TRIpureReagent(总RNA提取试剂)
植物总rna提取试剂
植物总rna提取试剂植物总RNA提取试剂是一种用于从植物组织中提取总RNA的试剂盒。
总RNA是植物细胞中的一个重要组成部分，可以用于基因表达研究、转录组学和其他分子生物学研究。
本文将介绍植物总RNA提取试剂的原理、操作流程、优缺点以及注意事项。
一、植物总RNA提取试剂的原理植物总RNA提取试剂通过破碎细胞壁和细胞膜，溶解蛋白质，并在碱性条件下使DNA和RNA不同程度地溶解从而实现总RNA的提取。
它通常包括下述主要步骤：1.细胞破碎：将植物样品研磨或经过冻融循环处理，释放细胞。
2.蛋白质沉淀：添加试剂进行蛋白质沉淀，将细胞残渣上清液中的蛋白质沉淀下来。
3. RNA沉淀：通过加入酒精等试剂使RNA从上清液中沉淀下来。
4.清洗：用特定的试剂将沉淀洗涤，去除污染物。
5.溶解：加入溶剂溶解沉淀，得到纯度较高的总RNA。
二、植物总RNA提取试剂的操作流程1.准备样品：收集新鲜的植物组织，将其迅速冷冻在液氮中，然后使用试剂研磨或液氮研磨法将其破碎。
2.加入试剂：向研磨好的样品中加入试剂，根据试剂盒的要求进行操作。
3.离心：离心样品，以将细胞碎片和蛋白质沉淀分离。
4.沉淀RNA：将上清液转移至新的离心管中，加入酒精等试剂，使RNA沉淀下来。
5.清洗：用特定的试剂洗涤RNA沉淀，去除杂质。
6.溶解：使用特定的溶剂将RNA沉淀溶解，使其完全溶解。
7.检测：采用比色法、荧光法或电泳等方法对提取得到的RNA进行定量和质量检测。
三、植物总RNA提取试剂的优缺点1.优点：-操作简单，不需要复杂的仪器和设备。
-高效提取总RNA，得到纯度较高的RNA。
-可以快速提取大量的样品。
-可以适用于多个植物种类和组织类型。
2.缺点：-可能存在某些试剂无法完全溶解质体等问题。
-部分试剂存在对环境的污染隐患。
四、植物总RNA提取试剂的注意事项1.使用新鲜的植物组织进行提取，以确保RNA的质量和完整性。
2.严格按照试剂盒的说明进行操作，不要改变试剂的使用顺序或添加量。
RNAblood 超纯全血总RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
RNAblood 超纯全血总RNA快速提取试剂盒目录号：RN25目录编号包装单位RN2502 50次❖适用范围：适用于快速提取全血高纯度总RNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：﹢试剂盒组成保存50次10X红细胞裂解液RLB 裂解液RL室温4℃避光25 ml50 ml去蛋白液RE 室温25 ml漂洗液RW 室温10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 室温10 ml70%乙醇室温9ml RNase-free H2O第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free吸附柱RA 室温50个收集管（2ml）室温50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项：1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。
裂解液RL可以常温运输，收到后4℃避光保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
❖产品介绍：1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!2.所有离心步骤如未加说明，均在室温进行。
使用转速可以达到13，000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
3.裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。
若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿，用户使用前需要自备氯仿。
5.常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。
好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb （18S），条带亮度比值约为2：1。
TRI zol 总RNA 提取试剂
2) 胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS 洗涤细胞，吸除PBS，向细 胞中加入含有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有 血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-free 的离心管中，300×g 离 心5 分钟，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。 注意：收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA 的 产量降低。 d. 细胞悬液：离心取细胞。每5×106－107 动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞 加入1 ml ZOzol。加入ZOzol前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。一些酵母和细菌细胞 可能需要匀浆仪处理。 e. 血液处理：直接取新鲜的血液，加入3 倍体积ZOzol（推荐0.25ml 全血加入0.75ml ZOzol），充分振荡混匀。 2. 将匀浆样品在15－30℃放置5 分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。 3. 可选步骤：4℃ 12,000 rpm(~13,400×g) 离心10 分钟，取上清。 注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。 离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪 组织样品时，上层是大量油脂，应除去。取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。 4. 每使用1 ml Z0zol 加入0.2 ml 氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15 秒，室温放置3分钟。 注意：如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2 分钟代替。 5. 4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心10-15 分钟，样品会分成三层：黄色的有机相，中 间层和上层无色的水相，RNA 主要在水相中，把水相（约600 μl）转移到新的离心管 中。（如要分离DNA 和蛋白质，可向天根公司索取提取方法）。 6. 在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，混匀，室温放置20-30 分钟。 7. 4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心10 分钟，去上清。离心前RNA 沉淀经常是看不见 的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。 8. 加入1 ml 75%乙醇（DEPC 处理过的水配制）洗涤沉淀。每使用1 ml NOzol至少用 1 ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。 9. 4℃ 5,000 rpm(~2,300×g)离心3 分钟。倒出液体，注意不要倒出沉淀，剩余的少量 液体短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。 10. 室温放置晾干（不要晾的过干，RNA 完全干燥后会很难溶解，大约晾干2－3分钟 左右即可），根据实验需要，加入30-100 μl RNase-free ddH2O，反复吹打、混匀， 充分溶解RNA。
博迈德质粒小量提取(磁珠法)
质粒小量提取试剂盒(磁珠法)目录号：PL02试剂盒组成保存PL0202100次PL0203200次RNaseA（10mg/ml）-20℃300µl 300µl×2 溶液P1 4℃30ml 30ml×2 溶液P2 室温30ml 30ml×2 溶液P3 室温40ml 40ml×2漂洗液WB 室温25ml 25ml×2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15ml 10ml×2磁珠悬浮液室温 1.5ml 1.5ml×2保存条件：本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于2-8℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，磁珠在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从磁珠上洗脱。
产品特点：1.磁珠吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
自备仪器及试剂：1，小型离心机，2磁力架(博迈德)，3无水乙醇注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
病毒基因组DNA RNA快速提取试剂盒II操作方法及步骤说明书
试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(RN2201) 裂解液VLB 室温20 mlPoly Carrier -20℃200μl去蛋白液RE 室温25 ml漂洗液RW 室温10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 室温10 mlRNase-free吸附柱RA和收集管室温50套室温储存12个月不影响使用效果，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：采用特异性结合病毒DNA/RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液，包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA/RNA。
该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求，如病毒RNA：HCV（丙肝病毒）,HIV（艾滋病毒）,和HTLV（人类嗜T淋巴细胞病毒）；病毒DNA：HBV（乙肝病毒）和CMV（巨细胞病毒）等等。
病毒裂解后，DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。
纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR/RT-PCR分析。
产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。
3.多次柱漂洗确保高纯度，提取的病毒DNA/RNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR/RT-PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。
注意事项：1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。
3.裂解液VLB和去蛋白液RE中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。
TRIpure Reagent总RNA抽提试剂操作方法及步骤说明书
TRIpure ReagentTRIpure Reagent总RNA提取试剂目录号：RN01试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成(RN0101) (RN0102)TRIpure （4℃避光）50 ml 100 ml储存事项：TRIpure 在室温下能稳定保存12个月。
尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在2~8°C的环境下。
重要提示：本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。
如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。
使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。
如果不小心接触，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
注意事项：1.样品用TRIpure匀浆后，如果不即刻加入氯仿之前，，置于-70°C下可放置一个月以上。
保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C条件下可以保存1年。
RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。
2.若下游实验对DNA非常敏感，建议用RNase free DNase I（货号：RN45）对RNA进行处理。
3.自备试剂：氯仿、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)、RNase free water或者DEPC处理过的水。
4.本公司生产TRIpure Reagent质量优异，可以完美替代Invitrogen的TrizolReagent。
提取质量和下游实验完全一样。
已经销售8年数万瓶。
从无质量问题。
客户如果购买本公司TRIpure Reagent证明不能替换Invitrogen的Trizol，无条件退货，并3倍销售价格赔偿。
RNA抽提操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：用TRIpure 抽提RNA时要戴手套和护眼罩。
避免接触皮肤和衣服。
在化学通风橱完成操作。
避免呼吸道吸入。
如无特殊说明，所有的操作应该在在15~30°C 的室温条件下。
血液(液体样本)总RNA提取试剂盒探讨
使用说明◆RNAliquid超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒◆目录号1123◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外RNAliquid 超速全血(液体样本)总RNA提取试剂盒目录号：1123目录编号包装单位112301 20次112302 50次适用范围：适用于快速提取全血（液体样本）高纯度总RNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存20次50次裂解液RLS 4℃避光25 ml 50 ml 去蛋白液RE 室温15 ml 25 ml漂洗液RW 室温5 ml 10 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 室温10 ml 10 ml70%乙醇室温4ml RNase-free H2O 9ml RNase-free H2O 第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free吸附柱RA 室温20个50个收集管（2ml）室温20个50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项：1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。
裂解液RLS可以常温运输，收到后4℃避光保存。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活RNA 酶，然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
总RNA提取试剂盒操作流程
总RNA提取试剂盒操作流程1.准备工作首先，准备实验室所需的所有试剂和材料。
包括总RNA提取试剂盒，标本样本（细胞培养物或组织样本），RNase去除剂、DNase处理试剂、异硫氰酸盐混合物、洗涤缓冲液、乙醇，10%叠氮化钠溶液，TE缓冲液和脱水酒精。
2.样本预处理对于细胞培养物，将其转移到离心管中，用1×PBS缓冲液洗涤细胞，然后将PBS去除。
对于组织样本，使用刀片将组织切碎，并将其转移到离心管中。
3.细胞裂解和组织裂解使用总RNA提取试剂盒提供的裂解缓冲液，将培养细胞或组织完全裂解。
对于细胞裂解，直接将缓冲液加入细胞，并彻底混匀。
对于组织裂解，将裂解缓冲液加入裂解管中，然后使用离心机将组织完全裂解。
4.清洁RNA将裂解的细胞或组织样本转移到离心管中，添加RNase去除剂，摇动混匀，然后在室温下孵育10分钟。
5.微量RNA精炼将异硫氰酸盐混合物添加到离心管中，摇动混匀，然后孵育10分钟以精炼RNA。
6.RNA沉淀和洗涤根据试剂盒提供的指引，将样品以及裂解缓冲液转移到分离管中。
加入等体积的酒精，然后彻底混匀。
样品将出现白色絮状，代表RNA已经沉淀。
使用离心机将样品离心10分钟，将沉淀收集到离心管底部。
轻轻倒出上清液，并加入预先配制好的洗液进行洗涤。
洗涤过程中，将洗涤缓冲液加入沉淀中，并轻轻混匀。
然后使用离心机将样品离心，去除上清液，并加入新的洗液进行额外的洗涤。
重复上述洗涤步骤2-3次，以确保完全清洁RNA。
最后，去除所有的上清液。
7.去除基因组DNA污染使用DNase处理试剂，按照试剂盒提供的指引，去除所有的基因组DNA污染。
将DNase处理试剂加入裂解液中，并轻轻混匀。
在室温下孵育15分钟。
8.乙醇沉淀RNA加入等体积的乙醇，并轻轻混匀。
样品将再次出现白色絮状，代表RNA再次沉淀。
使用离心机将样品离心10分钟，然后倒出上清液。
9.干燥RNA使用10%叠氮化钠溶液将RNA片段再次洗涤，并轻轻混匀。
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pure Reagent （总 RNA 提取试剂） TRI TRIpure 目录号 RN01 使用手册 实验室使用，仅用于体外
TRIpure Reagent（总 RNA 提取试剂）
目录号：RN01 目录编号 0101 RN RN0101 0102 RN RN0102 包装单位 50ml 100ml
离心前小心平衡试管。 离心前玻璃管口必须盖上铝箔并用石蜡膜封口，聚丙烯管必须盖紧。 从少量的组织(1~10mg)或细胞(102~104)中分离 RNA 样品：往组织或细胞中加入 800µl TRIpure。待样品裂解后，加入氯仿并进行步骤 2 中的抽提操作。在用异丙 醇沉淀 RNA 之前，加入 5~10μg 无 RNA 酶的 glycogen 作为水样层的载体。为降 低其黏度在加入氯仿前用 26 号注射器抽吸两次以切断基因组 DNA。Glycogen 会 留在水样层中并和 RNA 共析出。 在浓缩到 4mg/ml 之前它不会抑制逆转录反应第 一链的合成也不会抑制 PCR。
-4-
2.
分离阶段 °C条件下孵育 5分钟以使核蛋白体完全分解。每 1ml TRIpure -30° 将匀浆样品在 15 -30 加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管 15秒并将其在室温下孵育2~3分 钟。 在2~8°C下以不超过12,000×g的离心力高速冷冻离心15分钟。 离心后混合物分 成三层：下层苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于 水样层当中。水样层的容量大约为所加TRIpure 容量的60%。
4.
RNA 的漂洗 移去上层悬液。用75%的乙醇洗涤RNA沉淀一次，每1ml的TRIpure 至少加1ml的 75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在2~8°C下以不超过7,500×g的离心力高速冷冻离 心5分钟。
5.
RNA 的再溶解 在操作的最后，简单干燥RNA沉淀（空气干燥或真空干燥5~10分钟）不要在真空 管里离心干燥RNA。尤为重要的是，不能让RNA沉淀完全干燥那样会极大地降低 它的可溶性。部分溶解的RNA样品其A260/280比值<1.6。用移液管尖分几次移取 无RNA酶的水或0.5%SDS溶液来溶解RNA（当RNA以后要用于酶切反应时，避免 使用SDS。 ）RNA还能被100%甲酰胺（除去离子）再溶解并保存在–70°C。
�
RNA 抽提操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示： 用 TRIpure 抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩。 避免接触皮肤和衣服。 在化学通风橱
°C 的条件下。 完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外，所有的操作应该在在 15~30 15~30° 实验所需试剂但未提供的物品： 1. 氯仿 2. 异丙醇 3. 75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)
� 1. 2.
注意事项： 当TRIpure 用量少于2ml时建议使用清洁的一次性的聚丙材质试管。 当TRIpure 用量较大时，可以使用玻璃试管(Corex)或聚丙材质试管，事先检验以 确保该试管可以耐受加入TRIpure 和氯仿后12,000×g的离心力。不可使用有裂缝 或者破损的试管。 -2-
3. 4. 5.
3.
RNA 的沉淀 将水样层转移到一干净的试管中，如果希望分离DNA和蛋白，有机层同样要予以 保留。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA。最初均化时的每1ml TRIpure 对 °C条件下孵育10分钟并在2~8°C下以不超 -30° 应0.5ml异丙醇。将混合的样品在15 -30 过12,000×g的离心力高速冷冻离心10分钟。RNA沉淀在离心前通常不可见，形成 一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。
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6.
RNA 沉淀 在匀化后和加入氯仿之前， 样品可以在–60~–70°C 保存至少一个月。 （步 骤 4，RNA 漂洗）溶于 75%的乙醇在 2~8°C 至少可以保存一周，在–5~–20°C 下 至少可保存一年。
7.
台式离心机最大能达到 2,600×g 的离心力，如果将离心时间延长到 30~60 分钟可 以满足步骤 2 和步骤 3 中的操作。
-6-
*用于琼脂糖凝胶电泳的福尔马林pH低于3.5。
问题
评论与建议
*样品匀浆化时所加的TRIpure量太少。
DNA 污染
*用于抽提的样品包含有机溶媒（例如，乙醇，DMSO），强缓冲液， 或碱性溶液。 下述的对RNA沉淀方法（步骤3）的改进能从抽提的RNA中移去复合污 染。以匀浆化时每1ml TRIpureE为例，在水样层中加入0.25ml异丙醇后
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问题与解决方法 问题 评论与建议
*肝和脾，6~10μg *肾，3~4μg 每 1mg 组织或 1×106 培养细胞预期的 RNA 产量 *胎盘，1~4μg *上皮细胞(1×106 cultured cells)，8~15μg *纤维母细胞(1×106 cultured cells)，5~7μg *样品均化或裂解不完全。 抽提得率低 *终 RNA 不完全再溶解。 *在分光光度计测量前用水而不是用 TE 缓冲液稀释 RNA 样品。低离子 强度和低pH溶液会增加280nm处的光吸收值。 A260/A280 比率<1.65 *样品匀浆化时所加的TRIpure量太少。 *匀浆化后样品没有在室温下放置5分钟。 *分离的水样层中污染有苯酚层。 *终RNA没有完全溶解。 *从动物体取下的组织没有立即进行抽提或冰冻保存。 *用于抽提的样品，或抽提的RNA样品保存于–5~–20°C，而不是存放于 RNA 降解 –60~–70°C。 *细胞经胰酶消化而分散。 *水溶液或试管污染有RNA酶。 *骨骼肌和脑组织，1~1.5μg
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产品介绍： TRIpure 试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时
能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。 RNA存在于水样 层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后， 样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在 有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有 用。 无论是人、 动物、 植物还是细菌组织， 该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106) 以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。 TRIpure 试剂操作上的简单性 允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIpure 抽提的总 RNA 能够避免 DNA 和蛋白的污染。故而能够作 RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、 体外翻译、RNA 酶保护分析和分子克隆。如果是用于 PCR，当两条引物位于单一外显 子内时，建议用扩增级的 DNase I 来处理抽提的总 RNA。 TRIpure 试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠 肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不 连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S)， 低 分 子 量 RNA 介 于 0.1 和 0.3 kb 之 间 (tRNA, 5S) 。 当 抽 提 的 RNA 用 TE 稀 释 时 其 A260/A280比值≥1.8。
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4. 无RNA酶的水或0.5% SDS溶液调配无RNA酶的水——将水加入无RNA酶的玻 SDS溶液必须用DEPC 璃瓶中， 加入DEPC至0.1% (v/v)。 放置过夜并高压灭菌。 处理过并经高压灭菌的水配制。 1. 匀浆化作用 a. 组织 用glass或强力匀浆器搅匀组织样品， 每50~100mg组织加1ml的TRIpure。 匀浆化 时组织样品容积不能超过TRIpure 容积的10%。 b. 单层生长的细胞 直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的TRIpure 溶解细胞， 通过移液管分次移 出细胞裂解物。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的 TRIpure 量（每10cm2加1ml）。当TRIpure 量不足时可导致抽提的 RNA中污染 有DNA。 c. 悬浮生长的细胞 通过离心来沉淀细胞。在 TRIpure 试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每 5~10×106的动物细胞， 植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加1ml的TRIpure。 在加 入TRIpure 前应避免洗涤细胞，因为那样会增加 mRNA降解的可能性。破裂某 些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。 可选方案： 当样品富含蛋白质，脂肪，多糖或是细胞外物质例如肌肉，脂肪组 织和植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8°C的条件下 以12,000×g的离心力离心10分钟，移除匀浆中不溶解的物质，余下的沉淀中包含 有细胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，而上层的超浮游物含有RNA。在来自于 脂肪组织的样品中，大量的脂肪漂在最上层因而应该除掉。在每一个个案中，将 清亮的匀浆溶液转移到一干净的试管中加入氯仿并继续进行下述的分离步骤。
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适用范围： 适用于各种动植物组织/细胞总 RNA、DNA、蛋白的快速抽提温下能稳定保存 12 个月。尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保
存在 2~8°C 的环境下。
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重要提示： 有毒物接触皮肤或者不慎吞服，会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤
剂和清水清洗。若感不适，看医生并寻求苯酚和其他成分的正确治疗方案。
蛋白多糖 和多糖污染
再加入 0.25ml 的高盐溶液 (0.8 M 柠檬酸钠和 1.2 M NaCl) 。将终溶液混 匀，离心并继续进行前述的抽提操作。改进后的沉淀法能有效地析出 RNA而多糖和蛋白多糖仍以可溶的的形式留在溶液中。对于含有大量 多糖的植物，要抽提其RNA将改进后的沉淀法和在最初匀浆化时多加 一次离心(RNA抽提指南，可选方案)合并使用是十分必要的。