安徽医科大学研究生药理学实验方法重点
药理学实验详解
药理学实验详悉一、动物实验动物实验是根据研究目的，恰当地选用标准的符合实验要求的实验动物，在设计的条件下，进行各种科学实验、观察、记录动物的反应过程或反应结果，以探讨或检验生命科学中未知因素的专门活动。
动物实验是人类生存和发展的必要手段。
动物实验方法是进行动物实验时的各种实验手段、技术、方法和标准化操作程序。
也探讨实验动物科学中的减少、替代、优化问题。
实验动物的选择：首先应从生物医学研究的目的和实验要求来选择实验动物，进而考虑实验动物是否容易获得、是否经济、是否容易饲养。
一切实验动物应具有个体间的均一性，遗传的稳定性和容易获得三个基本要求。
标准化原则：根据对实验质量的要求选择标准化的实验动物。
动物实验中选择和使用与研究内容相匹配的标准化的实验动物标准化动物：是指遗传背景明确或来源清楚的，对其携带的微生物和寄生虫实行控制，模型性状显著且稳定的动物。
在精确试验中，鉴于动物体内外的微生物和寄生虫会干扰试验的结果，最好选择无菌动物或悉生动物，至少也应SPF级动物。
规格化原则：选择与实验要求一致的动物规格。
实验动物年龄与体重一般呈正相关性，可按体重推算年龄。
一般来说，实验动物年龄、体重应尽可能一致，相差不得超过10%。
不同性别的动物对同一药物的敏感程度是有差异的，如实验无特殊要求应选择雌雄各半做实验，以避免因性别差异所造成的结果误差。
特殊的生理状态下，如发情、妊娠及哺乳期，机体对实验的反应性发生改变。
★实验动物的选择应用应注意有关国际规范：GLP、SOP、“3R”（Replacement替代Reduction减少Refinement优化）(一)实验动物：系指遗传背景明确、来源清楚、对其携带的微生物、寄生虫实行控制，经科学方法人工培育用于科学实验的动物。
(二)实验动物的分类方法1、按遗传学控制分类*近交系：杂种动物经过相当于20代全同胞兄弟单纯连续繁殖，各条染色体上的基因趋于纯合，品系内个体差异趋于零。
近交动物的特征：a、纯合性和一致性——纯合性指的所有动物的基因位点都应是纯合的。
医科大学大三药理学实验内容
医科大学大三药理学实验内容大三第一学期药理学实验第一次地塞米松抗炎作用【目的】采用“大鼠足跖浮肿法”观察地塞米松抗炎作用【动物】大白鼠【药品】地塞米松注射液、右旋糖苷【器材】足跖容积测量仪、烧杯、注射器、蒸馏水、线手套【方法】1、选用健康大鼠2只，分别标记为甲、乙鼠。
即生理盐水对照组与地塞米松组。
2、甲鼠ip 生理盐水 1ml/㎏体重，乙鼠注射地塞米松1mg/㎏。
3、给药30min 后分别注射致炎剂：将大鼠放入固定筒内，后肢拉直。
于每鼠后足外踝处用记号笔化一道横线标志。
用4或5号针头，0.25 ml 注射器自足跖中部皮下向上注入一部分致炎剂，然后掉转针头向下注完药液（0.1ml/只）。
4、采用容积测量法于给予致炎剂前及后10、30、60、90min 测量鼠足跖肿胀程度。
将鼠后肢拉直放入测量仪玻璃筒内，观察足趾容积数值（ml ）。
5、观察指标为各测量时间点，甲、乙两鼠足肿胀程度，以测量仪测试的容积数值表示。
足肿抑制率=（对照足跖肿胀容积—药物足跖肿胀容积）/ 对照足跖肿胀容积*100%【注意】1.每次测量足的部位要固定，要求所做记号线必须与玻璃筒内液面线保持一致重叠，然后记录，避免误差。
2.防止硬物撞击玻璃测量筒，爱护仪器。
氯丙嗪的镇静和降温作用【目的】观察氯丙嗪的镇静作用和降温作用，掌握降温作用特点。
【动物】小白鼠4只【药品】0.08%盐酸氯丙嗪溶液、生理盐水、液体石蜡（或凡士林）【器材】电子秤、电子体温表、大烧杯、1ml 注射器、冰箱【方法】取小鼠4只，称重标记，观察正常活动。
左手固定小白鼠，右手将涂有液体石蜡的肛表插入小白鼠肛门内约1.5—2厘米，3分钟后取出读数。
每隔2分钟一次共2次，平均数为正常体温。
然后在甲、乙两鼠腹腔注射0.08%盐酸氯丙嗪溶液0.1ml/10g ，丙、丁两鼠腹腔注射生理盐水0.1ml/10g ，用药后，将乙、丙两鼠放入冰箱。
按表中时间各测一次体温，并观察活动情况。
【结果】鼠号药物条件活动情况体温（摄氏度）用药前用药后用药前用药后（min ） 15 3045甲氯丙嗪室温乙氯丙嗪冰箱丙生理盐水冰箱丁生理盐水室温第二次药物对家兔瞳孔的影响【目的】观察拟胆碱药、抗胆碱药对瞳孔的影响。
安徽医科大学研究生基础与临床药理实验方法
抑制 COX-2 可缓解 RA。 3、IL-1 受体拮抗剂作用机制：在 RA 炎症中，IL-1 可刺激 B 细胞和 T 细胞分泌 细胞因子和抗体物质，也可刺激软骨细胞和滑膜细胞分泌的细胞毒素。 4、甾体抗炎免疫药物：阻止炎症细胞向炎症部位集中，并抑制 T、B 淋巴细胞 的增值与分化，减少炎症因子合成。 5、免疫调节剂：调节机体的免疫力。 12.耐受性试验首个剂量与最大剂量的选择： 首个剂量：1，有相似的药物用其治疗量的 1/10 开始；2 没有相似药物的用 敏感动物的 LD50 的 1/600 或最小有效量的 1/600.；3 亦可按体表面积计算大动 物最大耐受量 1/5—1/3 作为人用初始剂量。 最大剂量：1 同类药物单 次治疗量，2 动物长期毒性实验时引起功能损害剂量的 1/10，3dollery 法计算动 物最大耐受量的 1/5，4 若国外有科学的临床研究文献，可参考其临床治疗最大 用量。 13.临床药理学的研究内容 1. 药物在健康志愿者上的 PK,PD 和遗传药理学研究。 2. 临床药理评价和 1~4 期临床实验。 3. 治疗药物监测 4. 药物警戒。 5. 药物利用研究。 6. 药物流行病学研究。 7. 药物经济学研究。 14.合成路线的优选 1．要求合成步骤短，每步产率高。 2．要求使用的设备技术条件和工艺流程简单，尽可能采用一般的技术和定型的 常规设备。 3．原材料供应应该充足，立足国内和廉价的原材料尽量采用化工原料和工业级 溶剂，这样可以价格便宜又可以保证大量供应。 4．生产工艺的全程是否符合环保要求。
基因多态性是指在一个生物群体中， 同时和经常存在两种或多种不连续的变 异型或基因型或等位基因，亦称遗传多态性。 （两者的关系没找到，还请高手补 充为感） 8.根据基因调整 6-MP 的用药 1.1 6-MP 为无活性的前体药，需在体内经代谢生成巯基鸟嘌呤核苷酸后 才能产生细胞毒性。另外还可以被 TPMT 催化发生甲基化反应或经黄嘌呤氧化 酶催化成硫脲酸。这两种途径来减少 TGNS，而主要是 TPMT 催化的甲基反应。 1.2 TPMT 基因具有遗传多态性，并与酶活性密切相关。基因型可分为野生型 基因纯合子、 杂合子和突变型纯合子。 野生型有高酶活性， 杂合子有中等酶活性， 突变型无酶活性。野生型 TGNS 浓度低，杂合子浓度稍高，突变型浓度最高。 即在使用时，TPMT 的低或无活性将导致形成 TGNS 毒积。 1.3 因此在临床用药时，测 TPMT 基因型来调整用药剂量。野生型高酶活性， 杂合型中等酶活性，突变型无酶活性。野生型用常规剂量的 100%，杂合型用常 规剂量的 60-70%，突变型用常规剂量的 10-20%。 9.肿瘤生物学特征,肿瘤药物新靶点 肿瘤生物学特征 1）持续增殖信号 2)逃避生长抑制 3)抵抗细胞死亡 4)无限复制潜能 5)诱导血 管生成 6)激活侵袭转移 7)基因组不稳定和突变 8)促进肿瘤的炎症 9)细胞能量异常 10)避 免免疫摧毁 肿瘤药物新靶点 1）以细胞周期分子为靶点 2)以细胞信号转导分子为靶点 3)端粒酶抑制剂 4) 肿瘤新生血管生成抑制剂 5)肿瘤耐药逆转剂 10.褪黑素的生理和药理作用 褪黑素主要由哺乳动物和人类的松果体产生的一种胺类激素 （1）促进睡眠：调节昼夜规律促进中枢神经递质 GABA 的合成和释放 （2）抗氧化消除体内自由基：直接消除自由基提高抗氧化物酶活性，既而有抗 氧化与线粒体保护作用 （3）褪黑素的神经--内分泌--免疫调节作用：属于免疫系统的高位调节点，年龄 增长，褪黑素下降，免疫功能下降 （4）抗炎作用：褪黑素对局部和全身性炎症动物模型具有强大的抗炎作用 （5）抗肿瘤作用：抗雌激素作用，抗细胞增殖，改变细胞周期，可作为抗肿瘤 的辅助治疗 11.简述类风湿性关节炎治疗药物的分子作用机制 答：类风湿性关节炎（RA）是一种常见的全身性免疫性疾病，以关节滑膜 炎为主要的病理特征，由白细胞浸润和滑膜细胞的激活，导致软骨和骨的破坏。 1、NSAIDS 作用机制：主要是通过抑制环氧酶（COX）并遏制可引起发炎、疼 痛反应的前列腺素（PG）类和一些相关炎症介质的生成，可用于 RA 引起的疼 痛和炎症，但 NSAIDS 的某些不良反应如消化道及肾毒性限制了其应用。 2、COX-2 抑制药作用机制：COX-2 的表达，增加 PGS 合成，参与机体炎症，
药理学实验指导
药理学实验指导（供自学助考班用）实验一药理学实验基础知识与常用动物捉拿、给药【目的】1、学习药理学实验基础知识；2、掌握药理学实验常用动物捉拿、给药方法。
【器材】1ml、5ml、20ml注射器，大、小鼠灌胃针头，4号、6号注射针头，250ml烧杯、鼠笼(或铁丝笼)，天平秤、砝码。
【药品】0.9%生理盐水。
【动物】小白鼠、大鼠、家兔。
【内容】一、实验动物的捉拿方法1、蛙和蟾蜍左手握持蛙或蟾蜍，食指和中指夹住左前肢，拇指压住右前肢；右手将双下肢拉直，左手无名指及小指将其压住而固定。
此法用于淋巴囊注射。
毁脑和毁脊髓则用左手食指和中指夹持蛙或蟾蜍的头部，拇指和无名指小指握持双下肢，右手持刺针进行操作。
2、小白鼠可采取双手法和单手法两种形式。
双手法：右手提起鼠尾，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后方轻拉，小白鼠则将前肢固定于粗糙面上。
此时迅速用左手拇指和食指捏住小白鼠颈背部皮肤，并以小指与手掌尺侧夹持其尾根部，固定于手中。
单手法：小白鼠置于笼盖上，先用左手食指与拇指抓住鼠尾，手掌尺侧及小指夹住尾根部，然后用左手拇指与食指捏住颈部皮肤。
3、大白鼠大白鼠容易激怒咬人，捉持时左手应戴防护手套或用厚布盖住大鼠，先用右手抓住鼠尾，再用左手拇指和食指握住头部，其余手指与手掌握住背部和腹部。
不要用力过大，切勿捏其颈部，以免窒息致死。
4、家兔用左手抓住颈背部皮肤(抓的面积越大，其吃重点越分散)。
将兔提起，以左手托住其臀部，使兔呈坐位。
二、实验动物的给药途径与方法1、小白鼠给药途径与方法灌胃(ig)：左手固定小鼠，右手持灌胃器，灌胃针头自口角进入口腔，紧贴上腭插入食道。
如遇阻力，将灌胃针头抽回重插，以防损伤。
常用灌胃量为0.1～0.2ml/10g。
皮下注射(ih)：可用腹部、背部、腹股沟的皮下，此处皮肤比较松弛，也可由助手协助。
注药量一般为0.1～0.2ml/10g。
肌肉注射(im)：一人抓住小鼠头部皮肤和尾巴，另一人持连4号针头的注射器，将针头刺入后腿外侧肌肉。
药理学常见实验操作方法
药理学常见实验操作方法药理学是研究药物在生物体内的活性、代谢、毒性和药物与生物体之间的相互作用等问题的学科。
药理学实验是药理学研究的重要手段，通过实验可以研究药物的药效、药代动力学、药物的药理作用和机制等方面的问题。
下面将介绍一些药理学常见的实验操作方法。
1. 细胞培养实验：细胞培养实验是研究药物对细胞的作用的一种常见的药理学实验方法。
首先需要选择合适的细胞系进行培养，如癌细胞、原代细胞等。
接下来，将药物加入到细胞培养基中，观察药物对细胞的影响，如细胞的增殖、凋亡、分化等。
可以使用细胞形态学方法、免疫组化、蛋白质分析等技术手段来评估药物对细胞的影响。
2. 动物实验：动物实验是研究药物在整个生物体内的药效和毒性的重要手段。
常见的动物实验包括药物的急性毒性实验、慢性毒性实验、药物代谢动力学实验、药效学实验等。
首先需要选择合适的动物模型，如小鼠、大鼠、猴子等。
然后，将药物给予动物进行观察和检测，如观察动物的行为、记录动物的生理指标、取动物组织样本进行药物浓度测定等。
3. 体外药物解剖学实验：体外解剖学实验是研究药物在体内分布、转化和代谢的重要手段。
常见的体外实验包括药物的分配实验、药物代谢实验、药物排泄实验等。
该实验通过收集和分析体内样本（如血液、尿液、组织）中的药物浓度以及代谢产物的浓度来评估药物在体内的代谢和排泄情况。
使用的方法包括液相色谱质谱联用技术、高效液相色谱技术、放射性同位素标记技术等。
4. 离体器官实验：离体器官实验是研究药物在特定器官上的药理作用的一种常见实验方法。
常见的离体器官实验包括离体心脏实验、离体肠段实验、离体骨骼肌实验等。
该实验将动物的某个器官取出，放置在体外培养液中，然后加入药物进行实验。
通过记录器官的生理活动的变化来评估药物对该器官的作用。
以上是药理学常见的一些实验操作方法，这些实验方法可以帮助研究人员深入了解药物的药理学特性和作用机制。
当然，在进行这些实验时，也需要遵守实验操作规范，保护实验动物的权益，确保实验结果的准确性和可靠性。
药理学课程教学大纲安徽医科大学基础医学院
一、课程简介（一）课程代码：（二）课程名称（含英文名称）：药理学实验（）（三）课程类别：专业基础课（四）修读对象：生物技术和生物科学专业（五）总学时与学分：其中实验27学时，1.5学分。
（六）相关课程：（七）内容提要本课程涵盖了药理学部分的模拟实验及经典实验项目，以大量的实验尤其是动物实验为基础，复制疾病动物模型，研究用药后的生物体功能活动变化及其规律，以巩固药理学及相关基础理论知识，进一步强化实验操作技术，提高动手能力，培养分析问题和解决问题的能力。
二、教学目的和教学方法（一）教学目的1 •加强学生的药理学基本理论、基本知识和基本技能的训练，培养理论联系实际和独立开展科学研究的能力。
药理学实验可以帮助学生验证药理学理论知识，巩固和加强对药理学理论的掌握；促进学生对药理学一些抽象概念的理解；了解药理学研究的一些基本方法，培养学生药理学实验设计和科研能力；初步掌握药物研究的基本技能，并且通过科研模拟实验加强学生的创新思维能力的培养。
2•药理学实验主要以学生在教师指导下自己动手操作为主，少量示教实验为辅，并且配合课堂讨论和多媒体等方法，达到既验证理论，巩固和加强药理学理论知识学习的目的，又要做到培养学生科研能力和创新思维的开发。
（二）教学方法采用课堂讲授、现场指导、模拟实验、双语教学、自主设计、病例讨论和课外训练等多种教学手段相结合的教学方法。
三、实践教学学时分配四、选用教材和主要教学参考书1. 陈志武,董六一，《药理学实验指导》,中国协和医科大学出版社，2013年10月2. 孔德虎，《医学机能学实验教程》，科学出版社，2009年2月。
五、实验教学内容实验一、动物捉拿及各种药方法（录像）主要讲授内容：介绍动物捉拿及各种给药方法教学时数：3 学时重点与难点：1. 小鼠、大鼠和家兔的捉拿方法。
2. 小鼠、大鼠和家兔常见的给药方法实验二、小鼠戊巴比妥钠50 和50 的测定主要讲授内容：50 及50的概念，其测定方法和小鼠腹腔注射的方法教学时数：4 学时重点与难点：1. 小鼠腹腔注射的方法。
药理学实验基本操作方法
药理学实验基本操作方法药理学实验基本操作方法是指在药理学研究中进行药物活性、毒性、代谢及药效评价等方面的实验操作方法。
下面将详细介绍药理学实验的基本操作方法。
1. 药物制备：首先需要准备所需的药物溶液。
根据实验需要，药物可以是天然的、合成的或者已经商业化的。
药物溶液的配制方法包括溶于溶剂中、配制不同浓度的药物溶液等。
药物在实验前需要进行精确称量，确保药物剂量的准确性。
2. 动物实验模型：选择合适的动物模型是进行药理学实验的关键。
常用的动物模型包括小鼠、大鼠、猪、猴等。
通过选用适合的动物模型可以更好地模拟人体的生理和病理状态，从而评价药物的疗效和安全性。
在动物实验前，需要进行动物的饲养和培养。
3. 药物给药方式：药物给药方式的选择取决于药物的性质和实验的目的。
常用的给药方式包括经口给药、静脉注射、皮下注射、直肠给药等。
给药时需要注意用药剂量、次数和给药时间的准确控制。
4. 临床观察和测量指标：在药理学实验中，需要对动物进行临床观察和测量，以评价药物的药效和毒性。
常见的观察指标包括体温、心率、呼吸频率、血压等。
另外，还可以通过采集血液、尿液等样本，进行对药物代谢、药物浓度的测定。
5. 数据处理和统计分析：药理学实验结束后，需要对实验数据进行处理和统计分析。
数据处理通常包括数据整理、计算药物的半数抑制浓度（IC50）、最大效应等指标，绘制药效曲线等。
统计分析可以通过方差分析、t检验、相关性分析等方法进行。
6. 实验设备消毒和废弃物处理：在药理学实验过程中，需要定期对实验设备进行消毒，以防止交叉感染。
实验结束后，需要按照相关规定安全处理药物残余和废弃物，确保实验环境的安全和卫生。
总结起来，药理学实验的基本操作包括药物制备、动物实验模型选择、药物给药方式、临床观察和测量指标、数据处理和统计分析以及实验设备消毒和废弃物处理。
这些基本操作方法是进行药理学实验的基础，通过合理的操作方法可以提高实验的准确性和可靠性，为药物的研发和临床应用提供科学依据。
药理学实验指导
实验一 半数致死量的测定
半数致死量（LD50）是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。它表示能使 全部实验对象死亡半数的剂量或浓度。由于生物间存在个体差异性，因此 LD50 需用一批 相当数量的实验对象进行实验方能测得，并且每种药物对不同实验对象的 LD50 值不同。
【实验目的】 1. 掌握半数致死量测定的基本方法和寇氏法的适用条件。 2. 熟悉动物的常用分组方法。 3. 了解寇氏法公式的推导过程。 【实验条件】 寇氏法（Kärbar 氏法） 测定 LD50 的方法有很多，如目测机率单位法、直线回归法、累计法、序贯法以及 Bliss 法等。其中 Bliss 法为最经典、最准确的方法，但需要用计算机和相应软件来完成。由 于寇氏法较常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故专门介绍之。 【实验条件】 1. 剂量必须按等比级数（剂量对数按等差级数）分组。 2. 各组动物数应相等。 3. “反应”应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率（Pn）应为 0％，最大剂量组 的死亡率（Pm）应为 100％；如果 Pn < 20% 或 Pm > 80% 需用校正公式计算；如 Pn > 20% 或 Pm < 80% 则不能用此法计算。 【实验动物】 小白鼠 【实验药品】 不同浓度敌百虫、苦味酸 【实验器材】 鼠笼、动物天平、1ml 注射器、电子计算器 【实验步骤】 １．预备实验 ①摸索上下限：即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量（Dm）和一个 动物也不死亡的最大剂量(Dn)。方法是据经验或文献定出一个估计量， 观察 2～3 只动 物的死亡情况。如全死，则降低剂量；如全不死，则加大剂量再行摸索，直到找出 Pm = 100 % 和 Pn = 0% 的剂量，此两量分别为上下限。
⑷计算注意事项：①发令后开始计算；时间到，立即停止计算。 ②实验开始后，一定尽全力进行计算。③中间对计算结果不能修改，否则统计时按 错误计算。
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1.白细胞分化抗原群的检测方法P170(1)免疫组化技术：先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成的有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究。
(2)免疫荧光技术：根据抗原抗体反应的原理，现将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。
(3)流式细胞技术：使悬浮在液体中分散的经荧光标记的细胞或微利捉个通过样品池，同时由荧光探测器捕获荧光信号并转换成分别代表向前散射角、侧向散射角和不同荧光强度的电脉冲信号，经计算机处理形成相应的点图，直方图和加三维结构图像进行分析。
2.分析白细胞分化抗原检测的影响因素流式法检测的影响因素：（1）非特异性结合NSB①Fc受体结合抗体是导致影响检测结果的重要因素，任何细胞上只要存在未结合的Fc受体，都可能有NSB。
采用高浓度的纯化IgG可用于阻断Fc受体的NSB。
（2）免疫球蛋白聚集可增加NSB。
由于冰冻、复溶和冻干处理，抗体均可出现聚集。
对于新购买的抗体，可通过高速离心去除聚集。
3.简述实验动物血压测定的方法。
P140一、直接测定法1．麻醉动物直接测定法：麻醉、固定动物、手术视野剪毛、气管插管、动脉插管、血压记录；2．清醒动物直接测定法：1）简易清醒自由活动大鼠血压测定技术：导管制作、手术操作、连接测压系统、记录血压（生理记录仪记录）：2）计算机化清醒自由活动大鼠血压测定技术：①采样、记录和储存：压力信号经换能器转换为电信号，再经放大器输入计算机。
②数据处理和结果分析：3）清醒自由活动大鼠血压遥控测定技术二、间接测定法1.容积测定法：1）大鼠尾容积测定法大鼠尾根部加压超过收缩压时，血流中断，当压力降低到等于或稍低于收缩压时，血液流入尾部，此时的压力大于静脉压，血液回流受阻，结果尾容积加大，测定该容积突然增加时的瞬间压力，即为收缩压。
2）大鼠足容积测定法同上；2..脉搏测定法：1）大鼠尾动脉脉搏测定法大鼠尾根部加压超过收缩压时，脉搏消失，压力减至收缩压时，脉搏出现，继续减压之舒张压时，脉搏回复加压前水平，检测这种脉搏变化时的瞬间压力，即得血压值。
2）犬颈动脉脉搏测压法同上； 3）犬胫动脉脉搏测压法同上4）犬尾动脉脉搏测压法同上4.简述肾外包扎性高血压模型制备的基本原理和注意事项。
P144原理：肾外异物包扎，可致肾周围炎，在肾外形成一层纤维素性鞘膜，压迫肾实质，造成肾组织缺血，使肾素形成增加，进而使血液中血管紧张素含量增加，血压上升。
注意事项：（1）肾外包扎材料除自制双层乳胶薄膜和玻璃纸外，还可用绸布、乳胶、火棉胶等材料。
肾外包扎材应足够紧，但不能勒破组织。
（2）如果要制造2肾1扎型，则一侧肾包扎后无需切除另一侧肾，术后3~6月10%~20%动物形成高血压。
如果要制造2肾2扎型，则一侧肾包扎后同法包扎另一侧肾，术后3~4周70%以上动物形成高血压。
5.试述区分中枢降压与外周降压的试验方法。
P145（1）.脊髓猫实验将猫在第二颈椎水平切断脊髓，施行人工呼吸，随后切断两侧迷走神经。
如果给药后仍有降压作用，提示作用部位不在中枢，而在外周。
如果给药后原有的降压作用消失，提示作用部位在中枢。
（2）.降压有效量比较实验如果以静脉注射最小有效降压计量的1/10量作椎动脉注射或侧脑室注射，仍可引起降压效应时，则可推测该受试药物降压作用为中枢性，否则尾外周性。
（3）.交叉灌流实验：通过交叉灌流实验记录受血动物的血压及交感神经活动来分析药物的中枢性心血管作用。
受血动物的头部血供由另一供血动物提供，在供血动物注射药物后，若药物通过中枢发挥作用，则受血动物会立即出现类似供血动物的心血管效应和交感神经活动的改变。
6.发热模型的建立与评价1.基本原理：发热反应大多是各种致热因子作用于机体，产生和释放内热原，并进一步影响体温调节中枢，使调温起步点提高，体温相应升高。
因此，实验室常用有关的刺激因子激活产生内热原。
操作方法：1测量体温，系将肛表涂上凡士林，使其润滑后插入动物肛门，兔一般插入3-4cm，大鼠插入2cm，放置3-5min后取出读数。
2.发热模型的建立（1）细菌培养液和内毒素引起的发热。
①注射杀死的大肠埃希菌或乙型副伤寒沙门菌培养液②注射伤寒-副伤寒菌苗③注射腐败干草浸剂④注射大肠埃希菌菌液⑤注入伤寒沙门菌内毒素⑥应用啤酒酵母悬液（2）非感染性发热复制法1）化学刺激法：给兔背部注射松节油0.4ml/kg或2%2,4-二硝基酚乙醇溶液亦用1%角叉菜胶0.1ml，于大鼠一侧后足趾皮下注射2）注入异性蛋白给兔肌注10%蛋白栋，剂量1.0g/kg，可在2-3h内引起体温显著升高（3）温刺激法3.实验性发热反应的影响因素①动物特点的影响：不同种属、年龄和形态特征，对发热有明显影响②实验环境温度的影响：实验环境的温度能明显影响发热的反应速度和强度③实验动物活性的影响：体温实验时，必须考虑到动物的活动情况④致热物质的注入量和注射部位。
7.痛反应标准1、刺激强度和部位明确；2、有痛感觉产生的潜伏期；3、反应优先发生于伤害性刺激痛觉感受范围内，可根据刺激强度对反应分级；4、痛反应的量化值必须能反应镇痛药的量效关系。
8.疼痛模型建立方法1、化学刺激法：小鼠扭体法，钾离子皮下透入法，缓激肽动脉注射法，福尔马林实验2、热刺激法：辐射热刺激法，小鼠热板法，小鼠热水缩尾法；3、机械刺激法：大鼠尾尖部压痛法，小鼠尾根部加压法，后肢加压法（大鼠压足法）4、电刺激法：1.大鼠牙髓刺激法 2.电刺激大鼠甩尾法9.慢性疼痛模型慢性疼痛法：1.大鼠关节炎痛2.神经源性疼痛3.坐骨神经痛4.癌痛模型10．镇痛药物作用部位分析基本原理：1）微量给药，直接给药部位达有效浓度，而经血流稀释分布至其他部位时则浓度太低而无效；2）阻断或改变血流使药物不能进入某一部位或只能到达某一部位；3）切断部位之间解剖学联系；4）造成对称肢体痛阀差别，根据差别与部位的关系分析药物的作用部位。
1.外周疼痛模型：大鼠单足致炎法（中枢和外周疼痛模型），大鼠诱发肌电法，痛介质诱发隐神经传入放电法，兔耳静脉阻断法2.中枢疼痛模型：清醒小鼠鞘内注射（脊髓），大鼠蛛网膜下腔插管法（脊髓），侧脑室给药法（中枢），脊髓化鼠模型（中枢），大鼠单足致炎法（中枢和外周）。
11.肝纤维化动物模型（1）、CCL4诱发的肝纤维化动物模型：原理CCL 4−−−→−酶肝450P CCL 3. + CL .启动脂质过氧化作用损伤肝细胞操作：SD 大鼠、CCL 4、花生油（高压灭菌）分组：正常组、模型组、不同剂量的受试药物组、阳性对照药组 背部皮下注射CCL 4（2）、异种血清诱发的肝纤维化动物模型：原理：异种血清进入动物体内引起免疫应答形成抗异种血清的抗体，长期刺激产生的免疫复合物来不及清除，沉积于肝脏的血管壁内外。
操作：wistar 雄大鼠、猪血清分组：同上 每只腹腔注射，，每次注0.5ml,每周2次，16周→给药组给予相应药物→血清，肝脏指标检查（3）、胆总管结扎致肝纤维化动物模型（4）、乙醇诱导的肝纤维化动物模型（5）、二甲基硝胺诱导的肝纤维化动物模型（6）、复合因素建立的肝纤维化动物模型12.人外周血、DC 分离培养及鉴定方法培养流程：（1）、静脉新鲜抗凝血50ml 。
（2）、密度梯度离心获得单个核细胞。
（3）、接种至6孔平底培养板中，置37度，5%二氧化碳培养箱吸弃细胞悬液，获得贴壁的单核细胞。
（4） 、分离成功的单核细胞于每孔加入10%胎牛血清的1640完全培养基，重组人GM-CSF20ng/ml 和IL-4 20ng/ml ，于培养第3天半量换液同时加入全量细胞因子，于培养第5天全量换液，加入全量细胞因子，于培养第七天收获。
鉴定方法：13.要进行某药物的药效试验，观察其对血压的影响，应分别选用何种实验动物为好？ 不能选择哪种动物？为什么血压研究常用实验动物为大鼠、犬和猫，一般不宜使用兔作为血压实验，因为兔血压易波动，对药物反应与人相差较大。
MTT 、CCK-8检测细胞增殖的基本原理和操作步骤MTT 法原理：活细胞线粒体酶还原成黄色，MTT 为显蓝色的不溶于水的甲臜，死细胞此现象消失，MTT 不被还原；DMSO 溶解甲臜后，可通过酶标仪在参考波长450nm ，检测波长570nm 处测定其吸光度（OD 值）。
吸光度值与活细胞数成正比，因此可根据OD 值推测出活细胞的数目，了解药物一直或杀伤肿瘤细胞的能力。
操作步骤：称取一定量MTT ，加PBS 或无血清培养基配置，用0.22um 滤膜过滤，5mg/mlMTT 液避光保存。
接种细胞→24h→溶剂对照组/待测实验组（五个稀释浓度）→培养结束前4h→每孔加MTT 溶液20ul→37度孵育4h ，吸弃上清→加DMSO→测定570nm OD 值计算:抑制率=[（对照组OD 均值—给药组OD 均值）/对照组OD 均值]*100%cck-8法原理：类似于MTT 化合物，在电子耦合剂存在的情况下，可被线粒体脱氢酶还原成黄色的水溶性甲臜，生成甲臜数量与活细胞数成正比，活细胞增殖越快，颜色越深；细胞毒性越大，颜色越浅。
操作：接种细胞于二氧化碳环境中培养24h→溶剂对照组/待测实验组（5个稀释浓度）→没空加cck-8溶液10ul→37度培养1至4小时→450nm 处测OD 值和计算抑制率。
优点：1、加入cck-8可直接测定OD ，简单方便，同时减少误差，尤其适用于悬浮细胞的培养。
2、由于CCK-8量加入少，建议加完后轻敲培养板混匀。
3、细胞种类不同，形成Formazan量也不同，如果显色不够可以继续培养。
15.Transwell侵袭实验的基本原理、操作步骤原理：肿瘤侵袭基地膜被认为是转移发生过程中的一个重要环节，肿瘤细胞最初穿过基底膜是他们侵入淋巴系统或血床的开始，随后肿瘤细胞通过血行散播或淋巴转移进入靶器官/组织，最终形成转移灶。
Matrigel是从一种富含细胞外基质蛋白的小鼠Engelbreth-Holm-Swarm肉瘤中提取的可溶性的基底膜。
它主要包含层黏连蛋白IV型胶原、硫酸类肝素蛋白多糖等多种基底膜组分。
操作步骤：1)Matrigel胶包被小室的制备；2）胰酶消化法从培养瓶中获取细胞，用含1%FBS的培养基重悬细胞，使细胞浓度达到（1~5）×105个/ml；3）Matrigel侵袭分析；4）结晶紫染色法收集下室细胞，并统计迁移到下室的细胞数。
16请以豚鼠肺支气管灌流方法为例简述肾上腺素和苯海拉明的药理作用机制差异基本原理：离体肺支气管灌流是通过观察药物对灌流液流出速率的影响，借以测定全部气道平滑肌的张力情况。
若使灌流液流量增加，说明气道平滑肌张力减低，即该药有扩张平滑肌的作用。