微生物的接种与培养
医学微生物学：实 验 二 细菌的接种和培养
2.半固体培养基：培养基量为管长的1/4--1/3
3.斜面培养基： 斜面长度为管长的2/3
4.平板：
将琼脂冷至56℃，倾倒平皿而成
肉汤
半固体
1CM
斜面
普通琼脂平板
血琼脂平板
巧克力平板
SS平板
配制培养基的干粉
培养基的用途
1.平板：分离出单个菌落 2.半固体培养基：动力观察 保存菌种 3.斜面培养基： 纯培养 保存菌种 4.液体培养基： 增菌
医学微生物学 实验二
实 验 二 细菌的接种和培养
实验内容:
1、平板分区划线 2、斜面接种法 3、半固体接种法 4、液体接种法
目的要求：
1、掌握常用培养基种类、用途 2、掌握细菌的各种培养基接种法 3、掌握细菌在培养基生长表现
培养基的种类（按性状分类）
1.液体培养基： 液体量为管长的1/4--1/3
2、肉汤：表面生长、浑浊生长、沉淀生长 3、半固体：
动力阴性：穿刺线清晰、沿穿刺线生长 动力阳性：穿刺线模糊或呈根须状、沿穿刺线向
四周扩散生长、培养基变混浊 4、斜面：均匀的菌苔
结果请看示教
细菌生长现象观察
表面 沉淀 混浊察
细菌的接种方法 电教 实验报告
1.描述今天接种的四种培养基上相应接种菌的生长现象 2. 描述今天接种的四种培养基的用途
平板分 区划线
斜面、半固体接种
从试管取细菌
斜面
半固体
液体接种
接种环
液体培养基
实验内容－－接种培养基
普通平板： 1个/人（菌种大肠杆菌或金葡或铜绿）
肉汤： 2支/人（菌种铜绿、链球菌） 半固体： 2支/人（菌种变形杆菌、金葡菌） 斜面： 1支/人（菌种大肠）
实验五 微生物的分离、接种及培养法
实验五微生物的分离、接种及培养法一目的要求1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。
2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。
二实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。
在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。
三实验材料1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。
2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。
3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。
四实验内容与步骤（一）微生物的分离技术1. 平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。
具体方法如下：倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。
（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。
（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。
然后将培养皿倒置放入恒温培养箱37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。
4.实验四 土壤微生物的接种与培养
实验四土壤微生物的接种与培养一、实验目的与要求1、掌握稀释平板涂布法接种技术。
2、掌握从土壤中分离培养微生物的方法（稀释平板分离法）。
二、实验原理在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。
为了获得某种微生物的纯培养。
一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。
三、实验方法1、配制土壤系列稀释溶液：称取10.0克土放入装90mL无菌水的三角瓶中，摇匀，即为10-1、土壤溶液。
静置后取上清液依上法配制10-2，10-3，10-4等稀释度的土壤溶液（取1mL上一浓度的溶液放入装有9mL无菌水的试管中，注意用移液管吹洗3次并摇匀）。
2、倒平板：培养基温度50℃左右，每个培养皿倒10-15mL（3-5mm厚）。
3、接种：分别吸取0.2mL无菌水、10-4，10-3，10-2（先接种低浓度，后接高浓度）的土壤溶液接种到平板上，用刮刀涂布均匀后置于37℃恒温箱中培养。
4、培养：先正置，20min后倒置培养，培养时间24h-48h。
四、注意事项1、实验操作过程中无菌操作。
2、各浓度溶液必须充分摇匀，否则可能出现很大的误差。
3、倒平板时不能太多或太少，温度不能过低。
五、实验报告讨论题1：接种要从低浓度开始，为什么？讨论题2：培养时先正置培养，然后要倒置培养，为什么？。
微生物的分离、接种和培养技术
微生物的分离、接种和培养技术一、实验的目的和内容目的：掌握微生物接种和分离纯化技术，掌握无菌操作技术。
内容：用平板划线法分离微生物；学习斜面接种及穿刺接种等无菌操作技术。
二、基本原理在自然界中，各种微生物是在互为依赖的关系下共同生活的。
因此，为了取出特定的微生物进行纯培养，必须从中把他们分离出来。
微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。
无菌操作是微生物接种技术的关键。
接种是将微生物或微生物悬液引入新鲜培养基的过程。
由于实验目的、培养基种类及实验器皿等不同，所用接种方法不尽相同。
斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生长良好的纯种微生物为目的。
分离培养微生物时，要考虑微生物对外界的物理、化学等因素的影响。
即选择该类微生物最适合的培养基和培养条件。
在分离、接种、培养过程中，均需严格的无菌操作，防止杂菌侵入，所用的器具必须经过灭菌，接种工具无论使用前后都要经过灭菌，且在无菌室或无菌箱中进行。
三、材料及器材（一）菌种：大肠杆菌、枯草杆菌，金黄色葡萄球菌，酵母菌。
（二）培养基：肉汤培养基试管斜面，肉汤半固体培养基，肉汤固体培养基试管斜面，肉汤固体培养基平板，查氏培养基试管斜面，查氏培养基平板。
易（三）仪器及其他工具：接种环，接种针，接种钩，镊子，酒精灯，火柴，酒精棉，试管架，标签纸，恒温培养箱等。
四、方法与步骤（一）接种。
1、试管菌种转接：试管细菌菌种转接主要用于菌种的活化、分离、纯化。
（1）将菌种试管与待接种的试管培养基依次排列，挟于左手的拇指与其他四指之间，用右手的无名指与小指和手掌边拔出棉塞并挟住。
（2）置试管口于酒精火焰附近。
（3）将接种工具垂直插入酒精火焰中烧红，再横过火焰3次，然后再放入有菌试管中，在管壁上停留片刻待其冷却。
（4）取少许菌种置于另一支试管中，按一定的接种方式把菌种接种到新的培养基上。
（5）取出接种工具，试管口和棉塞进行火焰灭菌。
（6）重新塞上棉塞。
（7）烧死接种工具上的残余菌，把试管和接种工具放回原处。
微生物的接种分离和纯培养
穿刺接种技术：用接种针从菌种斜面上挑取 少量菌体并竖直穿刺到半固 体培养基中；
接种无菌操作步骤
1. 将菌种斜面和待接种新鲜斜面夹在左手 的食指、中指和无名指之间，大拇指按在两 只试管中间。右手旋松棉塞，便于拔出； 2. 右手拿接种环，竖直伸入火焰中，环端 及伸入试管中部分均充分灭菌；
I
冷却至 45℃左右
每皿约倒入15ml
肉汤培养基
II
III
0.2ml 0.2ml
0.2ml
微生物的计数
血球计数法 平板活菌计数法
计繁殖数法只适宜于单细胞状态的微生物 或丝状微生物产生的孢子
血球计数法
一、实验原理
血球计数器是一特制的厚载玻片，上面 刻有一定面积的方格，将盖玻片盖上后，由 于两者之间存在着距离使之形成一定容积的 小室。滴入待测样品后，使样品均匀充满小 室，在显微镜下计算小室内的菌数，换算成 单位体积的样品中所含的菌数。
度。
思考题
1. 微生物的纯种分离通常采用那些方法，并说明个 方法的特点。
2. 什么叫微生物的污染？如何防止？ 3. 从两种方法计数得出的菌液浓度是否一致？分析
误差产生的原因，由此比较一下两者的优缺点及 各自的适用范围。 4. 平板活菌计数中，为何选择生长有25～250个菌 落的平板？
碰到火焰，以免烧死菌体 6. 血球计数器要洁净干燥，滴入菌液时在盖玻片与
载玻片间不能有气泡 7. 血球计数时显微镜光线不宜太亮
实验安排（三人一组）
斜面接种：每组三支 液体接种：每组三支（大肠、四联、枯草各一支） 穿刺接种：每组二支（四联一支、变形一支） 平板划线分离：每人划一块平板（混合菌液) 稀释分离：I、II、III各一块平板（混合菌液) 血球计数：写出小格数目，并算出酵母菌液
微生物实验中的接种分离和培养操作步骤
微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤一、目的要求1、掌握各种分离、接种方法。
2、掌握无菌操作基本环节。
二、实验说明微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。
在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。
微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。
然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。
三、实验材料1、恒温培养箱。
2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。
3、培养基（上次实验配制的）。
4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。
四、方法步骤（一）接种的操作1、斜面接种（接金黄葡萄球菌）（1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。
（2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。
（3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。
（4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。
（5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。
（6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。
有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。
有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
（8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。
细菌的接种与培养实验报告
细菌的接种与培养实验报告一、实验目的1、掌握细菌接种的基本操作技术，包括平板划线法、斜面接种法和液体接种法。
2、学习细菌培养的条件和方法，了解不同培养基对细菌生长的影响。
3、观察细菌在不同培养条件下的生长情况，培养对微生物实验的兴趣和动手能力。
二、实验原理细菌接种是将细菌从一个培养基转移到另一个培养基的过程，通过接种可以使细菌在新的环境中生长繁殖。
常见的接种方法有平板划线法、斜面接种法和液体接种法。
平板划线法是通过在平板表面多次划线，将细菌逐步稀释，从而得到单个菌落；斜面接种法是将细菌接种在斜面培养基上，以获得大量的菌体用于保存或进一步实验；液体接种法是将细菌接种到液体培养基中，进行液体培养。
细菌培养需要提供适宜的营养物质、温度、酸碱度和氧气等条件。
不同的细菌对培养条件有不同的要求，因此需要根据所培养细菌的特性选择合适的培养基和培养条件。
三、实验材料1、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。
2、培养基：营养琼脂平板、营养肉汤培养基、斜面培养基。
3、器材：接种环、酒精灯、培养箱、显微镜等。
四、实验步骤（一）平板划线法接种1、点燃酒精灯，将接种环在火焰上灼烧灭菌，冷却后蘸取少量菌液。
2、在营养琼脂平板上进行划线，第一次划线从平板的一端划至另一端，然后将接种环灭菌冷却，从第一次划线的末端开始第二次划线，依此类推，共进行 3 5 次划线。
3、划线完成后，盖上平板盖，倒置放入 37℃培养箱中培养 24 小时。
（二）斜面接种法1、点燃酒精灯，将接种环灭菌冷却。
2、用接种环从平板上挑取单个菌落，在斜面培养基的顶端自上而下轻轻划线。
3、接种完成后，将斜面放入 37℃培养箱中培养 24 小时。
（三）液体接种法1、点燃酒精灯，将接种环灭菌冷却。
2、用接种环挑取少量菌苔，伸入液体培养基中，轻轻搅拌。
3、接种完成后，将液体培养基放入 37℃摇床中培养 24 小时。
五、实验结果（一）平板划线法经过 24 小时的培养，在平板上可以观察到单个的菌落。
微生物细菌接种培养实验报告
微生物细菌接种培养实验报告一、实验介绍微生物是指细菌、真菌、病毒、原生动物和藻类等微小生物的总称，它们在生命的整个过程中都扮演着重要的角色。
本次实验主要介绍了微生物细菌接种培养的方法和技巧，旨在帮助学生熟悉微生物实验的基本操作。
二、实验原理细菌接种培养实验是通过将细菌接种到含有营养成分的培养基中进行培养，使细菌在适宜的环境中进行繁殖。
细菌在培养基中繁殖所需要的主要营养成分有碳源、氮源、磷源和微量元素等。
根据不同的细菌，培养基的成分也不同，需要根据实验的需要加入不同的营养成分。
三、实验步骤1.准备培养基根据实验需要选择合适的培养基，加入适量的蒸馏水和其他营养成分，将培养基均匀地倒入培养皿中。
2.接种细菌取一支已经生长好的细菌，用吸管沾取适量的细菌液，滴到培养基表面。
如果需要进行斜面培养，可以用细菌接种环将细菌接种到斜面上。
3.标记培养皿在培养皿的盖子上标记好实验的日期、细菌种类等重要信息，避免混淆。
4.封闭培养皿用透明胶带将培养皿的盖子封闭，避免细菌在外界环境的干扰下生长。
5.培养将培养皿置于恒温箱中，根据需要调节恒温箱的温度和湿度。
一般情况下，细菌的培养需要3-5天的时间。
四、实验注意事项1.实验过程中要做到操作规范、注意卫生，避免细菌的污染。
2.在接种细菌前，要先消毒接种器具，避免外界环境中的细菌污染。
3.在标记培养皿时，要将重要信息标注清楚，避免混淆。
4.在恒温箱中放置培养皿时，要将不同种类的培养皿分开放置，避免细菌之间的交叉感染。
5.实验结束后，要做好实验器具和培养皿的消毒和清洗工作，避免细菌的残留和传播。
五、实验结果与分析通过培养皿的观察和细菌的生长情况，可以初步判断细菌的种类和数量。
如果细菌长成了光滑、湿润的菌落，可以说明细菌在培养基中得到了良好的生长和繁殖。
如果发现有异常生长或变异的情况，需要进行进一步的实验和分析。
六、实验总结微生物细菌接种培养实验是学生进行微生物实验的基础操作，通过本次实验，学生可以熟悉微生物实验的基本步骤和操作技巧，同时也可以了解到微生物在适宜的环境中进行繁殖的基本原理。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
微生物的培养方法实验目的：学习掌握无菌操作技术；学习接种方法；学习常用的分离、纯化菌种的方法。
一、接种将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。
1、接种工具和方法在实验室用得最多的接种工具是接种环、接种针。
由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。
有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。
在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。
（图1）图1 接种和分离工具1．接种针2. 接种环3. 接种钩4.5. 玻璃涂棒6. 接种圈7. 接种锄8. 小解剖刀常用的接种方法有以下几种：1）划线接种这是最常用的接种方法。
即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。
常用的接种工具有接种环，接种针等。
在斜面接种和平板划线中就常用此法。
2）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。
此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。
除三点外，也有一点或多点进行接种的。
3）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。
做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。
用的培养基一般是半固体培养基。
它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。
4）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45° C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。
待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。
5）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。
6）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。
7）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。
8）活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。
所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。
接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。
2、无菌操作培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。
在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。
实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。
光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。
在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。
为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。
空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养皿的时间应尽量短。
用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌。
接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。
（图2）然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。
不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。
平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。
在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。
图2 斜面接种时的无菌操作(1) 接种灭菌(2) 开启棉塞(3) 管口灭菌(4) 挑起菌苔(5) 接种(6)塞好棉塞二、分离纯化含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物( Mixed culture )。
如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养( Pure culture )。
在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。
得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。
1、倾注平板法首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。
单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。
(图3, a)图3 倾注平板法(a)涂布平板法(b)图解1. 菌悬液2. 熔化的培养基3. 培养物4. 无菌水2、涂布平板法首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。
（图3 - 5, b）3、平板划线法最简单的分离微生物的方法是平板划线法。
用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。
划线的方法很多, 常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
（图4）当接种环在培养基表面上往后移动时,接种环上的菌液逐渐稀释,最后在所划的线上分散着单个细胞,经培养,每一个细胞长成一个菌落。
（图4）4、富集培养法富集培养法的方法和原理非常简单。
我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长, 在这些条件下, 所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争, 在生长能力方面远远超过其他微生物。
所创造的条件包括选择最适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。
在相同的培养基和培养条件下, 经过多次重复移种, 最后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。
如果要分离一些专性寄生菌, 就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中, 使其大量生长。
通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。
图4 平板划线分离法1. 斜线法2. 曲线法3. 方格法4. 放射法5. 四格法5、厌氧法在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。
然后快速冷却，并进行接种。
接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。
另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。
有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。
三、培养微生物的生长，除了受本身的遗传特性决定外，还受到许多外界因素的影响，如营养物浓度、温度、水分、氧气、PH等。
微生物的种类不同，培养的方式和条件也不尽相同。
1、影响微生物生长的因素微生物的生长，除了受本身的遗传特性决定外，还受到外界许多因素的影响。
影响微生物生长的因素很多，简要介绍如下。
1) 营养物浓度细菌的生长率与营养物的浓度有关：卩二卩max*C/(K+C),营养物浓度与生长率的关系曲线是典型的双曲线。
K值是细菌生长的很基本的特性常数。
它的数值很小，表明细菌所需要的营养浓度非常之低，所以在自然界中，它们到处生长。
然而营养太低时，细菌生长就会遇到困难，甚至还会死亡。
这是因为除了生长需要能量以外，细菌还需要能量来维持它的生存。
这种能量称为维持能。
另一方面，随着营养物浓度的增加，生长率愈接近最大值。
2)温度在一定的温度范围内，每种微生物都有自已的生长温度三基点：最低生长温度、最适生长温度和最高生长温度。
在生长温度三基点内，微生物都能生长，但生长速率不一样。
微生物只有处于最适生长温度时，生长速度才最快，代时最短。
超过最低生长温度，微生物不会生长，温度太低，甚至会死亡。
超过最高生长温度，微生物也要停止生长，温度过高。
也会死亡。
一般情况下，每种微生物的生长温度三基点是恒定的。
但也常受其它环境条件的影响而发生变化。
根据微生物最适生长温度的不同，可将它们分为三个类型：a.嗜冷微生物：其是适生长温度多数在-10 C —20C之间b.中温微生物：其最适生长温度一般在20C —45C之间c.嗜热微生物：生长温度在45 C以上。
3)水分水分是微生物进行生长的必要条件。
芽孢、孢子萌发，首先需要水分。
微生物是不能脱离水而生存的。
但是微生物只能在水溶液中生长，而不能生活在纯水中。
各种微生物在不能生长发育的水分活性范围内，均具有狭小的适当的水分活性区域。
4)氧气按照微生物对氧气的需要情况，可将它们分为以下五个类型。
a.需氧微生物：这类微生物需要氧气供呼吸之用。
没有氧气，便不能生长，但是高浓度的氧气对需氧微生物也是有毒的。
很多需氧微生物不能在氧气浓度大于大气中氧气浓度的条件下生长。
绝大多数微生物都属于这个类型。
b.兼性需氧微生物：这类微生物在有氧气存在或无氧气存在情况下，都能生长，只不过所进行的代谢途径不同罢了。
在无氧气存在的条件下，它进行发酵作用，例如酵母菌的无氧乙醇发酵。
c.微量需氧微生物：这类菌是需要氧气的，但只在0.2 大气压下生长最好。
这可能是由一它们含有在强氧化条件下失活的酶，因而只有在低压下作用。
d.耐氧微生物：这类微生物在生长过程中，不需要氧气，但也不怕氧气存在，不会被氧气所杀死。
e.. 厌氧微生物: 这类微生物在生长过程中，不需要分子氧。
分子氧存在对它们生长产生毒害，不是被抑制，就是被杀死。
2、培养方法1）根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养两大类。
好氧培养：也称“好气培养”。
就是说这种微生物在培养时，需要有氧气加入，否则就不能生长良好。
在实验室中，斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌的空气。
三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡，使外界的空气源源不断地进入瓶中。
厌氧培养：也称“厌气培养”。
这类微生物在培养时，不需要氧气参加。
在厌氧微生物的培养过程中，最重要的一点就是要除去培养基中的氧气。
一般可采用下列几种方法：a.降低培养基中的氧化还原电位：常将还原剂如谷胱甘肽、硫基醋酸盐等，加入到培养基中，便可达到目的。
有的将一些动物的死的或活的组织如牛心、羊脑加入到培养基中，也可适合厌氧菌的生长。
b.化合去氧：这也有很多方法，主要有：用焦性没食子酸吸收氧气；用磷吸收氧气；用好氧菌与厌氧混合培养吸收氧气；用植物组织如发芽的种子吸收氧气；用产生氢气与氧化合的方法除氧。
c.隔绝阻氧：深层液体培养；用石蜡油封存；半固体穿刺培养。
d.替代驱氧用二氧气碳驱代氧气；用氮气驱代氧气；用真空驱代氧气；用氢气驱代氧气；用混和气体驱代氧气。
2）根据培养基的物理状态，可分为固体培养和液体培养两大类。
固质培养：是将菌种接至疏松而富有营养的固体培养基中，在合适的条件下进行微生物培养的方法。