PH0351 考马斯亮蓝染色液脱色液实验使用手册
考马斯亮蓝快染
考马斯亮蓝快染
用该方案可以在加入染色液后5-10min内得到染色的蛋白质条带。
该方案背景低，但没有基本方案1敏感。
材料：异丙醇固定液，考马斯亮蓝快染液，10%（v/v）乙酸。
步骤：
1)将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料或玻璃容器并以3-5倍体积的异丙醇
固定液覆盖，室温下缓慢摇动10-15min（0.7mm厚的胶）或30-60min（1.5mm厚胶）；
2)倾去固定液，以考马斯亮蓝快染液覆盖凝胶，室温下快速摇动直
至得到想要的亮度（2h至过夜）；
3)倾去染色液，以10%乙酸覆盖凝胶，室温下缓慢摇动≥2h，直
至得到干净的背景。
如需要，换新的10%乙酸；
4)保存；拍照或干燥凝胶。
异丙醇固定液：25%异丙醇，10%乙酸，65%水，室温长期保存；
快速考马斯亮蓝染色液：10%（v/v）乙酸，0.006%（m/V）考马斯亮
蓝G-250，90%水，室温长期保存；
考马斯亮蓝染色液：用固定液配制0.05%（v/v）考马斯亮蓝R-250染
色液。
但是，在加乙酸和水（一般不必过滤）之前
应将考马斯亮蓝R-250溶于甲醇。
室温下溶液可保
存6个月。
如果随保存时间延长出现沉淀，可过滤
去除沉淀获得均一的溶液。
脱色液：5%（v/v）甲醇，7￥（v/v）乙酸，88%水，室温下可保存1
个月。
考马斯亮蓝染色套装使用说明
考马斯亮蓝染色套装使用说明货号：P1305保存：室温保存，至少一年有效。
规格：100ml+500ml产品简介：本考马斯亮蓝染色套装(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝G-250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western 转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
产品内容：考马斯亮蓝染色液100ml考马斯亮蓝脱色液500ml说明书1份使用方法：1、电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中(至少5倍胶体积)，确保染色液可以充分覆盖凝胶。
2、将凝胶置于摇床上缓慢摇动，室温染色至少2小时，低丰度蛋白染色需4小时以上。
3、染色结束后移除染色液，染色液通常可重复利用2-3次，但染色效果会略有影响。
4、将凝胶浸泡于和染色液等量体积的脱色液中，摇床上脱色4-8小时，期间更换3-5次脱色液。
注意事项：1.染色时间4小时以上效果最佳。
2.脱色可根据目的蛋白丰度和脱色效果随时终止，或延长脱色时间。
3.脱色越彻底，检测的蛋白量越低，脱色24小时一般可以检测出0.1ug蛋白量。
4.脱色后，将凝胶保存在水中，拍照或扫描保存图像。
或制成干胶保存。
相关试剂：P1300-500考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液PC0020BCA蛋白浓度测定试剂盒PR1400低分子量蛋白MARKERPR1700预染次高分子量蛋白MARKERI1020IPTG溶液(50mg/ml)A101030%丙烯酰胺(29:1)T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒。
考马斯亮蓝试剂使用的具体操作
蛋白质含量测定具体操作——考马斯亮蓝法（南京建成，货号：A045-2）一、实验目的：样品蛋白质的含量测定（本实验为小鼠肝组织10%的组织匀浆上清液样本）二、测定的原理：蛋白质中有-NH3+基团，当棕红色的考马斯亮蓝显色剂加入蛋白质样品中，会发生络合反应，使溶液变成蓝色，通过吸光度的测定来计算蛋白质的含量。
三、实验材料a)仪器：紫外分光光度计、涡旋混匀器、比色皿、2mlEP管、5mlEP管、标记笔、b)试剂：考马斯亮蓝试剂盒、待测样品、双蒸水四、实验步骤a)将考马斯亮蓝试剂一贮备液：双蒸水=1:4进行配置，本实验需要75ml,即取出贮备液15ml和60ml的双蒸水进行试剂一应用液的配制，备用；b)蛋白质标准品从20℃冰箱中取出，融冻，暂时放在4℃冰箱保存；c)标记好25个2ml的EP管、5mlEP管，按顺序放好；准备好200ul和1000ul的移液器枪头d)将各10%的肝组织匀浆上清液从冰箱中取出，融冻，备用；e)将10%的肝组织匀浆上清配制成1%的肝组织匀浆上清，即使用移液器移取0.1ml放于对应的2mlEP管中，分别加入0.9ml的生理盐水，使用涡旋混匀器适当混匀各个组织匀浆；f)将处理后的样品按照下面的操作表，将200ul量程的移液器调至50ul,1000ul量程的调至1000ulg)待样品和标准品加完以后，使用涡旋混匀器混匀，静置10minh)准备好比色皿，和纸i)将紫外分光光度计的波长调至595nm，双蒸水调零，测定各管的吸光度。
j)根据公式：待测样品蛋白=测定管OD值−空白管OD值标准管OD值−空白管OD值∗标准品蛋白浓度五、注意事项a)此法灵敏度高，反应后的显色液可以在2个小时之内是稳定的；b)样本的蛋白浓度必须使用生理盐水稀释至1.3g/l以下，在该范围内呈线性关系；c)考马斯亮蓝法测定组织蛋白的组织匀浆的浓度一般在0.5%-2%；d)不可用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，测完成后立即用 95%乙醇冲洗使用完比色皿，使用95乙醇立马清洗比色皿，洗去显色剂；。
考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液使用说明
考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液使用说明货号：P1300规格：500ml组成：溶液A10ml、溶液B500ml保存：2-8℃保存，1年有效。
产品简介：考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液是一种即用型快速灵敏而且安全的染液，以考马斯亮蓝G-250为染料，可用于SDS-PAGE或者非变性电泳蛋白凝胶的快速染色，染色时间短，半小时内即可检测到蛋白电泳条带。
使用方法：工作液的配制，取100ml溶液B，加入2ml溶液A，混匀，此为工作液。
此工作液配好后请在一周内使用完，过期效果会有一定的影响。
1.将电泳后的PAGE胶（以8cm×10cm大小为例）取下放入容器中，加入50ml双蒸水或去离子水，加热至沸腾后停止，（可选：继续在脱色摇床上摇动5分钟），弃去水溶液。
2.加入25ml快速染色工作液，加热至沸腾后保持沸腾状态30-60秒，停止加热后继续在脱色摇床上摇动5-10分钟，弃去染色液（此时蛋白条带应已可见）。
3.加入约50ml水，加热至沸腾后保持沸腾状态30-60秒，停止加热后继续在脱色摇床上摇动5-10分钟，换水即可完成脱色，观察结果。
注意事项：1.染色前的清洗步骤（第一步）中，水的质量非常重要，质量越好灵敏度越高，研究证明若用自来水加热清洗，染色效果与灵敏度仅与常规甲醇考马斯亮蓝染色（分子克隆第二版）相同。
2.脱色时可用自来水清洗。
3.若要得到无背景的染色胶，可重复脱色步骤或将胶放在水中过夜。
4.经本产品染色的PAGE胶，胶的缩涨度小于5%，染色后的胶可在水中放置数月而无明显脱色。
5.每次加热后，继续在脱色摇床上摇动5分钟，可增强染色效果。
6.本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。
相关试剂：P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）P1305考马斯亮蓝染色套装（染色液+脱色液）A101030%丙烯酰胺(29:1)T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液SP1060SDS-PAGE凝胶制备试剂盒P001210×丽春红染色液。
考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书--微量法 100T 96S
考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。
此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
测定原理：在酸性溶液中，考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物在620nm处有最大吸收峰，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。
该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析。
自备仪器和用品：离心机、酶标仪、96孔板、移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体11 mL×1瓶，4℃保存。
样品中可溶性蛋白质提取：1. 液体样品：澄清液体样品可以直接测定。
2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：20的比例（建议称取约0.05 g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水））冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即待测液。
（动物样品常常需要稀释）3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定操作：1. 酶标仪预热30 min。
2. 在96孔板中加入：试剂（μL）测定管空白管样本100蒸馏水100试剂一100 100混匀后，测定波长620 nm吸光值，△A=A测定-A空白。
注意：空白管只需要测定一次。
计算公式：标准曲线：y = 7.1265x - 0.0007 R2 = 0.9997 x: 蛋白标准品浓度(mg/mL)y: 吸光值差值1.按液体样本体积计算：Cpr（mg/mL）=(△A+0.0007)÷7.1265=0.1403×(△A+0.0007)2.按组织样本质量计算：Cpr（mg/g）=(△A+0.0007)÷7.1265×V总÷W=0.1403×(△A+0.0007)÷WV总：提取液体积，1 mL; W：样本质量，g。
考马斯亮蓝法——完整版
耗费时间长；操 作要严格计时； 颜色深浅随不同 蛋白质变化
考马斯亮蓝法 (Bradford法)
灵敏度最高 1～5g
快速 5～15分 钟
考马斯亮蓝染料
与蛋白质结合时， 其 max 由 465nm 变为595nm
强碱性缓冲液； TritonX-100; SDS
说出你所知道的几种蛋白质定量测定的方法，并与考马斯亮蓝染色法 相比较各有何优缺点？
五种蛋白质测定方法比较如下：方法Leabharlann 灵敏度时间原理
干扰物质
说明
凯氏定氮法 （Kjedahl法）
双缩脲法 （Biuret法）
灵敏度低，适 用 于 0.2~ 1.0mg 氮 ， 误 差为 2％
灵敏度低 1～20mg
紫外吸收法
考马斯亮蓝试剂 （ml） 5 5 5 5 5 5 5
摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
A595nm
以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
2、样品中蛋白质含量的测定
另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的 待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同 上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
二、试剂与器材
1. 试剂：
（1）考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml
85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试 剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙 醇，8.5%（W/V）H3PO4。
考马斯亮蓝染色
考马斯亮蓝染色一产品简介：本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
使用本试剂盒，采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带；采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。
观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。
本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。
二保存条件：室温保存，至少一年有效。
注意事项：可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。
本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
三使用说明：1. 常规染色脱色方法：a. 电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。
b. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。
注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。
凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。
凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。
通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。
染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。
c. 倒出染色液。
染色液可以回收重复使用至少2-3次。
d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
e. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4-24小时。
期间更换脱色液2-4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。
通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。
注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。
脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。
考马斯亮蓝快速染色液
考马斯亮蓝快速染色液简介：考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast staining solution)是以考马斯亮蓝G250为染料可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE 等蛋白电泳胶的快速染色，亦可用于Western 转膜后PAGE 胶上残余蛋白的检测。
Leagene 考马斯亮蓝快速染色液采用Leagene 自主研发的技术，在传统考马斯亮蓝快速染色液的基础上进行改良，是一种无毒的染色液，快速染色液，可以检测低达蛋白电泳条带。
其核心优点在于：无需对凝胶进行固定，无需煮沸，无需脱色，染色时间短，操作更加简单。
组成：自备材料：1、 水平摇床或侧摆摇床2、 蒸馏水3、 (可选)加热装置4、 20%甘油水溶液操作步骤(仅供参考)：1、PAGE 电泳结束后取凝胶放入约蒸馏水中，在摇床上摇动，弃液，重复上述步骤1次。
2、弃蒸馏水，加入Commassie Blue Fast staining solution ，使染色液能盖住凝胶。
3、(可选)凝胶置于考马斯亮蓝快速染色液中，在水浴锅或微波炉内加热至95～100℃，立即从加热装置中取出。
(此步骤可以使染色提高灵敏度或加快染色进程，亦可省略。
)4、在摇床上摇动染色，蛋白量大的条带10～15min 左右会出现，大部分蛋白条带会在30～60min 左右出现。
一般情况下，5h 能获得极佳效果。
5、出现清晰的目标蛋白条带即可停止染色，弃染色液。
6、加入适量的蒸馏水停止染色反应。
亦可以在摇床上摇动脱色，以便减少背景干扰。
7、把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。
保存在水中的凝胶会发生溶涨。
如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。
编号 名称 PT0013 PT0013 Storage 考马斯亮蓝快速染色液 100ml 500ml 4℃ 使用说明书 1份注意事项：1、PAGE电泳后凝胶采用蒸馏水清洗的目的在于去除凝胶中的SDS等干扰物质。
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PH0351|考马斯亮蓝染色试剂盒（染色液+脱色液）
Commassie Blue Stain Kit
Catalog No：PH0351Size：☐100mL+500mL Store at RT
考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
使用本试剂盒，采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带；采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。
观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。
试剂组分
Components Size
考马斯亮蓝染色液/Commassie Blue Stain100mL
考马斯亮蓝染色脱色液/Commassie Blue Decoloring Solution500mL
试剂存储
室温保存，一年有效
使用说明
1.常规染色脱色方法：
a.电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。
b.置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。
注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。
凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。
凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。
通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。
染色2-4个小
时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。
c.倒出染色液。
染色液可以回收重复使用至少2-3次。
d.加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
e.置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4-24小时。
期间更换脱色液2-4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。
通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。
注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。
脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。
f.完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。
保存在水中的凝胶会发生溶涨。
如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油的水中。
长期保存可以制备干胶。
2.快速染色脱色方法：
a.电泳结束后，取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。
通常对于胶浓度大于10%的胶比较坚韧，在发生煮沸时不易破损；对于胶浓度小于10%的胶，宜尽量避免煮沸，以免出现胶碎裂的情况。
b.随后在染色液温度较高的情况下，在室温摇床上摇动5-10分钟。
c.倒出染色液。
染色液可以回收重复使用至少2-3次。
d.加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保染色液可以充分覆盖凝胶。
e.微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。
f.随后在脱色液温度较高的情况下，在摇床上摇动5-10分钟。
此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。
g.更换新鲜的脱色液，重复步骤e和步骤f，直至蓝色背景基本上全部被脱去，蛋白条带染色效果达到预期。
h.完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。
保存在水中的凝胶会发生溶涨。
如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油的水中。
长期保存可以制备干胶。
常见问题
1、染色时如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热，可以大大加快染色速度。
但加热时宜尽量避免沸腾，以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。
2、如果希望染色的背景更低，希望获得更加清晰的蛋白条带，可以加入适量的室温蒸馏水进行洗涤。
通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。
在4℃蒸馏水中浸泡过夜可以获得背景更低，条带更清晰的条带。
在次日对4℃蒸馏水浸泡过夜的已经进行了染色的凝胶再同前一天一样进行染色和洗涤可以进一步改善染色效果，获得更好的考染蛋白条带。
3、常规染色脱色方法耗时较长，但检测灵敏度更高，染色效果更加稳定。
快速染色脱色方法通常检测灵敏度略低，并且在微波炉加热的过程中有时会出现暴沸导致凝胶碎裂的情况，需特别注意。
另外微波炉加热导致的高温会引起染色液和脱色液中的乙酸的挥发。
4、本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。