桑叶中多糖的提取与分析方法的研究
纸打印）本科生毕业设计[论文]（华文中宋小初号加粗居中）（题目）（黑体2号加粗居中）桑叶中多糖的提取与分析方法的研究院系_______________________专业班级_______________________姓名_______________________学号_______________________指导教师_______________________年月日（华文中宋3号居中）学位论文原创性声明（黑体小2号加粗居中）本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。
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（请在以上相应方框内打“√”）（宋体小4号）作者签名：年月日导师签名：年月日(注：此页内容装订在论文扉页)摘要由于科技技术的不断进步以及人们生活水平的不断改善，保健营养品越来越受到人们的关注，尤其体现在原材料是否采用天然材料方面，而天生就具有美誉的“神仙草”——桑叶，便逐渐走入了人们的视野中，随着其市场的兴起，不少科学家、研究人员对桑叶进行了多方面的研究。
研究表明：桑叶作为一种天然保健营养品，其有效成分较多，如黄酮、多糖、DNJ等等。
本文将多角度、深层次的对桑叶中的多糖成分进行剖析。
笔者首先通过文献资料查阅，熟悉了国内外对桑叶中多糖的研究较为权威结果，通过对比笔者将选择用苯酚-硫酸法进行多糖含量的测定工作。
关于采取何种方面提取桑叶中的堆糖，通常使用的方法为热水浸提法，也是经常被提及的水提法。
根据之前查阅资料显示，水提法在桑叶提取多糖实验中出现的频率最多。
经过多出实验最终得到水提法的最佳条件，即提取温度为80℃，持续两小时，共提取两次，液固比为30:1，在上述假定情况下，提取得到的粗糖约0.306g，占桑叶总重的6.12%；接下来开始实施超声提取法，优化组合超声波功率、持续时间以及液固比这三个指标，进而得到最佳的提取条件。
经过实验得到最优的组合为：功率采用300W，持续时间一刻钟，液固比为20:1，最后得到粗糖物质共0.446g，占桑叶总重8.92%；接着笔者将对基于最佳的实验条件下提取的粗糖进行去除杂质、提高纯度，首先在粗糖中加10%的三氯乙酸溶液用于去掉粗糖中的杂质-蛋白质，然后通过过滤、浓缩等工序，最后加入95%的酒精后静置一段时间，通过过滤、沉积、烘干最后得到多糖产物，紧接着再用活性炭对多糖产物进行去色，之后再使用醇沉法提纯，笔者通过多次使用各不相同浓度的乙醇进行沉淀，实验表明，当且仅当乙醇浓度为80%时，沉淀的效果最佳，且能获得质量最多的多糖精品，称重得32.19mg，得率为10.52%；最后一步，将多糖精品溶解在0.5L的蒸馏水中相同条件下、相同处理流程得到的葡萄糖溶液在490nm处的吸光度为0.6201，然后可以通过计算得到多糖物质重量为12.5mg，经过测定计算，其多糖含量为38.8%。
关键词：桑叶，多糖，紫外分光光度计，超声提取AbstractWith the rapid development of science and technology and the improvement of living standards, people are paying more and more attention to natural health nutrition products, and the “Fairy Grass” that has a natural reputation, mulberry leaves, gradually enters people’s field of vision. With the rise of its market, many scientists and researchers have conducted various researches on mulberry leaves. Studies have shown that: As a natural health nutrition product, mulberry leaves have many active ingredients, such as flavonoids, polysaccharides, DNJ, and so on. This article will be multi-angle, deep-level analysis of polysaccharides in mulberry leaves.The author first consulted the literature and was familiar with the authoritative results of the research on polysaccharides in mulberry leaves at home and abroad. By comparison, the author selected the phenol-sulfuric acid method to detect the polysaccharide content. The extraction of polysaccharides in mulberry leaves is performed by hot water extraction, which is often referred to as water extraction. According to the previous review, the water extraction method has appeared most frequently in the mulberry leaf polysaccharide extraction experiment. The optimum extraction conditions for water extraction were determined as follows: extraction temperature 80°C, extraction time 2h, extraction times 2 times, liquid-to-solid ratio 30:1 during extraction, and crude sugar extracted under the above assumptions. About 0.306g, accounting for 6.12% of the total weight of mulberry leaves; after the ultrasonic extraction experiment, set the ultrasonic extraction power, ultrasonic extraction time and extraction liquid solid ratio of these three univariate variables to determine the best ultrasonic extraction process conditions The ultrasonic extraction power was 300W, the ultrasonic extraction time was 25 min, and the liquid-solid ratio was 20:1. At this time, the crude sugar product was 0.446 g, accounting for 8.92% of the total mulberry leaf weight; The crude sugar extracted under the experimental conditions is used to remove impurities and increase the purity. First, 10% trichloroacetic acid solution is added to the crude sugar to remove the protein from the product, and then is left standing to filter, and is concentrated under reduced pressure. After 95% ethanol is added, it is allowed tostand and filtered. After the precipitate is dried, the polysaccharide product is obtained, and then the activated charcoal is used to decolorize the polysaccharide product, and then the alcohol is used to purify the solution. The author uses multiple different concentrations of ethanol to precipitate, and experiments are performed. Ming, if and only if the ethanol concentration is 80%, the best effect of precipitation, and can get the most quality polysaccharide boutique, weighed 32.19mg, the yield was 10.52%; the last step, dissolve the polysaccharide boutique in 0.5L In the distilled water, the absorbance at 490 nm was determined to be 0.6201 in the same procedure as the standard curve of glucose, and the mass of the polysaccharide in the fine polysaccharide was calculated to be 12.5 mg. After calculation, the polysaccharide content was 38.8%..Key Words：Mulberry leaf, polysaccharide, ultraviolet spectrophotometer, ultrasonic extraction目录摘要 (Ⅰ)Abstract (Ⅰ)1、绪论 (1)1.1研究背景与意义 (1)1.2多糖的研究进展 (3)1.3多糖的化学组成及结构 (4)1.4研究内容 (5)1.4.1多糖的提取方法研究 (5)1.4.2多糖的分离与纯化研究 (6)1.4.3多糖的分析与检测研究 (7)....... .. (7)2、实验部分 (8)2.1主要仪器与试剂 (8)2.2溶液的制备 (8)2.2.1葡萄糖标准溶液的制备 (8)2.2.2苯酚溶液的制备 (8)2.2.3三氯乙酸溶液的配制 (9)2.3标准曲线的绘制 (9)2.4桑叶中多糖的提取工艺流程 (9)2.4.1水提法实验流程： (9)2.4.2 水提法实验方案设计 (10)2.4.3超声提取法 (10)2.4.4 超声提取实验方案设计 (11)2.5多糖粗产品的分析纯化 (11)2.5.1除蛋白质 (11)2.5.2活性炭脱色 (11)2.4.3醇沉工艺 (11)2.6多糖粗产品含量的检测 (11)....... (11)3、实验结果与讨论 (12)3.1 标准曲线 (12)葡萄糖标准溶液在紫外可见分光光度计扫描图 (12)3.2实验数据处理 (13)正交实验结果 (13)....... (20)4、结论 (21)....... (21)参考文献 (22)致谢 (24)1、绪论1.1研究背景与意义1.1研究的背景和意义由于现在人们的生活水平不断得到改善，人们越来越注重自己的身体健康问题。
桑叶多糖降血糖实验作文
桑叶多糖降血糖实验作文桑叶多糖对糖尿病有明显的治疗作用，因此从桑叶中提取、纯化得到桑叶多糖并研究其药理学活性，对研制治疗糖尿病的新药具有重要的学术意义和实用价值。
利用热水浸提法从桑叶中提取多糖，进行纯化精制，以提高多糖含量，并用絮凝纯化后得到的桑叶多糖进行降血糖活性方面的研究。
首先，采用热水浸提法提取桑叶多糖，分别以不同的提取时间，提取温度，提取液pH、料液比（桑叶质量g：水体积mL）和提取次数为单因素，考察各因素对桑叶多糖得率的影响，并采用正交实验优化了桑叶多糖的水提取工艺，使总多糖的得率达2.89%；在醇沉工艺中，考察了乙醇浓度对醇沉效果的影响，确定最佳醇沉工艺条件，得到的醇沉物多糖含量为18.44%。
在除蛋白工艺中，考察了盐酸法和三氯乙酸法对多糖含量和保留率的影响，发现先用三氯乙酸调至pH5，再用盐酸调节pH至3时，多糖含量和保留率达到最高，分别为32.59%和85.42%。
其次，提取液采用单因素实验优化大孔树脂纯化桑叶多糖工艺，得出最佳工艺条件，多糖含量42.16%，多糖保留率为81.54%。
另外，利用壳聚糖絮凝剂纯化桑叶多糖，采用单因素实验和响应面实验优化得出了桑叶多糖的最佳絮凝工艺。
在此工艺下，多糖保留率达90%以上，多糖含量最高可达61.59%。
通过对壳聚糖絮凝纯化后多糖样品组分测定，发现样品中无机小分子含量很高，达到23.88%，其次是蛋白含量（7.83%）。
最后，通过建立四氧嘧啶糖尿病小鼠模型，对壳聚糖絮凝纯化后的桑叶多糖（纯度为59.22%）进行药理学活性实验，结果表明，桑叶多糖能够非常有效地降低糖尿病小鼠的血糖值，其中高剂量组的血糖抑制率达到81.14%，而且能够有效降低小鼠血清和肝脏中的MDA含量，效果优于二甲双胍阳性对照组，具有明显的降血糖和抗氧化协同作用。
研究为天然桑叶多糖的提取与纯化工艺路线的选择提供了必要的基础，为桑叶多糖的降血糖活性提供了实验依据。
桑叶多糖提取工艺优化研究
ｌ ７ ． ２１
ｌ ７ ． ３ １ １ ７． ５ １
４． ２ ２
４． １ ７ ４． ２ ５
作 者 简介 ：李德 灵 （ １ ９ ７ ４ ． １ ０ 一）男 ，汉族 ，河 南夏 邑人 ，现在 供职 单位 ：无 限极 （ 中 国 ）有 限公 司 ，食 品工程 中级工程师、工程硕士 学位 ，研 究方 向：食 品安全 。
称 量５ ． Ｏ ０ ０ ０ ｇ ４ ０ 目的干桑 叶颗粒 ， 在温度为８ ５ ℃， 提
取时 间为 ｌ ｈ ， 固液 比为 １ ： ４ ０ ， 提取次数为３ 次的条 件下 ，
嘲
缸
分别 在 有超 声 波和 无 超声 波 实验 得 到桑 叶多 糖提 取 情况如 下表 １ 所示 ：
图 １桑叶多糖提取 工艺流程图
表１ 热水浴浸提法桑叶多糖提取实验数据表
实验次数 超声波辅助 浸提率％
ｌ ２ ３ ４ ５ １ ８ ． ２１ １ ８ ． ２ Ｏ ｌ ８ ． ９ ４ １ ８ ． ３ ３ １ ９． ０１
无超声波辅助 多糖含量％
５． ０ １ ５． １ １ ５． ｏ ２ ５． ３ １ ５． １ ７
的意义。
热 水
司； Ｄ Ｚ ＫＷ—Ｄ 一２ 电热恒温水浴 锅 ， 北京市永光 明医疗 仪器厂 ； Ｘ Ｗ一 ８ ０ Ａ微型旋涡混合仪 ， 上海泸西分析仪器 厂； ＸＦ Ｂ 一 ２ ０ ０ ／ ４ ０ ０ ， ＇ ］ ＇ ， 型粉 碎机 ， 湖南 中诚制药机 械厂
瓣
毒 —１ — ｌ ； — ｛ ｌ Ｉ
３ 个因素 中其影响程度 的排序是提取次数＞ 提取时间＞固液比。 而最佳提取条件的组合是 固液比１ ： １ ５ ， 提取次数２ 次， 提取 时间为 １ ． ５ － ２ ． Ｏ ｈ 。 在最佳条件 下 ， 桑叶多糖提取收率可以达到２ １ ． ５ ６ ％。
桑叶多糖的提取研究进展
桑叶多糖的提取研究进展作者：喻明军来源：《赤峰学院学报·自然科学版》2019年第08期摘要：研究证明桑叶多糖具有抗肿瘤、抗氧化、消炎等生物活性，在保健品和药品中有着良好的应用前景.桑叶多糖的提取是这些研究的前提.本文对近年来关于桑叶多糖提取工艺的研究进行了综述，以期为桑叶多糖提取的深入研究提供借鉴参考.关键词：桑叶多糖;热水提取;超声波提取;微波提取;酶促提取中图分类号：Q53; 文献标识码：A; 文章编号：1673-260X（2019）08-0038-021 引言桑树在我国种植广泛，因此桑叶资源非常丰富.我国把桑葉作为中药使用由来已久，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目等功效.桑叶中多糖含量丰富是桑叶的主要功能性成分之一.大量科学研究表明，桑叶多糖有降血糖活性、抗肿瘤、抗氧化、抗动脉粥样硬化、抗炎和抑菌[1-4]等多种生物学活性.桑叶多糖的提取是研究其生物活性的前提条件，因此研究桑叶多糖的提取工作具有非常重要的现实意义.本文就桑叶多糖的提取研究进展做一综述.2 桑叶多糖的提取方法2.1 水提取法水浸提法是提取多糖的一种传统方法，在多糖的提取中广泛应用.对于热水提取法，国内外研究的比较多，主要是寻找最佳的提取温度、提取时间、pH和最佳的料液比.在研究中部分研究者通过正交实验来确定最佳的提取工艺条件，如王芳等[5]人通过正交实验确定的最佳提取工艺条件是提取温度80℃，时间1h，料液比1：40，桑叶多糖的得率约为11.50%.王淑萍等[6]人通过三因素三水平正交实验优化出最佳的提取工艺为料液比1：9，提取时间90min，提取温度90℃，桑叶多糖的得率为8.08%.还有些研究者通过利用响应面法来优化提取条件，如韩爱芝等[7]采用响应面法试验设计对药桑叶多糖提取条件进行优化，得出在液料比25：1，提取温度90℃，提取时间3h条件下，药桑叶粗多糖提取率最高为13.39±0.53%.刘军海等[8]利用响应面法对桑叶多糖的提取工艺进行优化，得出桑叶多糖浸提的最佳工艺条件为：料水比1：19，浸提温度96℃，浸提时间2.5h，浸提2次，桑叶多糖的实际一次提取率可达3.094%.2.2 超声提取法超声提取法是利用超声波产生的空化效应及搅拌作用破坏植物细胞的细胞膜，从而加快细胞内有效活性成分的释放与溶出相比于传统的提取法，其提取效率高、速度快.桑叶多糖的超声提取是与热水提取法相结合的，用超声辅助热水提取来提高收得率、提取效率和降低能耗.在超声提取的时候通过优化超声功率、提取温度、超声时间和料液比等来获得最佳的提取工艺.刘学军等[9]报道了对超声波功率、温度、时间和粒径4个参数进行正交实验优化，得到的最佳提取工艺条件是超声波功率50W，提取温度为85℃，提取时间2.5h，收得率为10.74%.王芳等[5]人报道了超声功率300W，超声处理10min之后水浸提多糖的得率为12.25%.Zhang等[10]人报道了最佳超声波提取条件为温度57℃，提取时间80min，液固比53mL/g，产率为6.92±0.29%.Ying等[11]人报道了超声波提取的最佳条件是提取功率60W，提取温度60℃，提取时间20min，水与原料的比例为15：1，收得率为10.79%.通过对比超声辅助热水提取和直接热水提取可以发现，提取温度相对降低了，提取时间也相对减少了，对降低能耗和生产成本有一定的帮助，但是提取收率未有明显的提高.2.3 微波提取法目前，与其他常规方法相比，微波辅助提取被广泛用于从各种植物材料中提取多糖，因为其提高了提取效率.当微波辅助提取用于提取多糖时，温度会快速升高，降低乳液粘度，破坏植物材料外膜，提高提取率.同时还会发生分子旋转，导致离子的运动增强，提高了萃取过程的效率.Liu等[12]人报道了超声微波辅助提取，其最优的提取条件是提取温度76℃，提取时间807s，pH值6.16，料液比1：40，实验得率为10.29±0.41%，大大好于热水提取4.67%的收得率.王尉等[13]人报道了通过Box-Behnken设计3因素3水平的试验得出的最优提取条件为温度88oC，提取时间11min和料液比为1：18，收得率为15.20%，是相同时间的热水提取收得率的2.18倍.从以上可以看出，微波提取具有时间短，温度低，收得率高的优点，但还未见有大规模生产的报道.2.4 酶提取法植物细胞由纤维素、半纤维素和果胶质等成分构成，这些物质阻碍了胞内多糖等大分子的溶出，选用合适的酶对待提取物进行预处理，能够分解这些物质，从而破坏细胞壁的结构，有利于糖类物质的溶出，这会缩短提取时间从而提高提取效率.研究酶法提取桑叶多糖的报道较少，王芳等[5]报道了利用纤维素酶、果胶酶、胰蛋白酶来提取桑叶多糖，并比较了这三种酶的提取效率，得出纤维素酶的提取效果最好.其最佳的提取条件为纤维素酶用量为桑叶量的1.5%，酶解时间2h，酶解温度50℃，酶处理后水提多糖得率为12.49%.夏平等[14]人报道了用纤维素酶和果胶酶的复合酶水解，其最佳提取条件为温度50℃，pH为4.5，酶用量1.0%，提取1h，桑叶多糖的提取收得率为14.32%.酶法提取桑叶多糖的条件比较温和，提取效率高时间短有利于降低能耗，并且提取收得率相对较高，有继续研究的价值.3 桑叶多糖提取相关的专利有关桑叶多糖提取的专利比较多，如李翠清等[15]在专利中利用CO2超临界萃取桑叶后再利用乙醇萃取、沉淀、过滤得到多糖.章华伟等[16]在专利中利用微波提取，然后将提取液，加酸调节pH值至2-5，再加入乙酸乙酯萃取，将水层用三氯乙酸溶液调节pH值至2-3，降温、搅拌、静置后，离心除去沉淀物，将上清液超滤，浓缩到多糖质量浓度为5%-15%，超滤膜截留分子量为5000D-10000D，浓缩液中加入乙醇，降温、搅拌、静置后，离心，即得桑叶多糖产品.4 结论及展望目前对热水浸提法提取桑叶多糖的研究最多，其提取温度主要在80℃-100℃之间，液料比也在20：1-40：1之间，提取时间在1-3小时之间，多糖提取收得率在10%-13%之间.虽然这种提取方法的缺点是能耗高、废水多，但是其优点也很明显，其对设备条件要求不高且操作简单，多糖的回收率也适中.因此热水提取依然是采用最多的方法.目前超声波辅助提取桑叶多糖的最佳提取温度大多在50℃-60℃之间，对比于直接热水提取的80℃-100℃，可以看出超声波辅助提取显著降低了提取温度，提取时间也大多控制在1小时以内.由于超声波提取降低了生产能耗，在当今节减排的大背景了，应积极发展超声波提取桑叶多糖.微波法提取桑叶多糖，提取时间短，大多在10min以内，多糖收得率较热水提取高.同时微波还可以起到灭活酶和细菌的作用，是一种极具发展潜力的新型提取技术.随着提取新技术的不断出现和不断完善，桑叶多糖的提取将会变得更加高效、更加环保.桑叶多糖具有抗凝血、抗氧化、抑菌等多种药理作用，因此其在药品和保健品的开发方面具有广阔的前景.目前对桑叶多糖提取方法和工艺条件研究的比较透彻，将有利于桑叶多糖的深度开发利用.但是目前对桑叶多糖的纯化研究不多，目前的纯化工艺还比较繁琐，且损失较大.因此，对桑叶多糖的纯化将是今后的研究重点和难点.——————————参考文献：〔1〕A Hunyadi， A Martins， TJ Hsieh， et.al. Chlorogenic acid and rutin play a major role in the in vivo anti-diabetic activity of Morus alba leaf extract on type II diabetic rats[J].Plos One，2012， 7 （11）：e50619.〔2〕GN Kim， HD Jang Flavonol content in the water extract of the mulberry （Morus alba L.） leaf and their antioxidant capacities[J].Journal of Food Science， 2011， 76 （6）：869-73.〔3〕A Hunyadi， A Martins， TJ Hsieh， et.al. Chlorogenic acid and rutin play a major role in the in vivo anti-diabetic activity of Morus alba leaf extract on type II diabetic rats[J].Plos One，2012 ， 7 （11）：e50619.〔4〕E Park， SM Lee ， JE Lee， et.al. Anti-inflammatory activity of mulberry leaf extract through inhibition of NF-κB[J].Journal of Functional Foods， 2013 ， 5 （1）：178-186.〔5〕王芳，郑海雪.桑叶多糖的提取工艺研究[J].浙江师范大学学报（自然科学版），2008，31（1）：79-83.〔6〕王淑萍，田甜.桑叶多糖提取工艺优化研究[J].长春工程学院学报（自然科学版），2014，15（3）：123-125.〔7〕韩爱芝，王丽君，贾清华，等.药桑叶多糖提取工艺优化及其降血糖活性研究[J].中国酿造，2017，36（8）：139-143.〔8〕刘军海，黄宝旭，许恩庆.桑叶多糖提取工艺研究[J].中国食品添加剂，2009（5）：91-95.〔9〕刘学军，李云平，胡恒彬，刘继延.超声波提取桑叶多糖工艺条件优化[J].北方蚕业，2007，28（3）：11-13.〔10〕Dong-Yang Zhang， Yi Wan， Jian-Yi Xu， et.al. Ultrasound extraction of polysaccharides from mulberry leaves and their effect on enhancing antioxidantactivity[J].Carbohydrate Polymers ，2016（137）：473-479.〔11〕Zhi Ying， Xiaoxiang Han， Jianrong Li. Ultrasound-assisted extraction of polysaccharides from mulberry leaves[J]. Food Chemistry， 2011（127）：1273-1279.〔12〕Fan Liu， Rui-Hong Hou， Sen-Tai Liao， et.al. Optimisation of Ultrasonic-Microwave-Assisted Extraction Conditions for Polysaccharides from Mulberry（Morus atropurpurea Roxb） Leaves and Evaluation of Antioxidant Activities in vitro[J].， Med chem， 2015， 5（2）：90-95.〔13〕王尉，徐春明，曹學丽.响应面法优化微波辅助提取桑叶多糖的工艺研究[J].北京工商大学学报（自然科学版），2009，27（4）：6-9.〔14〕夏平，谢何青.复合酶法提取桑叶中多糖的工艺条件优化[J].安徽农业科学，2009，37（1）：198-199.〔15〕李翠清，王腾，李继文，张红.从桑叶中连续提取分离多糖及1-脱氧野尻霉素的方法[P].CN201210462979.5.〔16〕章华伟，钱俊青，高水荣.一种高纯度桑叶多糖的制备方法[P].CN200910153701.8.。
桑叶多糖的提取及抗氧化与降血糖作用研究的开题报告
桑叶多糖的提取及抗氧化与降血糖作用研究的开题报告一、选题背景和意义：桑叶是儒艮科桑属植物的叶子，具有降血脂、降血糖、抗氧化等多种保健作用，是一种天然的药食同源的植物资源。
其中，桑叶多糖作为桑叶的主要功能成分之一，在抗氧化和降血糖方面具有独特的作用，已成为研究的热点之一。
因此，以桑叶多糖的提取及抗氧化与降血糖作用的研究为主题，对于挖掘桑叶资源的潜能，提高桑叶的综合利用价值，具有重要的意义和现实的应用价值。
二、研究目标和内容：本文主要研究桑叶多糖的提取方法、抗氧化能力及降血糖作用，并探究桑叶多糖对血糖调节的分子机制。
具体研究内容包括：1. 桑叶多糖的提取方法优化，包括不同提取溶剂、提取时间、温度、比例等因素的影响研究；2. 桑叶多糖的理化性质及纯度检测，包括多糖组分、分子量、紫外吸收光谱等物理化学性质的检测；3. 桑叶多糖的抗氧化活性测定及机制研究，包括对DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除能力研究，以及对氧化应激状态下肝细胞中相关基因表达的影响研究；4. 桑叶多糖的降血糖作用及分子机制研究，包括对糖酵解、糖原合成、糖原分解等关键酶系统的影响研究，以及对线粒体途径、AMPK信号通路等分子机制的深入探究。
三、研究方法：1. 桑叶多糖的提取：利用常规提取方法，考察不同因素对桑叶多糖产率的影响，并通过正交实验法优化提取条件；2. 多糖理化性质的检测：对提取得到的多糖样品进行物理化学性质的检测，主要包括分子量、单糖组成等方面的测定；3. 抗氧化活性的测定：采用多种体外实验方法，包括DPPH自由基清除、超氧阴离子自由基清除等；并对肝细胞抗氧化基因进行实时PCR检测，探究其影响机理；4. 降血糖作用的研究：采集实验动物，建立高脂饮食或高血糖模型，分别分析桑叶多糖在血糖调节中的作用及相应的分子机制。
四、预期成果：本研究将为桑叶多糖的应用价值提供理论和技术支持，为开发和利用桑叶资源提供科学依据和技术路线，具有积极的社会和经济效益。
桑叶多糖提取工艺的研究
糖粗提液 ，加入活化过 的粉末状活性炭 除去色素 。加 入 ９ 乙醇放冰箱 １ｈ沉淀 ，将 醇沉液抽滤 ，干燥得 ５ ２
暗黄色 的粗 多糖制 品 。 １ ． 标准 曲线 的绘制 ．２ ２ １ ．． 标准 溶液 的制备 ． ２１ ２ 精密称取干燥至恒重 的葡萄糖对照品 ４ ｍｇ置于 ０ １０ ｍｌ容 量 瓶 中 以 蒸 馏 水 定 容 至 刻 度 ，配 制 成 ００ ００ ｍｇｍ ． ／ ｌ的储 备液 ，分别精密吸取 ０２ ．、０６ ４ ．、０ ４ ．、 ０８ ．、１ ｍｌ于试 管 中，分别加水补至 ２ ｍ ，得 ．、１ ０ ． ２ ． ｌ ０ 系列对照品溶液 。
桑叶多糖提取工艺的研 究
刘树 兴 ，王维 ，魏丽娜 （ 陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西成 阳 ７２８ ） １０ １
摘要：本试验利用水浸提法从 桑叶中提取 桑叶多糖。利用正交试验确定出多糖提取 的最优化条件，用苯酚 一 酸法测定多糖的 硫
含量，通过三氯 乙酸法除去多糖 中的蛋白质。研究结果表明，桑叶多糖的最佳提取条件为：水浴温度 Ｉ０Ｃ、ｐ ｌ Ｏ￣ ＨＩ、料液比 （ 桑叶：
１ 实验方法 ． ２
１ ．． 最大 吸收峰的确定 ．２２ ２
取 １ ．． ．２１中的标准液 ，用苯酚硫酸显色 ，分别在 ２
Ａｂｓｒ ｃｓ：Ｔｈｉ ａ ｅ ｔ ｄｅ ｈ ｂ ｔａ ｔ ｏｌｓ ｃ ｈ ｒｄ ｒ ｍ ｈ ｏ ｓ ａｂ ｅ ｖ ｓｂ ｔ Ｔｈｅｐ ｙｓ ｃ ａｉ ｏｎｅ ｔｗａ ｔａ ｔ ｓｐ ｐ ｒｓｕ ｉｄ ｔ ｅ ａ ｓｒ ｃｉ ｏｆｐ ｙ ａ ｃ ａ ｉｅ ｆｏ ｔｅ Ｍ ｍ ｌ ａ ｌａ ｅ ｙ ｗａｅ ｏｎ ｏｌ ａ ｃｈ ｒｄｅ ｃ ｔｎ ｓ ｄｅｅｍ ｉ ｅ ｂ ｅｍ ｅｈ ｄ ｏｆｐ ｅ ｏｌｓ ｌｕｒｃａ ｉ．Ｔｈ ｏｅｎ ｉ ｐ ｙｓｃ ｈ ｒｄ ｓ ｅ ｏ ｅ ｙ ｔｉｈｌｒ ａ ｅｉ ｃｄ． ｅｒ ｓ ｌ ｒｈｏ ｏ ｌ ｔｒ ｎ ｄ ｙ ｔ ｔ ｏ ｈ ｎ —ｕ ｆ ｉ ｃｄ ｈ ｅｐｒ ｔｉ ｎ ｏｌ ａ ｃ ａ ｉｅ Ｗａ ｒｍ ｖ ｂ ｒｃ ｏ ｏ ｃ ｔ ａ ｉ Ｔ ｅ ｕｔｏｆｏｔ ｇ ｎａ ｄ ｃ ｈ
桑叶中多糖提取分离工艺的研究
桑叶中多糖提取分离工艺的研究桑叶多糖提取分离。
目的：优选桑叶多糖提取分离最佳工艺。
方法：比较稀酸、稀碱、蒸馏水3种提取方法，采用L9（34）正交试验，比较了不同蛋白去除法对多糖提取分离的影响。
结果：桑叶多糖的最佳提取工艺为用10倍蒸馏水在70℃下提取2次，每次1.5h。
醇沉分离最佳工艺优于传统的Savage法。
结论：优选的桑叶多糖提取分离工艺稳定可行。
标签：多糖；提取；分离工艺1材料和仪器752型紫外外-可见分光光度计，R-201旋转蒸发器，pHS-3C精密pH计，ALPHA1-2真空冷冻干燥机，FA/IA型电子天平。
2方法和结果2.1原料预处理：将桑叶粉碎、过筛，加入一定体积95%乙醇，使溶液中乙醇的体积分数达到80%，回流4h，间隙搅拌。
回流完毕，离心分离取滤渣，滤渣风干，备用。
2.2桑叶多糖的测定[3]2.2.1对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖对照品（105℃干燥至恒重）100mg，置于100mL量瓶中，加水适量使溶解，稀释至刻度，摇匀。
精密吸取10mL置于100mL量瓶中，加水稀释至刻度，即得。
2.2.2标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖对照品溶0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，用蒸馏水补到1.00mL。
分别加入4.00 mL0.2%蒽酮-硫酸试剂，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，自来水冷却，室温放置10min左右。
以同样处理的重蒸水为空白，于620nm处测定。
2.2.3測定：精密称取桑叶多糖提取物50mg，加水适量使溶解，蒸馏水定容至50ml量瓶中，摇匀。
精密吸取1 mL，按2.2.2 项下操作，测定吸光度值，计算多糖的质量分数。
2.3浸膏得率的测定：采用重量法。
精密量取等量的提取液（m），置于已干燥至恒重的蒸发皿中（m0），水浴浓缩干，于105℃干燥3h，移至干燥器中，冷却至室温，迅速精密称定质量（mi），按公式（mi-mo）/m×100%计算浸膏得率。
桑叶、桑枝、桑椹多糖的提取及含量测定
桑叶、桑枝、桑椹多糖的提取及含量测定目的提取纯化桑叶、桑枝、桑椹多糖并测定其含量。
方法用水提醇沉法提取桑叶、桑枝、桑椹多糖。
苯酚-硫酸紫外分光光度法测定桑叶、桑枝、桑椹多糖的含量。
结果果实桑椹中多糖含量最多，其次为桑叶，桑枝中多糖含量较少。
结论通过测定比较桑树不同药用部位的多糖含量，以充分开发利用桑树这一药用资源，同时为深入开发桑叶、桑枝、桑椹新资源提供有利的实验数据。
标签：多糖；含量；提取多糖在自然界中分布十分广泛，大多数高等植物、微生物、地衣、海藻和动物体内均有丰富的多糖。
多糖作为初级代谢产物，不仅具有结构、支持与保护、能量来源和解毒作用等生物学功能，而且大多数具有明显的药理活性[1～3]。
桑叶、桑枝、桑椹为桑科Moraceae植物桑Morus alba L.的干燥叶，嫩枝和果实。
桑叶始载于《神农本草经》，味苦、甘，性寒，归肺、肝经，具有疏风清热、平肝明目的功效；历代中医药书籍中记载桑叶能够治疗消渴症，现代药理研究表明桑叶有效成分之一桑葉多糖具有显著的降血糖作用。
其所含化学成分种类较多，主要有多糖、黄酮类化合物，现代药理学研究表明桑枝具有抗真菌活性、抗炎、降血糖等作用。
桑椹子为桑的果穗，又名桑果、桑实、桑枣等。
质油滑，气微，味微酸而甜。
我国许多地区都有分布，中医用于治疗肝肾阴亏、消渴、耳鸣、关节不利等症。
桑叶、桑枝、桑椹作为中医常用药有如此多的功效，目前有关桑树单个药用部位的多糖提取和含量测定略见报道。
本实验采用水提醇沉法提取桑叶、桑枝、桑椹多糖。
苯酚-硫酸比色法对其三者多糖的含量进行测定。
通过测定比较桑树不同药用部位的多糖含量，以期充分开发利用桑树这一药用资源，同时为深入开发桑叶、桑枝、桑椹新资源提供有利的实验数据。
1材料、仪器及试剂1.1原料桑叶、桑枝、桑椹的干燥叶，嫩枝和果实。
购于杭州市老百姓大药房。
1.2仪器SPC22型紫外分光光度计，HH-S型电热恒温水浴锅，超导热风干燥箱，循环水式多用真空泵，分析天平，旋转蒸发仪。
桑叶多糖提取分离工艺研究进展
桑叶为桑科植物桑树的树叶，可药食两用［１－２］。桑叶用来 用于医治感冒头 痛、头 晕 眼 花 等 症 状 和 镇 静 神 经、清 热 排 毒 等 作用。研究发现，多糖作为桑叶的主要活性之一，具有降血糖、 遏制肿瘤、抗凝血等多种药性功能［３－４］。另外桑叶中还含有黄 酮、氨基酸、维生 素 等 化 学 组 分 ［５］。王 向 阳 等 ［６］深 入 探 究 桑 叶 中活性多糖组分可以用来保护胰岛 β细胞不受伤害，进而使小 鼠体内细胞血糖 有 明 显 降 低 的 趋 势，因 此，从 桑 叶 中 提 取 并 分 离纯化多糖，对糖尿病药物的研制与开发具有重要意义。
１．４ 超高压提取法
超高压也是近些年兴起的一种新技术，可用于天然产物的 提取。其原理是利用加压装置对植物进行加减压，其骤降骤升 的压力会使细胞破裂从而流出有效物质。目前已有大量文献 报道利用超高压技术提取生理活性物质。超高压提取可以在 常温下进行，可以避免传统因高温引起多糖成分的变化。同时 超高压提取具有 能 耗 低，操 作 简 单，环 境 友 好 等 优 点。 与 传 统 提取 工 艺 相 比，具 有 明 显 的 优 势。 杨 青 珍 等［１２］使 用 压 强 ３００ＭＰａ，反应时长 ４．５ｍｉｎ，ｐＨ值达到 ９．０，料液比 １∶４６，多糖提 取达到 ２．２％。
热水浸提法就是采用热水高温蒸煮植物破坏植物细胞细胞 壁和体内结构，使得多糖溶于水中，提取率较低，耗时长。赵俊 等［７］采用蒸馏水 ８０℃，蒸煮 ６０ｍｉｎ，８０％浓度乙醇提取，提取率达 ２．５％。邢东旭等［８］优化提取工艺：料液比 １∶４５，加热保持恒温 时长达到 ９０分钟，蒸煮温度 ８５℃，多糖浸出率提高到 ３１％。
１．３ 超声波提取法
超声波技术已经应用于很多领域，利用超声波发生的高频 率震荡、极高的加 速 度 及 搅 动 作 用，可 使 多 糖 类 活 性 成 份 进 入
桑叶多糖提取方法的研究进展
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寒地桑叶多糖化学组成及其生物活性分析
寒地桑叶多糖化学组成及其生物活性分析1. 寒地桑叶多糖的提取与纯化方法为了获得高质量的寒地桑叶多糖，首先需要采用合适的提取与纯化方法。
目前常用的提取方法有溶剂提取法、超声波辅助提取法和酶解法等。
溶剂提取法是将寒地桑叶粉碎后，用有机溶剂(如乙醇、正丁醇等)浸泡，然后通过过滤、浓缩等步骤得到多糖粗品。
超声波辅助提取法则是在溶剂提取的基础上，利用超声波技术加快提取过程，提高提取效率。
酶解法则是通过添加蛋白酶、纤维素酶等酶类，使寒地桑叶中的多糖被分解为小分子单糖，从而便于后续的纯化过程。
在纯化过程中，可以采用离子交换层析、凝胶过滤层析、逆流色谱等方法对多糖进行分离纯化。
离子交换层析是一种根据分子大小和电荷性质进行分离的方法，适用于多种类型的多糖；凝胶过滤层析则是一种根据分子大小进行分离的方法，适用于大分子多糖；逆流色谱则是一种根据分子亲水性和疏水性进行分离的方法，适用于混合型多糖。
除了传统的提取与纯化方法外，近年来还发展了一些新型的生物技术手段，如微生物法、纳米技术等，用于提高寒地桑叶多糖的提取与纯度。
微生物法是利用特定的微生物(如酵母、细菌等)对寒地桑叶中的多糖进行发酵或吸附，从而实现多糖的高效提取。
纳米技术则是通过控制纳米材料的结构和性质，实现对多糖的高效分离和富集。
为了获得高质量的寒地桑叶多糖，需要综合运用各种提取与纯化方法，并结合现代生物技术手段，以提高多糖的提取率、纯度和生物活性。
1.1 水提法本研究采用水提法对寒地桑叶进行多糖提取，将新鲜的寒地桑叶清洗干净，然后切碎成适当大小的碎片。
将寒地桑叶碎片放入大容量的容器中，加入适量的清水，以保证叶片充分浸泡。
用搅拌器对寒地桑叶进行充分搅拌，使叶片与水充分接触，加快提取过程。
在搅拌过程中，需要定期更换水，以防止叶片中的杂质和泥沙沉淀在容器底部，影响多糖的提取效果。
为了保持水质的清洁，建议每隔一段时间就对水进行一次过滤或更换。
经过数小时的水力搅拌后，可以得到浑浊的液体。