生姜组织培养

四、生姜的组织培养
（一）培养基准备及条件
选择MS培养基，增加不同浓度的萘乙酸(NAA） 6-苄基嘌呤（6-BA）或2，4-二氯苯氧乙酸（2， 4-D）等植物生长调节物质，加速糖30 g/L、琼 脂7 g/L.PH值调到6.0左右。置于温度121℃、 压力1.1kg/cm2的条件下消毒155min后备用。 接种后首先暗培养4d，然后在3000—4000lx光 照强度下培养，每天光照12h,温度25—28℃,湿 度维持在75％—80％。
随着组织培养脱菌快繁技术应用于生姜的生产，不仅取得 了良好的经济效益，并且对生姜的良种选育也有较大的作 用。近年来，在外植体的选择、培养基和培养条件上都有 较大的改进，繁殖效率明显提高，就生姜脱菌快繁技术作 以下综述。
• （1）、外植体选择
• 1、初生芽：对姜初生芽（由种姜长出的芽）离体培养2至3 个月，每个初生芽平均出5.6个芽，如在含有1mg/L6-苄基氨 基嘌呤的培养基中继代培养，则可产生许多不定芽；将带 根试管苗移至含泥炭土：岩土：蛭石=2:1:1的塑料盒内温 室培养，上覆塑料膜，揭膜练苗，待生根、健壮后移至苗 床，田间成活率仍低。采用新建立的初生芽快繁脱菌体系， 培养4周后，平均每个芽可分化7.7个芽，将试管苗栽于含 沙：土：农家肥=1：1：1的塑料盒中，上覆聚乙烯膜保持 高湿，5—6d后揭膜，移入大盒（20cm2）前练苗5d，成活率 提高到95％以上，由此可见，试管苗初植的营养土成分对
诱导技术
• 在蔬菜中，马铃薯试管薯的诱导技术已经非常 成熟，大蒜、百合等蔬菜在组织培养器皿中可 以直接由组培苗诱导形成鳞茎、球茎，因此， 同样以根茎进行无性繁殖的生姜，也可能基于 组织培养及相关的诱导技术，建立起成熟的微 型姜诱导体系以加快优质种姜繁殖，缩短生长 周期，形成工厂化生产。
• 此外，生姜的组织培养技术结合细胞融合技术 创制丰富生姜的种质资源，结合基因工程的方 法和技术，提高生姜抗病虫害、抗逆性和改善 品质等，将是今后生姜组织培养技术应用的研 究重点方向之一。
二、市场概括
中国是生姜的发源地及主要出产国之一， 距今已有两千多年的栽培历史，全国各 地有许多名优地方品种，像山东莱芜大 姜、广东疏轮大肉姜、山东片姜、湖北 来凤姜、浙江小林黄姜等等。生姜已经 成为我国许多地区种植业的主要收入来 源之一，在农产品出口贸易中也占据一 席之地。生姜具有药食兼用的功效，随 着研究理论和加工技术的发展，生姜不 断在医药、保健、化工等方面得到发展。
三、生姜组织培养的必要性
• 生姜具有栽培容易、产量高、价格高等优点， 但是生姜在生产上长期采用无性繁殖，容易感 染多种病毒病，感染了病毒病的生姜，品质差， 叶子皱缩，生长缓慢，一般减产30—80%。对病 毒病目前还没有药剂可以防治,成为生姜创高产， 获得高效益的主要障碍.
• 由于生产上长期以来都是沿用的传统生姜品种， 目前的生姜品种越来越不适应当前的是、的市 场形势。解决这些问题的根本途径是培育抗病、 优质、高产的生姜新品种，使生姜种质得到根 本的改良和突破。
（2）材料消毒
• 多数实验采用0.1％—0.2％HgCl2或0.5 ％—10％NaClO消毒10—15min。据报导， 用0.5％NaCLO消毒10min，污染率仍高达 50％，改用0.1—0.2％HgCl2后，情况有 改善。先用70％乙醇将外植体洗一下， 再用1％—10％NaClO消毒10—20min，污 染率急剧下降，仅为4％。目前大部分 实验室采纳了这种两步消消毒法。
生姜组织培养
设计者：李申 学号：2011313179 班级：植保一班
Байду номын сангаас、生姜简介
• 生姜是一种一年生或多年生的姜科姜属的 宿根草本植物，是我国许多地区种植业的 主要来源。
• 生姜是药食两用的经济植物，发汗解表， 温中止呕，温肺止咳，解鱼蟹毒，解药毒。
• 含有辛辣和芳香成分。辛辣成分为一种芳 香性挥发油脂中的"姜油酮"。其中主要为姜 油萜、水茴香、樟脑萜、姜酚、桉叶 油精、淀粉、粘液等。
（四） 固定资产折旧
作为生产100万珠的组培苗车间， 需要投入一定规模的基础设备， 并且它们寿命是有限的，对此也 要将这固定资产（不包括基础建 设）折旧。对不同的设备需不同 的折旧处理。
（五）低值易耗易损品和维修
在整个生产过程中涉及到一些低值易耗易损品和维修、 玻璃器皿等年损耗。另外部分仪器需要维修和购买零 件。
（六）、大棚管理
• 1、苗床准备：苗床长10m，宽1.2—1.3m、土地肥沃、 夏季凉爽、土壤不积水。将珍珠岩与腐殖土按比 例3:1的比例混配成寄栽基质，经过过筛和严格的 土壤消毒灭菌后填铺苗床，保持床面平整、疏松。
• 2、寄栽：组培苗在出现6—7片叶，叶长5—8cm时， 从瓶内取出苗并洗净培养基，用一定浓度的生 根剂侵根20—30min后晾干，按5cm乘10cm规 格寄栽 于苗床，浇透水。棚内温度在20—28℃，相对湿 度80％，棚顶覆盖遮阳网。寄栽宜早不宜迟，通 常在3月下旬至4月中旬，当气温稳定在15℃以上时 进行。寄栽要求轻拿轻载，严禁过紧过深和吊角 苗，稳栽即可。
• 传统的植物脱菌一般在35—38℃条件下 持续对种苗处理5—6周，使病菌钝化失 活，但效果不理想。高山林等根据热 处理脱菌原理，改进了热处理方法， 即在50℃下处理5min，然后在无菌条件 下取分生组织进行培养，脱菌效果良 好。
（3）、病菌的检测方法
• 检测病菌的方法有以下3种：一是将获得的 脱菌苗和原始姜母同时转入TQH培养基中， 培养8—10d后观察菌落生长状况，结果发现 姜母72.5％长出黄腐病菌落，而脱菌苗无一 感菌；二是形态学观察，即大田条件下， 在生长季节观察发病情况；三是将脱菌苗 和姜母收获的姜分别置于沙床上，贮藏6个 月后计算姜腐率，姜母收获姜有54.5%腐烂， 而脱菌苗收获姜无一腐烂。
（五）、生根和驯化
• 把生好根的小苗经光照锻炼7-10天，从试管内取 出，洗净根部培养基，移栽入事先准备好的营养 土内，使其逐渐长大发出5-6片新叶的过程称为 驯化。驯化用的营养土要求土质以疏松的沙土掺 入少量有机质。移栽后要浇透水，支小拱棚覆盖 塑料薄膜保湿。驯化温度以15-20℃，前两周空气 相对湿度80-100%，第三周开始短时间放风，放 风强度逐渐加大，至移栽后第四周可去掉覆盖物。 根据情况每天或隔天喷水一次，保持土壤湿润而 不积水为宜。驯化一般需2-3个月即可移出。经 病毒鉴定，确认无毒后放入网纱大棚内繁殖。
(二)、材料取材、处理和接种
选取健壮的、无病害、虫害的生姜为组织
培养材料，将姜块用50％多菌灵500倍夜侵 泡20—30min消毒后，放在36—38℃的光照培 养箱内培养。当芽长长到1—2cm时，在无菌 室内剥去幼叶，取3—5mm姜芽，用70％的酒 精灭菌1min，再用1％—10％NaClO或0.1％— 0.2％HgCl灭菌10—15min，无菌水冲洗5次左 右，在超净工作台上用解剖镜进行茎尖剥 离，剥取0.3—0.5mm的茎尖进行接种。
（六）整个生产成本分析
（八）、生姜组织培养的问题及前景
• 生姜通过组织培养，可以起到脱毒、快繁、种质资源保存、品 种改良的作用，大幅度的提高了生姜产量和品质、扩大了生姜 的种植规模。生姜的组织培养技术取得了很大的进展。
• 但是仍未能实现工厂化生产，存在生长成本高，初代接种污染 率高，试管苗玻璃化，分化能力自衰，移栽程序繁琐和成活率 低等问题。目前为止，生姜组织培养快繁技术的研究重点，在 于确定组织培养中控制分化、继代生长、生根、根壮茎诱导的 培养基成分，生长调节剂的种类、浓度以及培养条件的最佳优 化选择。然而生姜品种的多样化，要求在具体培养室选择不同 的培养基和不同的培养条件，以完善生姜组织培养技术，从根 本上解决其存在的问题。此外，生姜试管苗运输损耗率高，且 移栽成活率不如试管姜高，所以，提高试管姜诱导率将是生姜 组织培养在将来一段时间的研究重点。
（七）、成本核算
• （一） 室内直接成本核算
• 1、培养基配制与消毒：根据培养基配方对 各种商品和添加物用量的费用计算。
• 2、洗瓶：洗瓶采用计件方式，每个瓶多少
钱，有多少瓶。来进行计算。
• 3、
培养基的配制与灭菌：培养基的
配制与灭 菌由专人负责，每次人 工费、
电费、水费，每次可以灭菌多少瓶。
（二）接种成本
2、茎尖分生组织培养 • 茎尖分生组织是最常用的外植体。种姜
在MS（+0.8％琼脂）上发芽，长至10mm— 15mm时，切取带2个叶原基（0.1mm—0.2mm） 的分生组织，培养4周后芽的数量将增加16 倍，并且再生苗在表型和生产力上无明显 变异；利用茎尖培养得到小块茎，在室温 下放置沙床2个月后，80％小块茎能生根发 芽。据lodcn报道，生姜茎尖培养快繁体系， 一年能产生750万株以上的植株。
（三）、培养
• 1、室内培养：将接种后的生姜放在培养室中进 行培养，使其生长分化。培养室要求干净清 洁，室内装有紫外线杀菌灯，每天要对室内 进行消毒，以防污染。培养温度20-28℃， 最适温度25℃，相对湿度70%，光照强度 1000-2000勒克斯，每日光照10小时左右。
2、继代培养：每培养25-30天，培养瓶内的 小植株就会分出3-5个小植株，把这些小植株 分出放于继代培养基内培养；过20-30天后又 会长出小植株，如此反复进行继代培养，增 加繁殖系数。
接种（几台超菌工作台）采用定额方式，每个零 工月工资（上班时间按每个月21天计算）规定任 务一天几瓶。
• 用电成本超菌工作台功率，灭菌器功率；一台一 天转庙多少，工作时间一天几小时，电费多少钱 一度。另外接种室内空调功率。
• （三） 培养成本
根据生产经验，一年生产100万（集中出售期5 个月）需要多大的继代培养室、多大的生根培养 室。培养室的耗电量
（四）、脱菌快繁
• 1、生姜繁殖方式及其所带病毒 生姜以地下根状茎无性繁殖为主，其繁殖系数较
低，并且易通过带病种姜传播病害，尤其是姜青枯 腐烂病，又称姜瘟，在世界各生姜产区均有发生， 发病地块一般减产10％—20％，重者达50％以上。其 致病菌为青枯假单胞杆菌，也可侵染番茄、辣椒、 茄子等茄科植物；此外，还有猝倒病，又称根腐 病，致病菌为Pythium aphanidermaturn（种子腐烂菌）。 目前尚无理想的杀菌药剂和抗病品种，只能以农 业防治措施如选用抗（耐）病品种、进行种姜药剂 消毒以及土壤消毒等为主。但效果不理想。