槐米中芦丁的提取分离与鉴定(1)

实验规则
5、保持室内整洁：学生进入实验室必须穿戴工作衣 帽。实验完毕应将本组实验台、实验架等整理洁净方 可离开。实验小组轮流值日，主要负责实验室内、走 廊地面、门窗的卫生整洁，以及废物缸的清倒工作， 将水、电门窗关好，经指导教师验收后再离开实验室。 6、写好实验报告：实验报告是考查学生分析总结实 验资料能力和写作能力的重要方面，亦是评定实验成 绩的主要依据
槲皮素
子项目一 槐米中芦丁的提取
思考问题
1、加入硼砂目的是什么？ 2、为什么要加入石灰水，在芦丁的提取中能 起到什么作用？ 3、酸沉pH值为什么不宜过低？

那个天然产物的实验，要算下得率,粗芦丁重 量/槐米的重量； 精制芦丁的重量/粗芦丁的 重量；并且计算下，每克芦丁分子中槲皮素 和糖所占的百分比。
残渣
冷却（可以用流动水快速冷却）静置 精制芦丁（备用） 抽滤， 干燥、称重

食品091班得到的精制wk.baidu.com丁大约（粗芦丁4克 精制后大约？）
减压抽滤装置

减压过滤操作 减压过滤也就是抽滤,利用抽气泵使抽滤瓶中的 压强降低,达到固液分离的目的. 装置:布式漏斗,抽滤瓶,胶管,抽气泵,滤纸 过程: 1、安装仪器,检查布式漏斗与抽滤瓶之间连接是否 紧密，抽气泵连接口是否漏气； 2、修剪滤纸，使其略小于布式漏斗，但要把所有 的孔都覆盖住，并滴加蒸馏水使滤纸与漏斗连接紧密； 3、将固液混合物转移到滤纸上； 4、打开抽气泵开关，开始抽滤。 5、过滤完之后，先抽掉抽滤瓶接管，后关抽气泵。 （防止倒吸）


硫酸可以同时沉淀Ba2+ Ba2+ + SO4 2========BaSO4↓ 使芦丁水解后的滤液更 纯净
学生做的结果：芦丁的得率大约是：20-25% 精制芦丁的得率是大约87% 槲皮素占芦丁分子是：13%到 20

子项目四 芦丁和槲皮素的鉴别
思考问题
1、纸色谱的原理及操作要点？ 2、黄酮类化合物有哪些显色方法，各针对哪类黄酮？ 3、黄酮类薄层色谱中，经常用到的吸附剂有哪几类？ 各自的原理有什么不同？ 4、黄酮类薄层色谱中常用到AlCl3乙醇溶液显色？显色 后一般呈什么颜色？ 5、薄层色谱的操作要点有哪些？
实验规则
3、杜绝差错事故：称取药品时，要在拿取、称量 和放回时进行核对。称量完毕应盖好瓶塞，放回原 处。实验成品应写明名称、规格、配制者、配制时 间及班组号，交实验指导教师验收。
实验规则
4、爱护仪器药品：实验仪器、药品应妥善保管、存 放和使用。如有破损缺少，必须立即报告实验指导 教师，并填写仪器药品报损表，然后到准备室补领。 实验小组合用的仪器药品，每次实验前应检查核对 后再取用。实验指导教师对破损缺少的仪器药品应 查明原因，按本院校对仪器药品破损处理办法提出 处理意见。 打破玻璃器皿和试 备要赔偿！
酚羟基 FeCl3反应 将样品溶液1ml，加入1～2滴2%Fecl3溶液， 观察现象。
芦丁的提取与定性反应
薄 层 色 谱 鉴 别
样品：分别取精制的芦丁、槲皮素适量，加95%乙 醇溶解成每1ml含1mg的溶液，备用。 展开剂：醋酸乙酯-甲酸-水（8：1：1） 显色剂：2%AlCl3乙醇溶液，105℃加热至斑点 清晰，置紫外灯(365nm)下观察。
所需的试剂和设备
1、样品：槐花米 试剂：硼砂、CaO、浓盐酸 仪器：每一组需要： 电炉、1000ml烧杯、 小烧杯、 500ml烧杯、玻璃棒、pH试纸、玻 璃漏斗、滴管 公共需要：棉花、天平

芦丁的提取分离与鉴定
子项目一 槐米中芦丁的提取
提 取
槐花米 （25g） 加0.4%硼砂沸 水200ml
芦丁的提取分离与鉴定
相关内容介绍

性能：苦，性微寒。 功效：凉血止血、清肝泻火 应用：用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、 衄血、肝热目赤、头痛眩晕等。 主要含有芦丁、槲皮素，还含少量皂苷类及多 糖、粘液质等。近代研究表明槐米含芦丁可高 达23.5%，槐花开放后降至13.0%。
芦丁的提取分离与鉴定
芦丁的提取分离与鉴定
定 芦丁供试品溶液：取精制芦丁约5mg，用5ml甲 性 醇（无水乙醇）使溶液，备用。 反 应 槲皮素供试品溶液：取粗槲皮素约5mg，用5ml
甲醇（无水乙醇）使溶液，备用。
其余试剂：镁粉、浓盐酸、10%α -萘酚溶液、浓硫酸、2% 三氯化铁乙醇溶液 准备3支试管（一个空白管， 样品用蒸馏水代替，一个是芦丁、一个是槲皮素）
子项目三
水解芦丁得到槲皮素
思考问题
1、芦丁是？苷（ N- 苷 、O-苷、S-苷or C苷? 2、苷键的裂解可以用什么方法 ？最常用的方 法是？ 影响酸水解速度的因素有哪些？ 2、芦丁水解后的产物是什么？ 3、如何进行苷类酸水解操作，如何分离得到 苷元成分？
芦丁的提取分离与鉴定
子项目三
水解芦丁得到槲皮素





需要配制的试剂: 1 苯胺—邻苯二甲酸试剂配法：苯胺0.93g和邻苯二甲酸 1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。 （我们实验需要配 100ml）(用分液漏斗中加入50ml水和 100ml正丁醇震摇后 静置取上层即为水饱和的正丁醇） 2 10%α-萘酚乙醇溶液 25ml 3 2%三氯化铁乙醇溶液 20ml 4、展开剂：醋酸乙酯-甲酸-水（8：1：1）（我们实验需要 配300ml 5、5组配一瓶配200ml正丁醇-乙酸-水（4：1：5）放到分液 漏斗中，平衡后取上层备用 配两瓶 6、 2%AlCl3乙醇溶液 100ml 7、硅胶预制板，用之前105度烘半个小时。
芦丁
芦丁的提取分离与鉴定
相关内容介绍
OH OH
HO
O
O OH OH O OH OH OH OH OH O CH2O O
用于治疗毛细管脆弱引 起的出血病，并用作高 血压的辅助治疗剂。
芦丁
芦丁的提取分离与鉴定
相关内容介绍
OH OH 3' HO 7 5 3 OH OH O O 4'
性状：黄色针状结晶（稀乙醇）。 溶解度：冷乙醇中1:300，热乙醇中 1:23。可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、 冰乙酸、吡啶，不溶于水、氯仿、乙 醚、苯和石油醚等。
天然药物化学实训
项目一 槐米中芦丁的提取分离 与鉴定
实训目的
能够运用碱溶酸沉法和结晶法的操作技术对 槐米中的芦丁进行提取分离 能够运用酸水解的操作技术对槐米中芦丁进 行水解 能够运用纸色谱、薄层色谱法和化学法鉴别 芦丁、槲皮素和糖类化合物

实训结果
得到两个单体化合物
OH OH
OH OH 3' HO 7 5 3 OH OH O O 4'
新华一号滤纸 标本缸
倒入缸内约30毫升的展开剂
芦丁的提取分离与鉴定
糖 的 纸 显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂。 色 105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点) 谱 鉴 定 试验记录： 粘附纸色谱，并计
算斑点的Ｒf值 当溶剂走到溶剂前沿6－ 8cm即可，约需40分钟
１ ２ ３
标准品：葡萄糖、鼠李糖 展开剂：正丁醇-乙酸-水（4：1：5）放到分液 漏斗中，平衡后取上层备用。
试验记录
试剂
盐酸-镁粉反 应 Molish反应 FeCl3反应 试验现象 芦丁 槲皮素
结论及解释
芦丁的提取分离与鉴定
定 性 反 应
黄酮母核 盐酸-镁粉反应 将样品溶液1ml，先滴加1－2滴浓盐酸再加入少许 镁粉振摇，1-2min内，观察颜色变化。（注意顺序）
Molish反应
苷类
将样品溶液1ml，加入与样品等体积10%α萘酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加适量浓 硫酸（约2ml），至分层注意观察两界面产生的 变化。（不要摇动）
实验记录
颜色 样品 芦丁 槲皮素
直接观察 日光 UV
AlCl3 喷雾 日光 UV
R f值

注意：硅胶预制板，用之前105度烘半个小 时。
实验规则
1、预习实验内容：要明确实验目的与要求。对处方 中药物性质、配制原理、操作步骤、操作关键等， 做到“心中有数”，并合理安排实验时间。 2、遵守实验纪律：应保持实验室内肃静，不得无故 迟到或早退，不得擅离实验操作岗位，甚至高声 谈笑。如发生差错事故或异常现象，应随时报告 指导教师，查明原因，及时解释。注意安全，严 防火灾、烧伤或中毒事故发生。
需要的仪器设备

每组需要抽滤设备（需要1000ml的抽滤瓶）、 滤纸、 玻璃棒、1000ml烧杯、加热回流设 备（电热套、冷凝管、烧瓶）、小烧杯、浓 硫酸、浓盐酸
芦丁的提取分离与鉴定
提 取 与 精 制
第一次实验所得滤液 抽滤，少量水洗涤沉淀至中性 滤液 沉淀（粗品芦丁）
重结晶 取粗制芦丁3g,加蒸馏水 400ml,煮沸10分钟后，趁 热抽滤 滤液
实训报告格式
参照书P139和P216页， 具体要求老师再规定！
搅拌下加 入石灰乳 调节 pH8-9 加热
保持微 沸20min 补充水分， 保证pH值
趁热用棉花 滤过
滤液
在60-70度下，用 浓盐酸调pH3-4
静置
残渣

2010.11月，实验结果：食品091班30克槐米 制得的粗芦丁大约5－8克不等。
子项目二
槐米中芦丁的精制和水解
思考问题
先进行项目二，冷却后等沉沉析出时候，再讨论项目3 1、以热水重结晶法精制芦丁的依据是什么？ 2、重结晶的操作要点有哪些？
HO
O
O OH OH O OH OH OH OH OH O CH2O O
槲皮素
芦丁
项目一

芦丁的提取分离与鉴定
子项目一 槐米中芦丁的提取


子项目二 槐米中芦丁的精制
子项目三 水解芦丁得到槲皮素
子项目四 芦丁和槲皮素的鉴别
芦丁的提取分离与鉴定
相关内容介绍
槐花 槐米
槐花为豆科植物槐Sophora japonica L．的干燥 花及花蕾
相关内容介绍
OH OH
HO
O
O OH OH O OH OH OH OH OH O CH2O O
性状：浅黄色粉末或极细微淡黄色针 状结晶。 溶解度：在冷水中1:10000，沸水中 1:200；冷乙醇中1:200，沸乙醇中 1:60。沸甲醇中1:7。 酸碱性：芦丁分子中具有较多酚羟基， 显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又 可析出。
精制芦丁1.5g 加入2%硫酸或者 (1mol/lHCL)100ml，加热回 流30min(从有液滴滴下开始 计时），放冷静置，抽滤
沉淀 粗品槲皮素
注意观察整个过程的现 象！( 溶液澄明度和颜色 的变化)为什么出现这种 情况？
滤液
作糖的检识用
水解
抽滤
洗涤沉淀
干燥
称重

具体做法：芦丁水解方法： 取精制芦丁1.5g，研细后 置于250ml圆底烧瓶中，加入2％硫酸或 （1mol/lHCL)100m1，加热回流 30min，瓶中浑浊 液逐渐变为澄清的棕黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。 放冷沉淀，抽滤，保存滤液（应为澄清无色液体）， 作为糖的检查，沉淀物为芸香苷苷元（槲皮素），用 蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称量。得粗制槲 皮素，再用乙醇重结晶得精制槲皮素。 1mol/lHCL配法:取约90毫升浓盐酸定容至1000毫升

注意观察现象：未加热时，瓶内为混悬
液（芦丁不溶于冷水），加热后，混悬 液逐渐变为澄清液（芦丁易溶于热水）， 继续加热，有鲜黄色沉淀析出（槲皮素不 溶于水）
滤液处理： 取芦丁水解后的滤液15m1，加 氢氧化钡粉 中和至中性（搅拌下进行）滤去白色的硫酸 钡沉淀(漏斗滤纸），滤液在沸水浴上蒸干后， 加1－2 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。 （如果加 氢氧化钡加过量后可以加少量的硫 酸回调pH)
芦丁的提取分离与鉴定
子项目三 芦丁 和槲皮素的鉴别
糖 的 鉴 定
残渣
水解所得滤液20ml
用饱和Ba(OH)2调PH值至中 性，折叠滤纸过滤
滤液 蒸干，放冷 加2-3ml乙醇溶解 供试品溶液 纸色谱
芦丁的提取分离与鉴定
糖 的 纸 色 谱 鉴 定
标准品：葡萄糖、鼠李糖
展开剂：正丁醇-乙酸-水（4：1：5）上层液 显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂。 105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点)

所需要的药品和设备：氢氧化钡、葡萄糖、鼠李糖、 正丁醇、乙酸、苯胺、邻苯二甲酸盐、无水乙醇、甲 醇、乙酸乙酯、甲酸、AlCl3、镁粉、浓盐酸、 α-萘酚溶液、浓硫酸、三氯化铁、紫外灯、新 华1号滤纸、点样毛细管、水浴锅、硅胶G预制板
11块、分液漏斗 喷雾器几个

每组需要：1个蒸发皿、玻璃漏斗、玻璃棒、10ml试 管8支、2个小烧杯、胶头滴管