醇法提取荷叶中总黄酮的工艺研究
超声提取荷叶黄酮工艺研究_丁芳林
利用荷叶, 本文采用超声萃取方法, 研究了荷叶黄酮 的提取工艺。
1 材料与方法
1. 1 主要仪器和试剂
仪器: SB 5200DTD 超声波清洗机( 宁波新芝科 技股分有限公 司) ; 岛津 UV120 02 紫外可 见分光 光度计 ( 日本岛津公司) ; DHG- 9240A 恒温干燥箱 ( 上海精宏实验设备有限公司) ; 旋转蒸发器( 上海亚 荣生化仪器厂) ; 真空干燥仪; FW100 粉碎机; 上海雷 磁 pHS- 29 型酸度计。
第6 期
丁 芳林等: 超声提取荷叶黄酮工艺研究
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2. 4 料液比对荷叶黄酮提取率的影响
取干燥荷叶粉 2 g, 乙醇浓度 50% , 超声时间为 20min, 调整 料液 比, 测定 荷叶 黄酮 含量 , 结 果 见 图 4。图 4 横坐标 1、2、3、4、5 对应乙醇体积分别
图 3 超声温度对荷 叶黄酮提取率的影响
Study on Extraction of Total Flavone From Lotus Leaf by Ultrasonic Wave
DING Fang- lin1, PENG Shu- lian2
( 1 Hunan Biological and Electr omechanical Polytechnic, Changsha 410127, PRC; 2 H unan Agricultural Product Pr ocessing Institute, Changsha 410125, PRC)
1. 4 正交实验设计
超声辅助萃取荷叶总黄酮工艺的研究
超声辅助萃取荷叶总黄酮工艺的研究周桃英1，罗登宏1，曹志军2(1．黄冈职业技术学院生物系，黄冈市438002；2．内蒙古农业大学职业技术学院食品科学与工程系，呼和浩特市010018)摘要：为获取荷叶总黄酮的最佳提取工艺，采用超声波提取法对荷叶总黄酮进行提取，以芦丁标准品，在波长510n m处测定吸光度，得回归方程C=0．0925A+0．0063(R=0．9996)。
通过单因素试验确定出荷叶总黄酮超声提取时较佳的提取工艺为：乙醇浓度60％～80％、料液比1：25～1：35、提取时间20～30m i n、提取温度30—40℃。
在此基础上，采用二次通用旋转组合设计优化确定出荷叶总黄酮最佳提取工艺为：按1：35的料液比加入70％乙醇溶液，浸泡4h；而后在超声波清洗器中超声提取30r ai n，超声温度40。
C，荷叶总黄酮提取率为7．47％。
利用超声波技术提取荷叶总黄酮具有提取率较高，节省时间和溶剂、能耗低等优点。
关键词：总黄酮；荷叶；超声波辅助萃取中图分类号：T S202．1文献标识码：A文章编号：1006—2513(2009)05—0074—06A s t udy about ext r act i on t ot al f l avonoi ds f r O m l ot us(N el um bo nuf i ce r a G aer t n)l eaf by ul t r as oni c as si s t ed m et hodZ H O U T ao-yi ng，L U O D eng-hong，C A O Z hi-j un(D e par t m e nt of B i ol ogy，H uangG ang V oc at i on al&T e chni c al C o l l eg e，H uan gG an g438002)A bst r a ct：Tot al f l avonoi ds f r om l ot us(N el um bo nuf i cer a G aert n)l eaf by ul t r as oni c as s is t ed ext r act i on W as s tud i e d．R u t i n be i ng us ed鹊a st and ar d t o de t er m i ne t he cont ent of f l avonoi ds by m e asur i ng t he ab sor bane e at510nm．T he r e．gr es s i on equ at i on W a s C=0．0925A+O．0063(R=0．9996)．T he bett er ext r act i on pr o cess W a s def i ned by s i n gl e f act or t es t．鹊f ol l ow i ng：60％～80％et ha nol，r aw m at er i al a nd s ol uti on r at i o W a s l：25～l：35，e xt r a ct i on t i m e20～30r ai n，e xt r act i on t e m pe r at ur e30～40℃．B ased on t he a bove condi t i o ns，t he opt i m um ext r act i on pr o cess W as obt a i ned by s i n gl e f act or t est a nd r esul t s w er e：70％e t ha nol as a sol ven t．t h e r at i o n of r a w m at er i al a nd s ol uti on l：35，soak 4b．山t r aso ni c ext r act i on30m i n a t40℃．A t l as t。
超声波协同法提取荷叶中总黄酮的研究
超声波协同法提取荷叶中总黄酮的研究作者：李海梅胡佳佳来源：《中国科技博览》2014年第03期摘要：采用超声波协同提取法对荷叶总黄酮进行提取，通过单因素试验确定最佳的荷叶总黄酮提取工艺：提取时间20min，料液比1：30，乙醇浓度60%，温度50℃，验证试验证明实际提取率为4.85%。
关键词：超声波法；荷叶总黄酮；协同提取中图分类号：P631.5荷叶为睡莲科莲属植物莲的叶。
荷叶中的黄酮类化合物主要是荷叶苷，其次是槲皮素、异槲皮素等常见的黄酮类物质。
本课题以荷叶为研究对象，利用超声波协同法提取总黄酮，从而增加荷叶的附加值，将为荷叶在食品、药品中的应用提供科学依据。
1材料与方法1.1试验材料原料：荷叶（湖北武汉）：新鲜、无污染荷叶，采摘后洗净，用烘箱60℃烘干。
主要试剂：芦丁（生化试剂，国药集团化学试剂有限公司）、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、盐酸、锌粉等均为分析纯。
1.2黄酮测定方法用NaN02-Al（N03）3-NaOH体系络合化学吸光法测定黄酮。
得到回归曲线方程：y=0.5095x+0.0019，R2=0.9997。
式中：y，提取液吸光度；x，提取液黄酮类物质浓度，mg/ml。
1.3荷叶总黄酮单因素试验与分析称取一定量的荷叶，在不同反应条件下，即处理时间、料液比、乙醇浓度、提取温度，测定总黄酮的提取率，从而比较选取最佳反应条件。
1.4荷叶总黄酮响应面分析2结果与分析2.1不同超声波处理时间对荷叶总黄酮提取率的影响称取荷叶0.2g，在料液比为1：30、乙醇浓度为60%、温度为50℃的条件下，分别对不同超声波处理时间的荷叶测定总黄酮的提取率。
从图1看出，在处理时间为20min条件下，荷叶总黄酮的提取率最高。
2.2不同料液比对荷叶总黄酮提取率的影响称取荷叶0.2g，在乙醇浓度为60%、处理时间为20min、温度50℃的条件下，分别对不同料液比的荷叶测定总黄酮的提取率，比较选取最佳料液比。
由图2可知，料液比为1：30时，荷叶总黄酮提取率最高。
建莲叶中总黄酮的浸提工艺研究
建莲叶中总黄酮的浸提工艺研究［摘要］以福建建莲鲜叶为原料，对建莲叶中总黄酮的浸提工艺进行了研究，研究结果表明70％乙醇溶液是浸提建莲叶中黄酮的较理想溶剂，最佳浸提工艺条件是：浸提温度80℃，料液比1:30，浸提次数为三次,每次2h。
［关键词］建莲叶；总黄酮；浸提莲为睡莲科水生植物(Nelumbo nuciferea Gaerth) [1]，生长在水上，别名很多：荷花、水芙蓉、芙蓉、水华、水芸、水旦，在我国南北均有分布。
建宁莲子，简称“建莲”，产于福建北部山区的建宁、建阳、浦城、崇安等县。
这些县在历史属建宁府管辖，因此，所产莲子统称为“建莲”。
在1991年11月中华人民共和国卫生部的卫监发（1991）第45号文件中，莲叶被列入第二批“既是食品又是药品”的名单之中[2]。
莲叶在食用及药用两方面均有较广泛的应用[3，4]。
黄酮类化合物是在植物中分布非常广泛的一类天然产物，是自然界药用植物中主要活性成分之一，研究表明，黄酮类化合物具有很多生理活性[5]，如抗自由基、抗衰老作用，抗癌、抗肿瘤作用，抗糖尿病及其并发症作用，此外，黄酮类化合物也是重要的功能性食品添加剂、天然抗氧化剂、天然色素[6]，并广泛应用于食品中。
目前种植建莲主要为了收获其莲子作食用，大量生长的莲叶则作为废弃物，未被适当的利用。
本文研究不同溶剂的提取效果，并通过单因素试验确定莲叶黄酮的最佳浸提工艺，为进一步分离纯化莲叶中的黄酮打下基础，对于提高建莲生产的附加值有较大的现实意义。
1材料与方法1.1材料：产自福建建宁新鲜莲叶；芦丁购自国药集团，其它试剂均为分析纯；日本岛津1700紫外可见光分光光度计。
1.2方法1.2.1莲叶黄酮提取液的制备：将干燥后的莲叶放入搅碎机中进行粉碎，过40目筛，得莲叶粉。
取定量莲叶粉放入具塞试管中，加入提取溶剂，在一定温度下浸提一定时间，趁热过滤、冷却，得莲叶黄酮提取液。
1.2.2莲叶总黄酮的测定：标准曲线的制作采用NaNO2- A1(N03)3-NaOH 显色法[7]，标准品选用芦丁。
论文-荷叶提取物工艺的研究
荷叶提取物最佳工艺的研究摘要：荷叶提取物有较好的调节血脂功效，有药理[1]研究表明其主要活性组分为荷叶生物碱、黄酮类化合物。
并且目前荷叶生物碱[2]、黄酮的需求量不断增加，但是缺少方便有效的分离分析荷叶生物碱和黄酮的方法[3]，限制了对荷叶资源进一步的开发和利用。
本实验通过对荷叶生物碱、黄酮的提取、分离纯化，寻找荷叶提取物的最佳工艺，以期为荷叶提取物的深入研究和合理开发利用提供参考。
关键词：荷叶提取物;黄酮;生物碱;分离纯化Abstract: Better regulation of blood lipid effect of the extract from Lotus leaf, pharmacological research has shown that group into the alkaloid from Lotus leaf, its main activity of flavonoid compounds. And Lotus Leaf alkaloids, flavonoids in demand now increasing, but the lack of convenient and effective method of separation and analysis of alkaloids and flavonoids in Lotus leaf, limited the further development and utilization of resources in Lotus leaf. This experiment by alkaloids from Lotus leaves, extraction, isolation and purification of the flavonoids, finding best technology of Lotus leaf extract, for in-depth research and rational development and utilization of Lotus leaf extract of reference.Key words: Lotus leaf extract; flavonoids; alkaloids; isolation and purification1.前言荷叶属睡莲科植物(Nelumbo nuxifera Gaerth)的叶片，作为一种天然、安全有效的保健食品和药物[4]，越来越受到人们的青睐。
荷叶黄酮富集纯化研究
荷叶黄酮富集纯化研究摘要：荷叶为睡莲科植物莲的千燥叶，为我国民间常用中药材，它是一种既是食品又是药品的天然植物。
本文对黄酮类化合物的结构与性质进行归纳，并对大孔树脂法分离纯化荷叶黄酮进行研究，采用最大耐受量实验，检验了荷叶的使用安全性，实验完成后所有实验动物全部健康存活，表明荷叶黄酮安全无毒。
关键词：荷叶黄酮类化合物大孔树脂分离纯化一、黄酮类化合物的结构与性质1.黄酮类化合物的结构黄酮类化合物系色原烷或色原酮的2或3苯基衍生物，泛指两个苯环通过中央三碳链相互连接而成的一系列化合物，一般具有c6一c3一c6的基本骨架结构。
黄酮类化合物是植物光合作用产生的一大类化合物，黄酮母核上有羟基、甲氧基、烃氧基等取代基，分别形成各种黄酮类化合物。
植物界中存在各种各样的黄酮类化合物，目前发现的已达上万余种。
已从多种植物提取出了黄酮类化合物，并且已从中分离出了部分单一成分。
2．黄酮类化合物的性质(1)物理性质黄酮类化合物多为结晶性固体，少数(如黄酮苷类)为无定形粉末。
一般情况下，黄酮、黄酮醇及其苷类多显灰黄～黄色，查耳酮为黄～橙黄色，而二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮类，因不具有交叉共轭体系或共轭链短，故不显色(二氢黄酮及二氢黄酮醇)或显微黄色(异黄酮)。
(2)溶解性黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态(苷和苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷)不同而有很大差异。
一般游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醇等有机溶剂及稀碱水溶液中。
(3)酸碱性黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。
由于酚羟基数目及位置不同，酸性强弱也不同，以黄酮为例，其酚羟基酸性强弱顺序依次为：7，4’一二羟基>7或4t-羟基>一般酚羟基>5一羟基。
二、大孔树脂法分离纯化荷叶黄酮荷叶粗提液中所含组分较多，不仅含有黄酮类化合物，还含有其它组分，因此必须进一步鉴定、分离纯化，大孔吸附树脂具有机械强度好、选择性好、吸附量高、解析容易、可反复使用、耐污染强等特点。
醇提法提取荷叶中总黄酮工艺条件研究_李万林
1.2.5 总黄酮含量的测定 配取定量试液和不同浓度的芦丁溶液分别同步做与硝
酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等的显色反应，然后以芦丁作为标 准 溶 液 ，用 紫 外 分 光 光 度 计 在 510 nm 处 测 定 吸 光 度 ，按 回 归 方 程 计 算 样 品 液 中 总 黄 酮 的 含 量 （mg/g）。
36
HORIZON OF SCIENCE AND TECHNOLOGY 科技视野
取率下降。 因此，提取时间 40 min 的提取效果最好。 2.1.3 温度对荷叶总黄酮提取率的影响
在提取时间 40 min 和 固 液 比 1:25 的 条 件 下 ，用 95%乙 醇按试验步骤分别处理 温 度 为 ：60、65、70、75、80 ℃，用 紫 外 分光光度 计在 510 nm 处 测 定 吸 光 度 ，计 算 总 黄 酮 类 化 合 物 的含量，结果如表 4 所示。
研究表明，黄酮类化合物中的大豆异黄酮可以显著促进 动物生长、提高动物繁殖能力、增强机体免疫力、降低饲料成 本、是安全高效的绿色饲料添加剂，在饲料中有很大的发展 前景，本试验对汉中荷叶总黄酮的提取工艺条件进行优化， 为荷叶保健食品的开发利用提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料
荷 叶 于 2013 年 7 月 中 旬 采 集 于 陕 西 省 汉 中 市 汉 台 区 。
HORIZON OF SCIENCE AND TECHNOLOGY 科技视野
醇提法提取荷叶中总黄酮工艺条件研究
李万林 钟姣姣
（陕西理工学院化学与环境科学学院）
［中 国 分 类 号 ］R284.2
［文献标识码］ B
［文 章 编 号 ］1002-8358 （2014 ）04-35-3
摘 要：为研究荷叶中总黄酮的最佳提取工艺，本试验 通过正交设计用乙醇提取荷叶中总黄酮。 结果表明，荷叶中 总 黄 酮 最 佳 提 取 工 艺 为 ：温 度 75 ℃、固 液 比 1:30、提 取 时 间 为 40 min。 在 最 佳 提 取 条 件 下 所 提 取 总 黄 酮 含 量 为 2.1329%。
醇法提取荷叶中总黄酮的工艺研究
世 ０ ８
。 ６
图 ４ 不 同反 应 时 间对荷 叶总 黄酮提 取 率 的影 响 称取荷叶 Ｏ ． ２ ｇ ， 在 浸 提温 度 ８ ０ ℃、 料液 比 １ ： ２ ５ 、 乙醇 浓 度 ６ ０ ％的 条件 下 ， 分别 测定 不 同反 应 时 间测定 荷 叶总 黄 酮含 量 。由图 ４可知 ， 通过 反应 时 间 为 ｌ ｈ时 ， 荷 叶黄 酮 提 取率 最 高 ， 因此 选 择 反应 时 间 为
荷 叶 为睡 莲 科植 物 莲 的 叶 。荷 叶 中所 含 的黄 酮类 化 合 物 ， 其 主 要成分是荷叶苷 ， 其次是槲皮素、 异槲皮素等常见的黄酮类物质。 实 验 研究 表 明 ， 黄 酮类 物质 具 有很 高 的 生物 活 性 ， 如 抗氧 化 作 用 、 抑 菌 作用 、 降 血脂 、 减 肥作 用 等｛ ” 。 本课 题 以荷 叶 为研 究对 象 ， 利 用 乙醇 提 取 法 提取 总 黄酮 ， 从 而增 加 荷 叶 的附 加值 ， 将 为荷 叶 在食 品 、 药 品 中 的应 用 提供 科学管 中 ，用 体积分数 Ｊ ∞ ∞ ∞３ ＿ Ｊ ｌ ０ ％乙醇 ∞ 叩 ∞ 印 补充至 ∞ ５ ｍ Ｌ ，分别加人 ０ ． ３ ｍ Ｌ质量分数 １ Ｏ ％硝酸铝溶 液 ， 混匀 ， 用体积分数 ３ ０ ％乙醇标定 至 刻 度线 ， 放置 １ ０ ｍ ｉ ｎ后 于 ５ １ ０ ｎ ｍ处， 以 ０号试 剂作 为空 白参 比 ， 测 定 其 吸光 度 值 。 以吸光 度 为纵 坐 标 ， 浓 度为 横 坐标 ， 绘制 标 准 曲线 ，
摘 要： 采 用 乙醇提 取 法 对荷 叶 总黄 酮进 行提 取 ， 通 过 单 因素试 验 分析 ， 确 定 最佳 的荷 叶 总黄 酮提 取 工 艺。荷 叶 黄酮 醇 法提 取 的 最佳 Ｘ － 艺是 ： 料液比 １ ： ２ ５ ， 提取时间 １ ｈ ， 提取温度 ８ ０ ％， 乙醇浓 度 ６ ０ ％， 验 证试 验证 明 实际提 取 率 为 ３ ． ８ ２ ％。 关 键词 ： 总黄 酮 ； 荷叶 ； 乙醇提 取 法
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醇法提取荷叶中总黄酮的工艺研究
采用乙醇提取法对荷叶总黄酮进行提取，通过单因素试验分析，确定最佳的荷叶总黄酮提取工艺。
荷叶黄酮醇法提取的最佳工艺是：料液比1：25，提取时间1h，提取温度80℃，乙醇浓度60%，验证试验证明实际提取率为3.82%。
标签：总黄酮；荷叶；乙醇提取法
荷叶为睡莲科植物莲的叶。
荷叶中所含的黄酮类化合物，其主要成分是荷叶苷，其次是槲皮素、异槲皮素等常见的黄酮类物质。
实验研究表明，黄酮类物质具有很高的生物活性，如抗氧化作用、抑菌作用、降血脂、减肥作用等[1]。
本课题以荷叶为研究对象，利用乙醇提取法提取总黄酮，从而增加荷叶的附加值，将为荷叶在食品、药品中的应用提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 实验设备
电热恒温水浴锅、722型分光光度计、鼓风干燥箱、电子天平、粉碎机、旋转蒸发器等。
1.2 试验材料
原料：荷叶（湖北武汉）：新鲜、无污染荷叶，采摘后洗净，用烘箱60℃烘干。
主要试剂：芦丁（生化试剂，国药集团化学试剂有限公司）；无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等均为分析纯。
1.3 黄酮测定方法[2]
用NaN02-Al（N03）3-NaOH体系络合化学吸光法测定黄酮。
用NaN02-Al （N03）3-NaOH体系络合化学吸光法测定黄酮。
准确称取芦丁标准品0.625mg，用体积分数30%乙醇定容于100mL容量瓶中，得质量浓度为0.625mg/mL的标准储备液。
分别吸取芦丁标准储备液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL分别置于0、1、2、3、4、5、6号共7支10mL具塞试管中，用体积分数30%乙醇补充至5mL，分别加入0.3mL质量分数10%硝酸铝溶液，混匀，用体积分数30%乙醇标定至刻度线，放置10min后于510nm处，以0号试剂作为空白参比，测定其吸光度值。
以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，见图1所示。
得到回归曲线方程：y=0.5011x+0.0022，R2=0.9997。
式中：y，提取液的吸光度；x，提取液黃酮类物质的浓度，mg/mL。
1.4 荷叶总黄酮单因素试验与分析
称取荷叶，在不同反应条件下，测定总黄酮的提取率，比较选取最佳反应条件。
2 结果与分析
2.1 不同细度对荷叶总黄酮提取率的影响
称取0.2g荷叶，在浸提温度80℃、料液比1：25、乙醇浓度60%、提取时间1h的条件下，分别对不同细度的荷叶测定总黄酮含量。
从图2看出，随着细度的提高，荷叶黄酮提取率不断升高。
其中，荷叶在60目和80目条件下，黄酮提取率相差不大。
综合考虑，选择粉碎60目的荷叶作为提取黄酮的原料。
2.2 不同料液比对荷叶总黄酮提取率的影响
称取荷叶0.2g，在浸提温度80℃、乙醇浓度60%、提取时间1h条件下，分别测定不同料液比的荷叶总黄酮含量。
由图3可知，随着料液比的增加，黄酮提取率增加，当料液比超过1：25后，黄酮的提取率增加幅度不大，因此，选择料液比为1：25。
2.3 不同反应时间对荷叶总黄酮提取率的影响
称取荷叶0.2g，在浸提温度80℃、料液比1：25、乙醇浓度60%的条件下，分别测定不同反应时间测定荷叶总黄酮含量。
由图4可知，通过反应时间为1h 时，荷叶黄酮提取率最高，因此选择反应时间为1h。
2.4 不同反应温度对荷叶总黄酮提取率的影响
称取荷叶0.2g，在料液比为1：25、乙醇浓度为60%、提取时间为1h的条件下，分别对不同反应温度的荷叶测定总黄酮的提取率。
由图5可知，随反应温度的升高，黄酮提取率增加，在反应温度为80℃条件下，荷叶总黄酮提取率最高。
2.5 不同乙醇浓度对荷叶总黄酮提取率的影响
称取荷叶0.2g，在浸提温度80℃、料液比1：25、提取时间1h的条件下，分别测定不同乙醇浓度下的荷叶总黄酮的提取率。
由图6可知，在乙醇浓度小于60%时，荷叶黄酮提取率随乙醇浓度的提高而增高，乙醇浓度大于60%时，提取率缓慢降低。
因此，选取乙醇浓度60%。
3 结论
采用乙醇提取法对荷叶总黄酮进行提取，通过单因素试验分析，确定最佳的荷叶总黄酮提取工艺。
荷叶黄酮醇法提取的最佳工艺是：料液比1：25，提取时
间1h，提取温度80℃，乙醇浓度60%，验证试验证明实际提取率为3.82%。
参考文献
[1]黄开颜，张志国.荷叶研究概况[J].中国药业，2008，17（11）：77-78.
[2]张蕾，乔旭光，占习娟等.超微粉碎对荷叶黄酮类物质醇提工艺的影响[J].食品与发酵工业，2006，32（11）：142-145.
[3]郭辉，罗宇倩，章华伟等.响应面法优化超声波辅助提取荷叶黄酮工艺研究[J].中国食品学报，2011，11（1）：119-125。
作者简介：何莉萍（1983-），女，汉族，硕士。