免疫组化入门实验操作
免疫组化实验步骤流程
免疫组化实验步骤流程1.样品制备：a.组织样品：从动物或人体获得的组织样品首先需要固定在福尔马林中，然后通过蜡包埋技术将组织固定在蜡块中。
之后，将蜡块切成薄片，然后将薄片分别放置于载玻片上。
b.细胞样品：将细胞悬浮液放置在载玻片上，并用福尔马林进行固定。
2.抗原恢复：固定的组织或细胞样品经过脱水和脱脂处理后，需要通过抗原恢复来揭示隐藏的抗原。
抗原恢复的方法可以是热处理、酶切或化学处理等。
3.形成蛋白结合位点：将载玻片上的样品用蛋白结合剂如牛血清白蛋白（BSA）、鱼胶或生物素素蛋白结合剂等进行封闭处理，以防止非特异性结合。
4.孵育抗体：a.主抗体：将特异性的首要抗体加入到样品中，与目标抗原结合形成抗原抗体复合物。
b.辅助抗体：添加荧光素或酶标记的次抗体，与主抗体结合，以扩大信号的产生。
5.洗涤：用缓冲液洗涤载玻片，以去除未结合的抗体和其他无关物质。
6.信号增强：a.酶标记的实验，为了增加信号强度，可以加入荧光素或发光底物。
b.荧光标记的实验，可以直接观察荧光。
7.显色：在酶标记的实验中，加入染色底物以产生可见的颜色，从而定位并显示目标抗原的存在。
8.盖玻片：在涂抹适当封片剂后，将载玻片盖上一片封片玻片，以保护样品并减少光的干扰。
9.显微镜观察：使用显微镜观察载玻片下的样品，并通过图像系统进行图像捕捉和分析。
10.结果评估：评估图像和数据以确定抗原的表达和分布情况。
根据实验目的，可以进行半定量或定量的数据分析。
需要注意的是，免疫组化实验中的条件、试剂和步骤会因实验目的不同而略有差异。
因此，在进行实验前需仔细阅读相关文献和制定适合的实验方案，以确保实验结果的准确性和可靠性。
免疫组化操作步骤(自编)
免疫组化操作步骤一免疫组化（ LP 法）操作步骤：1．切片常规脱蜡至水。
如需抗原修复，可在此步后进行2. 缓冲液洗 3min/2 次。
3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色 , 将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。
4. 缓冲液洗 5min/2 次。
5. 滴加 Ultra V Block ，在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。
（注：孵育不要超过 10 分钟，否则会导致特异性染色降低。
如果一抗的稀释液中含有 5 － 10% 正常羊血清，这一步可以省略。
）6. 缓冲液洗 5min/2 次。
7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 － 2 小时。
（具体孵育时间和温度由试验者最终决定）8. 缓冲液洗 5min/2 次。
9 ．滴加 Primary Antibody Enhancer( 增强子 ) , 在室温下孵育 20 分钟。
10 ．缓冲液洗 5min/2 次。
11 ．滴加 HRP Polymer( 酶标二抗 ) ，在室温下孵育 30 分钟。
（注： HRP Polymer 对光敏感，应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。
）12 ．缓冲液洗 5min/2 次。
13 ．向 1ml DAB Plus Substrate ( 或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen （或 AEC Plus Chromogen ） , 混匀后滴加到切片上，孵育 3 － 15 分钟。
（具体时间由染色深浅决定。
）14 ．自来水充分冲洗 , 复染，脱水 , 透明 , 封片。
二．免疫组化 ( 三步法 ) 操作步骤：（ 1 ）、石蜡切片脱蜡至水。
（ 2 ）、 3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。
（ 3 ）、蒸馏水冲洗， PBS 浸泡 5 分钟 x2 （如需抗原修复，可在此步后进行）。
免疫组化法实验操作步骤
免疫组化法实验操作步骤-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN免疫组化染色实验操作流程实验目的：观察标记物在细胞中的表达及分布。
一、病例资料和实验分组标本：经10% 福尔马林液固定，常规石蜡包埋，4µm厚切片编号备用。
二、试剂及免疫组化方法实验试剂：xx两步法免疫组画试剂盒和DAB显色试剂盒进行组化染色。
抗体1,抗体2。
二甲苯、无水乙醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、柠檬酸、柠檬酸钠、甲醇、30% H2O2、羊血清、Triton液、中性树脂等。
仪器(1)10µl、100µl、200µl、1000µl可调微量加样枪（2）4℃冰箱(3)光学显微镜(4)恒温水浴锅(5)恒温烤箱(6)电热蒸馏水器(7)LEICA显微镜及VISITRON照相系统(8)其他：量筒、电炉、高压锅、染缸、湿盒、脱蜡架、冲洗球、免疫组化笔等。
主要试剂的配置（1） PBS缓冲液NaCl g磷酸氢二钠 g磷酸二氢钠 g加入1000ml容量瓶，加ddH2O至1000ml定容。
充分混合（2）L柠檬酸盐溶液（PH ）A液：柠檬酸溶液(4℃保存)柠檬酸1000mlddH2OB液：柠檬酸钠溶液(4℃保存)柠檬酸钠1000mlddH2O900ml dH2O 缓冲液现用现配（1000ml mol/L）A液（18ml）+B液(82ml)充分混合，调整PH ，充分混合，调整PH （3）3% H2O230% H2O2：甲醇=1：9(4)%Triton的配制Triton原液 ml液4℃保存备用。
（5）5%羊血清的配制（1ml）羊血清 50µl%Triton 950µl4℃保存。
免疫组化方法(1)石蜡切片60℃烤箱烤片30min.(2)石蜡切片常规脱蜡二甲苯Ι15min -- 二甲苯Ⅱ15min -- 无水乙醇Ι15min -- 无水乙醇Ⅱ5min -- 无水乙醇Ⅲ 5min -- 95%乙醇5min -- 90%乙醇5min -- 80%乙醇5min -- 70%乙醇5min -- 蒸馏水冲洗3min，浸泡待用（浸泡在什么溶液中）。
免疫组化实验步骤完整版
免疫组化实验步骤完整版步骤1：标本采集和固定首先，需要从待检测样本中采集组织或细胞。
可以使用手术切片、活体组织、培养的细胞等作为标本。
然后，将采集的样本固定在载玻片或切片上，以保持其结构和形态的完整性。
步骤2：抗原暴露和体细胞抗原消除接下来，需要处理标本以使抗原裸露出来，并消除非特异性的抗体结合和细胞膜结合的抗原。
这一步骤常常涉及对组织或细胞的预处理，例如用石蜡脱脂、酶解抗体和孵化等。
步骤3：抗体特异性结合选择特异性的抗体用于检测待测蛋白质。
这些抗体可以是直接标记的一抗，或间接标记的二抗。
一抗是专门与目标抗原结合的抗体，而二抗则可以与一抗结合，以提高信号的灵敏度和特异性。
这一步骤中还需要选择适当的阴性对照，即未携带待检测抗原的样本。
步骤4：探针检测根据需要，可以使用不同的探针来检测目标分子。
常用的探针有标记的一抗、荧光探针、放射性标记物等。
标记的一抗可以直接结合抗原，然后使用染色剂进行可视化；荧光探针则通过荧光显微镜进行检测；放射性标记物可以通过放射自显影等方法进行检测。
步骤5：显色和对比计数将荧光、酶标记或放射性标记的物质显色，以便于检测和计数。
在染色的过程中，需要防止非特异性的染色，例如使用阻断剂、胶原等。
步骤6：结果分析根据观察到的染色强度、分布模式等结果，分析待测蛋白质在样本中的表达情况。
这可能需要与阴性对照和阳性对照进行比较，以确定实验结果的可靠性。
步骤7：图像捕获和分析使用显微镜或其他成像设备，将荧光、染色或放射性标记的图像捕获下来。
可以使用图像分析软件来计算和比较样本中的染色强度、面积等参数。
步骤8：数据统计和结果报告根据实验结果进行数据统计和分析，并将结果记录在报告中。
报告应包括样本信息、实验方法、结果和结论等内容，并根据需要进行解释和讨论。
总结：免疫组化实验是一种广泛应用于研究、诊断和治疗的方法。
它的步骤包括标本采集和固定、抗原暴露和体细胞抗原消除、抗体特异性结合、探针检测、显色和对比计数、结果分析、图像捕获和分析、数据统计和结果报告。
免疫组化实验步骤
免疫组化实验步骤免疫组化操作步骤一、实验原理与意义免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。
它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。
（一）、仪器设备1. 18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉.2. 水浴锅（二）、试剂1. PBS缓冲液（ph7.2―7.4）：NaC137mmol/L，KCl2.7mmol/L ,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L. 2．0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6.0,1000ml）：柠檬酸三钠3g,柠檬酸0.4g。
3．0.5mol/L EDTA缓冲液（ph8.0）：700ml水中溶解186.1g EDTA& 8226;2H2O,用10mmol/L NaOH调至ph8.0,加水至1000ml.4. 1mol/L的TBS缓冲液（ph8.0）：在800ml水中溶解121gTris 碱，用1N的HCl调至pH8.0, 加水1000ml。
5. 酶消化液：a.0.1%胰蛋白酶:用0.1%CaCl 12(ph7.8)配制。
b.0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。
6. 3%甲醇―H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制7. 风裱剂：a.甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9.0–9.5）等量混合 b 油和TBS(PBS)配制8．TBS/PBS PH9.0–9.5,适用于荧光纤维镜标本;ph7.0-7.4适合光学纤维标本（三）、操作流程1、脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。
a 组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟,更换二甲苯后在浸泡10分钟b 无水乙醇中浸泡五分钟c 95%乙醇中浸泡五分钟d 75%乙醇中浸泡五分钟2、抗原修复：用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片：A 抗原热修复a 高压热修复在沸水中加入EDTA(ph8.0)或0.01m枸橼酸钠缓冲溶液（ph6.0）.盖上不锈钢锅盖，但不能锁定。
免疫组化实验操作方法
免疫组化步骤：一．标本脱蜡及水化1.90℃恒温烘箱孵育半小时。
（或者60℃恒温烘箱孵育2h或过夜）（目的：使蜡块融化）2.依次放入二甲苯I,II各处理20min。
（目的：脱蜡）3.按不同的酒精浓度（100%，90%，80%，70%）（610室 100%，95%，80%，75%）分别水化10min。
（目的：洗去石蜡，然后一遍一遍置换高浓度的酒精）4.蒸馏水洗涤5min×2次。
（目的：洗去酒精）5.PBS缓冲液洗涤5min×2次。
二．标本抗原修复及封闭1.取出切片，放置于3%的过氧化氢槽中（30%过氧化氢30ml 加蒸馏水到300ml，即稀释10倍），室温孵育15min。
（目的：脱去内源性过氧化物酶）2.PBS缓冲液洗涤5min×2次。
（目的：洗去过氧化氢）3.取出标本，加入95℃~100℃预热抗原修复液（柠檬酸抗原修复液，PH 6.0）中低火、微波15min。
（抗原修复液先加热至100℃沸腾，然后微波炉调至解冻档，即差不多95℃~100℃。
目的：打开键，利于之后的抗原抗体反应）4.自然冷却至室温。
（或者放在冰水里冷却，速度较快）5.PBS缓冲液洗涤3min×3。
6.取出切片，擦干切片组织周围的液体，放置于湿盒中，标本加入羊血清（5%~10%），每张片子约50ul（30ul~50ul不等，即覆盖组织即可），室温孵育30min。
（此步骤为封闭）（SUPER PAP PEN在组织周围画圈，即可防止羊血清外溢）三．抗体加入及显色1.将切片上的液体甩干，滴加入50ul一抗工作液于组织上，于4℃冰箱中过夜（一般8~10小时，时间过一些问题也不大）。
（或者37℃恒温箱中孵育2h）2.将切片上的液体甩干，放置PBS缓冲液中洗涤3~5min×3~5次。
（时间可以短一些，但多洗涤几次）3.将切片上的液体甩干，加入二抗（每张片子约30ul~50ul，覆盖组织即可）室温下孵育30min。
免疫组化法实验操作步骤
免疫组化法实验操作步骤步骤一：取材固定1.将需要处理的组织或细胞样本，如切片或离心沉淀等，放置在含有适当浓度的固定试剂（如4%的中性缓冲甲醛）中，使其固定。
2.这一步的目的是保持蛋白质的结构和形态，使其对后续步骤的抗体反应更加稳定。
步骤二：脱水和包埋1.将样本从固定试剂中洗涤，并逐渐转移到乙醇溶液中，以脱水。
2.将样本转移到适当浓度的透明剂（如甲基丙烯酸甲酯）中，使其透明化。
3.最后，将样本包埋在合适的固化剂（如尼龙、蜡、树脂等）中，以便后续的切片操作。
步骤三：切片和烘干1.使用组织切片机将样本以适当的厚度切成切片。
2.将切片放置在加热平台上，烘干以去除切片中的水分。
步骤四：抗体处理1.使用适当的抗体稀释液将抗体与切片接触。
抗体可为一抗或二抗，具体选择取决于实验需求。
2.将切片放置在含有抗体的湿润孵育盒中，使其与抗体反应。
孵育温度和时间取决于抗体的要求，一般在4℃下孵育过夜。
步骤五：洗涤1.将切片取出，并置于洗涤缓冲液中，用于去除未结合的抗体。
2.反复洗涤3-4次，每次至少5分钟，确保切片完全清洗。
步骤六：标记1.添加适当浓度的二抗，如辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，与已经结合的一抗反应。
2.孵育切片与二抗共反应，孵育温度和时间根据试剂的要求进行。
步骤七：显色和染色1.使用合适的显色剂将切片进行显色。
常见的显色剂有DAB（二氨基联苯氧化物）和VIP（有机磷染料）等。
2.彩色染色可根据实验需求进行，可以使用核染料如伊红、快速伊红等对细胞核进行染色。
步骤八：石蜡去除和封片1.将切片浸入去石蜡溶液中，去除石蜡。
2.使用适当稀释的巴豆胶溶液将切片封闭，确保切片在显微镜下观察时保持湿润。
步骤九：显微镜观察1.将封片放置在显微镜载物台上，使用适当放大倍率的显微镜观察切片。
2.观察切片的染色情况、抗体标记的结果等，记录并进行分析。
这些是一般的免疫组化法实验操作步骤，根据具体实验需求和试剂要求，可能会有一些细微的差异和额外的步骤。
免疫组化实验流程 临床医学研究中心
免疫组化实验操作流程
1. 60℃烤片2 小时，烤片后放置一会恢复到室温
2. 脱蜡。
脱蜡剂脱蜡10 分钟，两次
3. 水化。
依次经过无水乙醇、95%、90%、80%、70%，各5 分钟，蒸馏水5 分钟
4. PBS 洗5 分钟，两到三次
5. 抗原修复。
采用0.01M pH
6.0 枸橼酸高压锅沸水浴修复，配制2L修复液置于高压锅内煮开，然后放入玻片用900W煮到冒气2min后关火，没有冒气后可以拔掉限压阀排气并开盖，然后降温到室温后取出。
PBS 洗 5 分钟，两到三次。
6. 3%双氧水封闭20 分钟，PBS 洗5 分钟，两到三次
7. 封闭液封闭，37℃或室温30min
8. 一抗孵育，4℃过夜.
9. 复温20 分钟，一抗可回收，PBS 洗5 分钟，两到三次
10. 二抗孵育，37℃ 20 分钟（二抗为生物素标记的羊抗兔IgG），PBS 洗5 分钟，两到三次（具体按说明书）
11. 三抗孵育，37℃ 20 分钟（三抗为辣根酶标记的链酶亲和素），PBS 洗5 分钟，两到三次（具体按说明书）
12. DAB 显色，镜下观察结果，适时终止。
（配制按说明书）
13. 苏木素复染5 分钟，镜下观察结果，适时终止，自来水冲洗片刻，0.5%的盐酸酒精（75%酒精配制）溶液分化几秒，自来水冲洗 5 分钟或用1%氨水泡2min蓝化
14. 脱水。
依次经过70%、80%、90%、95%、无水乙醇，每级1秒至1min，透明剂10min，两次
15. 封片，水溶性封片剂或中性树脂封片
图像分析软件Olympus CellSens Dimension 光学显微镜400X。
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免疫组化入门实验操作一、实验目的：1.了解免疫组化基本原理。
2.了解免疫组化实验操作及注意事项。
3.免疫组化结果判定。
通过实验，让学生熟悉免疫组化操作流程及注意事项，对抗原抗体结合、抗原修复和酶催化底物显色进行研究。
要求学生通过查阅文献，在归纳、对比、总结的基础上对免疫组化有进一步的了解。
二、实验原理：三、实验材料：一抗：CD5、CK8、Ki67二抗：MaxVision3其它：柠檬酸抗原修复液、过氧化物酶阻断剂、PBS缓冲液、DAB、孵育盒、染色架、苏木素、盖玻片、冲洗瓶、中性树胶，孵育盒。
四、实验步骤：1.脱蜡水化二甲苯5min，二甲苯5min，二甲苯5min，无水乙醇2min，无水乙醇2min，95%酒精2min，85%酒精2min，自来水冲洗。
2.抗原修复高压锅中加入1200mL柠檬酸修复液，电磁炉煮沸后放入切片，扣紧锅盖，功率调至800W，至压力阀均匀喷气后计时 1.5min，移开高压锅室温冷却10min，自来水冷却。
3.过氧化物酶阻断修复结束后，流水冲洗干净，除去自来水，在离组织3mm处用免疫组化油笔画圈或用纸巾擦干组织外残留的液体，滴加50 μL（一滴）过氧化物酶阻断剂，室温孵育10min，PBS冲洗3×3min。
4.一抗甩去PBS，纸巾擦干组织3mm外的残留液体，每张切片加50 μL（一滴）相应一抗，室温下孵育60分钟，PBS冲洗3×3min。
5.二抗甩去PBS，纸巾擦干组织3mm外的残留液体，每张切片加50 μL（一滴）MaxVisionTM试剂，室温下孵育30分钟，PBS冲洗3×3min。
6.DAB甩去PBS液，纸巾擦干组织3mm外的残留液体，每张切片加50 μL（一滴）新鲜配制的DAB，显色5分钟，自来水冲洗。
7.苏木素复染每张切片滴加50 μL（一滴）苏木素，20-30秒后自来水冲洗30s以上，或浸泡于PBS中30s以上再自来水冲洗。
8.封片梯度酒精脱水干燥（85%酒精2min，95%酒精2min，无水乙醇2min，无水乙醇2min，二甲苯1min），或直接电吹风吹干，中性树胶封固。
一、柠檬酸缓冲液高温高压修复法取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液（800-1500ml）于压力锅中，大火加热至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片至于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。
盖上锅盖，扣上压力阀，将功率调至800W,继续加热至喷气，从喷气开始计时，1.5分钟后，压力锅离开热源，室温冷却10分钟后用自来水冲淋高压锅外壁加速冷却至室温，取出玻片，自来水冲洗干净。
注意事项：1、加热时间长短（1.5分钟）和加热功率（800W）的控制很重要，时间过短可能会使染色强度变浅，时间过长可能会使染色背景加深。
2、必须使用不锈钢或耐高温塑料切片架，不能使用铜架，以防缓冲液pH值增高而导致掉片。
3、高压锅离开热源后必须等缓冲液冷却后，才能把切片取出。
4、为防止组织脱落，必须使用防脱玻片。
5、缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到。
二、EDTA水煮修复法取500mlEDTA抗原修复液于1000ml不锈钢锅中，加热至沸腾，将电磁炉功率调至保温状态（120W），使修复液保持微沸状态。
将脱蜡水化后的切片置于耐高温染色架上，再将染色架缓慢放入不锈钢锅中（注意：若快速放入可能会导致组织脱落），之后加盖继续加热20分钟。
再将不锈钢锅从电磁炉上移开，室温冷却10分钟后用自来水冲淋不锈钢锅外壁加速冷却至室温，取出玻片，自来水冲洗干净，除去自来水，在离组织3mm处用免疫组化油笔画圈，PBS 冲洗2次，每次3分钟。
1、加热时间长短（20分钟）和加热功率（120W）的控制很重要2、修复液不能重复使用。
3、工作液的量必须保证切片始终能浸泡在液体内。
4、为防止组织脱落，必须使用防脱玻片。
5、抗原修复后一定要等修复液冷却后，才能将切片取出。
石蜡切片制作和HE染色一、目的要求：简要介绍石蜡切片的制作和苏木精、曙红染色法（简称H.E 染色法），借以了解石蜡切片制作的基本原理和一般方法。
二、实验用具：解剖器一套、单面刀片、切片刀、切片机、载玻片、盖玻片、标本瓶、烧杯、量筒、漏斗、染色缸、树胶瓶、酒精灯、毛笔、绘图纸、滤纸、熔蜡箱（或恒温箱）、展片台（或烫板）、小木块、蜡带盒、烤片盒、切片托盘。
三、实验材料：蛙或小白鼠。
四、实验内容：（一）药品：１、７０％、８０％、９０％、９５％酒精及无水酒精：９５％以下的各级浓度酒精是用９５％酒精加蒸馏水稀释而成。
简单的稀释方法：所需稀释的浓度是多少，就量取多少毫升原浓度的酒精，再加蒸馏水至该酒精的原浓度即可。
例如，配制７０％酒精，就量取７０ml９５％酒精，然后加入２５ml蒸馏水即成。
２、固定液：常用的固定液有１０％福尔马林、Bouin氏液和Zenker氏液等。
Bouin氏液在组织学切片技术方面应用甚广，配方如下：苦味酸饱和水溶液７５ml福尔马林２５ml冰醋酸５ml３、蛋白甘油：蛋白甘油是粘贴蜡片用的粘片剂。
配方如下：取一新鲜鸡蛋的蛋白，充分搅拌成雪花状泡沫，然后滤去泡沫，加入等量甘油，搅拌均匀，再加入一小粒麝香草酚防腐。
４、染色液：以H.E.染色法为例，需配制苏木精染液和曙红染液。
⑴、苏木精染液：苏木精是一种碱性染料，它可将染色质染成蓝紫色。
配方有多种，现介绍Harris氏苏木精的配制：甲液：苏木精０.５ g９５％酒精５.０ ml 乙液：硫酸铝钾（或硫酸铝铵）１０g蒸馏水１００ ml氧化汞０.２５g冰醋酸几滴先将甲液溶解，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中，并加热使溶解，然后将两液混合煮沸，离开火焰后缓缓加入氧化汞。
冷却后过滤，加入几滴冰醋酸即成。
⑵、０.５％曙红酒精溶液：即０.５g曙红溶于１００ml９５％酒精中。
曙红是一种酸性染料，它可使多种细胞的细胞质染成粉红色或红色。
５、盐酸酒精：盐酸酒精用于分色。
配制方法是在１００ml７０％酒精中加入１ml盐酸。
６、其它：二甲苯、切片石蜡、中性树胶等。
（二）、操作步骤：进行组织学研究，必须把活的组织或器官制作成切片标本，以便在显微镜下进行观察。
切片标本也就是利用组织的不同结构，经过染色后呈现出不同的颜色和不同的折光率而制作的。
制片的方法众多，但基本要求是尽量保持结构的真相，切成薄的切片，应用不同的染色方法，使内部结构清晰易见。
石蜡切片法是最常用的一种制片法。
其制作过程是：取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→烤片→脱蜡→复水→染色→脱水→透明→封藏。
现分述如下：１、取材和固定：固定的目的在于保存组织内细胞原有的结构和形态，使其与生活时相似，因此要求固定的材料越新鲜越好。
把动物杀死后应立即割取组织块，并快速投入固定液中。
将蛙或小白鼠快速剪去头部，打开腹腔，用锐利的刀片割取小块组织（肝、肠等）。
组织块的大小以厚度不超过５mm 为宜。
然后，将取下的组织块迅速投入Bouin氏固定液中。
固定时间为数小时至２４小时（需视组织块的大小而定）。
２、冲洗：经固定的材料，可根据不同的固定液，分别用水或酒精冲洗，以洗去固定液，否则固定液留在组织会有碍染色.用Bouin氏液固定的材料,可直接移入70％酒精中，多换几次酒精，直至无黄色时为止。
也可在酒精中加入几滴氨水或饱和碳酸锂溶液，以迅速洗去黄色。
但留少许黄色也无妨碍。
浸洗后的材料若暂时不制片，可保存于７０％酒精中。
３、脱水：柔软并含有多量水分的组织是易切成薄片的，故必须增加组织的硬度。
石蜡切片法就是使石蜡渗入组织，以达到支持增硬的作用。
但水与石蜡是不相混合的，因此，在浸蜡、包埋前须将组织中的水分完全除去，这一步骤即为脱水。
常用的脱水剂是酒精。
脱水时，先从低浓度的酒精开始，然后，递增浓度，直至无水酒精。
具体方法是，将材料经７０％酒精→８０％酒精→９５％酒精（Ⅰ）→９５％酒精（Ⅱ）→无水酒精（Ⅰ）→无水酒精（Ⅱ），各级酒精１－２小时。
脱水应彻底，否则材料不能透明，影响石蜡的浸入，致使难以切片。
４、透明：酒精与石蜡不能混和，因此，脱水后的材料在浸蜡前，还必须经过透明。
透明剂既可替代组织中的酒精，又能溶解石蜡，以利石蜡的渗入。
二甲苯是常用的一种透明剂。
将脱水后的材料经１：１无水酒精与二甲苯→二甲苯（Ⅰ）→二甲苯（Ⅱ），各级时间为０.５－２小时，务使组织达到透明为止。
５、浸蜡：将已透明的材料移入熔化的石蜡内浸渍即为浸蜡。
其目的是去除组织中的透明剂，而使石蜡渗入整个组织，获得一定的硬度和韧度，以便切成薄的切片。
先将装有５６－５８℃石蜡的三个蜡杯放在熔蜡箱内熔化，并使熔蜡箱的温度保持恒定（约５８℃），切勿太高或太低。
然后将透明了的材料放入蜡杯（Ⅰ）→蜡杯（Ⅱ）→蜡杯（Ⅲ）。
浸蜡时间视材料大小而定，一般总的浸蜡时间为２－４小时左右。
６、包埋：将浸蜡后的材料包埋于石蜡中，并使它凝固成蜡块，这一过程称为包埋。
包埋前，视组织块的大小先将绘图纸折成一纸盒，作为包埋的容器。
纸盒折法如下：先折１、２线，次折３、４线，然后使a、b两折重叠，向外折出５线；同法折出６线，再折c线。
最后依同法折出７、８线及d线即成。
将纸盒盛满已熔化的石蜡，随即将第三杯中已浸蜡的材料放入其中，应注意切面朝下，位置放正。
然后速将纸盒半浸于冷水中，待石蜡表面凝结后，将纸盒全部浸入水中冷却。
石蜡全部凝固后，拆去纸盒即成蜡块。
７、切片：切片前，先将蜡块用刀片修整成上下两边平行的正方形或长方形，否则切出的蜡带弯曲不直，或无法连成带状。
将修整后的蜡块粘在小木块上，小木块装在切片机上，以待切片。
在旋转式切片机上将蜡块切成４－８um厚的薄片。
切下的薄片连。
蜡带。
用毛笔轻轻取下蜡带，放在蜡带盒内备用。
８、贴片或烤片：将蜡片粘贴在载玻片上即为贴片。
用小玻棒蘸取一点蛋白甘油滴于一干净的载玻片上，用手指涂匀，并加几滴蒸馏水于载玻片上。
将蜡带按要求切成适当长度的蜡片，然后用小镊子将蜡片轻放在载玻片的水面上，再把载玻片放在展片台上（温度为４５℃左右）。
蜡片受热后即慢慢展平。
待完全展平后，用解剖针将切片位置拨正，倾去载玻片上的余水后，将其放在烤片盒中，置于５０℃左右恒温箱内烤干。
９、染色：染色剂多为水溶液，故染色前必须先经脱蜡、复水等步骤。
染色方法众多，以H.E.染色法而言有下列步骤：⑴、脱蜡：将烤干的切片放入二甲苯(Ⅰ)→二甲苯(Ⅱ)中，各为５min，以溶去切片上的石蜡。
⑵、复水：是将脱蜡后的切片经各级浓度酒精逐渐下降到水的过程，即将二甲苯(Ⅱ)中取出的切片移入无水酒精→９５％酒精→８０％酒精→７０％酒精→蒸馏水，各级中停留１－５min。
⑶、染色：①、将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中５－１０min，使细胞核着色。
②、用自来水洗去切片上残余的染液。
③、用１％盐酸酒精分色数分钟。
分色时就是褪去细胞质不应着色部分的颜色，而使细胞核着色得清晰适度。