最新API细菌鉴定系统
API 20NE (20050)中文说明书
触，必须立即用水冲洗至少 10
分钟；如与皮肤接触，用肥皂
洗和水冲。
对氨基苯磺酸
0.4 g
乙酸
30 g
H2O
具腐蚀性
70 ml
R34: 引起灼伤
S2: 避免儿童接触
S23: 避免吸入蒸气
S26: 如与眼睛接触，即用水冲洗，并
治疗处理
N, N-二甲基-奈酶胺
0.6 g
乙酸
30 g
H2O
70 ml 具腐蚀性
－用手垂直握住安瓿瓶(白色瓶盖向上) －尽量将瓶盖压下 －用大拇指顶住瓶盖上斜面部份 －向外施加压力直至瓶盖内瓶尖断裂 *无滴头安瓿：小心移开瓶盖 *附滴头安瓿：垂直倒置安瓿瓶，挤压瓶盖将所 有试剂加入滴瓶
所有加样後产品应视之带有污染性，需小心处理。 所有病人标本和细菌培养均可能带有污染性，应根据国际标 准 处 理 (NCCLS M29-72: CDC Manual Biosafety in Microbiological & Biomedical Laboraties, 1993) 在完成检测、判读後，所有标本，污染物及试条必须高温高 压消毒，烧成灰或在丢弃前浸於消毒水内杀菌。 最後鉴定的结果需由合格微生物学家肯定，同时需考虑病 史、标本来源、菌落及显微镜下生长形态、其他测试结果， 例如药敏结果。
50300 API 50CH
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api® 50 CH
07945F - GB - 2002/11
必须但未提供的试剂和材料 试剂 : - 接种培养基 API 50 CHL 培养基（产品号.50410） API 50 CHB/E 培养基（产品号.50430） (指本说明书中提到的培养基或其他适合的培养基) - 矿物油 (产品号. 70 100) - McFarland 标准比浊管 (产品号. 70 900)，或 DENSIMAT 比浊仪（产品号.99234），或 ATB Densitometer - 鉴定软件（请与生物梅里埃公司联系）
api菌种鉴定系统介绍
VIDAS CAM
结果 70 分钟
阴性结果 无弯曲菌属 r
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
阳性结果
确认 结果
API campy (6 McF )
完！
结果判读系统
A P I LAB Plus 分析软件
原理：生化结果组合跟资料库內的典型条目作比 较，经计算後得出：
鉴定百比率（ %Id ）＝机会率 与数据库中各个项的接近程度来确认未知菌是否 属于某一个分类单位 (科,属,种)
T 值（T index ）=变异程度 待检菌的分类单位被确定以后， T 值表示其生
化反应结果与该菌最典型生化谱的接近程度
鉴定前的准备
鉴定前常规的分离培养是必不可少的。
分离培养后挑选可疑菌落进行预试验 , 如革兰 氏 染色、镜检、氧化酶实验、触酶试验 等。
预试验起定向的作用 , 根据定向的结果选用不 同 的A P I 试剂条。
杆菌 球菌
革兰氏 革兰氏
杆菌 球菌
革兰氏 革兰氏
革兰氏阴性菌
% id >99.9 % id >99 % id >90 % id >80 % id <80
T >0.75 T >0.5 T >0.25 T >0
弯曲菌的生化确认
? 革兰氏阴性 ? 海鸥型 ? 氧化酶阳性 ? 接触酶阳性
VIDAS CAMPYLOBACTER
24hr-48hr , 42 °c
前培养肉汤
常见的生化反应
1.发酵或同化抑制试验: 是根据待测菌是否受到反应杯中特异抑制物 的抑制而不能产生分解代谢或不能生长来判断。
2.酶试验: 根据待测菌含有相应的酶就可分解底物, 再通过显色反应 来判断。如碱性磷酸酶、氧化酶、B- 半乳糖苷酶、赖氨酸脱羧酶、 鸟氨酸脱羧酶、色氨酸脱羧酶、吲哚产生等。
API20E生化鉴定条在致病菌检验中的应用
API20E生化鉴定条在致病菌检验中的应用摘要】目的提高API20E鉴定系统在肠道致病菌鉴定中的应用。
方法应用API20E和国产生化鉴定管对13株阳性菌株（4株致病性大肠埃希氏菌、7株志贺氏菌、2株甲型副伤寒菌）进行鉴定比较，并经血清学凝集验证。
结果表明API20E鉴定系统方法程序简化，检测结果准确可靠，对致病菌鉴定有现实的指导意义，可作为常规致病菌检测方法。
【关键词】API20E生化鉴定条、生化鉴定管、沙门氏菌、志贺氏菌【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）30-0305-02近年来新的生化鉴定系统不断推出，以传统的试验方法来鉴定致病菌已不能适应准确、快速诊断的需求。
API20E生化鉴定系统是由法国生物梅里埃公司生产细菌数值分类鉴定系统，它的鉴定能力强，数据库不断更新和补充完善，已被许多国家和组织列入标准方法。
现在就API20E生化鉴定系统与国产生化鉴定官的鉴定效果进行比较对比，报告如下：1、样品、材料和检测依据1.1样品来源：本地区历年检测出的阳性菌株13株（4株致病性大肠埃希氏菌、7株志贺氏菌、2株甲型副伤寒菌）1.2、材料：API20E生化反应试剂条（法国生物梅里埃公司生产），批号：1002230950；API-Plus鉴定软件；国产细菌生化鉴定管（北京路桥公司生产），批号：20140218；志贺氏菌属诊断血清22种（宁波天润生物药业公司生产），批号：20140201；肠道致病性大肠埃希氏菌诊断学清15种（宁波天润生物药业公司生产）批号：20140201；沙门氏菌属诊断血清30种（宁波天润生物药业公司生产），批号：20140201。
1.3、检验依据：沙门氏菌检验方法：GB/T4789.4-2010、志贺氏菌检验方法：GB/T4789.5-2012、致泻性大肠埃希氏菌检验方法：GB/T4789.6-2003。
API20E生化反应试剂条和国产细菌生化鉴定管按厂家操作说明书进行操作。
API 20E (20100)使用说明
- 在 MacConkey(McC)培养基上的生长； - 葡萄糖氧化型(OF-O)； - 葡萄糖发酵型(OF-F)。 根据相同的原理，将相应的反应编码，则得到一个 9 个位数的编码。
附加试剂: TDA (Ref. 70400)
JAMES (Ref. 70540)
VP 1 (Ref. 70420)
VP 2 (Ref. 70430)
NIT 1 (Ref. 70440)
NIT 2 (Ref. 70450)
OX
(Ref. 70460)
－Zn 试剂 (Ref. 70380)
－石腊油 (Ref. 70100)
试验条的接种 用吸管将细菌悬液充满檬酸CIT、VP各GEL管； 其它管仅充满管部(不是杯部)； ADH、LDC、URE、ODC和H2S，则用矿物油覆 盖； 盖上盖子，孵育於 35~37°C 18~24 小时。 於周未孵育 ：API 20 E的生化反应需於孵育 18-24 小时後判读，如无法进行试条需於温箱取 出并置於 2-8°C直至可以进行判读。
试验条的准备： 准备一个培养盒（盘和盖子），倒入约 5ml 水於 盘的蜂窝小凹中，造成一个湿室。 记菌株资料於盘的边沿部分。 从包装中取出试验条放到盘中。 进行 Oxidase 氧化酶检测:
- 在玻片上放上张滤纸片。 - 在滤纸上滴一滴水。 - 取一个菌落涂在滤纸上。 - 加一滴 OX 试剂 - 如於 1 至 2 分钟内呈现深紫色，则为阳性反应。
储存试剂。
4. Zn 附加试剂 － 打开小瓶 － 取大约 2-3mg Zn 粉未,使用小刮铲将粉未加入
反应小管. － 使用试剂後，拧紧瓶盖，根据"试剂的储藏"一栏，
储存试剂。
警告及留意事项：
只供体外诊断用。 合格检验科工作人员应采用无菌操作方法并防范 带传染性物质。 不应用口吸取标本或试剂。
API20A（20300）.pdf
20 300api 20 A供体外诊断用厌氧菌鉴定系统API 20 A 鉴定系列有21个测定，能快速、简便地对厌氧菌进行生化鉴定。
其它测定如菌落和显微形态，革兰氏染色、代谢产物的气相层析等都应进行，其结果用于确认或完善鉴定结果。
能鉴定的菌名单列于说明书末的鉴定表。
原理API 20 A 试验条是由20个含干燥底物的小管所组成。
将菌悬液分装到管内而重新组成这些底物。
在35-37°C培养24或48小时之后，所产的代谢物由酸度(pH)指示剂或加入试剂而呈现出来。
根据读表判读反应结果；用分析谱索引或鉴定软件予以鉴定。
试剂一套API 20 A(可作25个鉴定物)包括有：- 25个API 20 A 试验条- 25个培养盒- 25个API 20 A 培养基物的安瓿管- 25份报告单- 1份说明书附加产品：- 棉签(ref. 70 610)- 矿物油(ref. 70 100)- 吸管或PSI管(ref. 70 250)- 厌氧缸或厌氧室- 培养皿(直径9 cm)- 紫外灯(365nm) (ref. 70 800)- 安瓿架(ref. 70 200)- 过氧化氢(3%)- 试剂：BCP (ref. 70 510)EHR (ref. 70 520)XYL (ref. 70 530)- McFarland标准(ref. 70 900)- API 20 A 分析谱索引(ref. 20 390)或鉴定软件试验室必备设备- 培养箝- 冰箱- 本生煤气灯- 记录笔培养基和试剂成分API 20 A 培养基4ml胰酶解蛋白 5g酵母膏 5 gNaCl 2..5 gL-色氨酸0.2 gL-半胱氨酸0.4 g血红素0.005 g维生素K1 0.01 gNa2SO40.1 g无离子水1000 mlpH 7.0-7.2EHR试剂5ml对二甲氨基苯甲醛0.9 g盐酸 6.67 g乙醇82 mlH2O 11.3 ml易燃R11：高度易燃S7：密闭容器S16：远离火源一禁吸烟BCP试剂5ml溴甲酚紫0.02 gH2O 100 mlXYL试剂5ml二甲苯有害R10；易燃R20/21；吸入和皮肤接触有害R38；对皮肤剌激S25；避免与眼接触试验条和培养基的贮存在有效日期(在包装上标出)内，培养基应贮存于2-8°C。
API 20E、API 20NE使用说明：
API 20E、API 20NE使用说明：概要说明：API 20 E 是肠杆菌科和其它非苛养G-杆菌的标准鉴定系统，包括21 个标准化微型生化测试和鉴定资料库可鉴定的菌谱名录请参考说明书后的鉴定表。
原理：API 20 E 试验条是由20 个含干燥底物的小管所组成，这些测定管用细菌悬浮液接种培养一定时间後通过代谢作用产生颜色的变化或是加入试剂後变色而观察其结果，根据说明表判读反应参照分析图索引或使用鉴定软件得到鉴定结果。
试条的准备：准备一个培养盒盘和盖子，倒入5mL蒸馏水或软化水，于盘的蜂窝小凹中，造成一个湿室。
在盘的边缘写上编号。
从报装中取出实验条放到盘中。
API 20E操作步骤：1．取API 0.85% NaCl（5mL）培养基或使用5mL0.85%无杂质生理盐水2．用吸管或接种针从分离物的平板上挑取单个分纯菌落至悬浮基物中建议适用新鲜培养3．仔细研匀以达到均一的细菌悬液4．用同一根吸管，将菌悬液充满[CIT]、[VP]和[GEL]管的管部和杯部（加满）5．其他管仅充满管部（不是杯部）6．ADH、LDC、ODC、H2S和URE管用矿物油覆盖以形成厌氧环境7．盖上培养盒8．孵育18~24小时结果判读：添加附加试剂：TDA试验加1滴TDA试剂深褐色为阳性反应IND试验加1滴JAMES试剂反应立即发生粉红色出现为阳性反应VP试验加1滴VP1和1滴VP2试剂至少等待10分钟浅粉或红色表示为阳性结果如浅粉红色在10至12分钟内出现判断结果为阴性NO2测定：各加一滴Nit 1和Nit 2试剂於葡萄糖管内，待2~3分钟後，红色表示阳性，阴性反应（黄色）可能由於还原至N2（有时还有气泡）：加2-3mg锌粉到葡萄糖管，5分钟後，如果管保持黄色表示N2阳性记录於报告对照结果判读（加入附加试剂前阳性结果包括GLU试验的数量少于3个重新培养21小时且不要加任何试剂）板条的准备准备一个培养盒，在盒子中加入5ml 纯水，以建立一个湿润的环境。
无菌培训-关于菌种鉴定系统的介绍
1、工作原理： VITEK试卡的反应池内含风干底物（培养介质）。试卡由 标准浓度菌液充填，然后放入测试槽内，读取器每小时量度 卡片内样本在培养介质内生长变化值，与数据库中的数据进 行比较分析，达到系统预设的阈值时，自动报告结果，直至 最后结果打印出来。 2、主要卡片的种类及其可鉴定的微生物种类 GNI+：革兰氏阴性杆菌鉴定 （1）革兰氏阴性杆菌鉴定(肠杆菌科Enterobacteriaceae) （2）非发酵革兰氏阴性杆菌鉴定：氧化酶阳性(假单胞菌 属Pseudomonas) （3）发酵革兰氏成 A P I 鉴定系统的主要部分是A P I 试剂条及检索工具,此外有些反应还 需使用添加试剂。 （1）试剂条 A P I 试剂条由透明的PVC 材料制成, 不同的试剂条有不同数量的反应 杯, 每个反应杯内包被有相应的干燥生化基质, 常见的生化反应有以下5 类: ①发酵试验: 为碳水化合物与酸的分解代谢试验, 结果是通过PH 的变化 引起酸碱指示剂颜色的改变来判断。如葡萄糖、乳糖、甘露糖、蔗糖、 甘露醇、肌醇、山梨醇等。 ②同化试验: 根据待测菌能否利用反应杯中的单一碳水化合物作为碳源 而得以生长来判断。如葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖、甘露醇、N - 乙酰 葡糖铵、葵酸、乙二酸、苹果酸等。 ③发酵或同化抑制试验: 是根据待测菌是否受到反应杯中特异抑制物的 抑制而不能产生分解代谢或不能生长来判断。 ④酶试验: 根据待测菌含有相应的酶就可分解底物, 再通过显色反应来 判断。如碱性磷酸酶、氧化酶、B- 半乳糖苷酶、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸 脱羧酶、色氨酸脱羧酶、吲哚产生等。 ⑤其它生化反应: 如硝酸盐还原酶、七叶苷、明胶、硝酸盐还原等。
革兰氏阳性菌
杆菌 L. Monocytogenes Bacillus cereus Corynebacteria Lactobacillus
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——全球金标准
细菌鉴定的重要性
- 疾病的评估 - 找出食物变质的原因，从而制定预防的步骤 - 确保用药治疗洽当 - 环境控制 - 流行病学的基础
常规鉴定所遇的困难
- 分类学复杂及进化
- 涉及很多生化项目
- 工业微生物容易出现变异
- 结果处理及计算麻烦
API 系统
所引用的分类学方法国际认可 - International Journal of Systematic Bacteriology
ID 显色接触酶 现成试剂 稳定化试剂 显色剂 粘度 敏感性 实 用 性 : 用 於 包括 血 平板在内各种培养 有 有 (稳定期 1 年 ) 有 (Evans 兰) 试剂可保持在测定的菌落上 高 有 传统方法 (H2O2) 无 无 无 滴加於琼脂上 低 无
ID Color Catalase
产品规格
名称 货号 试剂 ID Color Catalase 55561 2 瓶 5ml 滴瓶 (~100 测试量) 储存 有效期 2-8° C 於暗处 一年或 6 个月(於室温)
培养盒 保持潮湿环境
PSIpettes 接种管 挑菌落，混匀及接种
API 试条 每个小孔载有风乾的底物
操作步骤 1 (API 20E)
分离单个菌落
挑单个可疑菌落 尽量避免使用高度选择性培养基
调制菌液
悬浮液 (容量: 5ml)
操作步骤 2 (API 20E)
将菌液接种到小 管或小管及小杯 (CIT, VP和 GEL)
API鉴定原理
API 微生物鉴定系统以微生物生化理论为基础,借 助微生物信息编码技术,为微生物检验提供了简易 、方便、快捷、科学的鉴定程序。
生理生化鉴定：根据微生物对各种生理条件（温 度、pH、氧气、渗透压）、生化指标（唯一碳氮 源、抗生素、酶、盐碱性）代谢反应进行分析， 并将结果转化成软件可以识别的数据，进行聚类 分析，与已知的参比菌株数据库进行比较，最终 对未知菌进行鉴定的一种技术。
葡萄球菌
链球菌
接触酶试验
原理 :
H 2 O2
接触酶
H2O + O2
传统方法 :
试管法
O2
菌落
+ =接触酶(+)
H2O2
玻片法
=接触酶(+)+
接触酶显色剂
玻片法
试管法
ID Color Catalase 接触酶试剂
组成:
- 增稠剂: 高粘度集中所产生的气泡, 防止试剂扩散
- Evans兰: 兰色使结果更容易阅读
API 系统
- 构成: 试条由特別选择的生化反应小管 API试条有多种类 各有相应的数据库 所有生化结果以同时间一并阅读
API 套件
API 试剂盒及其配套试剂
石腊油(容量: 125ml) 覆盖在指定小孔上
悬浮液 (容量: 5ml) 用於调菌液
安培架
附加试条 加进指定的生化孔内
容许於平板(包括血平板)上作直接检测
- 玻片法
- 直接在平板上测试
ID COLOR CATALASE 接触酶试剂
步骤 :
– 玻片法 : 或 – 直接平板测试 : 落
将待检菌落乳化於一滴试剂中
将一滴试剂直接滴於平板上的菌
即时产生气泡 (5 秒内) 代表阳性结果。
鉴定用接触酶显色剂
接触酶试验是细菌鉴定中的一个重要反应。由於传统方法的弱 阳性结果，这个试验没有得到充分应用。
步骤
- 染色前，所有细胞是透明的
G()
G()
- 结晶紫着色後用碘增加染料ห้องสมุดไป่ตู้与菌体结合
- 乙醇从G() 菌体洗脱结晶 紫
- 用番红液复染，革兰氏阴性 菌呈粉红色，革兰氏阳性菌 呈兰紫色
革兰氏染色
原理 : 检查细菌细胞壁的渗透性
不紧密外壁层(透乙醇) + 薄内壁层钛聚糖
单层厚钛聚糖细胞壁
革兰氏阳性
革兰氏阴性
革兰氏染色液 2 (Color Gram 2)
- 特性
稳定化的碘液 PVP(聚氯乙烯吡咯烷酮)可以防止因 碘挥发而变质，同时也增强了媒染效 果。
更容易分别G()及G(-)菌
高质量的结晶紫和番红，无沉淀。
接触酶试验
接触酶试验
用于分辨葡萄球菌及链球菌
革兰氏阳性球菌 接触酶 + 接触酶 -
按操作说明书规定，将附加试剂 加进适当小孔内
api20E 试剂
API 试剂条
24小时出结果
阅读结果
根据说明书上，
或彩图的指示， 记录结果於报告 单上。
利用编码手册
或APILAB PLUS软件进出分析
全Windows操作界面，多种语言。
API 结果
跟据T值及%Id的组合，作出评语： (i) 极好的鉴定结果 (ii) 很好的鉴定结果 %Id >99.9及T>0.75 %Id >99.0及T>0.50
(iii) 好的鉴定结果
(iv) 可以接受的鉴定结果 (v) 可疑的生化谱
%Id >90.0及T>0.25
%Id >80.0及T>0
API 与日俱进
不断更新的数据库：
- 分类学的进化 - 新的菌种发现 - 生化反应的演进 - 鉴定菌种需要的改变
定向试验
革兰氏染色液
- 在细菌学里最普遍的染色方法
资料库＝整个系统的心脏
API 系统
• 美国FDA的细菌鉴定标准 • 欧洲药典的细菌鉴定标准 • 国标
API的优点
标准化，简易化 在制造过程中，进行质控 FDA标准 用户可用ATCC菌种进行质控 系统化 操作简易 快速报告 30多年的经验，拥有菌种资料＞25000 ，鉴定系统的发源生化测试＞750 - ＞1500多篇使用文献 -
完整的鉴定谱
微生物鉴定
杆菌 球菌
接触酶
革兰氏
革兰氏
杆菌
球菌
API 鉴定范围
庞大资料库 15种试条 >600种细菌可被鉴定 研究用试条： 乳酸杆菌，芽胞菌，弯曲菌
API 试剂类别
• • • • • • • • • •
API 20E /RapiD 20E革兰氏阴性杆菌鉴定 API 20NE非发酵菌鉴定 API STAPH葡萄球菌及微球菌 API STREP链球菌鉴定 API 20C AUX酵母菌 API 20A厌氧菌 API LISTERIA李斯特菌 API CAMPY弯曲菌属 API CORYNE棒状杆菌 API CH芽胞杆菌/乳酸杆菌
将试条放进培 养盒内
将 5ml 无菌 水放进培养 盒里
利用石腊油覆盖指定的生化孔 (有划线的孔)
ADH ODC H2S URE
把培养盖盖上
操作步骤 3 (API 20E)
把试条放进孵育箱内，利用指
定温度及时间 API20E : 35 - 37oC，18-24 小时
18-24 小时後