儿童感染流感嗜血杆菌分离培养与耐药性分析

儿童感染流感嗜血杆菌分离培养与耐药性分析目的了解流感嗜血杆菌（Hi）在儿童中的感染情况及耐药性现状，为临床合理使用抗生素提供参考。

方法采集本院2012年6月～2013年5月就诊患儿的咽拭子、痰标本共2251份做细菌培养鉴定及药敏试验。

结果Hi阳性标本186份，阳性率为8.3%。

3～5月检出率最高，共检出74例，占39.8%，为感染高峰期；复方磺胺甲■唑片、氨苄西林、四环素耐药率较高分别为70.4%、51.6%、32.3%；氨苄西林/舒巴坦、头孢呋辛耐药率为26.3%、17.2%；头孢噻肟、氨曲南、阿奇霉素、左氧氟沙星耐药率均低于10.0%，美罗培南耐药率为0.0%；β-内酰胺酶的阳性率为45.2%。

结论Hi是杭州地区儿童呼吸道感染中的重要致病菌，对常见抗生素的耐药率高，应根据药敏结果合理选择临床用药。

[Abstract] Objective To investigate the incidence and resistance status of Haemophilus influenzae（Hi）infection in children，so as to provide a reference for the rational use of antibiotics in clinical. Methods Bacterial culture of sputum and throat swab in 2251 children in our hospital from June 2012 to May 2013 were selected. Results 186 Hi samples had been detected and the positive rate was 8.3%，whereas there were 74 cases had been detected from March to May，and the positive rate was 39.8%，and the period was the infection peak according to the highest isolated rate.The drug resistance rates of susceptibility results showed that the resistance rate of trimethoprim/sulfam，ampicillin，tetracycline was 70.4%，51.6% and 32.3% respectively，the resistant rate of amipicillin/subactan and cefuroxime was 26.3% and 17.2% respectively，whereas the resistant rate of cefotaxime，aztreonam，azithromycin，levofloxacin were all less than 10%，meropenem resistance rate was 0.0%，the positive rate of β-lactamase was 45.2%. Conclusion Hi is an important pathogen of respiratory tract infections in children in Hangzhou area，with high resistance to common antibiotics，so the antibiotic choice in clinical should be based on susceptibility results reasonably.[Key words] Children；Haemophilus influenzae；Infection；Resistance rate流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae，Hi）于1892年在流行性感冒中首次被发现，是流感时继发感染的常见细菌，属革兰阴性杆菌，因具有嗜血性而得名，广泛寄居于呼吸道中，是我国儿童呼吸道感染的常见致病菌。

婴幼儿多见于急性化脓性感染，局部引起鼻咽炎、会厌炎、急性气管炎等，也可引起肺炎、中耳炎、脑膜炎等，严重影响儿童健康。

近年来，随着抗生素的大量应用，Hi对抗生素的耐药率也逐步上升，因此，及时准确地分析Hi的耐药情况具有重要的临床意义，有鉴于此，本院对门诊及住院患儿咽拭子、痰标本分离培养得到的Hi耐药情况进行了分析，现报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料采集2012年6月～2013年5月在杭州市儿童医院就诊的呼吸道感染患儿咽拭子、痰标本共2251份。

1.2 仪器与试药主要仪器：CO2培养箱；试剂：嗜血杆菌专用巧克力培养基（HAE），营养琼脂培养基，嗜血杆菌药敏培养基，Ⅴ、Ⅹ及Ⅴ+Ⅹ因子纸片，API-NH试剂盒，β-内酰胺酶试验纸片，标准抗生素纸片氨苄西林（AMP，10 μg）、头孢噻肟（CTX，30 μg）、头孢呋辛（CXM，30 μg）、美罗培南（MEM，10 μg）、氨曲南（ATM，30 μg）、阿奇霉素（AZM，15 μg）、四环素（TE，30 μg）、左氧氟沙星（LEV，15 μg）、复方磺胺甲■唑片（SXT，23.75 μg）、氨苄西林/舒巴坦（SAM，10/10 μg）共10种，均由英国OXOID公司提供；Hi标准菌株ATCC49247为质控菌株。

1.3 细菌培养鉴定与药敏试验1.3.1 菌株的分离与鉴定将采集的标本接种于HAE中，置（35±2）℃5%的CO2培养箱中培养18～24 h，挑取平板上生长的灰白或透明、光滑、圆形可疑菌落，涂片做革兰染色，镜检选取革兰染色阴性的杆菌接种于营养琼脂培养基上密集划线，并在平板上贴上Ⅴ、Ⅹ和Ⅴ+Ⅹ因子纸片后置于5%的CO2培养箱中培养18～24 h；另挑取单个菌落接种于另一个HAE平板上，置（35±2）℃5%的CO2培养箱中分离培养18～24 h。

观察营养琼脂培养基，若Ⅴ+Ⅹ因子纸片周围有细小菌落生长，而Ⅴ、Ⅹ因子周围无菌落生长，该菌株即为Hi，必要时做API-NH鉴定确认。

1.3.2 β-内酰胺酶试验用接种环挑取分离后菌落涂布于β-内酰胺酶试验纸片上，试纸变红色为阳性，1 h内观察有效。

1.3.3 药敏试验挑取HAE上分离培养后的Hi菌落，用无菌生理盐水调制相当于0.5麦氏单位浊度的菌悬液，用无菌棉签均匀密集涂布于药敏培养基上，贴上药敏纸片（纸片扩散法），置于（35±2）℃5%的CO2培养箱中18～24 h后量取抑菌圈直径。

严格按照NCCLS/CLSI标准判断结果。

1.3.4 药敏质控使用质控菌株ATCC49247作药敏质控，结果全部符合标准。

2 结果2.1 Hi分离情况的分析2251例标本中共培养分离到Hi 186例，感染率为8.3%。

从季节上分析全年均可感染，6～8月检出30例，占16.1%；9～11月检出29例，占15.6%；12～2月检出53例，占28.5%；3～5月检出74例占39.8%；冬春季节感染率较高，高峰期为3～5月（图1）。

图1 2012年6月～2013年5月Hi检出数与季节的关系2.2 Hi对10种抗生素药敏分析的比较复方磺胺甲■唑片、氨苄西林、四环素的耐药率较高，分别为70.4%、51.6%、32.3%；氨苄西林/舒巴坦、头孢呋辛的耐药率分别为26.3%、17.2%；头孢噻肟、氨曲南、阿奇霉素、左氧氟沙星的耐药率均低于10.0%，美罗培南耐药率为0.0%（表1）。

表1 Hi对10种抗生素耐药率的比较（n）2.3 Hi产酶情况的分析2251份标本中有186份标本分离出Hi菌株，其中产β-内酰胺酶者有84株，产酶率占Hi菌株的45.2%。

3 讨论Hi是目前国内儿童急性下呼吸道感染中的主要病原体，儿童下呼吸道感染中有29%的病例由Hi感染所致，在儿童细菌性急性上呼吸道感染中，Hi仅次于肺炎链球菌居第2位[1]。

我国地域辽阔，不同地区Hi的分布特点及耐药性存在一定差异。

本院2251份标本中共检出186株Hi，检出率为8.3%，提示Hi在儿童呼吸道感染中占重要地位，且感染率与季节密切相关，以冬春为高发季节，可能与气候因素有关。

国外有报道Hi产β-内酰胺酶概率为5%～55%[2]，我国不同地区Hi的产酶率也各不同，苏州及孝感地区报道分别为31.4%、24.0%[3-4]。

有报道本地区2001～2002年Hi产β-内酰胺酶率为18.1%[5]，2006～2007年为23%[6]，而本次研究中Hi产β-内酰胺酶率为45.2%，显著高于各地及本地区往年报道。

本院Hi耐药率较高的抗生素为复方磺胺甲■唑片（占70.4%）、氨苄西林（占51.6%）四环素（占32.3%），其中氨苄西林曾是Hi感染的首选敏感抗生素，但近年来随着抗生素的不规范应用，Hi的耐药率逐年增加。

氨苄西林耐药多由β-内酰胺酶产生引起，本院186例Hi菌株中β-内酰胺酶产酶率达45.1%，是氨苄西林耐药率高的主要原因，此三类药物由于耐药率较高，已不适用于临床经验用药。

美罗培南、左氧氟沙星、头孢噻肟、氨曲南、阿奇霉素耐药率分别为0.0%、0.5%、0.5%、1.6%、8.6%，耐药率低，显示碳青霉烯类、喹诺酮类、头孢菌素类、大环内酯类等有较高的抗Hi活性，可为临床医师治疗Hi引起的呼吸道感染提供用药参考。

本次试验耐药率数据跟几年前相关报道对比有明显上升趋势，Hi对常用抗菌药物的耐药已十分严重，应引起重视[5-6]。

因此，相关部门在日常工作中应对Hi做好耐药性监测，密切关注其耐药趋势，为临床合理用药提供依据。

[参考文献][1] 赖国祥，叶礼燕，李玉德，等.儿童下呼吸道流感嗜血杆菌感染的临床调查[J].中华儿科杂志，1997，35（11）：590-592.[2] HA Srair，H Aman，AL mandan M，et al.Bacterial meningitis in saudi children[J]. Indian J Pediatr，1995，59：719-721.[3] 吴军华，季件，陶云珍，等.2006-2007苏州地区儿童呼吸道感染流感嗜血杆菌分布及耐药性分析[J].临床儿科杂志，2010，28（2）：131-134.[4] 刘朱华，李从荣.孝感地区儿童呼吸道流感嗜血杆菌感染流行病学特点及耐药性分析[J].北京医学，2012，34（12）：1051-1054.[5] 华春珍，俞惠民，陈志敏，等.流感嗜血杆菌致小儿下呼吸道感染216例分析[J].临床儿科杂志，2005，23（9）：624-626.[6] 张烛仙.儿童感染嗜血杆菌分离株的耐药性和血清分型研究[D].杭州：浙江大学，2008.。