常见化学发光免疫分析技术比较
3种化学发光检测系统测定血清糖链抗原125的比较
２２ 病 原 体 的检 出 情 况 ．
２８ ３例 标 本 中 ， 出 念 珠 菌 ４ ９例 ６ 检 ２
・
临床 研 究 ・
３种 化 学发 光 检 测 系统 测定 血 清 糖 链 抗 原 １ 比较 ２ ５的
颜 威 张巧娣 谢 而付。 １ 江 苏省徐 州睢 宁县 官山镇黄 圩卫 生院 ２ １ ｏ ； ， ， （． ２ ２ ０
２ 南京 医科 大学第一 附属 医院 ．
【 要】 目的 摘
理 ［］ 现 代 妇 产科 进展 ，０ ６ １ （） １ １ ． Ｊ． ２ ０ ，５ １ ：２ ７ ［ ］ 房 克 爽 ， 玲 ． 道 清 洁 度 与 生 殖 道 感 染 的 检 测 分 析 ［］ ５ 许 阴 Ｊ． 检 验 医学 与 临 床 ，０ ９ ６２ ）１ ４ ７ ６ ２ ０ ，（ ０ ：７５１４ ． ［］ 张 蕊 ， ６ 隋静 ， 龙 强 ． 道 炎 患 者 细 菌 性 阴 道 病 的快 速 检 徐 阴
２ ０２ ） １ ０ ９
探 讨 血 清糖 链 抗 原 １ ５Ｃ ２ ） ２ （ Ａ１ ５ 临床 测 定 结 果在 ３种 化 学发 光 检 测 系统 间 的 可 比 性 ， 确 定 其 并
相 关 性 。 方 法 选取 １ ０例 患者 血 清 ， 别 使 用 化 学发 光 酶 免 疫 分 析 法 （ Ｌ Ｉ 、 ０ 分 Ｃ Ｅ Ａ） 电化 学 发 光 免 疫检 测 法 （ Ｃ Ａ） Ｅ Ｉ Ｉ 和 直接 发 光 免 疫 分析 法 （ Ｌ Ａ） 行 Ｃ ２ 检 测 ， 各 组数 据进 行 相 关性 分 析 与 中位 数 比较 。结 果 ３组 结 果 中任 Ｃ Ｉ 进 Ａ１ ５ 对
化学发光
化学发光
化学发光（chemiluminescence）是指伴随化学反 应过程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂) 在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能， 使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃 迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发
㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，
在与反应体系中的待测标本和固相载体发生
免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶
标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，
碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。
碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图
电化学发光免疫分析 电化学发光免疫分析
射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。
一些化学反应能释放足够 的能量把参加反应的物质激 发到能发射光的电子激发态， 若被激发的是一个反应产物 分子，则这种反应过程叫直 接化学发光。反应过程可简单地描述如下： A十B C* C* C ＋ h· γ 其中γ为光子，C*表示C处于单线激发态。
若激发能传递到另一个未参加化学反应 的分子D上，使D分子激发到电子激发态， D分子从激发态回到基态时发光，这种过 程叫间接化学发光。反应过程可表示如下： A十 B C* C *十 D C 十 D* D* D十 h· γ
思考题
1．什么是化学发光免疫分析？ 2．什么叫化学发光剂？ 3．酶促反应的发光剂有哪些？ 4．什么是化学发光酶免疫分析？ 5. 化学发光免疫分析和放免、酶免相比具 有哪些优势？
小 结
• 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由 基态跃迁到激发态，然后再返回到基态，并释 放光子的过程。 • 化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的化 学能使分子激发而发光。 • 化学发光免疫分析是将化学发光与免疫反应相 结合，用于检测微量抗原或抗体的标记免疫分 析技术，分为直接化学发光免疫分析，化学发 光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。
化学发光免疫分析技术
化学发光免疫分析技术
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化学发光免疫分析技术
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是当前世界公认先进标识免疫测定技术，化学发光免
疫分析技术含有高度准确性和特异性，成为检验方法中最 为主要技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病诊疗主 要伎俩已被广泛用于机体免疫功效、传染性疾病、内分泌 功效、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功效等方面体外诊疗 分析技术
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• 分析方法简便快速
• 结果稳定、误差小
• 样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免去了各种可能原因（光源稳定性、光 散射、光波选择器等）给分析带来影响，使分析结果灵敏稳定可靠。
• 安全性好及使用期长
• 免去了使用放射性物质。到当前为止，还未发觉其危害性；试剂稳定，保留期可达一 年。
T3降低： ⑴仅于较重甲状腺功效减退病人，T3和T4均下降，轻型甲减T3 不一定下降； ⑵重症全身性疾病状态或慢性病变可造成T3下降，多见 于慢性肾功效不全、慢性心功效不全、糖尿病、心梗等疾病患者。
化学发光免疫分析技术
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游离甲状腺素（FT4）游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）
• FT3和FT4分别为T3和T4在血清中未与蛋白结合部分，其不 受血清中TBG影响，直接反应甲状腺功效状态，其敏感性 和特异性均高于T3和T4
化学发光免疫分析技术
第15页
㈠ 辣根过氧化物酶标识化学发光免疫分析
该分析系统采取辣根过氧化物酶（HRP）标 识抗体(或抗原)，在与反应体系中待测标本 和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被 抗体-待测抗原-酶（HRP）标识抗体复合物， 这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发光增 强剂使产生化学发光。
四种HIV抗体检测方法的对比分析
四种HIV抗体检测方法的对比分析高平【摘要】目的:采用化学发光法(CLIA)、乳胶层析法、酶联免疫法(ELISA)和免疫印迹法(WB)进行HIV抗体检测,探讨不同方法学的敏感性和特异性.方法:采用化学发光法对2016年12月—2017年10月门诊和住院患者19090例血清标本进行检测,筛查阳性标本根据《全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)》要求,再用ELISA法和乳胶层析法进行复检,如均有反应或一个有反应一个无反应,则送疾病预防控制中心(CDC)进行抗体WB试验.结果:化学发光法检测出的150例阳性标本中,乳胶层析法检出阳性96例,阴性54例;ELISA检出阳性99例,阴性51例;WB试验检出阳性105例,阴性45例;前三种方法与WB试验符合率分别为70％、91％和94％.结论:初筛方法均具有假阳性和假阴性,HIV抗体先筛查,后WB试验有利于提高HIV抗体检测结果的准确性.化学发光法检测人血清HIV具有较高的灵敏度,自动化程度高,能够及时为临床送检标本进行HIV筛选;乳胶层析法符合率较高,操作简单,检测时间快,可用于急诊等快速检测;ELISA法灵敏度和特异性均较高,可作为HIV批量筛查.【期刊名称】《临床医药实践》【年(卷),期】2019(028)005【总页数】4页(P369-371,375)【关键词】HIV抗体;化学发光法;乳胶层析法;酶联免疫法;免疫印迹法【作者】高平【作者单位】内江市第一人民医院,四川内江 641000【正文语种】中文【中图分类】R446艾滋病(AIDS)是由于感染人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的人类免疫功能受损的疾病，可通过性接触、血液及血制品和母婴垂直传播[1]。
近年来，在国际范围内传播和发病率呈上升趋势，在我国感染人数也在逐年增多。
由于艾滋病患者感染HIV后破坏人体内CD4+T淋巴细胞，使人体免疫力降低甚至丧失，最终患者机体在缺乏免疫保护下走向死亡。
因此，艾滋病的防治正成为全世界各个国家和民族所面临的严峻卫生问题和社会难题。
比较几种免疫检测的异同
免疫学课后作业比较几种免疫标记技术的异同。
答：根据标记物种类的不同，免疫标记技术可以分为放射免疫分析、酶标记免疫分析、荧光标记免疫分析、化学发光标记免疫分析、胶体金标记免疫分析技术，它们之间具有相同点，也有不同之处，现将其归纳如下。
一、相同点主要包括以下几个方面：1、均具有高特异性。
五种免疫标记技术的免疫技术都是采用抗原抗体反应，而抗原与抗体的结合是一一对应、特异性结合的，故它们都具有非常高的特异性。
2、均具有高灵敏性。
由于五种免疫标记技术的标记技术均采用示踪物标记，例如酶、放色性核素、荧光素、胶体金以及致密物质等，当与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物本身，只需测定复合物中的标记物，通过化学或物理的手段使不见的反应放大，转化为可见的、可测知的光、色、电、脉冲等信号，并可借助仪器精密测定，从而间接测出微量的抗原或抗体。
3、检测对象相同。
除了放射免疫技术只能检测抗原外，其他四种免疫标记技术均可检测抗原或者抗体，即通过已知抗原(或抗体)特异性结合待测抗体（或抗原），从而定性或定量地测出抗体或抗原。
4、免疫标记的程序基本相同。
其包括纯化抗原或抗体、确定标记物质（即决定了最终的检测方式）、进行标记、对标记产物分离纯化和分析鉴定等一系列程序。
二、不同点主要包括以下几个方面：1、检测原理不一样。
首先，酶免疫技术是以酶标记的抗体（或抗原）作为主要试剂，将抗原-抗体反应的特异性和酶催化底物反应高效性和专一性结合起来的一种免疫方法，其对作为标记用的酶具有特定的要求，如活性高、纯度高等；放射免疫标记技术是以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法；免疫荧光技术是以荧光素作为标记物与已知的抗体或抗原结合，然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂，用于检测和坚定未知的抗原，其对用于标记的荧光素也有特定的要求，如荧光效率高，与蛋白质结合稳定，易于保存等；发光免疫分析技术是将发光分析与免疫反应相结合而建立的一种新型超微量分析技术，它是使用发光剂标记抗体（或抗原），通过发光检测抗原（或抗体）反应的免疫分析方法；免疫胶体金标记技术则是以胶体金作为示踪标记物，而胶体金在碱性环境中带负电荷，与抗体蛋白质分子的正电荷基团因静电而形成牢固结合应用于抗原抗体反应的一种新型免疫检测方法。
化学发光免疫分析与其他方法对比
• 免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特 异性反应进行检测的一种手段，由于其 可以利用同位素、酶、化学发光物质等 对检测信号进行放大和显示，因此常被 用于检测蛋白质、激素等微量物质。
免疫分析经历了放射免疫检验、荧光免疫检验、 酶标免疫检验等不同时期，化学发光免疫检验是 免疫分析发展的一个新阶段，它环保、快速、准 确的特点已得到人们的普遍认识。
免疫测定(immunoassay)是利用抗原体反应来测定标本
中微量物质的方法。
化学发光免疫检测原理
1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫 活性。
2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶 标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
3.洗涤后加入发光底物，酶促使发光底物发光，通过专用 的仪器检测光子的数量，从而反算出未知抗原或抗体的浓 度。
化学发光与放免的对比表：
测量精度 人体伤害 有效期 干扰因素 测试项目
放免
较高
放射性 较长 较多 较多
化学发光
高
无 长 极少 多
化学发光与时间分辨的对比：
时间分辨免疫检测原理和化学发光基本一样，只
是标记物改为稀土元素，不用发光底物但需要外在的稳 定光源照射，光的波长产生stoke位移，并有一个时间滞 后以便于检测波长改变后的光子数量。 1、化学发光成本低于时间分辨荧光免疫分析 。 2、化学发光比时间分辨荧光免疫试剂盒更稳定 3、化学发光免疫分析试剂盒对对测试环境条件要求低 。 4、化学发光不需要外光源，仪器可靠性更高
新技术，很成熟
新技术，不成熟
干扰极小
容易受内外源稀土离子的干扰
项目齐全(见试剂报价 缺少部分项目。如：贫血（叶
单)
微阵列化学发光免疫分析法与蛋白蕊
微阵列化学发光免疫分析法与蛋白蕊微阵列化学发光免疫分析法（microarray chemiluminescent immunoassay）是一种高通量的生物分析技术，可用于检测并定量多种蛋白质，例如抗体、细胞因子和肿瘤标志物等。
与传统的免疫分析方法相比，微阵列化学发光免疫分析法具有高灵敏度、高特异性、快速、高通量和自动化等优势，因此在生物医学研究和临床诊断中得到了广泛应用。
在微阵列化学发光免疫分析法中，首先将要检测的蛋白质样品固定在载玻片、芯片或微孔板等载体上。
然后，使用特异性的抗体与被检测蛋白质结合，并加入适当的标记物质，如酶或荧光染料，以发出化学发光信号。
最后，通过荧光或酶促反应的测量，可以定量检测样品中蛋白质的含量。
与传统的免疫分析方法相比，微阵列化学发光免疫分析法有以下优势：1.高通量：微阵列技术可以同时检测上千种蛋白质，使得高通量分析成为可能。
这样，可以快速且有效地筛选大量样本，提高研究效率。
2.高灵敏度：由于信号的放大和积累，微阵列化学发光免疫分析法比传统的免疫方法更为灵敏，可以检测到较低浓度的蛋白质。
3.高特异性：由于使用特异性的抗体与被检测蛋白质结合，微阵列化学发光免疫分析法具有高特异性，可以有效地避免其他蛋白质的干扰。
4.快速：微阵列化学发光免疫分析法只需几个小时即可完成，比传统的免疫分析方法更为快速，大大缩短了实验时间。
5.自动化：由于自动化的处理和读取，微阵列化学发光免疫分析法具有更高的可重复性和准确性，可以大大减少操作误差。
微阵列化学发光免疫分析法在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用。
例如，在肿瘤标志物筛选中，可以使用微阵列化学发光免疫分析法同时检测多种肿瘤标志物，通过比较其相对含量，可以辅助早期肿瘤的诊断和预后评估。
此外，该技术还可以用于药物研发、新型分子的鉴定和生物标记物的发现等领域。
总之，微阵列化学发光免疫分析法是一种高通量、高灵敏度、高特异性、快速和自动化的生物分析技术，在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用前景。
化学发光免疫测定、酶联免疫、时间分辨免疫荧光三种方法检测乙肝
时间分辨免疫荧光与化学发光法、酶联免疫法测定乙肝标志物的比较摘要目的: 比较化学发光免疫测定（CL）、酶联免疫（EIA）与时间分辨免疫荧光（TRFIA）三种方法检测乙肝病毒免疫标志物的优缺点。
方法: 用上述三种方法的检测试剂及仪器对189例临床血清标本分别进行检测，然后进行结果分析。
结果: 三者对乙肝表面抗原的检测灵敏度均达到了0.1ng/ml。
对HBcAb的测定，以CL的灵敏度最高，ELISA最低。
对表面抗体、E抗原及E抗体的检测，相互符合率均在95%以上，但对核心抗体的检测符合率，TRFIA与CL为83.23%，TRFIA与EIA为85.19%。
结论: 三种方法的检测性能相差不大，但操作性各有特点，应按各实验室具体情况加以选择。
关键词：化学发光法，酶联免疫试验，时间分辨荧光免疫测定本文作者:肖征周薇薇白立彦赵莉萍parison of chemiluminescence, ELISA and time-resolved fluoroimmunoassay in detecting Hepatitis B markers肖征，副主任医师，副教授周薇薇，主管技师白立彦，主管技师赵莉萍，主管技师解放军总医院微生物科，100853Zheng Xiao, Weiwei Zhou, Liyan Bai, Liping ZhaoGeneral Hospital of PLA, Beijing, 100853 PRCAbstractSubject:To pare three deferent assays to see their abilities in detecting hepatitis B markers.Methods：By using Chemiluminescence (CL), ELISA and Time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA), 189 serum samples were tested for hepatitis B markers, then the results were analyzed.Results:The three assays all can detect as low as 0.1ng/ml of HBsAg. But in HBcAb, The CL showed the highest sensitivity, ELISA showed the lowest sensitivity. The coincidences of the three methods in detecting HBsAb, HBeAg, and HBeAb are normally above 95%, but for HBcAb, the coincidence was 83.23% between TRIF and CL, and 85.19% between TRIFA and EIA.Conclusion:There were not much difference among these three methods regarding their abilities in detecting hepatitis B markers, but the maneuver flexibilities of each method differed a lot. One should consider his own lab's situation before making choice.Key words:chemiluminescence, ELISA, time-resolved fluoroimmunoassay自二十世纪七十年代以来，许多高灵敏度的测定方法应用于临床免疫学检测。
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常见化学发光免疫分析技术比较1、化学发光免疫分析化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)，英音：[,kemi,lju:mi'nesəns] [,imju:nəuə'sei]是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。
是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。
CLIA是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。
是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。
1.1、化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。
化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hv) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。
免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。
1.2、化学发光免疫分析类型化学发光免疫分析法以标记方法的不同而分为两种:(1)化学发光标记免疫分析法;(2)酶标记、以化学发光底物作信号试剂的化学发光酶免疫分析法1.2.1化学发光标记免疫分析化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) , 是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。
常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridiniumester (AE) , 是有效的发光标记物，其通过起动发光试剂(NaOH-H2O2) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成, 为快速的闪烁发光。
吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法, 大分子抗原则采用夹心法, 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。
1.2.2化学发光酶免疫分析从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂, 操作步骤与酶免分析完全相同: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物, 在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。
目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) , 它们有各自的发光底物。
12.2.1HRP 标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺(3-氨基邻苯二甲酰肼,luminol) , 或其衍生物如异鲁米诺(4-氨基邻苯二甲酰肼) , 是一类重要的发光试剂。
其结构如图4 所示。
鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行, 在过氧化物酶及活性氧[过氧化阴离子(O2-) , 单线态氧(1O2) , 羟自由基(OH·) , 过氧化氢(H2O2) ]存在下,生成激发态中间体, 当其回到基态时发光, 其波长为425nm。
早期用鲁米诺直接标记抗原(或抗体) , 但标记后发光强度降低而使灵敏度受到影响。
近来用过氧化物酶标记抗体, 进行免疫反应后利用鲁米诺作为发光底物, 在过氧化物酶和起动发光试剂(N aOH-H2O2) 作用下, 鲁米诺发光, 发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。
Kodak AmerliteTM 半自动分析系统就是利用这一体系专门设计的。
1.2.2.2增强发光酶免疫分析(enhanced luminescence enzyme immunoassay, ELEIA )在发光系统中加入增强发光剂, 如对2碘苯酚等, 以增强发光信号, 并在较长时间内保持稳定, 便于重复测量, 从而提高分析灵敏度和准确性。
在全自动分析仪上, 还可通过计算机严密控制, 进行自动操作, 如加试剂, 混合, 温育, 洗涤, 加发光试剂, 发光计数, 数据处理, 绘制标准曲线, 直至完成病人血清样品的分析并打印出结果。
Am erliteTM 发光增强酶免分析系统用荧光素、噻唑等增强剂, 其发光时间可持续长达20min, 试剂盒有甲状腺功能检测的促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素, 与性激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮, 以及其他方面的如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等。
1.2.2.3ALP标记的CLEIA所用发光底物为环1, 2-二氧乙烷衍生物,,用于化学发光酶免分析底物而设计的分子结构中包含起稳定作用的金刚烷基, 其分子中发光基团为芳香基团和酶作用的基团, 在酶及起动发光试剂作用下引起化学发光。
最常使用的底物AMPPD 3-[2-spiroadamatane]-4-methoxy -4-[3-phosphoryloxy]-phenyl-1,2-dioxetane) Dioxetane中文名为: 3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷。
在碱性磷酸酶(ALP) 作用下, 磷酸酯基发生水解而脱去一个磷酸基, 得到一个中等稳定的中间体AMPD (半寿期为2-30min) , 此中间体经分子内电子转移裂解为一分子的金刚烷酮和一分子处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子, 当其回到基态时产生470nm 的光, 可持续几十分钟(如图5)。
AMPPD 为磷酸酯酶的直接化学发光底物, 可用来检测碱性磷酸酯酶或酶和抗体、核酸探针及其它配基的结合物。
可检测到碱性磷酸酯酶的浓度为10-15mol/L 。
美国DPC公司的Immulite全自动酶放大发光免疫分析仪, 以碱性磷酸酶为标记物, 以金刚烷作发光底物, 测定灵敏度相当于10- 21mol/mL的酶, 采用聚苯乙烯珠作载体, 其检测水平已能达到10- 12g/mL。
AMPPD是一种生物化学领域中最新的超灵敏的碱性磷酸酶底物，其特点：反应速度快，在很短时间内提供正确可靠的结果。
在它的分子结构中有两个重要部分，一个是联接苯环和金刚烷的二氧四节环，它可以断裂并发射光子；另一个是磷酸根基团，它维持着整个分子结构的稳定。
在通常情况下，这种化合物很稳定。
但是当有碱性磷酸酶存在时，DioxetanePhosphate作为酶的底物会在酶的催化一脱去磷酸根基团，形成一个不稳定的中间体。
这个中间体随即自行分解（二氧四节环断裂），同时发射光子。
该试剂采用微粒子化学发光技术，采用最新磁性微粒，用以包被抗体。
用碱性磷酸酶（ALP）标记抗原（抗体）。
经过普通抗原抗体反应，碱性磷酸酶结合在微粒子上，碱性磷酸酶的结合量同病人血清中的待测物质成比例。
经过洗涤（反应管两边有磁场，磁性微粒包被的抗原抗体结合物被吸附在管子两边，其余游离部分被抽吸掉），最后加入发光底物DioxetanePhosphate，5分钟后，仪器通过光电倍增管检测反应的发光强度。
AMPPD是碱性磷酸酶的化学发光底物，在适宜的缓冲液中，随着酶的催化水解作用，AMPPD分解成AMP-D，后者发出强度很高的光信号，其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。
当碱磷酶偶合到杂交的探针时，便可以通过此系统检测到杂交分子的存在量。
2微粒体发光免疫分析微粒体发光免疫分析(microparticle luminescence enzyme immunoassay,MLEIA ),该免疫分析技术有两种方法：一种是小分子抗原物质的测定采用竞争法。
另一种是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。
该仪器所用固相磁粉颗粒极微小，其直径仅 1.0μm，这样大大增加了包被表面积，增加抗原或抗体的吸附量，使反应速度加快，也使清洗和分离更简便，从而减少污染，降低交叉污染概率。
反应中使用碱性磷酸酶（ALP）标记抗原或抗体，作用于其底物二氧乙烷磷酸酯，由其在激发态与基态的动力学变化中发生发光反应。
2.1、竞争反应其原理是：用过量包被磁颗粒的抗体，与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育，其免疫反应的结合形式有两种，一是标记抗原与抗体结合成复合物；二是测定抗原与抗体的结合形式。
如受检标本中含有待测抗原，则与标记抗原以同样的机会与磁颗粒包被的抗体结合，竞争性地占去了吖啶酯标记抗原与磁颗粒包被的抗体结合的机会，使吖啶酯标记抗原与磁颗粒包被的抗体的结合量减少。
由于磁颗粒包被的抗体是过量的，足以与待测抗原结合。
2.2、双抗体夹心法：其原理是：标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式，即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。
具体讲是以顺磁性微珠作为载体包被抗体，利用磁性微珠能被磁场吸引，在磁场的作用下发生力学移动的特性，迅速捕捉到被测抗原，当加入标本后，标本中的抗原与磁性抗体形成复合物，在磁力的作用下，协助该复合物快速地与其他非特异性物质分离，使抗原-抗体结合反应的时间缩短，测定时间减少，降低了交叉污染的几率，此时再加入碱性磷酸酶标记的第二抗体，形成磁珠包被抗体-抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤去掉未结合的抗体后，加入ALP的发光底物环1，2-二氧乙烷衍生物AMPPD 。
AMPPD被复合物上ALP催化，迅速地去磷酸基团，生成不稳定的中间体AMPD。
AMPD的快速分解，从高能激发态回到低能量的稳定态时，持续稳定地发射出光子（hv），发射光所释放的光子能量被光量子阅读系统记录，通过计算机处理系统将光能量强度在标准曲线上转换为待测抗原的浓度，并报告结果。
其检测水平可达pg/ml水平，重复性好。
3、电化学发光免疫分析(Electrochemiluminescence immunoassay, ECLIA )ECLIA是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术，是电化学发光（ECL）和免疫测定相结合的产物。
它的标记物的发光原理与一般的化学发光（CLA）不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。
ECL与CLA的差异在于ECLA 是电启动发光反应，而CLA是通过化合物混合启动发光反应。
ECLA 不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于DNA／RNA探针检测。
其检测原理（以TSH检测为例）：第一步：结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)3]2+ +N羟基琥珀酰胺酯（NHS）的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟。