靛酚蓝_分光光度法测定胃肠道内容物中氨态...
靛酚蓝分光光度法测定氨的试验研究
靛酚蓝分光光度法测定氨的试验研究【摘要】从靛酚蓝分光光度法中所用溶剂的研究和利用坐标法和最小二乘法来综合确定Bs值的研究两个方面，对靛酚蓝分光光度法测定氨的试验研究进行分析探讨。
【关键词】无氨蒸馏水氨靛酚蓝分光光度法随着人们居住条件的日益改善，人们频繁换居所和经历多次装修。
室内空气的质量与我们的健康息息相关，因此它越来越受到人们的重视。
氨是室内空气中主要污染物之一。
室内空气中的氨主要来自建筑施工中使用的混凝土外加剂，这些含有大量氨类物质的外加齐4在墙体中随着温度等环境因素的变化而还原成氨气从墙体中释放出来。
室内空气中氨也来自于室内装修材料中的添加剂和增白剂。
人们长期接触氨，它对接触的皮肤组织都有腐蚀和刺激作用。
可以吸收皮肤组织中的水分，使组织蛋白变性，并使组织脂肪皂化。
破坏细胞膜结构。
氨被呼入肺泡进入血液，与血红蛋白结合，破坏运氧功能。
短期内吸入大量氨气后可出现流泪、咽痛、声音嘶哑、咳嗽、痰带血丝、胸闷、呼吸困难，可伴有头晕、头痛、恶心、呕吐、乏力等。
严重者可患有肺气肿、成人呼吸窘迫综合症，同时可能发生呼吸道刺激症状。
因此，空气中氨的检测和检测方法的研究很重要。
空气中氨的测定方法为靛酚蓝分光光度法。
原理：空气中氨吸收在稀硫酸中，在亚硝基铁氰化钠及次氯酸钠存在下，与水杨酸生成蓝绿色的靛酚蓝染料，根据着色深浅，比色定量。
一、靛酚蓝分光光度法中所用溶剂的研究靛酚蓝风光光度法中所用的水均为无氨蒸馏水。
无氨蒸馏水的制备方法：于普通蒸馏水中，加少量的高锰酸钾至浅紫红色，再加少量氢氧化钠至碱性。
蒸馏，取其中间蒸馏部分的水，加少量硫酸溶液呈微酸性，再蒸馏一次。
研究的动机：该试验所有溶液的配制、仪器的最后洗涤以及吸收液都要用无氨蒸馏水，并且试验的频率高，因此无氨蒸馏水的使用量很大。
而无氨蒸馏水的制备方法繁琐、耗能大、耗时长，往往是蒸馏几天的量才够一次试验使用。
并且蒸馏时为了安全起见，需要全程配备人员跟踪。
因此。
如何选择一种溶剂既能满足试验要求、又省时省力、低能耗，对于这个试验来说非常重要。
靛酚蓝分光光度法测氨标准曲线
靛酚蓝分光光度法测氨标准曲线靛酚蓝分光光度法是一种常用于测定氨含量的分析方法。
本文将介绍靛酚蓝分光光度法的原理、操作步骤、以及测定氨标准曲线的方法。
一、靛酚蓝分光光度法的原理靛酚蓝是一种有机化合物，可以与氨形成稳定络合物。
在碱性条件下，靛酚蓝与氨结合生成蓝色络合物，其吸收峰位于610 nm处。
通过测定络合物在该波长处的光吸收强度，可以确定氨的浓度。
二、操作步骤1.准备工作：清洗实验仪器、准备标准氨溶液和待测样品。
2.打开分光光度计，预热10分钟。
3.使用纯水调零：取空白比色皿，向其中加入10 mL纯水，放入分光光度计进行零点校准。
4.制备标准曲线：取一系列浓度已知的标准氨溶液，如0.1、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L，每个浓度取3个平行样品。
将这些样品分别放入比色皿中，放入分光光度计中，测定吸光度值，并制作氨浓度与吸光度的曲线。
5.测定待测样品：取待测样品，将其放入比色皿中，放入分光光度计中，测定吸光度值。
6.计算氨浓度：根据待测样品的吸光度值，利用标准曲线得出氨的浓度。
三、测定氨标准曲线的方法1.准备标准溶液：分别称取氨的标准品，加入适量的纯水溶解，并稀释到不同浓度（如0.1、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L）。
2.操作步骤同上述操作步骤中的步骤4。
3.计算吸光度：根据测定的吸光度值，绘制氨浓度与吸光度的曲线。
4.检验曲线的合理性：通过计算回归方程和相关系数来判断标准曲线的合理性，保证测定结果的准确性和可靠性。
四、标准曲线的分析与应用1.回归方程：根据实验数据，通过最小二乘法得到氨浓度与吸光度的回归方程，可以用于计算待测样品中氨的含量。
2.相关系数：通过相关系数可以评估标准曲线的拟合程度，相关系数越接近1，说明标准曲线拟合得越好。
3.误差分析：分析标准曲线上各点的误差，可以评估测定方法的精密度和准确度。
4.应用：标准曲线可以用于测定各种样品中氨的含量，例如水质监测、食品安全等领域。
靛酚蓝分光光度法测量空气中氨浓度的不确定度评定
2 . 5 5 x 10 一 2
1. 9 60
1. 3 x 10 一L Z
) 相对标准不确定度 url5(V) = u(V e V
1. 3 x 10 一 z
5
相对标准不确定度u}.z(A)
u(A)
A
5 . 8 x 10 一 4
0 . 13 2
“2 . 6 x 10 一 3
自由度 v5二00 ,
因此用靛酚蓝分光光度法测定空气中氨浓度，其测 量结果的不确定度因素有: 分光光度计的测量重复 性， 分光光度计的分辨率和温度计、 气压计、 恒流采 样器的仪器设备带入的测量不确定度及测量方法的定作出评定。 检测方法简介 在被测空间用恒流采样器采集 5L 空气， 记录采 样点的温度、 大气压， 吸收了空气中氨的稀硫酸吸收 液在亚硝基铁氰化钠及次氯酸钠存在情况下与水杨 酸生成蓝绿色的靛酚蓝染料溶液， 用分光光度计测量 其吸光度， 根据同批次试剂做出标准曲 线比 色定量。 2
2. 6 x 10 一 4
0 . 13 2
= 2. 0 x 10 一 3，
自 由度 。= 10 - 1 =90 ， 3. 3. 2 分光光度计的分辨率引人的不确定度 UV 一 1600 型分光光度计的分辨率为 0. O IA, O 由于数字式测量仪器对示值量化导致的不确定度概 率是呈矩形(均匀)分布的。
标准不确定度u(尸 = )
0. 02
标准不确定度 ， =s(A 探 (A) k)/
= u(A)
= 8 . 2 x 10 一 夕 = 2. 6 x
= 0. Ol kPa,
相对标准不确定度u," ) ,4(P
而
10 一 皱，
u(P )
尸
0. 01 10 1. 0
靛酚蓝分光光度法测定氨的试验研究
靛酚蓝分光光度法测定氨的试验研究实验步骤如下：1.实验试剂准备：需要准备的试剂包括靛酚蓝溶液、编号试剂（含有已知浓度氨的溶液）以及一系列浓度的氨溶液。
2. 校准曲线的制备：取一系列浓度已知的氨溶液，如0.5、1、2、3和4 mg/L，分别使用靛酚蓝溶液进行比色反应，并通过分光光度计测定吸光度，并将吸光度与相应氨的浓度建立校准曲线。
3.未知样品测定：取待测样品，用同样的方法进行比色反应，并测定其吸光度。
使用校准曲线可以计算出待测样品中氨的浓度。
在这个实验中，注意以下几点：1. 靛酚蓝的浓度应适当，过高或过低都会影响反应产物的稳定性和测定的准确性。
一般来说，0.5 - 2 mg/L的靛酚蓝溶液是比较适宜的。
2.样品的处理要仔细，以确保反应中不会出现影响测定结果的干扰物质。
如果可能的话，可以使用反应堵塞剂去除一些干扰物质。
3.实验条件的控制也很重要。
反应温度和反应时间对结果的准确性都有一定影响，应该在实验过程中加以控制。
除了上述要点，还有一些可能的改进方法可以提高该分析方法的准确性和可靠性：1.使用含有缓冲溶液的反应体系可以稳定反应，并提高靛酚蓝与氨的反应速率。
2.可以进行反应的放大以使得试样的吸光度落在校准曲线的线性范围内。
如果样品浓度较高，可以对样品进行适当稀释后再进行测定。
3.可以使用多次测定的方法减小误差，通过重复测定并取平均值的方法提高测定结果的稳定性。
总的来说，靛酚蓝分光光度法是一种常用于测定氨浓度的方法，通过准备校准曲线并使用比色法测定未知样品的吸光度，可以得出氨的浓度。
在实验过程中，需要注意控制实验条件、处理样品及选择合适的试剂浓度，以提高测定结果的准确性和可靠性。
靛酚蓝分光光度法测氨标准曲线
靛酚蓝分光光度法测氨标准曲线靛酚蓝分光光度法是一种常用于测定氨含量的分析方法。
它基于靛酚蓝与氨形成深蓝色络合物的特性，利用分光光度计测定络合物的吸收光强度来计算样品中氨的浓度。
首先，我们需要准备一系列含有已知浓度氨的标准溶液。
可以通过稀释浓度已知的氨溶液来制备一系列浓度递增的标准溶液。
标准溶液通常以ppm表示，即溶液中氨的质量分数。
制备好标准溶液后，我们就可以开始绘制氨标准曲线了。
为了绘制氨标准曲线，我们需要使用不同浓度的标准溶液进行测量，并记录下吸光度和对应的氨浓度。
通常，我们会选择至少5个不同浓度的标准溶液，以便获得较好的曲线拟合效果。
在进行测量之前，我们需要调整分光光度计的工作条件。
首先，选择适当的测试波长，一般为630nm，这是靛酚蓝的最大吸光度波长。
然后，调整仪器的零位，确保在没有样品时读数为零。
最后，使用一块透明的石英玻璃或玻璃杯作为空白对照，将其放入仪器中进行调零。
开始测量之前，我们需要将待测样品进行适当的处理。
对于液态样品，直接取适量加入合适的试剂，使其与靛酚蓝反应生成络合物。
对于固态样品，可以先将其溶解于适量溶剂中，然后按照液态样品的处理方法进行操作。
开始测量吸光度时，我们首先读取空白对照的吸光度。
然后，依次读取标准溶液和待测样品的吸光度，并将其记录下来。
为了减少误差，每个浓度的标准溶液和待测样品至少测量3次，并取平均值。
同时，应注意避免操作时发生时间上的偏差，以免影响测量结果。
完成测量后，我们可以绘制氨标准曲线了。
将吸光度数据沿x轴表示氨浓度，沿y轴表示吸光度，即光强度。
在一坐标系中绘出吸光度与氨浓度之间的关系，并拟合出一条曲线。
通常，线性回归方法被广泛用于拟合曲线。
使拟合曲线的拟合程度较好，对于后续的样品测量结果的准确性有很大的影响。
得到氨标准曲线后，我们就可以根据待测样品的吸光度值来确定其中氨的浓度。
将待测样品的吸光度值代入氨标准曲线中，通过插值或外推的方法，即可得到样品中氨的浓度。
靛酚蓝分光光度法测定室内空气中氨浓度的不确定度评定
体的上呼吸道有刺激 和腐蚀作用 ， 还能使组织蛋 白变 性 ， 脂 肪 皂 化 ， 坏 细 胞 膜 结 构 减 弱 人 体 对 疾 病 的 使 破
抵抗 力 。长期 接触 氨 气 会 出现 流 泪 、 痛 、 闷、 吸 咽 朐 呼
空 白样 品 的吸光 度 ；
被测样 品 的吸光 度 ； 标 准状态 下 空 白样品 和 被测 样 品 的体 积 （ ） Ｌ
１ 测 量对象
（ 同步 测定 时空 白样 品 和 被测 样 品 的环 境 条件 可 视 为
相 同， 因此 标 准状态 下 的体积 也相 同） 。
Ｖ ＝ ２ ３ （ ７ ｆ Ｐ Ｐ ｏ ７ ／ ２ ３＋ ） ／ ｏ
式 中 ： 一 实 际状 态下样 品 的体积 （ ） Ｌ；
ｆ 实 际状态 下温 度 （（） 一 ｃ ； ＝ 实 际状态 下 大气 压力 （ Ｐ ） ｋａ ；
一
民用建筑 工 程 室 内空 气 中 的 氨检 测 依 据 ： 民用 《
标 准状态 下 大气 压力 （ Ｐ ） ｋａ 。
建 筑工 程 室 内 环 境 污 染 控 制 规 范 》 Ｂ ０ ２ Ｇ ５ ３５—２ ０ ０１ （０ ６年 版 ） 公 共 场 所 空 气 中 氨 测 定 方 法 》Ｇ ／ ２０ 《 Ｂ
一
一
困难 ， 严重 者也 可发 生 呼 吸 困难 、 水 肿 、 肺 昏迷 甚 至 休
克 。随着 社会 生活水 平 的提 高 ， 人们 越 来 越 重 视 室 内 的环境 质 量 ， 而也 越 来越 重 视 室 内空 气 检 测 的 结果 从 的可靠 性 。测量 不确 定 度 就是 评 定 测 量水 平 、 定 测 判 量结果 质量 的指标 。
样仪 流 量计 的 示 值 误 差 产 生 的不 确 定 度 和采 样 仪 时 问显 示误 差产 生 的不确 定度 。
靛酚蓝分光光度法测定空气中氨浓度的影响因素
靛酚蓝分光光度法测定空气中氨浓度的影响因素摘要：本研究将对靛酚蓝分光光度法测定空气氨浓度实验的实验条件进行研究和分析，探讨实验活动中，显色湿度、显色时间、入射光波长、显色剂用量等变量对实验结果的影响情况。
关键词：靛酚蓝分光光度法；氨浓度测定；影响因素一、引言氨是一种常见的有机气体，广泛存在于自然界中。
空气中的氨浓度的准确测定对于环境监测、工业安全和健康保护等方面具有重要意义。
传统的氨浓度测定方法主要包括化学分析和物理分析两种。
化学分析方法通常使用酸碱滴定法、电化学法等，但这些方法操作复杂，耗时长，且对样品处理要求较高。
物理分析方法主要包括红外吸收法和质谱法等，这些方法具有高灵敏度和快速响应的特点，但设备昂贵，操作复杂[1]。
靛酚蓝分光光度法是一种新兴的氨浓度测定方法，近年来备受关注。
该方法通过将空气中的氨与稀硫酸吸收，通过比色定量来测定氨的浓度。
本研究基于这一原理，对靛酚蓝分光光度法在测定空气中氨浓度方面进行了深入研究，并探讨了各种相关变量对氨浓度检测结果的影响。
在研究中，我们发现靛酚蓝分光光度法具有许多优点。
比如，该方法操作简便，不需要复杂的仪器设备，适用于实验室和现场环境，我们还发现了一些影响氨浓度检测结果的关键变量，研究分析如下。
二、实验研究（一）实验仪器、试剂由上海精密科学仪器有限公司生产的7230G型可见分光光度计、水杨酸、次氯酸钠、亚硝基铁氢化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、硫酸、无氨蒸馏水。
（二）实验方法采用“靛酚蓝分光光度法”进行实验。
靛酚蓝分光光度法是一种常用的分析方法，用于测定溶液中靛酚蓝的浓度。
其原理基于溶液中物质对特定波长的光的吸收。
靛酚蓝是一种有机染料，它在可见光区域有吸收峰。
在分光光度法中，使用一台分光光度计，该仪器可以发射出可见光的各个波长，并测量通过溶液后的光强度。
步骤如下：采集空气样品：使用氨气采样器采集公共场所空气中的样品。
样品处理：将采集到的样品经过处理，去除干扰物质。
靛酚蓝分光光度法测定氨的试验研究
靛酚蓝分光光度法测定氨的试验研究作者：阎立芹来源：《中国校外教育·理论》2012年第02期【摘要】从靛酚蓝分光光度法中所用溶剂的研究和利用坐标法和最小二乘法来综合确定Bs值的研究两个方面，对靛酚蓝分光光度法测定氨的试验研究进行分析探讨。
【关键词】无氨蒸馏水氨靛酚蓝分光光度法随着人们居住条件的日益改善，人们频繁换居所和经历多次装修。
室内空气的质量与我们的健康息息相关，因此它越来越受到人们的重视。
氨是室内空气中主要污染物之一。
室内空气中的氨主要来自建筑施工中使用的混凝土外加剂，这些含有大量氨类物质的外加齐4在墙体中随着温度等环境因素的变化而还原成氨气从墙体中释放出来。
室内空气中氨也来自于室内装修材料中的添加剂和增白剂。
人们长期接触氨，它对接触的皮肤组织都有腐蚀和刺激作用。
可以吸收皮肤组织中的水分，使组织蛋白变性，并使组织脂肪皂化。
破坏细胞膜结构。
氨被呼入肺泡进入血液，与血红蛋白结合，破坏运氧功能。
短期内吸入大量氨气后可出现流泪、咽痛、声音嘶哑、咳嗽、痰带血丝、胸闷、呼吸困难，可伴有头晕、头痛、恶心、呕吐、乏力等。
严重者可患有肺气肿、成人呼吸窘迫综合症，同时可能发生呼吸道刺激症状。
因此，空气中氨的检测和检测方法的研究很重要。
空气中氨的测定方法为靛酚蓝分光光度法。
原理：空气中氨吸收在稀硫酸中，在亚硝基铁氰化钠及次氯酸钠存在下，与水杨酸生成蓝绿色的靛酚蓝染料，根据着色深浅，比色定量。
一、靛酚蓝分光光度法中所用溶剂的研究靛酚蓝风光光度法中所用的水均为无氨蒸馏水。
无氨蒸馏水的制备方法：于普通蒸馏水中，加少量的高锰酸钾至浅紫红色，再加少量氢氧化钠至碱性。
蒸馏，取其中间蒸馏部分的水，加少量硫酸溶液呈微酸性，再蒸馏一次。
研究的动机：该试验所有溶液的配制、仪器的最后洗涤以及吸收液都要用无氨蒸馏水，并且试验的频率高，因此无氨蒸馏水的使用量很大。
而无氨蒸馏水的制备方法繁琐、耗能大、耗时长，往往是蒸馏几天的量才够一次试验使用。
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表 1 氨态氮工作曲线的制定
Tab. 1 Establishment of linear work curve of N H4+ 2N
试剂 对照
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
溶液 A/ mL 5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
溶液 B/ mL 5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
标准液/μL 0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
0. 321
0. 353
0. 333
0. 372
0. 345
0. 379
0. 336
0. 371
Abstract : The impact facto r s of determinatio n of N H4+ 2N co ntent in gast rointestinal co ntent s were
screened wit h indop henol blue spect rop hoto met ric met hod. The result s showed t hat t he optimum factor s were reactio n temperat ure at 40 ℃,reactio n time fo r 20 min ,catalyst at 25 mg/ L and determinate at 640 nm ,respectively. A linear wo rk curve of N H4+ 2N wit h R2 = 0. 999 1 had been achieved ,wit h 0～5. 0 μg of linearit y extensio n andε640 = 1. 26 ×103 L/ ( mol ·cm) . No significant difference in determinatio n result s was fo und bet ween t his met hod and colorimet ry met hod. It was suggested t hat indop henol blue spect rop ho2 to met ric met ho d can be used as a met ho d to determine N H4+ 2N co ntent in gast rointestinal co ntent s. Key words : indop henol blue spect rop hoto met ric met hod ;gast rointestinal co ntent ;ammo nia nit rogen
(BRF060303) . 收稿日期 : 2008203205
前 ,在临床上用于快速测定肠道内容物中氨态氮的 方法主要为粪污计法 、电导法 、氨电极法 、粪污氮含 量计量仪法 、反射计法等[1 ,2] ,这些方法检测速度快 但准确性稍低 ,适合于临床快速检验. 实验室的检测 手段主要有氧化镁直接蒸馏法[3] 和比色法[429 ] . 蒸馏 法操作较为繁琐 ,比色法操作简单 、快速 ,但该法对 检测的显色时间 、温度及催化剂浓度等条件都没有 进一步的研究报道 ,检测的结果就可能会因人而异. 靛酚蓝 - 分光光度法作为一种操作方便 、重现性和 准确度都比较高的分析方法 ,原理与比色法相近 ,常
第 5 期 蒲万霞等 :靛酚蓝2分光光度法测定胃肠道内容物中氨态氮含量研究 15
2 结果
2. 1 确定检测波长 由图 1 可知 ,波长在 620～650 nm 范围内 OD 值变化不大 ,640 nm 最高 ,因此 ,确定 640 nm 为最
佳波长. 2. 2 催化剂浓度和反应温度的确定 由表 2 和图 2 可知 ,催化剂浓度为 25 mg/ L ,温 度 40 ℃为最佳反应条件.
(1. College of Veterinary Medicine , Gansu Agricult ural U niversity ,Lanzho u 730070 ,China ; 2. Lanzho u Instit ute of Animal Husbandry & Veterinary Pharmaceutics Science , Chinese Academy of Agricult ural Sciences ,Lanzho u 730050 ,China)
(1. 甘肃农业大学动物医学院 ,甘肃 兰州 730070 ; 2. 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 ,甘肃 兰州 730050)
摘要 : 对靛酚蓝2分光光度法检测胃肠道内容物中氮含量的试验条件进行了筛选 ,结果表明 :催化剂质量浓度 25 mg/ L ,在 640 nm 的波长下 ,40 ℃水溶显色 20 min 为最佳检测试验条件 ;氨态氮标准曲线相关系数为 0. 999 1 , 线性范围为 0～5. 0μg ,摩尔吸光系数ε640 = 1. 26 ×103 L/ (mol ·cm) ,最低检出限为 0. 127μg ;该方法与比色法的 测定结果间无显著性差异 ,可用于胃肠道内容物中氨态氮含量的检测. 关键词 : 靛酚蓝2分光光度法 ;胃肠道内容物 ;氨氮 中图分类号 : Q 5233 文献标识码 : A 文章编号 : 100324315 (2008) 0520013205
1 材料与方法
1. 1 材料 1. 1. 1 样品及处理 将猪肠道内容物样品按固液 比 1 ∶5 ( W/ V ,以干质量计) 加入一定量的去离子 水 ,在 150 r/ min 的速度下振荡浸提 1 h ,在 4 ℃的 低温条件下 ,以 12 000 r/ min 的速度离心 20 min , 0. 45μm 纤维树脂滤膜抽滤 ,收集滤液以水溶性指 标测定. 1. 1. 2 仪器 日本津岛紫外可见分光光度计 1. 1. 3 试剂 苯酚 ,分析纯 (白银化学试剂厂) ; (N H4 ) 2 SO4 , 分 析 纯 ( 天 津 市 巴 斯 夫 化 工 有 限 公 司) ;亚硝基铁氰化钠 ,分析纯 (天津市化学试剂研究 所) ;NaClO ,分析纯 (天津市德恩化学试剂有限公 司 ,有效氯不少于 10 %) . 1. 2 方法 1. 2. 1 氨态氮标准溶液 原液 :精确称取 0. 235 8
14 甘 肃 农 业 大 学 学 报 2008 年
用于检测相对简单体系中氨的浓度 ,如水中氨态氮 的检测[10 ,11 ] ,也有用于发酵液中氨氮含量检测[12 ,13 ] 以及血液中氨态氮的检测[14] 的报道 ,而对于胃肠道 内容物这样比较复杂的系统而言则鲜有报道. 该方 法实验原理是 : 在强碱性介质中 ,N H4+ 与次氯酸和
100
水/μL 100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
氨氮量/μg 0
0. 5
1. 0
1. 5
2. 0
2. 5
3. 0
3. 5
4. 0
4. 5
5. 0
表 2 温度与催化剂浓度的选择 Tab. 2 Selection of temperat ure and co ncent ration of catalyst
苯酚作用生成水溶性染料靛酚蓝 ,蓝色的深浅在一 定范围内与 N H4+ 的浓度 ( 3. 57 ×10 - 9 ～ 3. 57 × 10 - 8 mo如下 :
反应以 Na2 Fe (CN) 5 NO 作催化剂 ,反应体系的 p H 在 10. 5～11. 7 之间 ,这个反应最早是由 Ber2 t helot 于 1895 年发现的 ,而后则通过逐步改进而用 于氨态氮的测定. 本文是在比色法和靛酚蓝 - 分光光度法的基础 上 ,进行了进一步优化 、完善 ,对于该方法用于肠道 内容物氨氮检测过程中可能影响靛酚蓝显色的一些 因素进行了研究 ,并由此确定了该方法的最佳检测 波长 、水浴显色温度 、时间及催化剂浓度等条件 ,为 胃肠道内容物氨态氮监测寻找了一种较为简便 、切 实可行的方法.
Determinatio n of N H4+ 2N co ntent in cast rointestinal wit h indop henol blue spect rop hoto met ric met hod
PU Wan2xia1 ,2 ,W EI Yun2xia2 ,M EN G Xiao2qin1 ,WAN G Ling2 ,C H EN J io ng2ran2 , YAN G ZHi2qiang2
胃肠道内容物中氨态氮是反映胃肠道营养代 谢 、微生态环境状况的重要指标之一 ,随着动物营 养 、疾病与胃肠道微生态关系的进一步深入研究 ,胃 肠道内容物中 N H32N 的监测就显得更加重要. 目
作者简介 : 蒲万霞 (19642) ,女 ,在读博士 ,主要研究方向为肠道微生 态与免疫学.
通讯作者 : 杨志强 ,男 ,研究员 ,主要研究动物营养与代谢病. 资助基金 : 中 央 级 公 益 性 科 研 院 所 基 本 科 研 业 务 费 专 项 资 金
2008 年 10 月 第 5 期 13～17
甘 肃 农 业 大 学 学 报 J OU RNAL O F GANSU A GRICUL TU RAL UN IV ERSIT Y
第43卷 双月刊
靛酚蓝2分光光度法测定胃肠道内容 物中氨态氮含量研究
蒲万霞1 ,2 ,魏云霞2 ,孟晓琴1 ,王 玲2 ,陈炅然2 ,杨志强2
g (N H4 ) 2 SO4 溶于双蒸水 ,稀释至 100 mL ,其氨态 氮含量为 500 μg/ mL . 标准液 : 精确吸取 1 mL 原 液 ,稀释至 10 mL ,则其氨态氮含量为 50μg/ mL . 1. 2. 2 检测试剂的配制 亚硝基铁氰化钠溶液 (1. 27 %) :精确称取 0. 362 2 g 含 2 个结晶水的亚 硝基铁氰化钠 ,溶于去离子水并定容至 25 mL ,4 ℃ 保存 (可保存 1 个月) . 溶液 A :精确称取 5. 00 g 苯 酚 ,溶于 400 mL 去离子水 ,加入 2. 0 mL 的亚硝基 铁氰化钠溶液 (1. 27 %) ,定容至 500 mL ;用棕色试 剂瓶 4 ℃保存 ,若溶液变为红棕色则不能使用. 溶液 B :称取 2. 50 g NaO H ,2. 0 g 柠檬酸三钠和 3. 5 mL NaClO 溶于 400 mL 水中 ,并定容至 500 mL ,用棕 色试剂瓶 4 ℃可保存 1 个月左右. 1. 2. 3 确定检测波长 选择 3 个已知浓度样品 ,依 次在 400～800 nm 的波长下测定 OD 值 ,然后选择 3 个样品中 OD 值最大的为测定波长. 1. 2. 4 催化剂浓度和反应温度的测定 催化剂浓 度选择 10 、15 、25 、40 、50 mg/ L , 温度选择 25 、30 、 35 、37 、40 、50 、60 、70 ℃,筛选最佳反应温度和催化 剂浓度. 1. 2. 5 测定最佳水浴显色时间 选一标准样品浓 度 ,在 10 、20 、30 、40 、50 、60 、70 min 下测定其 OD 值 ,选择当 OD 值达到平衡不变时的时间作为最佳 水浴显色时间. 1. 2. 6 氨态氮工作曲线的制作 待确定波长 、时 间 、催化剂浓度及水浴显色温度后按照表 1 依次加 入各种试剂 ,充分混合后 ,按照已确定的条件进行反 应 ,测定其吸光值.