：采用SPSS 22.0软件进行统计学分析，数据以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。
四、实验结果1. 细胞增殖实验：A549细胞在体外培养条件下呈现出明显的增殖趋势，随着培养时间的延长，细胞增殖率逐渐增加（P<0.05）。
2. 细胞凋亡实验：A549细胞在体外培养过程中，随着培养时间的延长，细胞凋亡率逐渐升高（P<0.05）。
3. 肿瘤细胞增殖与凋亡的关系：A549细胞的增殖与凋亡呈现出一定的负相关性，即随着细胞增殖率的增加，细胞凋亡率逐渐降低。
五、实验结论1. A549细胞在体外培养条件下具有明显的增殖能力，且细胞增殖与培养时间呈正相关。
A549细胞使用说明书
A549细胞使用说明书细胞基本信息产品货号YC-C016细胞名称A549中文名称人非小细胞肺癌细胞细胞形态上皮样，贴壁细胞传代比例1:3~1:590%F12K+10%FBS培养体系源井细胞培养未加双抗，客户可视实际情况选择添加。
冻存液体系50%F12K+40%FBS+10%DMSO特殊备注无STR鉴定细胞接收1)冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮储存或短暂（24H)放至-80℃冰箱保存，或直接进行细胞复苏。
2)活细胞：如果是T25瓶活细胞运输，收到后用75%的酒精对T25瓶外表面进行消毒，之后放在5%CO2、37℃的细胞培养箱静置2h，静置后取出细胞瓶在显微镜下观察细胞贴壁情况和细胞汇合度，分别在200X和40X下各拍2个不同视野的细胞拍照记录。
如果汇合度达到80%以上的传代密度，可以进行传代操作，如果细胞汇合度没有达80%以上不够传代，可以将细胞瓶内的培养基吸出在50ml离心管中并标记该细胞专用培养基后备用，保留8-10ml继续培养至可传代。
注意：收到细胞后，活细胞首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否漏液、浑浊等现象。
冻存细胞若发现干冰已挥发完、冻存管瓶盖脱落、破损等异常情况，请务必拍照保留，并于收货24h内与我们联系（电话：400-688-9033；https://）。
细胞复苏1)准备工作：将完全培养液置37℃水浴锅预热30分钟，随后将冻存的细胞从液氮中取出，转移到-80℃冰箱，放置数分钟让残余液氮挥发；2)在超净台内用吸管吸取6-7mL完全培养液至15mL离心管中；3)将细胞从-80℃冰箱取出暂时放置于干冰里，复苏时稍稍甩动，去除残留的干冰和液氮，再迅速用镊子夹住盖子放入37℃水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在1分钟左右完全融化；4)在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，稍稍晾干。
用单道移液器将所有融化的细胞悬液转至提前准备好的完全培养液中，盖上盖子，1100rpm室温离心4分钟收集细胞；5)超净台内小心吸弃上清，用单道移液器吸取1mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液，再转移至装有4mL完全培养液的T25cm2培养瓶中，写上细胞名称、复苏日期、代次，放置37℃、5%CO2饱和湿度培养箱内培养。
细胞活力测试实验报告
通过本实验，了解细胞活力测试的基本原理和方法，掌握MTT法（MTT比色法）测定细胞活力的操作步骤，并分析细胞在不同条件下的活力变化。
实验时间：2023年4月10日实验地点：细胞生物学实验室实验材料：1. 细胞系：人肺上皮细胞（A549）2. MTT试剂：3-（4，5-二甲基噻唑-2-yl）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）3. DMSO（二甲基亚砜）4. 细胞培养试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素5. 细胞培养瓶、细胞培养板、移液器、吸管、试管、离心机、酶标仪等实验方法：1. 细胞培养：将人肺上皮细胞（A549）接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 细胞传代：待细胞生长至约80%融合时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞，传代至新的培养瓶中。
3. 实验分组：将传代后的细胞分为实验组和对照组，实验组细胞在特定条件下培养，对照组细胞在正常培养条件下培养。
4. 细胞接种：将实验组和对照组细胞分别接种于96孔细胞培养板中，每孔接种细胞数量为5×104个。
5. 细胞培养：将细胞培养板置于37℃、5%CO2的培养箱中培养24小时。
6. MTT实验：向每孔细胞中加入20μl MTT试剂，继续培养4小时。
7. 终止培养：弃去孔内液体，向每孔加入150μl DMSO，振荡混匀。
8. 比色：用酶标仪在490nm波长下测定各孔的吸光度（OD）值。
9. 数据分析：计算实验组和对照组的细胞活力，并比较两组间的差异。
1. 实验组细胞活力较对照组显著降低，说明特定条件下细胞活力受到抑制。
2. 不同浓度药物处理的实验组细胞活力呈剂量依赖性下降，说明药物浓度越高，细胞活力抑制越明显。
实验结论：通过MTT法测定细胞活力，可以有效地评估细胞在不同条件下的生长状态。
本实验结果表明，特定条件下细胞活力受到抑制，且药物浓度越高，细胞活力抑制越明显。
实验讨论：1. MTT法是一种简单、快速、灵敏的细胞活力测定方法，适用于多种细胞系和药物筛选实验。
细胞药物敏感实验报告
一、实验背景随着现代医学的不断发展，肿瘤已成为全球范围内主要的死亡原因之一。
肿瘤的治疗方法主要包括手术、放疗和化疗等。
其中，化疗作为治疗肿瘤的重要手段，其效果的好坏直接影响到患者的生存率和生活质量。
因此，如何筛选出对肿瘤细胞具有高敏感性的化疗药物，对于提高肿瘤治疗效果具有重要意义。
细胞药物敏感实验是一种评估肿瘤细胞对化疗药物敏感性的体外实验方法，可以为临床治疗提供依据。
二、实验目的本实验旨在通过细胞药物敏感实验，评估不同化疗药物对人癌细胞系A549的敏感性，为临床治疗提供参考。
三、实验材料1. 人癌细胞系A5492. 5-氟尿嘧啶（5-FU）、紫杉醇（PTX）、顺铂（DDP）、多西他赛（DTX）等化疗药物3. DMEM培养基、胎牛血清4. 细胞培养箱、显微镜、酶标仪等实验仪器5. 微量移液器、培养皿、细胞计数板等实验用品四、实验方法1. 细胞培养：将人癌细胞系A549接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养，待细胞生长至对数生长期后，用于实验。
2. 细胞计数：采用细胞计数板法对细胞进行计数，以确定细胞浓度。
3. 实验分组：将细胞分为5组，分别加入不同浓度的化疗药物（5-FU、PTX、DDP、DTX）和阴性对照组。
4. 治疗时间：将细胞与药物共培养24小时。
5. 细胞活力检测：采用MTT法检测细胞活力，计算药物抑制率。
五、实验结果1. 不同化疗药物对人癌细胞系A549的抑制作用实验结果显示，5-FU、PTX、DDP、DTX等化疗药物对人癌细胞系A549均具有明显的抑制作用，且抑制作用随着药物浓度的增加而增强。
2. 不同化疗药物的半数抑制浓度（IC50）根据MTT法检测结果，计算不同化疗药物的半数抑制浓度（IC50），结果如下：- 5-FU：20.0 µM- PTX：30.0 µM- DDP：40.0 µM- DTX：50.0 µM六、实验结论1. 5-FU、PTX、DDP、DTX等化疗药物对人癌细胞系A549具有明显的抑制作用，且抑制作用随着药物浓度的增加而增强。
A549肺癌细胞条件培养液促进人骨髓间充质干细胞的增殖和迁移
CHINESE JOURNAL OF ANATOMY V ol.44 No.1 2021 解剖学杂志 2021年第44卷第1期A549肺癌细胞条件培养液促进人骨髓间充质干细胞的增殖和迁移*姜杨1王璐璐1金海峰1姚立杰1张嵩2刘丹阳3李永涛1张善强1沈雷1△（齐齐哈尔医学院，1 解剖学教研室，2 细胞生物学教研室，3 组织学胚胎学教研室，齐齐哈尔 161006）摘要目的：探讨A549肺癌细胞对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）增殖和运动的影响。
方法：以提取A549肺癌细胞和BEAS-2B正常人肺上皮细胞上清液制备条件培养基，培养的hBMSCs分别为A549组和BEAS-2B组；2组均添50 nmol/L趋化因子-8（CXCL-8），分别为A549 C组和BEAS-2B C组，若同时添加100 nmol/L triciribine （Akt抑制剂）分别为A549 CT组和BEAS-2B CT组；A549组加入100 nmol/L triciribine为A549 T组。
正常条件下培养的hBMSCs为对照组。
ELISA检测细胞上清液中CXCL-8含量和hBMSCs裂解液Akt、P-Akt蛋白的表达。
MTT实验、流式细胞仪和transwell细胞小室实验分别检测各组hBMSCs吸光度值（A490值）、细胞凋亡率和细胞迁移数目。
结果：与BEAS-2B上清液相比，A549上清液中CXCL-8含量明显升高。
各组hBMSCs的A490值、细胞凋亡率、细胞迁移数目、Akt和P-Akt蛋白表达等均具有显著差异，尤以A549 C组hBMSCs最明显。
与A549 C 组相比，A549 CT组hBMSCs的A490值和细胞迁移数目、Akt和P-Akt蛋白表达均降低，细胞凋亡率升高较显著。
结论：A549细胞表达的CXCL-8能激活Akt通路，促进hBMSCs增殖和运动。
关键词趋化因子-8；人骨髓间充质干细胞；Akt信号通路；细胞迁移Conditioned media prepared from A549 lung carcinoma cells promotes the proliferation and migration of human bone marrow mesenchymal stem cells*Jiang Yang1， Wang Lulu1， Jin Haifeng1， Yao Lijie1， Zhang Song2， Liu Danyang3，Li Yongtao1， Zhang Shanqiang1， Shen Lei1△（1. Department of Anatomy，2. Department of Cell Biology，3. Department of Histology and Embryology， Qiqihar Medical University， Qiqihar 161006， China）Abstract Objective：To investigate the effect of A549 cells （lung carcinoma cells） on the proliferation and migration of human bone marrow mesenchymal stem cells （hBMSCs）. Methods： The supernatants of A549 cells and BEAS-2B cells （the normal human bronchial epithelial cell line）were extracted. hBMSCs cultured with the supernatants were called A549 group and BEAS-2B group respectively； 50 nmol/L chemokine-8 （CXCL-8）was added to both groups to form A549 C group and BEAS-2B C group； 100 nmol/L triciribine （Akt inhibitor） was added at the same time to form A549 CT group and BEAS-2B CT group； 100 nmol/L triciribine was added to A549 group to form A549 T group. hBMSCs incubated in the conventional condition were served as the control group. The CXCL-8 in the cell culture supernatants and the expression of Akt and P-Akt in hBMSCs lysates were tested by ELISA. MTT assay， flow cytometry and transwell assay were used to detect the absorbance （A490）， apoptosis rate and the number of migrating cells in each group respectively. Results： Compared with the BEAS-2B supernatant， the CXCL-8 in the A549 supernatant was significantly increased. There were significant differences in A490， apoptosis rate， the number of migrating cells， and Akt and P-Akt expressions of hBMSCs in each group， especially in A549 C group. Compared with the A549 C group， the A490 and the number of migrating cells， Akt and P-Akt expression of hBMSCs in the A549 CT group were reduced， but the apoptosis rate was increased significantly. Conclusion： CXCL-8 expressed by A549 cells can activate the Akt pathway and promote the proliferation and migration of hBMSCs.Key words C-X-C motif chemokine ligand-8；human bone marrow mesenchymal stem cell； Akt signaling pathway； cell migrationdoi： 10.3969/j.issn.1001-1633.2021.01.003·论 著·* 黑龙江省卫生健康委员会科研课题（2018470）第1作者 E-mail：*****************.cn△通信作者，E-mail：******************.cn收稿日期：2020-04-09；修回日期：2020-09-09间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）是促成肺癌发生的因素之一[1]。
A549细胞培养方法
A549细胞培养方法1.A549细胞的传代：A.在细胞培养器中用无菌吸管吸取培养器中的A549细胞悬液；B.将吸取的细胞悬液转入离心管中，以200xg的速度离心5分钟；C.弃去上清液，用细胞培养基轻轻悬浮细胞沉淀，避免细胞的受伤；D.将细胞悬浮液分装到新的培养器中，加入足够的培养基；E.将培养器放入细胞培养箱中，以37°C和5%CO2条件下培养。
2.A549细胞的培养基配制：A.常用的A549细胞培养基配方为DMEM/F12，含有10%胎牛血清（FBS）；B.在无菌条件下，将DMEM/F12培养基倒入无菌培养瓶中；C. 加入10% FBS、1%青霉素/链霉素溶液（100倍浓度），最终体积稀释为100 ml；D.在细胞培养箱中保持4°C保存培养基。
3.细胞分裂周期的控制：A.A549细胞的最佳生长条件为37°C和5%CO2；B.细胞密度达到80-90%时，可以进行细胞分裂周期的控制；C.使用无菌吸管将培养器中的培养基离心，去除上清液；D. 加入足够的预温PBS或EDTA-Trypsin溶液，使细胞与其接触；E.将培养器放入孵化器中，以37°C孵育5-10分钟，直到细胞完全分离；F.加入足够的培养基终止胰蛋白酶切割细胞，离心沉淀，去除上清液；G.加入足够的新鲜培养基，将细胞悬浮液分装到新的培养器中，继续培养。
4.细胞的处理和保存：A.停止细胞培养前，将培养器中的细胞悬液用无菌吸管取出；B.离心培养物，去除上清液；C.加入足够的预冷无血清培养基，将细胞悬浮液分装到新的培养器中，即可保存；D.将培养器放入液氮保存。
通过遵循以上措施，可以有效地进行A549细胞的培养。
在实验中，一定要注意细胞的无菌操作，并且保持合适的温度、湿度和气体条件，以最大限度地维持细胞的健康和生长。
同时，及时进行细胞的传代和处理，确保实验的可靠和准确。
有了合适的培养方法，A549细胞可以在不同研究领域中广泛应用，如肺癌研究、药物筛选和基因表达分析等。
细胞凋亡实验报告
细胞凋亡实验报告细胞凋亡实验报告引言：细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，它在维持生物体内部平衡和发育过程中起着关键作用。
本次实验旨在通过细胞凋亡实验，探究不同因素对细胞凋亡的影响，从而进一步了解细胞凋亡的机制和调控。
材料与方法：1. 细胞系：使用人类肺癌细胞系A549作为实验对象。
2. 药物：选择化学药物紫杉醇（Paclitaxel）作为细胞凋亡诱导剂。
3. 细胞培养条件：将A549细胞系在含有DMEM培养基和10%胎牛血清的培养皿中培养，保持在37℃、5% CO2的恒温培养箱中。
实验步骤：1. 细胞培养：将A549细胞系接种于培养皿中，培养至细胞密度达到80%左右。
2. 细胞处理：将培养皿中的培养基抽取，加入不同浓度的紫杉醇处理液，分为高、中、低三个浓度组，每组设置相应的对照组。
3. 细胞观察：将处理后的细胞培养皿放回恒温培养箱中，培养24小时后观察细胞形态和数量的变化。
4. 细胞计数：使用显微镜观察细胞数目，并通过计数室内的细胞数目，计算细胞存活率。
5. 细胞凋亡检测：使用流式细胞仪检测细胞凋亡率，采用荧光染料标记细胞并进行分析。
结果与讨论：在本次实验中，我们观察到不同浓度的紫杉醇处理后，A549细胞的形态和数量发生了明显变化。
在高浓度组，细胞数量明显减少，细胞形态发生变化，出现细胞收缩和凋亡体的形成。
而在低浓度组，细胞数量减少较少，细胞形态变化不明显。
对照组中，细胞数量和形态均与处理组相似。
通过细胞计数的结果，我们计算出了细胞存活率，并发现随着紫杉醇浓度的增加，细胞存活率逐渐降低。
这说明紫杉醇可以诱导A549细胞发生凋亡，并且凋亡率与药物浓度呈正相关。
进一步使用流式细胞仪检测细胞凋亡率，我们发现在高浓度组中，细胞凋亡率明显增加，而在低浓度组和对照组中，细胞凋亡率相对较低。
这与细胞存活率的结果相一致，进一步验证了紫杉醇可以诱导A549细胞发生凋亡的能力。
细胞凋亡是一种高度调控的细胞死亡过程，它在生物体内部平衡和发育过程中发挥着重要作用。
A549细胞培养法测定RCA实验报告
A549细胞培养法测定RCA实验报告
实验日期：
一、实验方法
1.取对数生长期的A549细胞，消化，计数。
2.用含10%FCS的DMEM培养基将细胞密度调整至4×105cells/mL，向12孔
板中加入1mL/well的细胞悬液，接种1块12孔板，37℃，5%CO2培养过夜。
3.弃去旧培养液，将2.5×109VP待测病毒样品稀释于10mL含10%FCS的DMEM
培养液中。
4.两孔为对照，其余10孔每孔加入1mL稀释好的待测病毒样品。
5.37℃，5%CO2培养14天，并在第5天和第10天换新鲜培养液，每孔加入1mL
培养液。
6.结果判断
加入待测病毒样品的10孔均无细胞病变效应(CPE)出现，同时，阴性对照的细胞正常，初步判断病毒样品的RCA检测合格。
二、实验结果
三、结果分析
注：该实验方法只用于实验过程中初步的病毒RCA检测，质控指标的检测按正式实验要求进行。
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A549细胞的培养
A549细胞为人肺腺癌细胞，属于传代细胞系，可稳定地传代培养。
一般用胰酶消化后，加入生长液稀释，以1：2～1：3传代培养都是可行的。
一、 [所需溶液]
1，细胞冲洗液：磷酸盐缓冲液(PBS)——无Ca、Mg
NACL 8.00g；
KCL 0.20g;
KH2PO4 0.20g;
Na2HPO4 .。
12H2O 1.15g
加水至 1 000mL,将PH调至7.4，高压灭菌。
2，胰酶-PBS消化液
结晶胰酶 2.5g;
高压灭菌后的PBS 1000ml
用磁力搅拌器搅拌均匀，使其完全溶解，通过0.22μm的滤膜过滤除菌，分装备用，放置—20℃保存。
3，细胞培养液：RPMI 1640培养液
二、［细胞的维持和培养］
１，细胞的复苏
（１）准备一个盛有40℃温水的烧杯，从液氮罐中取出存有Ａ５４９细胞的冻存管，放于40℃温水中，用镊子夹住轻轻摇动使其迅速融化（2-3 min）。
（２）在无菌操作台中采用75%的乙醇彻底擦拭冻存管，然后打开冻存管，注意动作要轻柔。
（３）加入10ml以上预热的细胞培养液至25cm2培养瓶中。
（４）倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2培养。
（５）8-10h后，更换新的培养液。
（６）常规传代培养。
２， A549细胞更换新的培养液
（１）无菌操作打开培养瓶瓶盖，倒掉培养液。
（２）用PBS反复冲洗细胞2～3遍。
（３）加入新鲜的预热好的培养液及10%的胎牛血清。
（４）倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2培养。
３， A549细胞的传代
（１）无菌操作打开培养瓶瓶盖，倒掉培养液。
（２）向已经长满的细胞中加入消化液1ml，轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有的细胞表面，吸弃或倒掉，轻轻冲洗细胞表面2～3遍，以尽可能去除原培养液中的牛血清。
（３）加入1ml消化液，在室温1-2min后把培养瓶放置在倒置显微镜下观察，发现细胞的胞质回缩、胞间质增大后，立即终止消化。
（４）加入5ml预热至37℃的培养液，用玻璃吸管反复吹打以分散细胞。
吹打过程按顺序进行，从培养瓶底部一边开始到另一边结束，以确保所有的底部都被吹到。
（５）吸取一半的细胞悬液，接种到新的25cm2培养瓶中，补足培养液，并且添加10%～20%的胎牛血清。
通常每瓶液体量为5～10ml。
（６）倒置显微镜下观察，37℃、5%CO2培养。
注意事项：
（１）所有液体在加入细胞瓶前均应预热到37℃。
所有液体均应调整PH至7.2左右，均不能超过7.4。
（２）细胞消化传代时吹打不要产生气泡，吹打力量不宜过多，否则会损伤细胞。
（３）严格执行无菌操作的要求。
（４）尽可能减少消化液剩余量，过多时会对细胞产生损伤，可多添加些含牛血清的培养液中和。
（５）培养瓶在室温中放置时间应尽可能短。
４， A549细胞的冻存
（１）消化已生长融合的单层细胞。
（２）用生长液悬浮细胞，并且添加10%的FCS和10%DMSO(二甲基亚砜)。
分装在2ml容积的冻存管中。
（３）用本实验室自制的冻存包包裹好冻存管，放在-70℃冰箱中过夜。
（４）放入液氮中冻存。