培养细胞形态分类
组织培养技术(7)
20世纪 年代以来，随着细胞生物学、 世纪90年代以来 随着细胞生物学、 世纪 年代以来， 分子生物学、 分子生物学、免疫学以及遗传学等基础学 科的迅猛发展， 科的迅猛发展，以及干细胞和组织工程技 术在现代医学基础和临床的应用， 术在现代医学基础和临床的应用，使得现 代再生医学在血液病、肌萎缩、 代再生医学在血液病、肌萎缩、脑萎缩等 神经性疾病的治疗方面显示出良好的发展 前景。 前景。 组织工程学被认为是继细胞生物学和分子 生物学之后， 生物学之后，生命科学发展史上又一新的 里程碑。组织工程学的出现， 里程碑。组织工程学的出现，意味着外科 学已经进入了“再生医学”的新阶段。 学已经进入了“再生医学”的新阶段。
第九章 组织培养细胞 生物学性状检测
细胞一般形态学观察法 第一节 细胞一般形态学观察法 固定细胞观察法 一、固定细胞观察法 长有细胞的盖玻片是最适宜的 观察对象。 观察对象。
一般染色法： 一般染色法： 1、Giemsa染色法 、 染色法 2、苏木精 伊红 伊红(HE)染色法 、苏木精-伊红 染色法 3、Feulgen染色法 、 染色法 4、吖啶橙染色荧光观察法 、吖啶橙染色荧光观察法 电子显微镜(电镜 电镜)观察法 二、电子显微镜 电镜 观察法 原位切片 透射观察 消化分离切片 培养细胞电镜观察 原位观察 扫描观察 消化分离观察
射 线 照 射 分 离 法
提高克隆形成率的措施： 提高克隆形成率的措施： 1）培养基：选用适应性或条件培养基 ）培养基： 2）血清：胎牛血清 ）血清： 3）饲细胞 ） 4）激素：胰岛素、地塞米松 ）激素：胰岛素、 5）CO2：5%（特殊：2%、10%） ） （特殊： 、 ） 6）底物特殊处理：多聚赖氨酸 ）底物特殊处理： 7）适应性底物 ）
细胞骨架观察
体外培养细胞的基本形态
体外培养细胞的基本形态
体外培养细胞的基本形态通常可以分为以下几种：
1. 悬浮细胞：这种细胞没有任何附着物质，完全悬浮在培养基中。
悬浮细胞的形态通常呈现为圆形、椭圆形或不规则形状。
2. 基质附着细胞：这种细胞会附着在培养基的底部或其他附着物质上。
它们通常呈现为扁平的形状，并且会伸出像触角一样的细胞突起。
3. 单层附着细胞：这种细胞生长在平坦的基质上，形成一个单细胞层。
其形态通常呈现为扁平的形状，并且细胞之间呈现较为规则的排列。
4. 多层附着细胞：这种细胞会从单层细胞增殖而来，形成多层细胞堆叠的结构。
上层细胞通常会呈现较为扁平的形状，下层细胞则呈现更加立体的形态。
除了这些基本形态，不同类型的细胞在体外培养时还可展现出不同的特征形态。
需要注意的是，体外培养条件可能会对细胞形态产生影响，所以在实验过程中需要综合考虑培养条件对细胞形态的影响。
简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段
简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段体外培养细胞是指将细胞从其天然环境中取出，放入培养基中，在合适的条件下维持和增殖的细胞。
体外培养细胞的形态特征和生长阶段与细胞类型有关，但有一些共同的特征和阶段。
一般来说，体外培养细胞具有以下形态特征：1. 形态多样性：不同类型的细胞在体外培养中表现出不同的形态特征。
有的细胞呈悬浮生长，形成单个或成团的细胞群；有的细胞附着在培养器皿底部，形成单层或多层薄片。
2. 细胞大小和形状：体外培养细胞的大小和形状也变化多样。
有的细胞较小且呈圆形或椭圆形；有的细胞较大且呈扁平形或长条形。
3. 细胞分裂：体外培养细胞通常通过有丝分裂进行细胞增殖。
在分裂前，细胞会经历一段生长期，增加体积和细胞器数量，然后进入分裂期。
体外培养细胞的生长阶段包括以下几个阶段：1. 悬浮细胞的生长阶段：悬浮细胞通常分为四个生长阶段：lag期（适应期）、log期（指数期）、stationary期（平台期）和decline期（衰亡期）。
在lag 期，细胞正适应培养基的环境，准备开始增殖。
在log期，细胞开始快速增殖，细胞数呈指数增长。
在stationary期，细胞增殖速度减慢，细胞数趋于稳定。
在decline期，细胞死亡速度超过增殖速度，细胞数开始下降。
2. 附着细胞的生长阶段：附着细胞的生长阶段通常分为三个阶段：附着期、增殖期和平衡期。
在附着期，细胞接触到培养器皿表面，并开始附着。
在增殖期，细胞开始增殖并形成单层或多层细胞。
在平衡期，细胞增殖速度减慢，细胞数趋于稳定。
总结起来，体外培养细胞的形态特征和生长阶段是多样的，但都遵循一定的规律。
了解这些特征和阶段有助于科学家更好地控制和利用体外培养细胞，促进生物医学研究的发展。
细胞培养常规检查（一）一般形态观察生长状态良好的细胞在普通显微镜
细胞培养常规检查(一)一般形态观察生长状态良好的细胞在普通显微镜下观察时可见，细胞透明度大，轮廓不清，只有用相差显微镜观察，才能看清细胞的细微结构。
细胞内颗粒少、无空泡，胞膜清晰，培养上清液清澈透明，看不到悬浮细胞和碎片；细胞功能不良时，轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物，细胞之间空隙加大，细胞形态可变得不规则，甚至失去原有特点。
只有生长状态良好的细胞才能用于实验。
细胞生长过程中，CO2积累增多，由于培养液内含有pH指示剂，因此其颜色变化可间接反映细胞的生长状态。
正常情况下，培养液呈桃红色；呈橙黄色时，细胞一般生长状态较好；呈淡黄色，则可能是培养时间过长、营养不足、细胞死亡过多；呈紫红色，则可能是细胞生长状态不好，或已死亡。
（二）细胞增殖生长状态初代或传代培养时，都有一长短不同的潜伏期。
传代细胞系、胚胎组织或幼体组织潜伏期短，一般在第二天即可见细胞生长，一周内便可连接成片。
成体组织的潜伏期长，老龄组织和癌组织更长，有时可达一周左右。
初代组织块培养法细胞生长，最先从组织“长”出的为游走细胞，它们多单独活动，形态不规则，用缩时逐格显微摄电影法可显示出极活跃的变形、游走和吞噬活动。
在游走细胞之后，接着长出的是成纤维细胞或上皮细胞。
只有当出现细胞分裂、细胞数量逐渐增多、形成较大生长晕或连接成片时，细胞才真正进入增殖状态。
成纤维细胞是最易生长细胞，生长速度较快，低倍镜下观察时，前哨部位细胞似火焰状或放射形状向外扩展；如接种为游走细胞、胶质细胞等细胞，在密度不大时，可连接成网状，只有细胞密度增大时才连接成片。
上皮细胞排列紧密，相互接壤成膜状；上皮膜边缘整齐，细胞很少单独活动，生长时整个上皮膜发生移动。
上皮细胞尤其是外胚层来源的细胞如表皮细胞等，生长过程中常产生溶解酶，能使细胞间质发生液化，导致细胞相互分离，严重时可导致细胞脱落，其确切机制尚不明了．可能与产生透明质酸酶有关。
细胞接种后，经过悬浮期、潜伏期和指数增生期等后，最终将长满瓶壁，如不及时做再培养，由于营养物质消耗和代谢产物积累，细胞即进入停滞期。
细胞工程原理-第一章 动物细胞的培养
（二）合成培养基
主要是指通过人工设计、配制而成的，使用时需 添加一定量血清的一类培养基，可在体外较好用 于动物细胞培养。目前已经设计出适合不同类型 细胞的培养基，如DMEM、TC199等。 优点：创制出与体内相似的生存环境，又便于控 制，实现标准化。
主要成分：氨基酸、糖、无机盐、维生素及其他 辅助物质。
定 1.鉴定指标 ① 纯度： 何种细胞为主 ② 细胞学特征： 细胞形态、结构、染色体组型、生长曲线、分 裂指数、倍增时间等
③ 稳定性：传代过程中，细胞学特征是否发生变化 ④ 污染情况： 是否有微生物和其他细胞系污染
2.鉴定方法
① 细胞形态学观察： 光镜和电镜观察形态特征 ② 绘制生长曲线，计算分裂指数 ③ 进行染色体组型和带型分析 ④ 检测同工酶酶谱
人心肌成纤维细胞 成纤维细胞
人乳腺
（3）游走细胞型
特点：细胞质常伸出伪足或突起，呈活跃的游 走或变形运动，一般不连接成片。 举例：人单核细胞、巨噬细胞以及某些肿 瘤细胞。
人单核细胞
（4）多行型细胞
特点：呈多角形，是一些形态上不规则的细胞 ，不规则形态是由宽扁的胞质突起所致，细胞 一举般 例分 ：胞 神体 经和 元胞细突胞两、部神分经。胶质细胞。
（一）细胞的冷冻保存
细胞超低温保存的基本原理：细胞在-70℃以下时 ，细胞内的酶活性降低，代谢处于完全停止状态 ，故可长期保存。
细胞低温保存的关键：通过-20-0℃阶段的处理过 程。因为在此温度范围内，易造成细胞的严重损 伤，因此，常常在培养液中加入保护剂来减少对 细胞的伤害。
细胞冷冻过程：将对数期细胞用冻存液（DMSO+血 清或者+培养基+血清）、甘油+血清等）重悬，分
（二）建立细胞系、株
总结细胞分类
总结细胞分类引言细胞是生命的基本单位，它们在构成生物体组织和发挥生物功能中起着重要作用。
根据形态、功能、结构和组织等特征，细胞可以被分类为多种类型。
本文将总结常见的细胞分类方法，并对每个分类进行简要介绍。
细胞分类方法细胞可以根据不同的标准进行分类，常见的细胞分类方法包括：1.形态分类2.功能分类3.结构分类4.组织分类下文将对这些分类方法进行详细介绍。
形态分类形态分类是根据细胞形态特征进行分类的方法。
细胞形态包括细胞形状、大小、颜色等方面的特征。
根据形态分类，细胞可以分为以下几类：•球形细胞•柱状细胞•扁平细胞•不规则形细胞形态分类主要用于描述细胞的外观特征，常用于形态学研究和细胞观察。
功能分类功能分类是根据细胞所具有的功能特点进行分类的方法。
细胞功能种类繁多，不同细胞具有不同的功能。
常见的细胞功能分类包括：•红细胞：主要负责携带氧气和二氧化碳。
•白细胞：参与免疫反应和抵抗病原体。
•神经细胞：传递神经信号。
•肌肉细胞：产生肌肉收缩力。
•脂肪细胞：负责脂肪储存。
功能分类关注细胞所具有的特殊功能，有助于揭示细胞在整个生物体中的作用。
结构分类结构分类是根据细胞内部的结构特征进行分类的方法。
细胞内部包含多种不同的细胞器，细胞器之间的组合和特征不同，导致细胞的结构差异。
根据结构分类，细胞可以分为以下几类：•原核细胞：没有细胞核和细胞器。
•真核细胞：有细胞核和细胞器。
结构分类主要用于描述细胞内部结构的差异，有助于研究细胞功能和进化。
组织分类组织分类是根据细胞在生物体中的组织分布特点进行分类的方法。
细胞可以构成多种不同类型的组织，根据细胞组织的类型和分布，细胞可以分为以下几类：•上皮细胞：构成皮肤和器官的表面层。
•结缔组织细胞：构成结缔组织，如骨骼和软组织等。
•神经组织细胞：构成神经系统的各个组织。
•肌肉细胞：构成肌肉组织。
•血细胞：构成血液。
组织分类用于描述细胞在生物体中的特定分布和组织结构。
结论细胞是生物学研究的重要对象，对细胞进行分类有助于深入了解细胞的形态、功能、结构和组织等特征。
体外培养细胞的基本形态
体外培养细胞的基本形态
体外培养细胞的基本形态取决于细胞类型和培养条件。
然而，大多数体外培养细胞在适当的条件下通常会形成两种基本形态：
1. 悬浮细胞：某些细胞类型以单个细胞的形式悬浮在培养基中生长。
这些细胞通常是圆形或卵圆形的，且没有固定的形态。
它们可以自由地在培养基中移动和增殖，且不依赖于外部支持（如培养皿表面）。
2. 贴壁细胞：其他一些细胞类型具有贴壁的生长习性，需要附着在培养皿表面或其他细胞支持基质上生长。
这些细胞通常呈扁平或纺锤形，并沿着支持基质表面附着。
它们可以形成单层或多层细胞，紧密地粘附在一起。
此外，还有一些细胞类型可以形成三维结构，例如球状聚集体或器官样结构。
这些细胞可以在体外条件下自组装成立体结构，并模拟组织或器官的形态和功能。
细胞培养技术
细胞培养技术一、细胞培养基本概念细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境, 在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下, 使期生长繁殖, 并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。
在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。
外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可反复取材等优点, 它在临床染色体分析中使用最广泛。
体外培养细胞株可在培养过程中发生自发的或在外界作用下的转化, 成为永久细胞系, 也可直接建成永久细胞系, 永久细胞系能在体外无取制的传代和生长。
永久细胞系通常具有非整倍体细胞和各个细胞的核型不完全相同特性。
但细胞克隆的细胞系其这一特性可以不明显。
二、细胞培养的环境细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。
1.无污染环境培养环境无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件。
当细胞放置于体外培养时, 与体内相比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力, 一旦被污染或自身代谢物质积累等, 可导致细胞死亡。
因此在进行培养中, 保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等, 是维持细胞生存的基本条件。
2.恒定的温度维持培养细胞旺盛生长, 必须有恒定适宜的温度。
人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃, 偏离这一温度范围, 细胞的正常代谢会受到影响, 甚至死亡。
培养细胞对低温的耐受力较对高温强, 温度上升不超过39℃时, 细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-40℃1小时, 即能受到一定损伤, 但仍有也许恢复；在40-41℃1小时, 细胞会普遍受到损伤, 仅小半数有也许恢复；41-42℃1小时, 细胞受到严重损伤, 大部分细胞死亡, 个别细胞仍有恢复也许；当温度在43℃以上1小时, 细胞所有死亡。
3.气体环境气体是人体细胞培养生存必需条件之一, 所需气体重要有氧气和二氧化碳。
氧气参与三羧酸循环, 产生供应细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。
分子分型和细胞分型-概述说明以及解释
分子分型和细胞分型-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容可以从以下角度进行撰写：概述部分是整篇文章的开篇，通过对分子分型和细胞分型的概括性介绍，引导读者对这两个主题有一个大致的了解。
首先，简要介绍分子分型和细胞分型是生命科学中的重要研究领域，涉及到生物体内分子和细胞的分类、识别和表征等方面。
随着生物科技的不断发展，这两个领域的研究意义和方法也得到了全面提升。
对于分子分型，可以介绍其涉及到对生物体内重要生物分子（如蛋白质、核酸、糖类等）结构、功能以及相互作用等方面的分析和研究。
通过对生物分子的分型，可以深入了解生物体内的代谢、信号传导、免疫应答等关键过程，为药物研发、生物学研究等提供重要支持。
相对于分子分型，细胞分型则更加注重对细胞的分类和表征。
细胞是生物体的基本结构和功能单位，通过对细胞形态、生理学特性、基因表达等方面的研究，可以更加深入地了解生物体内的发育、分化、疾病进展等过程。
细胞分型在癌症研究、干细胞研究、组织工程等领域发挥着重要作用。
本篇文章主要围绕分子分型和细胞分型展开，通过对这两个领域的概要介绍，介绍其定义、背景和研究意义，以及目前的研究方法与应用。
同时，还将结合目前的研究进展，总结分子分型和细胞分型之间的关系，并对其在未来的应用前景进行展望。
通过这样的概述，读者可以对分子分型和细胞分型有一个初步的了解，为后续章节的具体内容打下基础。
文章结构部分的内容如下所示:1.2 文章结构本文分为三个主要部分：引言、正文和结论。
引言部分提供了对分子分型和细胞分型的概述，介绍了文章的目的和结构。
通过引言可以帮助读者对分子分型和细胞分型有一个初步的了解，并建立起对这些主题的兴趣。
正文部分是本文的核心部分，主要包括分子分型和细胞分型这两个主题。
其中，分子分型部分包括定义和背景、分子分型的意义以及分子分型的方法与应用。
细胞分型部分包括细胞分型的概念和原理、细胞分型的分类方法以及细胞分型的研究进展。
培养动物细胞
转化后的细胞可能具有恶性 性质，也可能仅有不死性而 无恶性。
永久细胞系的特征
细胞形态已发生变化，比如细胞 变小，附性减少，具有较高的 核质比；
生长速率增加，倍增时间缩短； 对血清的依赖性减小； 贴壁依赖性降低； 细胞异倍体和非整倍体增加，细
主要作用于赖氨酸或精氨酸 相连接的肽键，使细胞间 质中的蛋白水解而使细胞分 散开来。
适用于细胞间质较少的软组 织。
胰 酶 浓 度 一 般 为 0.125% 和 0.25% ， pH 为 8.0 ， 最 适 温 度37℃。
胶原酶消化法
对胶原有很强的消化作用 只对细胞间质有较好的消化 作
用，而对细胞本身影响不大. 适用于消化分离纤维性组织、 结
细胞培养用液
细胞培养用液
水 平衡盐溶液：主要由无机盐和葡萄糖组成
消化液：胰蛋白酶液、Na2-EDTA液、胶原蛋白酶液 消化液抑制液：血清、大豆胰酶抑制剂 pH调整液:NaHCO3溶液和羟乙基哌嗪乙磺酸液 抗生素液:常常青霉素和链霉素结合使用 谷 氨酰胺补充液:很不稳定，需要单独配制
5.4 原代培养技术
上皮型细胞
名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同。 形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角 上皮型细胞
形，中间有圆形核。 生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层
—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群 而单个活动。 来源：来源于外胚层、内胚层细胞, 如： 皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤。
在开放培养时，一般把细胞置于 95%空气和5%二氧化碳的混合气体 环境中进行培养。
二氧化碳培养箱
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培养细胞形态分类
体外培养细胞大多培养在瓶皿等容器中，根据它们是否能贴附在支持物上生长的特性．可分为贴附型和悬浮型两大类。
1．贴附型
(图2一1) 这类细胞在培养时，能贴附在支持物表面生长。
大多数培养细胞呈贴附型生长；只赖于贴附才能生长的细胞称贴附型细胞或锚着依存型细胞。
关于细胞的贴附过程和机制将另加叙述。
当单细胞贴附在支持物上后，易失去它们在体内时原有的特征，细胞分化现象常变得不显著。
在形态上常表现单一化的现象，并常反映其胚层起源，呈现类似前述返祖现象。
如来源于内、外胚层的细胞多呈上皮细胞型；来自中胚层的细胞则易呈成纤维细胞型(这种现象又与供体的年龄有密切的关系，原供体越幼稚则“返祖”越明显)；显然与细胞分化有关。
由于上述原因，体外培养细胞形态常表现有一般化的倾向。
因此在判定细胞形态时，很难再按体内细胞标准确定,仅能大致作如下分类。
(1)成纤维细胞型：本型细胞因形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名：细胞体呈梭形或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质向外伸出2—3个长短不同的突起。
细胞在生长时多呈放射状、火焰状或漩涡状走行：除真正的成纤维细胞外．凡由中胚层间充质起源的组织．如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本类形态。
另外在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称为成纤维细胞。
因此组织培养中的成纤维细胞一词是一种习惯上的称法．此点与体内细胞不同。
(2)上皮细胞型：本型细胞具有扁平不规则多角形，中有圆形核．细胞紧密相连成单层膜：细胞增殖数量增多时，整块上皮膜随之移动；处于上皮膜边缘的细胞多与膜相连，很少脱离细胞群单独活动。
起源于内、外胚层细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝、胰和肺泡上皮等组织培养时，皆呈上皮型形态。
上皮型细胞生长时，尤其是外胚层起源的细胞．细胞之间常出现所谓拉网现象，即在构成上皮膜状生长的细胞群中一些细胞常相互分离卷曲，致使上皮细胞膜中形成网眼状空洞。
拉网的形成可能与细胞分泌透明质酸酶有关。
(3)游走细胞型：本型细胞在支持物上散在生长．一般不连接成片。
细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变形运动．速度快而且不规则。
此型细胞不很稳定，有时亦难和其他型细胞相区别。
在一定条件下，由于细胞密度增大连接成片，可呈类似多角形，或因培养基化学性质变动等，也可能变成成纤维细胞形态。
(4)多形细胞型：除上述三型细胞外，还有一些组织和细胞，如神经组织的细胞等，难以确定它们规律的形态，可统归人多形型细胞。
2．悬浮型
有的细胞在培养时不贴附于支持物上，而呈悬浮状态生长。
如某些癌细胞和血液白细胞可呈悬浮型。
细胞悬浮生长时．胞体为圆形，观察时不如贴附型方便。
其优点是细胞悬浮在培养液中生长。
生存空间大．允许长时间生长．能繁殖大量细胞。
便于做细胞代谢等研究。
对组织培养细胞形态的分类，主要根据细胞在培养中的表现以及描述上的方便而定。
当细胞处于较好的培养条件时．形态上有相对的稳定性．在一定程度上能反映细胞的起源，正常和异常(恶性)也可能区别开来，故可作为判定细胞生物学性状的一个指标或依据。
但必须意识到．培养细胞的一般形态．并不是一项很可靠的指标．原因是它可受很多因素的影响而发生改变，当培养条件发生变化．如反复开关培养箱．不但影响温度．使之波动，还能放出培养箱内的CO2，使培养基呈碱性。
还有支原体污染、培养基pH改变等都可使细胞形态发生变化。
如HeLa细胞原本属于上皮型，但在过酸或过碱的情况下可变成梭形，pH适宜时又可恢复。
从细胞接种到细胞密度增大的一代生长过程中。
细胞形态表现也有所不同，如上皮型细胞在刚接种后不久，因细胞数量较少，细胞可能呈星形或三角形。
只有当细胞数量增多后，多角形态特点和上皮膜状结构才逐渐变得明显起来。
另外贴附型和悬浮型细胞性质也不是绝对一成不变的；在一定条件下，悬浮型细胞可呈贴附状生长，贴附型细胞也可呈悬浮状生长。
当细胞发生转化后，细胞形态变化更大；成纤维细胞转化后可变成上皮形态。
另外在一些类型相同的细胞之间，如癌细胞等．也很难在形态上看出有什么明显区别。
由于培养细胞形态的易变性．在利用形态学指标判定细胞类型和其他一些性状时应持谨慎态度。
不应仅仅依赖光学显微镜观察的结果．必要时须做超微结构和其他方法的分析，如电镜下观察到桥粒时，可确认为上皮型细胞，因桥粒是上皮细胞所特有的结构．但在光镜下不可见，只有在电子显微镜下才能观察到。
因此电子显微镜所提供的形态学依据显然更为可靠。