最新丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定
酸氨基转移酶(ALT)测定(速率丙氨法)标准化操作程序文件
酸氨基转移酶(ALT)测定（速率丙氨法）标准化操作程序文件1概述肝脏内含有丰富的酶系统，以维持机体的正常生理代谢过程。
不少酶是由肝脏合成并由肝胆系统排泄，当肝脏有病时，可由于酶生成亢进或释出异常，引起血清内酶的活性改变。
这些改变在一定程度内反映了肝脏的功能状况。
人体转氨酶的种类甚多，而以血清丙氨酸氨基转移酶，血清天门冬氨酸转换酶活性最强。
此两种酶广泛在于机体组织细胞内，以肝脏，心脏，肾脏及骨骼肌中较多。
在肝脏中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量最多，AST以心肌含量最多，此两种转氨酶较多地释放在血液中，使血清中两种酶活性增高。
2 样本收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。
血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。
样本在4摄氏度可稳定7天。
采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。
3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。
不建议采用血浆标本。
3 方法原理L-丙氨酸+α-酮戊二酸—————→丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH—————→L-乳酸+NAD﹢4剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。
启用后在2-8度可稳定30天。
若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在340nm处的光吸收值低于1.0A,应予丢弃。
试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。
5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数：样品量15 u/l 试剂量：第一试剂240 u/l（R1）；第二试剂60 u/l测光点23—38 测定模式：速率法负反应分析波长：340nm/405nm(主波长/副波长)6计算方法样本浓度（U/L）=样本管吸光度的变化×校准液浓度（U/L）校正管吸光度的变化7 线性范围：本实验的线性范围：4----1000U/L8 参考范围：男性；：5—40U/L 女性：5---35 U/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。
血清丙氨酸氨基转移酶测定速率法
血清丙氨酸氨基转移酶测定速率法血清丙氨酸氨基转移酶（简称ALT）测定速率法，听起来是不是有点拗口？别担心，今天咱们就一起来聊聊这个看似复杂、实则挺简单的东西。
ALT是什么呢？它其实是一种存在于我们身体里的酶，主要在肝脏里工作，帮忙转化一些重要的氨基酸。
你知道的，肝脏就是那个“沉默的英雄”，总是在默默地承担着解毒、代谢的重任。
只不过，有时候肝脏忙碌得有点过头了，搞得肝细胞有点“小情绪”，于是这时候，ALT的含量就会变得比较高，这可就给我们敲响了警钟。
所以，ALT的测定在体检中占据着举足轻重的位置，可以帮助我们了解肝脏的健康状况。
说到这里，你可能会想，“哎，那测这个有啥用啊？”嘿，告诉你，它可是个大有用处的检测指标呢！ALT升高常常意味着肝脏受损或者有炎症，比如肝炎、脂肪肝，甚至是肝硬化，都是有可能导致ALT升高的。
最神奇的是，ALT的升高通常早早就会出现在你自己没有感觉到的情况下。
所以，定期检查血清ALT，基本上能帮你提前发现肝脏的小毛病，避免大病发生。
那咱们要怎么测呢？ALT测定的方法其实很多，不过最常见的还是速率法。
这种方法可不像你想象中那样复杂，一般来说，检测的步骤其实挺简单的。
首先得抽点血，血液样本可不能少。
然后，实验室里会通过加试剂、测量反应速度等方式，得出ALT的活性水平。
说白了，咱们就是通过看这个酶反应的速度来推算ALT的水平。
这个方法既准确又快捷，基本上1015分钟就能出结果，简直是急救中的“快刀斩乱麻”。
不过，怎么测也得有一个标准吧？ALT测定的标准很明确，健康人的ALT水平通常是在正常范围内，也就是50单位/升以下。
超过这个数值，就得注意了。
比如，如果ALT数值一度飙升到100单位/升，可能就说明你的肝脏正在经历一些“风雨”，要赶紧去医院看看了。
如果你想知道具体数值和标准，最好还是请教医生，毕竟每个人的身体情况都不一样。
让咱们再来谈谈这个“速率法”，听起来好像很厉害对吧？速率法就是通过测量ALT催化反应中产物变化的速度，来得出酶的活性。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定方法操作规程
包头文治医院- 1 -丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（IFCC法）【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或肝素血浆中丙氨酸氨基转移酶的活力。
【检验原理】在ALT催化下，从丙氨酸转移到2个氨基到α-酮戊二酸上，生成产物谷氨酸和丙酮酸。
后者通过乳酸脱氢酶催化下转变成乳酸，在340nm波长条件下检测到NADH吸光度下降速率，与ALT的活力成比例。
L-丙氨酸+α-酮戊二酸ALT丙酮酸+ L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+LDH L-乳酸+NAD++H2O【主要组成成份】R1：Tris缓冲液150mmol/L L-丙氨酸750 mmol/L 乳酸脱氢酶（LDH） 1200U/LNADH 0.4mmol/LR2：α-酮戊二酸90mmol/L NADH 0.9mmol/L *不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2℃~8℃保存有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定28天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清或肝素血浆样本，采集后及时测定，应避免污染。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm 温度37℃分析类型动力学法反应方向下降反应操作步骤空白/校准/样本10ul R1200ul混匀，37℃孵育5min；R250ul 混匀，37℃孵育1min后，连续测定3min内的吸光度，计算吸光度变化率（ΔA/min）。
丙氨酸氨基转移酶ALT
丙氨酸氨基转移酶ALT(GPT紫外乳酸脱氢酶法作业指导书1、前言试验名称：丙氨酸氨基转移酶测定，英文名称：ALT，方法：紫外-乳酸脱氢酶法。
本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB450全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的丙氨酸氨基转移酶活力，以保证测定结果的准确可靠。
本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中丙氨酸氨基转移酶的活力。
丙氨酸氨基转移酶在肝脏中有较高的浓度，而在肾、心、骨骼肌、胰、脾、肺脏中则含量较少，ALT升高通常是由某些与肝脏有关的疾病引起的，这些疾病包括：肝硬化、肝癌、病毒性或中毒性肝炎和阻塞性黄疸。
在急性病毒性或中毒性肝炎时，ALT明显高于AST，而对于绝大多数的慢性肝炎病人ALT则低于AST，ALT升高也见于广泛损伤和肌肉疾病、伴有休克的循环衰竭、缺氧、心肌梗塞和溶血性疾病。
2、测定原理本试验测定原理以IFCC推荐的方法为基础，实验分两步进行测定原理如下：a、样本中的ALT催化丙氨酸氨基转换至α-氧代戊二酸，生成丙柄酸和L-谷氨酸。
b、枘柄酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸，同时NADH被氧化为NAD+，从而合340nm处的光吸收值下降，通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可以测定ALT的活力。
L-丙氨酸+α-氧代戊二酸ALT丙酮酸+L-谷氨酸LDH L-乳酸+ NAD+丙酮酸+NADH3、试剂试剂生产商：长海科华生物工程股份有限公司。
剂型：液体双试剂。
包装量：R1：4*40ml R2：4*20ml注册号：沪食药监械（准）字2010第2400056号。
生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。
基本成份：试剂1：L-丙氨酸600mmol/l乳酸脱氢酶﹥1820u/lNADH0.26mmol/lTris缓冲液80mmol/l试剂2：Tris缓冲液80mmol/lα-氧代戊二酸36mmol/lEDTA 5.0mmol/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。
丙氨酸胺基转移酶测定SOP_ALT临床意义_检验科生化项目SOP
丙氨酸胺基转移酶测定SOP_ALT临床意义_检验科生化项目SOP丙氨酸胺基转移酶（alanine aminotransferase，ALT），又称谷丙转氨酶，是一种存在于细胞内的酶，主要分布于肝脏、心肌、肾脏和肌肉组织中。
ALT的主要功能是参与氨基酸代谢，将丙氨酸转化为丙酮酸，并把谷氨酸转化为谷酸。
ALT是一种常用的临床血液生化指标之一，用于评估肝细胞损伤和肝功能。
ALT水平常常在肝脏疾病、肝细胞损伤和一些非肝脏疾病中发生变化，因此，ALT的测定具有重要的临床意义。
测定ALT的方法是通过检测血液中ALT的活性。
以下是丙氨酸胺基转移酶测定的SOP（标准操作程序）：1. 准备样本：选择新鲜的全血或血清样本。
尽量避免使用有凝块的样本。
将样本转移到离心管中，并在3000 rpm的离心机中离心10分钟。
2.样本处理：将血清分装到干净的离心管中，避免沉淀和异物。
在2-8摄氏度的条件下保存样本，如无法在2小时内进行测定，应冷冻保存。
3.实验准备：将所需试剂室温恢复至室温，配制工作液，准备好标准品和质控品。
4.仪器设定：打开酶标仪，选择ALT测定程序。
根据仪器的要求进行设定。
5.样本测定：将标准品和质控品与样本一起放置在仪器的试剂槽中。
按照仪器的操作指南，进行试剂的加入和反应的进行。
6.记录结果：根据仪器的操作指南，测定样本的吸光度，并记录下结果。
计算样本的ALT浓度。
7.结果分析：根据仪器的参考范围和临床经验，对ALT的测定结果进行分析和解读。
1.评估肝脏健康状况：ALT水平是评估肝细胞损伤和肝功能的重要指标之一、高ALT水平可以提示肝脏病变或损伤，如肝炎、肝硬化等。
2.监测肝炎治疗效果：ALT水平在肝炎治疗中常被用来监测治疗效果。
治疗有效时，ALT水平会下降。
3.鉴别肝脏疾病：ALT水平的变化可以用来鉴别肝脏疾病的类型。
例如，在急性肝炎中，ALT水平常常显著升高。
而在慢性肝病中，ALT水平可能轻度升高或持续在正常范围内。
ALTAST测定方法
ALTAST测定方法ALT和AST是两种常用的肝功能指标，用于评估肝脏疾病和损伤程度。
本文将介绍ALT和AST的测定方法。
一、ALT（丙氨酸氨基转移酶）的测定方法：ALT是一种肝细胞特异性酶，主要存在于肝细胞的胞浆中。
当肝细胞受损或破坏时，ALT会释放入血液中，因此血液中ALT水平的升高通常与肝脏疾病相关。
ALT的测定方法一般采用酶动力学法或颜色反应法。
1.酶动力学法：这种方法是通过衡量ALT催化丙酮酸和谷氨酸互相转化的速率来测定ALT的活性。
这种方法的原理是ALT催化丙酮酸和谷氨酸生成谷草转氨酶和谷氧化酶，同时反应中NADH的消耗会导致光学密度的变化。
通过测量这种变化可以确定ALT的活性水平。
2.颜色反应法：颜色反应法是用于测定ALT浓度的常用方法，它基于谷氨酸和丙酮酸在特定条件下与ALT催化生成谷草转氨酶和谷氧化酶的反应。
这种方法通常使用的试剂盒包含了特定的底物和酶，当ALT存在时，底物与其催化生成产物，产物的浓度可以通过光度计测量。
二、AST（天冬氨酸氨基转移酶）的测定方法：AST也是一种肝脏酶，但它不仅存在于肝细胞中，还存在于心肌、肌肉、肾脏和红细胞等组织中。
因此AST的升高并不一定代表肝脏疾病，也可能与其他组织的损伤有关。
AST的测定方法与ALT类似，也有酶动力学法和颜色反应法两种常见方法。
1.酶动力学法：该方法是通过测量AST催化天冬氨酸和α-酮戊二酸互相转化的速率来测定AST的活性。
反应中，NADH或NADPH的消耗导致光学密度的变化，可以用于测量AST的活性水平。
2.颜色反应法：AST的颜色反应法原理与ALT的相似，使用特定的底物和酶，当AST存在时，底物与其催化生成产物，产物的浓度可以通过光度计测量。
这些方法虽然有一定的差异，但一般都基于底物与酶的反应原理，通过测量底物与产物的光学密度变化或者测量酶活性来确定血液中ALT和AST的水平。
综上所述，ALT和AST的测定方法主要有酶动力学法和颜色反应法两种。
丙氨酸氨基转移酶检测方法
丙氨酸氨基转移酶检测方法丙氨酸氨基转移酶(ALT)是一种重要的肝脏酶,也是一种常见的生化指标。
检测方法通常用于判断肝脏功能的健康程度和疾病的演变趋势。
下面，我们将对丙氨酸氨基转移酶检测方法进行详细的阐述。
一、常规检测方法常规检测方法是指采用血清学方法检测ALT水平。
具体步骤如下：1.患者空腹4～8小时。
2.采集3～5ml静脉血标本，禁止吸烟和饮酒。
3.将血样放于离心管中，进行离心处理，得到血清样本。
4.通过检测仪器检测血清ALT酶的含量。
二、生物传感器检测方法生物传感器检测方法可以检测非常低的ALT水平，可以提供更加精确的测试结果。
具体步骤如下：1.准备含有具有高选择性的生物传感器的电极。
2.采集患者的静脉血标本。
3.将血样与生物传感器电极接触并依据特定的工艺条件进行分析。
4.通过仪器获得ALT的浓度明确的结果。
三、免疫学方法免疫学方法采用免疫学技术分析ALT特定抗体的含量。
具体步骤如下：1.准备特定的抗ALT抗体试剂。
2.采集患者的静脉血标本。
3.加入抗ALT抗体图谱，进行特异性反应，每个抗原对应一个抗体。
4.使用适当的试剂盒，对空白对照样品和样品进行ELISA测定。
5.通过光学振荡仪读取ALT特定抗体的含量并获得浓度明确的结果。
综上所述，以上列出的三种方法都是常用的丙氨酸氨基转移酶检测方法。
针对不同的病情和检测需求选择不同的检测方法非常重要。
总之，如果您的ALT测试结果不正常，医生会建议您进一步进行了解。
您可以向医生咨询，了解其他可能涉及的测试方法和预防方法。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定
标本的测定（改良赖氏法）
❖ 取适量基质缓冲液和待测血清，37℃水浴预温5min。 ❖ 取干净试管2支标明管号，按下表所示操作。
（对照管） 0.10 ---
基质缓冲液
0.50
❖ 混匀，放置5min，在505nm处以蒸馏水调零，读取各管吸光
度。
❖ 以测定管A测-A对之值作为标本的吸光度值，在标准曲线查得相
反应总体积
样本体积 比色杯光径
2020/3/23
12
注意事项
1、尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化 合物而影响测定结果，但因其量不多，加之对505nm的吸光度 远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强，尤其用标准曲线作测定 时，所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正，摈弃了 赖氏法一些固有弊端，结果比其他比色法准确。
可不同程度的损害肝细胞，引起ALT的升高。
2020/3/23
15
器材：分光光度计、半自动生化分析仪、恒温水浴箱、微量进样
器、移液管等。
待测标本：血清
2020/3/23
8
标准曲线的绘制（改良赖氏法）
❖ 取干净试管5支标明管号，按下表所示操作。
加入物（ml）
0
1
2
3
4
0.1mol/L磷酸盐缓冲液 2.0mmol/L丙酮酸标准液
基质缓冲液 2,4二硝基苯肼溶液
0.4mol/L NaOH溶液
完全。加入NaOH溶液的方法和速度要一致，不同的
方法及速度也会导致吸光度读数的差异。
5、底物中的α-酮戊二酸和2，4-二硝基苯肼均为呈色物
质，称量必须很准确，每批试剂的空白管吸光度上下
波动不应超过0.015，如超出次范围，应检查试剂及
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1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义？
2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？为什么要 避免溶血？
丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定
【目的要求】
1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作
方法。
3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
二是比色测定法，如：金氏法（King法）、穆氏法（Mohun 法）和赖 氏法（Reitman-Frankel法）。其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全 相同。不同之处在于作用时间：King法60min ，Mohun法和 Reiman法 30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是： 每1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min，生成1μmol丙酮酸称为一个单 位。 Mohun 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4，37℃条件下与底物作 用30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。赖氏法没有制定自身的单位定 义，而是以实验数据套用速率法的卡门氏单位作表示的。1个卡门氏单位 的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血 清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。可见卡门氏单位不是用物质 的量浓度，而是用物质的吸光度表示酶的活性单位的。若将卡门氏单位的 定义条件代入国际单位计算公式，即得卡门氏单位与国际单位的换算关系： 1卡门氏单位=0.4821 IU/L(25℃)，便可将卡门氏单位兑换成国际单位。
பைடு நூலகம்原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度(改为低 浓度)的改良赖氏法，对卡门氏单位的科学套用，使比色 法一些缺陷得到了卓有成效的克服，使其结果与速率法较 为一致，能较好反映酶的真实活性。
由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足，反应速度 只能达到最大速度的65%；显色剂2,4-二硝基苯肼的用量只 及反应液中酮酸浓度的一半；保温30min的酶促反应后， 新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控 制的竞争显色的几率问题，如此等等，使赖氏法的重现性 较差，在测量精度上仍与连续监测法相差甚大。
【临床意义】
肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细 胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清 中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要 指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药 物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、 肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于 阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发 性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。