总RNA提取试剂盒使用说明
试剂盒--总RNA_提取__SV_Total_RNA_Isolation_System_Kit
总RNA 提取（SV Total RNA Isolation System Kit，Promega）1.低于30mg的样品中加入175µl裂解缓冲液(SV RNA Lysis Buffer＋BME)，充分匀浆。
2.加入350µl蓝色的RNA 稀释缓冲液（SV RNA Dilution Buffer），颠倒3-4次使样品充分混合。
3.放入70℃水浴中裂解3min。
注：温育时间不要超过3分钟，否则可能破坏RNA的完整性。
4.14，000g 离心10 min。
小心用移液器将上清液转移到新的Eppendorf管中。
注：①若是组织中脂肪含量较高，需重复几次此步骤；②避免吸到颗粒物。
5.加入95%的乙醇200µl于上清液，用枪头冲吸3-4 次。
6.将其全部转移到带有滤膜的微型柱中，14,000g, 离心1min，弃滤液。
7.加入600µl冲洗缓冲液（SV RNA Wash Solution）, 14,000g, 离心1min，弃滤液。
注：确保SV RNA Wash Solution已用乙醇稀释过。
8.按样品数量准备DNA 酶Ⅰ混合液，用于降解DNA。
每样需40µl黄色缓冲液, 5µl 0.09M的MnCl2和5µl DNA 酶Ⅰ配制的DNA 酶Ⅰ混合液。
注：①DNA 酶Ⅰ必须在冰上解冻；②温柔用移液器混合，不可涡旋。
9.确保加50µl DNA 酶Ⅰ混合液到滤膜中间，室温保持15 min。
10.加入200µl终止反应缓冲液（SV DNase Stop Solution），14,000g, 离心1 min，不必弃滤液。
注：确保SV DNase Stop Solution中已加入乙醇。
11.加入600µl 冲洗缓冲液（SV RNA Wash Solution），14,000g，离心1 分钟，弃滤液。
12.再加入250µl冲洗缓冲液洗一次（SV RNA Wash Solution），14,000g，离心2 min，弃滤液，转移微型柱到新的洗脱管中。
总RNA纯化试剂盒说明-中文版
总RNA纯化试剂盒产品说明书此款RNA纯化试剂盒提供了一种从培养的动物细胞、组织样品、血液、细菌、酵母、真菌、植物和病毒中快速提取和纯化总RNA的方法，。
该试剂盒可以纯化所有大小的RNA，从大的mRNA和核糖体RNA到小RNA（microRNA或miRNA）和小干涉RNA（siRNA）。
RNA优先从蛋白等的细胞组分中纯化出来，而不使用抑制的苯酚或者氯仿。
纯化的RNA是高度完整的，可以应用到一系列的下游应用试验中，包括实时PCR，Northern免疫印迹分析，RNase保护实验和引物延伸，以及表达芯片分析。
纯化技术纯化的基础是旋转柱色谱法，用特有的树脂作为分离介质。
RNA优先从其他细胞组分（如蛋白质）中分离出来，而不使用苯酚或者氯仿。
纯化步骤包括首先用合适的裂解液融解细胞或组织，然后裂解液中加入乙醇后上样到旋转柱中。
树脂结合RNA是基于离子的浓度，所以只有RNA结合到柱子上而所有剩余的蛋白和其他的污染物会在流动液中而被除去或者仍在树脂的顶部。
然后结合的RNA用试剂盒提供的洗涤液洗涤以除去所有残余的杂质，然后纯化的总RNA用抽提缓冲液洗涤。
纯化的RNA是高度完整的，可以用于一系列的下游实验分析。
说明优点•使用旋转柱提取，步骤快且简单•提取总RNA，从大的核糖体RNA（rRNA）到小（RNAmicroRNA或者miRNA)•不需要苯酚或氯仿作提取液•从多种种类来源样品中提取高质量的总RNA•可以提取和检测到的RNA组织样品可以小到单个动物细胞试剂盒成分储存条件和产品稳定性所有的溶液需在室温密闭保存。
所有的试剂在不开封条件下稳定保存１年。
预防措施和警告事项该试剂盒只为科研目的设计，不可用于人或者临床。
要确保有合适的实验服，在操作化学试剂时一次性的手套和护目镜会磨损。
需要更多信息，请参考适合的材料安全表（MSDSs）。
所有人和动物组织的问题是要考虑到潜在的感染。
当操作全血样品时，所有在使用国家的有关当局建议的预防措施都要执行。
FOREGENE植物总RNA提取试剂盒说明书
Version Number:1.1Plant Total RNA Isolation Kit PlusCat.No.RE-05021/05024For total RNA purification from general plant samples containing high polysaccharide and polyphenol componentsFor research use only Store at room temperature目录产品介绍 (3)产品特点 (3)试剂盒应用 (4)RNA的应用 (4)RNA的储存 (4)产品质量控制 (4)试剂盒内容 (5)产品信息 (5)储存条件 (5)DNA-Cleaning Column特性 (6)RNA-Only Column特性 (6)RNA提取得率与纯度 (7)RNA完整性 (7)RNA洗脱回收效率 (8)注意事项 (9)操作前准备事项 (10)实验材料和设备 (10)自备试剂 (10)安全性 (10)操作指南 (11)样本选取和保存 (11)样本初始用量 (11)植物组织破碎 (12)RNA污染预防 (12)基因组DNA污染及清除 (12)操作步骤 (13)RNA浓度及纯度检测 (15)DNA污染及检测 (15)快速操作示意图 (16)问题分析指南 (17)该试剂盒采用本公司研制的离心柱和配方，可以从各种多糖多酚含量高的植物组织中高效率的提取得到高纯度高质量的总RNA。
提供DNA-Cleaning Column能轻松的让上清液和组织裂解物分离，去除样品中的DNA，操作简便、省时；RNA-Only Column 能高效的结合RNA，搭配独特的配方，可以同时处理大量样品。
全体系RNase-Free，使得提取的RNA无降解；Buffer PRW1、Buffer PRW2缓冲液洗涤体系，使得获得的RNA纯度极高。
产品特点◆全程常温(15-25°C)操作，无需冰浴和低温离心。
Trizol总RNA抽提试剂盒
Trizol使用说明书一、分离纯化的基本原理研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。
RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。
Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。
二、用户需自备的试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、 ips （RNase-free）三、准备工作RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。
它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。
用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。
它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。
RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。
一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。
取RNase-free的物品时必须戴手套。
1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。
对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。
处理步骤如下：1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。
注意：DEPC 为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。
2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。
3）在通风柜中室温处理过夜。
4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。
5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。
置于干净处备用。
2、璃玻和金属物品 250°C烘烤3小时以上。
四、从组织中提取总RNA1) 液氮研磨，组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。
QIAGEN RNeasy Plant Mini试剂盒提取总RNA
用QIAGEN RNeasy Plant Mini试剂盒提取总RNA（胍盐法）操作步骤1、称取新鲜叶组织样品100 mg，液氮速冻。
2、在预冷的研钵中研磨成细粉，转移到2 ml离心管中。
注意研磨不彻底则会造成严重产量降低。
3、待液氮挥发（但不能解冻）后，加入450 ml提取缓冲液RLT，涡旋混匀，并在56℃温育1~3 min。
注意：最好在RLT临用前加入1/100体积的14.5 M β-巯基乙醇，加后保存时间不超过1个月，RLT溶液应在1个月内使用。
对于高淀粉含量的材料，可将温度提高到60℃以上防止淀粉结块。
4、将裂解液加到离心柱（淡紫色柱）上，下接一个2 ml收集管，最大转速（10000 g）离心2 min。
如果将裂解液粘稠，可切去吸头顶端，用大口吸头吸取。
裂解液通过柱子时被均质化，大部分组织碎片都被截留在柱子表面，只有少部分通过柱子形成沉淀，因此，应小心吸取上清液，转移到另一新离心管，不要吸细胞碎片残渣沉淀。
5、加入0.5倍体积（225 µL）96~100%乙醇，吹打混合均匀。
如果裂解液有损失，则相应减少乙醇用量。
加入乙醇后，可能会出现沉淀，但对提取无影响。
6、将混合液全部（包括沉淀675 µL）转移到吸附RNA的离心柱（粉红色柱），下接一个2 ml收集管，大于8000 g或10000 r/min离心15 sec。
如果混合液体积超过700 µL，每次只加700 µL到离心柱上，按上述条件离心。
弃去管内液体，重复使用收集管。
7、加入700 µL洗脱液，大于8000 g或10000 r/min离心25 sec，弃去收集管。
8、将离心柱转移到一新的2 ml收集管上，加入500 µL RPE液，大于8000 g或10000 r/min离心15 sec。
弃去管内液体，重复使用收集管。
注意：试剂盒提供浓缩的PRE洗脱液，所心使用前必须加入4倍体积的96~100%乙醇，成为工作液。
磁珠法总RNA 提取试剂盒
磁珠法总RNA 提取试剂盒(细胞)操作步骤1.样本前处理：细胞用PBS洗两次后，沉淀备用;2.裂解结合：在细胞沉淀中，加入400 μl Buffer CRL重悬细胞、400 μl异丙醇和30 μl磁珠，颠倒混匀，室温放置10分钟（期间不时颠倒混匀，重悬磁珠），将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。
；注意：如果改变样品使用量，裂解液、磁珠悬浮液和异丙醇醇的使用量也需要按比例做相应的调整。
3.漂洗:(1)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500 μl Buffer CRW 0,轻微振荡混匀（或用移液器吹打混匀）,重悬磁珠，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体；(2)向离心管中加入500μl Buffer CRW I,轻微振荡混匀（或用移液器吹打混匀）,重悬磁珠，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体,重复上述洗涤步骤1次，第二次洗涤待磁珠完全吸附后充分吸弃液体（不要有残留），室温晾干5-10min。
注意：要将上清尽量弃净，乙醇晾干，以免影响DNase I消化效果4.DNA消化：将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入75μl DNase I 反应液，移液器吹打重悬磁珠，37°C孵育15分钟,每隔5分钟轻弹管底悬浮磁珠，以防磁珠成团。
5.漂洗：(1)将离心管从37°C加热器上离开，加入700 μl Buffer CRW 0，移液器吹打重悬磁珠，室温颠倒混匀5分钟，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体；(2)加500 μl Buffer CRW I,轻微振荡混匀（或用移液器吹打混匀）,将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体；(3)再次加入500 μl Buffer CRW I，轻微振荡混匀（或用移液器吹打混匀）,请注意将磁珠聚集在管底,待磁珠完全吸附后吸弃液体，室温晾干2min。
6.洗脱：将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入50-100 μl 洗脱液EB，56°C 孵育5分钟，将离心管重新放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后小心将总RNA 溶液转移至新的离心管，放入-80 °C保存备用。
OMEGA总RNA提取试剂盒说明书_BBH
E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps) 步骤A．真核细胞和组织自备材料：β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管、一次性乳胶手套。
细胞的步骤1．在离心管中用TRK裂解缓冲液裂解细胞，使细胞团松散，轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。
吸净培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。
加600ul的TRK到T35细颈瓶或10cm的培养皿中，更小的培养器则加350ul的TRK。
用移液管吸取buffer布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。
将裂解产物转移至干净的1.5mlEP管中，然后进行第2步。
如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK）裂解液，漩涡振荡混匀（具体略，见说明书）。
2．匀浆化裂解产物“裂解和匀浆化样品”－第四页有更详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。
样品匀浆化不完全会显著的减少RNA的产量并容易造成柱子堵塞。
a)用匀浆器（rotor-stator ）30 s，使样品匀浆化，而后进行第3步。
b)使裂解产物通过钝的针头的注射器（0.9mm直径20-gauge），使之匀浆化。
注射器要除RNase。
进行第3步。
c)将裂解物转移入omega homogenizer spin column,10000g离心1分钟。
将流出液移入新的tube中，进行第3步。
组织的步骤：1．TRK裂解缓冲液在离心管中裂解细胞，使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
350ulTRK裂解液最多能有效裂解20mg组织（-3mm3）。
对20mg以上组织用600ul的TRK裂解液。
然而，不要超过30mg组织，这是推荐的最大量。
TaKaRa 提取RNA说明书
TaKaRa Code N0.9769 TaKaRa MiniBEST Plant RNA Extration Kit 说明书
一、制品说明
本试剂盒是小量提取植物组织Total RNA 的试剂盒。
试剂盒采用了独特的裂解系统，可以对各种简单的植物材料（叶片、茎、幼苗等）富含多糖多酚的植物组织材料（果实、种子）、真菌等进行RNA的提取，适用范围广。
按照标准流程使用本试剂盒可以有效提取分子量大于200nt的RNA，也可以按照可选步骤提取得到包含Small RNA（＜200nt）的Total RNA。
试剂盒中包含了RNA提取所需的全部是局，无需额外购买其他试剂。
本试剂盒具有高效、快速、方便的特点，组织或自爆裂解后，提取操作仅需要30min 便可完成操作。
提取过程中无需苯酚氯仿抽提等步骤。
利用该试剂盒提取的RNA纯度高，基本不含蛋白质及及基因组DNA污染。
本试剂盒可以从50mg—100mg植物组织中纯化得到多至数十微克的高纯度RNA。
提取得到的RNA可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、Real Time PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
二、制品内容（50次量）
本试剂盒分两部分|Part 1和Part 2。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
总RNA提取试剂盒使用说明
货号：R1200
规格：50T/100T
产品内容：
试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期
裂解液50ml100ml2-8℃一年
漂洗液15ml15ml×2RT一年
洗柱液50ml50ml×2RT一年RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年RNase free吸附柱50个100个RT一年RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年
操作步骤：
1.样品处理：
a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。
用取样器吹打混匀。
d.细胞悬液：离心收集细胞。
每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。
弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。
离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。
2.将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
4.2-8℃12000rpm离心10分钟。
RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
5.吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12,000rpm 离心2min，弃废液。
6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃12000rpm 离心2min，弃废液。
7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃12,000rpm 离心2min，弃废液。
8.向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。
9.12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
10.将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得
到RNA。
注意事项：
1，所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2，RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。
相关试剂：
R1600DEPC处理水
R10505×RNA Loading Buffer
SR0020RNA wait(非冻型组织RNA保存液。