测序技术
基因测序技术的流程和方法
基因测序技术的流程和方法首先是样本采集，样本可以是血液、组织、唾液等。
对于人类基因组测序项目，通常采集血液样本，而对于微生物基因组测序项目，通常采集组织或其他有机体的样本。
第二步是DNA或RNA提取。
DNA提取主要通过裂解细胞膜和核膜，使DNA释放出来，随后经过适当的处理和纯化步骤，得到纯净的DNA样本。
对于RNA提取，主要是通过裂解细胞膜和核膜，并加入酶进行降解DNA的同时保护RNA，接着通过反转录酶进行反转录合成cDNA，并随后用DNA聚合酶合成双链cDNA。
DNA或RNA的提取过程需要精确操作，以保证样本的质量和浓度。
第三步是文库构建。
文库是指将提取的DNA或RNA样本进行文库构建，将其切割成小片段，然后连接上适当的接头序列。
接头序列的引入是为了辅助后续测序反应的进行，并便于序列分析，还会加入各种引物和适配体用于测序反应。
文库构建过程中，还可能利用PCR技术进行扩增，以获得足够多的DNA或RNA的拷贝数目。
第四步是测序。
测序是基因测序技术中最核心的步骤。
目前主要有两种测序方法，即链终止法和串联式单分子测序法。
链终止法即Sanger测序法，是一种经典的测序方法。
其原理是利用DNA聚合酶合成互补链，并在酶合成时向链中插入特殊的二氧化氮核苷酸（ddNTPs），这些ddNTPs不能进一步合成，同时会以一定比例终止链的延伸。
通过对反应体系中形成的DNA分子进行多个PCR循环，然后将其在凝胶中进行电泳分离，即可得到DNA片段的序列信息。
串联式单分子测序法则是近年开发出的新技术，代表性的有Illumina的测序技术。
其原理是首先将DNA片段固定在流动细胞的底物上，并引入引物和酶，以序列为模板合成新的DNA链。
随后引入荧光染料及激发光源，并使用高灵敏的CCD摄像机进行荧光成像。
然后，荧光染料被化学处理，使其发光的荧光基团被移去，让新的DNA链继续合成。
这一过程不断重复，记录下每一个核苷酸在每个位点上的序列信息。
二三代测序技术的介绍和比较
二三代测序技术的介绍和比较二代测序技术（也称为高通量测序技术）和三代测序技术是目前最常用的两种DNA测序技术。
下面将对这两种技术进行详细介绍和比较。
1.二代测序技术：二代测序技术的代表性平台包括Illumina HiSeq、Ion Torrent PGM 等。
其工作原理是将DNA样本切割为较短的片段，并通过PCR扩增产生大量的拷贝。
然后，这些片段被连接在测序芯片上，每个片段都被反复地鸟嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、胞嘧啶（C）、鸟嘧啶（G）四种碱基中的一种互补的碱基识读，并记录下与之相对应的碱基序列。
这些碱基序列最后被计算机软件组装为完整的DNA序列，进而获取样本的遗传信息。
优点：（1）高通量：可以同时测序数百万个DNA片段，获得庞大数量的数据。
（2）成本低廉：通过并行测序的方式，可以大大减少测序成本。
（3）高精度：二代测序技术的错误率较低，可以达到0.1%以下。
（4）测序速度快：每天可获得几百GB的数据。
缺点：（1）仅适用于短序列：由于二代测序技术的局限性，只能测序相对较短的DNA片段，对于长序列的测序存在困难。
（2）高度依赖参考序列：在组装过程中，需要有可靠的参考序列作为基础，否则可能出现组装错误。
（3）无法解析复杂的基因组结构：由于只能产生相对较短的序列片段，二代测序技术无法很好地解析复杂的基因结构，例如重复序列。
2.三代测序技术：三代测序技术的代表性平台包括PacBio SMRT、Oxford Nanopore等。
三代测序技术的特点是可以直接测量DNA单分子的临床序列。
该技术中的样本DNA被引入到小孔中，随后测序设备会通过测量DNA分子在小孔中的电信号变化来捕捉和记录碱基序列。
这种技术可以完整地获取较长的DNA片段，从而提供了更全面和准确的基因组信息。
优点：（1）长读长：能够测序较长的DNA片段，可以获得更全面和准确的基因组信息。
（2）无需参考序列：三代测序技术不需要依赖已知的参考序列，可以直接解析未知基因组。
测序技术介绍范文
测序技术介绍范文测序技术是指对DNA或RNA进行高通量、高速度的测序的一系列技术方法。
通过测序技术，科学家们可以了解并研究生物体的基因组结构、组成与功能。
随着测序技术的不断发展，测序速度提高，成本降低，已经成为生命科学研究的基础工具之一、本文将介绍几种常见的测序技术，包括Sanger测序技术、Illumina测序技术、454测序技术和Ion Torrent测序技术。
首先介绍Sanger测序技术，这是最早的测序方法之一、Sanger测序技术基于DNA合成反应的原理，通过使用一种特殊的DNA聚合酶和一种缺失的核酸，使得DNA合成过程在特定的位置停止。
通过多次进行这种反应，可以得到一系列不同长度的DNA片段。
这些DNA片段经过电泳分离后，通过读取末端标记的DNA片段的大小和位置，可以确定DNA序列。
Sanger测序技术准确性较高，但是速度较慢，成本较高。
随着生物技术的发展，诞生了新一代测序技术，其中最常用的是Illumina测序技术。
Illumina测序技术基于DNA合成过程中的降解原理，使用一种特殊的核酸链终止剂，在每个合成周期结束时，会出现一个特定的降解残基。
然后，使用荧光标记的核酸链终止剂使DNA片段断裂，合成过程被停止。
所有这些反应同时进行，最终获得大量不同长度的DNA片段。
这些DNA片段经过测序仪读取后进行拼接和比对，可以得到原始DNA序列。
Illumina测序技术具有高通量、高灵敏度和高准确性的特点，广泛应用于基因组学、转录组学和表观基因组学等领域。
另一种常见的测序技术是454测序技术，它是基于荧光检测的单分子测序。
在454测序技术中，会将DNA样本切割成小片段，并与荧光标记的核苷酸引物进行结合。
这些DNA片段在PCR反应中被扩增成多个拷贝，并且附在一种特殊的载体上。
然后这些DNA片段会被分离并夹杂在一种微小的水滴中，每个水滴里只有一个DNA片段。
然后，这些水滴经过荧光探测仪的检测，可以测定每个水滴中DNA片段的长度和序列，并得到大量的数据。
检测方法介绍——测序法
检测方法介绍——测序法测序法是一种用于确定DNA或RNA序列的分析方法。
它可以揭示基因组的组成和结构，以及研究基因变异和分析基因功能。
随着技术的不断进步，测序法也不断发展，从最早的Sanger测序到现在的高通量测序技术，为我们提供了更多的分析信息和更准确的结果。
Sanger测序是最早被广泛使用的测序方法之一、它基于离子交换层析技术，通过添加一种特殊的人工合成核苷酸，即二氨基苯基-二氢氧化呋咯核苷酸（ddNTP）来终止引物的延伸。
不同的ddNTP标记有不同的荧光染料，使得被终止的DNA片段可以通过毛细管电泳分析。
这种方法可以测序几百至几千个碱基对（bp）的DNA序列，并被广泛应用于DNA测序、基因组学等领域。
然而，随着基因组学的迅速发展，需要更快、更高通量的测序技术来满足大规模基因测序的需求。
于是，短序列测序技术随之发展起来。
其中，最有代表性的技术是Illumina的测序技术。
它使用的是桥式放大技术，通过将DNA片段固定在玻璃芯片上，并进行反复的扩增和合成过程，在每一次合成时加入荧光标记的核苷酸。
最后，通过激光将荧光信号读取出来，并基于同向同色邻近法分析序列。
这种技术可以在较短的时间内测得上百万个碱基对的序列，成本低廉，是目前最常用的测序方法之一近年来，第三代测序技术也逐渐崭露头角。
相较于传统的测序技术，第三代测序技术具有更快、更准确和更经济的特点。
其主要原理是将单个DNA分子拉伸到液晶或纳米孔等微米尺度的通道中，通过测量DNA链中的碱基单位传导性或发射性质来检测碱基序列。
这种技术能够在短时间内快速测序整个基因组，且无需进行PCR扩增和荧光标记，减少了测序偏差。
目前市面上常见的第三代测序技术有Pacific BioSciences的SMRT测序、Oxford Nanopore的纳米孔测序等。
除了以上几种常见的测序技术外，还有一些其他测序方法。
例如，454测序技术是基于DNA逐个串联并DNA聚合酶扩增的原理，将多个相同的DNA模板串联在一起，并对其进行扩增和测序，以获得长序列信息。
测序技术原理(一)
测序技术原理(一)测序技术简介测序技术是指以某种方式对DNA或RNA的顺序进行测定的方法。
随着测序技术的不断发展和完善，其应用范围也越来越广泛，如基因组测序、转录组测序等。
测序技术的分类测序技术按照不同的原理和方法可以分为以下几种：•Sanger测序：通过链终止法将DNA序列依次测定出来的方法；•下一代测序（NGS）：通过并行测序等技术同时测序数万甚至数百万条DNA片段；•单分子测序：通过单个DNA分子的测序来得出DNA序列。
Sanger测序原理Sanger测序是测序技术的第一种方法，也被称为经典测序技术。
其原理是通过DNA合成过程中的链终止以及聚合酶链反应（PCR）来将DNA 分成一系列不同长度的断片，并利用含有不同颜色荧光标记的特异性末端标记引物进行扩增和测序。
下一代测序原理下一代测序技术相对于Sanger测序技术而言更为高效快捷。
其原理是将DNA样品在流式细胞仪上进行打碎，然后将其分解成小片段，进行PCR扩增和连接至适当的载体上，最后进行大规模并行测序。
下一代测序包括Illumina、Ion Torrent、Pacific Biosciences等技术，可快速、准确、高通量地测序。
单分子测序原理单分子测序技术是测序技术的最新发展。
其通过对单个DNA分子进行测序达到高精度和高速率的目的。
单分子测序技术的原理是将单个DNA分子固定在固体表面上，在观察DNA分子的同时进行测序。
单分子测序技术包括了PacBio、Oxford Nanopore等公司和平台。
测序技术的应用随着对测序技术的深入理解和不断完善，测序技术在生物医学、环境科学、农业技术、个性化医疗等领域也得到广泛应用。
测序技术可以帮助我们更加深入地了解生命科学的一些科研难题，为人们的生活和健康提供更好的服务。
测序技术的局限性和挑战虽然测序技术在生物医学、基因组学、生态学等方面具有重要的应用价值，但其自身也存在一些局限性和挑战。
其中包括：•长读长的区域往往难以准确测序；•目前的测序技术难以处理高度重复的序列；•在一些特定的应用环境中，如病毒检测等，对数据的准确性和实时性要求很高。
新一代测序技术及其应用
新一代测序技术及其应用随着生物学研究的不断深入和发展，人们对DNA和RNA的研究日益重要，而其中基因测序技术的发展又是关键一环。
作为基因测序技术的最新进展，新一代测序技术已然成为现代生物技术领域的热点之一。
新一代测序技术是什么？新一代测序技术又称为高通量测序技术，是相对于传统Sanger 序列测序技术而言的。
通过采用不同的测序平台和方法，这种技术可以实现基因组、转录组、表观基因组的快速高通量测序。
新一代测序技术的特点？新一代测序技术相对于传统测序技术具有以下几个特点：高速：新一代测序技术的最大优势就是速度快，能够实现同步并行测序，一个测序流程可以同时进行多个测序。
可扩展：实现新一代测序技术的仪器硬件具有高度的扩展性，可以根据实际需要进行扩展。
低成本：相对于传统测序技术，新一代测序技术的成本更低，可以实现更广泛的应用。
高灵敏度：其高灵敏度能够检测到大量的生物小分子。
高分辨率：新一代测序技术的高分辨率能够检测到更多的生物多样性。
新一代测序技术的应用由于新一代测序技术在多个方面具有技术优势，目前已经广泛应用于医学、生物学、农学、生物工程和环境科学等领域。
基因组测序：新一代测序技术支持对大型基因组进行全基因组测序，快速检测并诊断人类基因疾病，推动个性化医疗的发展，为传染病研究提供基础数据，并揭示生物多样性。
转录组测序：新一代测序技术可以研究基因表达量、信号途径、蛋白质质量等重要信息，以帮助生物学家对基础生物过程进行分析和解释。
表观基因组测序：新一代测序技术可以研究DNA甲基化、组蛋白修饰和其他表观遗传现象，从中了解癌症发生机制、生物进化和环境适应。
配合CRISPR/Cas9基因编辑技术等高端技术，新一代测序技术又可以为药物研究提供快速的基础数据，成为发掘新药研发领域的基础技术。
结论新一代测序技术的快速发展，推动了生物学科学研究的进一步发展，为人们提供了更多及更好的研究手段。
它的应用领域越来越广泛，相信未来，新一代测序技术会带来更多的惊喜和突破。
基因诊断中测序技术的应用及优缺点
基因诊断中测序技术的应用及优缺点一、概述基因诊断，作为现代生物医学领域的一项重要技术，正逐步改变我们对人类遗传性疾病和复杂病症的认知。
测序技术作为基因诊断的核心手段，发挥着至关重要的作用。
测序技术通过直接对DNA或RNA 序列进行测定，能够精准地揭示个体的遗传信息，进而为疾病的预防、诊断和治疗提供有力支持。
随着科技的不断进步，测序技术也在不断更新换代，从早期的第一代测序技术，到如今的第二代、第三代测序技术，其测序速度、准确性和成本效益都得到了显著提升。
这些技术的发展，使得基因诊断的应用范围越来越广，不仅限于遗传性疾病的诊断，还逐渐扩展到肿瘤、心血管疾病、感染性疾病等多个领域。
测序技术在基因诊断中的应用也并非尽善尽美。
其优缺点并存，使得在实际应用中需要谨慎权衡。
优点方面，测序技术具有高度的准确性和灵敏度，能够检测到基因序列中的微小变异同时，其信息量巨大，能够为研究者提供丰富的遗传信息。
缺点也不容忽视，如测序成本较高、数据处理复杂、隐私保护问题等，都在一定程度上限制了测序技术的广泛应用。
在探讨基因诊断中测序技术的应用及优缺点时，我们需要全面、客观地分析其技术特点、应用范围及挑战，以期更好地推动其在生物医学领域的发展和应用。
1. 基因诊断的概念与重要性在《基因诊断中测序技术的应用及优缺点》一文的“基因诊断的概念与重要性”段落中，我们可以这样描述：基因诊断，即通过直接分析人类基因或基因产物来诊断疾病的方法，是现代医学领域中的一项重要技术。
它涉及对个体的基因组进行深入研究，以揭示与特定疾病相关的基因变异或异常表达。
基因诊断不仅为疾病的预防、早期发现和治疗提供了有力支持，还极大地推动了个性化医疗的发展。
基因诊断的重要性在于其能够提供精准、可靠的疾病诊断信息。
通过基因测序等技术，医生能够直接检测到与疾病相关的基因变异，从而明确疾病的遗传背景和发病机制。
这有助于实现疾病的早期发现和干预，提高治疗效果，降低医疗成本。
高通量测序技术简介
高通量测序技术简介近年来，随着生物技术的发展，高通量测序技术在生物学研究、临床医学、农业科技等众多领域中发挥着越来越重要的作用。
本文将为读者简单介绍高通量测序技术的基本原理、应用及未来发展方向。
一、高通量测序技术基本原理高通量测序技术（High-Throughput Sequencing，简称HTS）是指通过同时测序数以亿计上万条DNA片段的方法，快速准确地得出基因信息。
其核心技术包括样品制备、DNA片段库构建和测序。
样品制备主要包括DNA抽提、纯化和切割等步骤。
DNA片段库构建通常分为两种方式：文库构建（Library Preparation）和逆相PCR法（Inverse PCR）构建。
其中文库构建方法包括Genomic DNA文库构建、cDNA文库构建和ChIP-seq文库构建等。
测序分为Sanger测序和第二代/第三代测序两种。
目前，Illumina、Ion Torrent、PacBio和Nanopore等公司的测序技术已开始广泛应用。
二、高通量测序技术的应用高通量测序技术在生物领域中的应用越来越广泛。
具体应用包括以下几个方面：1、基因组学：基因组学是高通量测序技术最早应用的领域之一。
通过对整个基因组进行测序，可以深入研究基因的结构、组织与表达等方面的信息，促进基因组学的发展。
2、转录组学：高通量测序技术在转录组学中的应用主要为RNA测序，可以发现RNA剪切变异、可变外显子和SNPs （Single Nucleotide Polymorphisms）等。
3、表观基因组学：表观基因组学是研究基因组DNA序列和其组杂化状况的学科。
高通量测序技术可以对DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质状态等进行充分研究。
4、单细胞测序技术：在原有的基础上，在单细胞尺度上进行分析，可以识别不同类型的单细胞和细胞异质性在不同生理状态下的基因表达差异。
5、临床医学：高通量测序技术在临床上可以进行新生儿常染色体脆性综合征、癌症个性化治疗、基因疾病等多方面的风险评估。
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非凝胶基质毛细管电泳
为避免 CGE 存在的问题，非凝胶基质毛细 管电泳用于DNA分析的研究越来越多； 非凝胶基质：线性聚丙烯酰胺和纤维素衍 生物 非凝胶基质在 DNA 测序中可以更换，使毛 细管的寿命延迟，在优化条件下可获得高 效及高速的分离效果。
阵 列 毛 细 管 电 泳 CAE ， Capillary electrophoresis
• 2007年6月，James Watson的基因组序列登 录到了GenBank数据库当中，这是第一次使 用非Sanger测序法获得了人类个体基因组序 列，且第一次将个人基因组序列公之于众 • 整个测序在两个月之内完成，花费不到100万 美元，仅占耗时10年之久的人类基因组计划使 用经费的千分之一，Venter基因组计划费用的 百分之一
新一代DNA测序仪
循环芯片测序法
cyclic-array
sequencing
454基因组测序仪--美国Roche Applied Science公司 Illumina测序仪--美国Illumina公司和英国 Solexa technology公司合作开发 SOLiD测序仪--美国Applied Biosystems公司 Polonator测序仪--Dover/Harvard公司 HeliScope单分子测序仪--美国Helicos公司
一个4Mb基因组和3个6Mb基因组测序 • 传统的Sanger测序法：需要好几个月的时间， • 454测序仪，一位实验人员，包括样品制备等 步骤在内所用的时间仅需要一周 • 使用454测序仪还避免了传统测序方法中细菌 克隆阶段可能出现的错误，获得了高质量的测 序结果 • 发现了导致结核分枝杆菌对R207910产生抗药 性的两个点突变位点，此研究成果使得人类最 近的40年内第一次找到了特异性治疗结核病的 药物
新型纳米孔测序技术 •采用电泳技术，借助电泳驱动单个 分子逐一通过纳米孔实现测序 •核酸分子中每一个核苷酸通过孔道 时出现一种特定形式的电流改变，通 过分析电流改变确定核酸序列
• 目标：10年内完成1,000美元检 测个人基因组 • 美国国家人类基因组研究所 （NHGRI），已经给纳米孔测 序研究提供了多次经费支持
经典方法
双脱氧链终止法(Sanger&Coulson1977) 化学降解法(Maxam 和Gilbert,1977) 杂交测序法 质谱法
新技术方法
单分子测序法
原子探针显微镜测序法
流式细胞仪测序法
大规模平行实测法
Maxam-Gilbert DNA化学降解法(Maxam 和 Gilbert，1977) Sanger双脱氧链终止法（Sanger和Coulson， 1977）
合成测序法的两种策略 •循环可切除终止测序法（cyclic reversible termination technology）：依次逐个添加荧 光标记的碱基，继而检测荧光信号，切除荧光 基团，如此往复； •焦磷酸测序法：通过检测碱基掺入时发出的光 来进行测序，无需电泳分析， 454基因组测序仪
454测序仪的先行者地位 • Leamon、Rothberg等人撰写的一篇 介绍该技术的论文被引用了570多次 • 100多篇经过同行审议的关于人类遗传 学、代谢组学、生态学、进化学以及 古生物学的论文（peer-reviewed publications）都是使用454测序仪开 展的研究
双脱氧链终止法的测序基础是以双脱氧核苷三磷 酸为测序反应的链终止剂。
dNTP
P P P
OH
P P P
OH ddNTP
OH
OH
双脱氧链末端终止法 测序原理示意图
二、测序反应体系的组成
（一）待测模板
1．单链模板DNA
Sanger 法经典测序反应 -- 将待测 DNA 片段克隆于 M13mp 载 体中，得到单链的DNA模板，再按Sanger法进行测序。 将待测的 DNA 片段克隆到质粒载体上，得到含待测 DNA 克 隆片段的双链质粒，经碱变性处理，与寡核苷酸引物序 列退火，按Sanger法进行测序； PCR产物
DNA杂交测序法 第二代测序技术 第三代测序技术 测序技术应用
经典测序技术
Maxam-Gilbert DNA化学降解法(Maxam 和 Gilbert，1977) Sanger双脱氧链终止法（Sanger和Coulson， 1977）
1970年发明了第一种DNA测序方法
Maxam-Gilbert化学分析法 1977年哈佛大学A.M.Maxam和W.Gilbert发明 原理： 化学试剂处理末端放射性标记的DNA片段， 造成碱基的特异性切割 产生一组具有不同长度的DNA链混合物
2.循环测序
3.电泳与结果分析
染料受测序仪氩离子激光激发而发射出特定光谱的 四种不同颜色的荧光； 测序仪的专用激光扫描镜头实时扫描不同大小的DNA 片段在相应时间通过垂直电泳胶读数区时发射的荧 光，将不同大小DNA片段发射的荧光实时地传递给计 算机测序数据实时收集软件； 电泳结果转换成胶图文件及原始数据信号； 当电泳完毕后，DNA序列分析软件通过分析胶图文件 及原始数据信号，得到最终的测序结果； 1,000bp的DNA片段，准确率高达99.999%，费用约 0.5美元/1,000个碱基。
（五）测序产物的凝胶电泳及识读
能否将测序反应中产生的各种不同长度的DNA片 段进行有效分离是序列分析成败的关键。
三、Sanger双脱氧链终止法的特点
1.快速简便，一次反应可测500个以上的碱 基序列； 2. 荧光染料代替放射性核素标记，使该法 便于实现自动化分析，能够满足绝大多 数DNA样品序列分析的需要。
一、基本原理
二、测序反应体系的组成
三、双脱氧链终止法的特点 四、毛细管电泳 五、DNA自动化测序
一、基本原理
单链DNA模板、DNA合成引物、
DNA聚合酶 以单链DNA为模板，合成出准确 的DNA互补链 能够利用2’，3’-双脱氧核苷三磷酸 作底物，参入到寡核苷酸链的3’末端，DNA链延长终止
第 二 章 基 因 组 研 究 技列测定 重组DNA技术
基因组测序
•一、测 序 技 术 •二、基因组测序策略 •三、基因组图谱构建
人类基因组计划（Human Genome Project－ HGP）于1990年正式启动，其主要目标有：识别 人类DNA中所有基因（超过10万个）；测定组成 人类DNA的30亿碱基对的序列；将这些信息储存 到数据库中；开发出有关数据分析工具；致力于 解决该计划可能引发的伦理、法律和社会问题。 人类基因组计划是当代生命科学一项伟大的 科学工程，它奠定了21世纪生命科学发展和现代 医药生物技术产业化的基础，具有科学上的巨大 意义和商业上的巨大价值。
通用引物长度：一般为15～30个核苷酸。
（三）DNA聚合酶
1．大肠杆菌DNA聚合酶I大片段（Klenow片段）： Sanger法最早 使用的酶，具有5’→3’聚合酶和3’→5’外切酶活性，催化链延伸 反应的能力较差，用它进行测序常产生较高的本底和假带； 2 ．测序酶（ sequenase ）：经过修饰的 T7 噬菌体 DNA 聚合酶，消 除了3’→5’外切酶活性。酶活非常稳定，很高的链延伸能力和 极快的聚合反应速度，测定较长DNA的首选酶；
四、毛细管电泳CE , Capillary electrophoresis
以高压直流电场为驱动力，在毛细管内使 带电粒子按淌度或分配系数进行分离的一 种电泳技术。 优点：分辨率高、重现性好、灵敏度高、 快速、自动化。 毛细管凝胶电泳 非凝胶基质毛细管电泳
阵列毛细管电泳
毛细管凝胶电泳CGE，Capillary gel electrophoresis
经凝胶电泳分离和放射自显影，读出待测 DNA片段的核苷酸序列
Sanger双脱氧链终止法
Sanger 于 1977 年在加减法测序的基础上创建 了 双 脱 氧 链 末 端 合 成 终 止 法 （ chain termination method ），简称 Sanger 法、双 脱氧法或酶法。
Sanger双脱氧链终止法
激光测序法终止标记系统测序原理示意图
测序仪原理
1.荧光标记
BigDye Terminators--美国应用生物系 统公司专利，四色荧光分别标记的起链 终止剂作用的四种ddNTPs； 一个反应管中完成循环测序反应，通过 一个电泳道电泳即可完成测序任务； 传统双脱氧链终止法：四个反应管循环 测序反应，四个泳道电泳检测。
• 454测序仪最初的技术参数（每次可以获 得两千万碱基序列，测序长度100bp，准 确率96%） • James Watson测序时的技术参数（一亿 碱基序列，250bp，99%） • 个体基因组测序的费用由100,000美元降 低到10,000美元，继而降低到1,000美元 甚至更低
第三代测序技术—
五、DNA自动化测序
激光测序法终止标记系统
用4种不同的荧光染料标记不同的ddNTP；
测序反应在同一反应管内进行，无需分成4管； 反应产物按终止位置的碱基不同其 3’ 末端带有不同 的荧光基团，被激发后产生不同的荧光； 反应产物加样于凝胶的同一加样孔，电泳分离后， 经过DNA测序仪分析系统识别，将检测信号不断传送 到计算机，通过软件分析，自动读出待测DNA的全部 核苷酸序列。
377型遗传分析仪
310型遗传分析仪
3100遗传分析仪
3730遗传分析仪
DNA杂交测序（sequence by hybridization） SBH 原理：如果一段短的DNA探针能够与较长的 靶DNA片段杂交，并形成完全的双链分子， 可据此推断靶DNA序列相对应的互补序列 步骤：