花粉管生长观察及核型分析
毛葡萄花粉管的萌发与生长情况的观察
毛葡萄花粉管的萌发与生长情况的观察张瑛,李鸿莉,朱建华,徐宁,卢江,彭宏祥*(广西农业科学院园艺研究所南方葡萄研究中心,广西南宁530007)摘要分别于人工授粉后的不同时间段对毛葡萄雌能花株雌蕊进行荧光染色后压片观察,结果表明:人工授粉后花粉的萌发率显著高于自然授粉状态,且环境条件在很大程度上制约花粉的萌发。
人工授粉72h花粉管从珠孔进入胚珠内部,且参与受精的花粉管由于先端膨大出现了生长受阻现象;而自然授粉72h内均未见有花粉管到达花柱基部,主要在花柱中部停止生长。
2种授粉方式出现的花粉管生长停滞现象,均对毛葡萄结实率产生一定影响。
关键词毛葡萄;花粉管;萌发;生长中图分类号S663.1文献标识码 A 文章编号0517-6611(2006)21-5540-02O b s e rv a t ion o n th e G e r m in a tio n an d G row th C ou rse o f Po lle n T ub s e o f V itis quinquangu laris R e h dZHANG Y in g e t a l(H o r ticu ltu re In s titu te o f G u an g x i A cadem y o f A g r icu ltu ra l S cien ce s;R e sea rch C en tre o f G rape in S ou th,N an n in g,G u an g x i530007) A b s tra c t A t in te rva ls o f2,4,8,12,24,48,72,96and120ha fte r po llin a tion,th e po llentu bes sub sequ en t g row thinth e sty le s w a s observed a fte r fl u o re s-cen ce co lo ra tion.T h e re su lt sh ow ed th a t th e ge rm in a tion pe rcen tage o f po llen s in a r tificia l po llin a tion w a s sign ifican tly h igh e r th anth a t in open po llin a tion an d ge rm in a tion o f po llen s w as res tr icted by su r roun d in gs.P o llentu bes re ach ed o vu le v ia m icropy le w ith in72ha fte r a rtificia l po llin a tion,and po llentube s w e re a rre sted a fte r reach ed ca rpe l in h an d po lli n a tion an d th e re are n o po llentu bes re ach ed th e ba se pa r t o f th e s ty le in open po llin a tion.T h e ph en om en on o f po llen tu bes a rres ted intw o po llin a tion sty le in flu en ce fru ctifica tion o f V itis qu inquangu laris R eh d.K e y w o rd s V itis quinquangu laris R eh d;P o llentube;G erm in a tion;G row th毛葡萄(V itis qu i nquangul aris R ehd)原产于我国,是广西野生葡萄中分布最广、蕴藏量最大的种类。
花粉管生长的分子机制研究
花粉管生长的分子机制研究花粉管是在花粉萌发后，从花粉颈向雌蕊生长的管状结构。
花粉管生长的目的是完成花粉粒的授粉任务。
在过去的几十年里，科学家们一直在研究花粉管的分子机制，以期解开这个生命现象的奥秘。
花粉突破表皮层的过程中，花粉发生了不同程度的喷射捕获。
某些压力条件下，花粉颈壁就会断层，花粉粒就会被弹射到一段距离之内，然后开始萌发。
花粉起初的生物学转化包括离子、分子、蛋白质和核酸。
这种转化会引发花粉管的破裂和内部的细胞溶酶体释放。
经过化学信号传递，细胞壁的加强和细胞壁腐蚀剂的自身输出让花粉管突破表皮层。
花粉管生长过程中的步骤：1. 感知与去向决定花粉管生长开始于感知和定向远程信号的阶段。
它们通过子孔和花粉表面进行接受。
感知这些信号的蛋白质用来激发花粉管的相应适应性和运动反应。
2. 细胞壁腐蚀剂的释放花粉管生长的下一个的阶段是需要细胞壁长期的腐蚀素放到环境中。
利用这个，花粉管就能够开始切入紧张的花粉。
腐蚀剂释放过程中，细胞壁被氧化酶反应加强，而增强的细胞壁可以限制花粉管在底层花粉颈部分裂。
3. 细胞伸长和细胞形态学改变花粉管的下一个阶段是伸长探头。
这个过程需要激发物理力学的必要变化。
在这个过程中，花粉管一些阶段会出现细胞形态的特殊变化，这是视觉物理学学科介入的领域。
这个过程需要摄像与形态学分析技术，以解剖伸长活动和细胞结构特征。
4. 细胞硬化和拐角转移花粉管的下一个阶段是需要细胞硬化，以摆脱曲折处的外部力。
在弹性区和硬化区发生的细胞强度变化，是细胞去适应应变条件的过程。
此外，细胞层和细胞壁的摩擦强度也会随着硬化程度的改变而发生变化，以改变花粉管的方向。
5. 聚合物分布与生物矿化花粉管的生长也需要聚合物的特殊分布和生物矿化的作用。
在聚合物的分布中，可采用细胞化学技术和基因组学分析准确阐述聚合物的分布和作用；而在生物矿化中，比较先进的是利用纳米生物外壳处理过的纳米材料。
总的来说，花粉管的生长是一个极其繁琐而复杂的过程，其中涉及到了大量的生物化学、细胞学等学科。
花粉的形态观察及生活力测定
实验一花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料百合、金鱼草、菊花等花粉。
三、仪器及药品显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨水。
四、实验原理花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。
也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。
2 ） TTC 染色法：使用TTC测定花粉生命力的原理，主要是无色药液进入花粉遇到活组织里的脱氢酶，接受氢离子，还原成红色三苯基甲腊TTF，还原结果使有生命力的花粉染上红色，死花粉不着色；花粉生活力强弱有异，染色深浅也有不同。
花粉形态观察实验报告
一、实验目的1. 了解花粉形态学的基本知识，掌握花粉形态观察的实验技能。
2. 通过观察不同植物花粉的形态结构，加深对植物分类学、系统发育和传粉方式的认识。
3. 培养实验操作能力和科学思维。
二、实验原理花粉是植物的雄性生殖细胞，具有多种形态和结构，对植物的传粉和分类具有重要意义。
通过光学显微镜和扫描电子显微镜观察花粉的形态和结构，可以了解花粉的多样性及其与传粉方式的关系。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：不同植物的花粉样品（如小麦、玉米、大豆等）。
2. 试剂与耗材：冰乙酸、乙酸酐、浓硫酸、甘油、石炭酸、加拿大树胶、蒸馏水、酒精等。
3. 仪器：光学显微镜、扫描电子显微镜、水浴锅、离心机、小试管、镊子、解剖针、细铜网、载玻片、盖玻片、双面透明胶带、酒精灯、目镜测微尺。
四、实验步骤1. 准备花粉样品：将采集到的花粉样品放入干燥器中，待花粉干燥后取出，用解剖针挑取适量花粉，放入装有冰乙酸的试管中。
2. 制片：将花粉样品在冰乙酸中浸泡一段时间，取出后滴加少量加拿大树胶，将花粉粘附在载玻片上，用盖玻片覆盖。
3. 光学显微镜观察：将制片放入光学显微镜下观察花粉的形态、大小、形状、纹饰等特征。
4. 扫描电子显微镜观察：将制片放入扫描电子显微镜下观察花粉的表面结构，如纹饰、突起等。
5. 记录数据：根据观察结果，记录花粉的形态、大小、形状、纹饰等特征，并计算花粉的长度、宽度、面积等参数。
五、实验结果与分析1. 光学显微镜观察结果：小麦花粉为长椭圆形，长度约为30-40微米，宽度约为15-20微米，表面具有网状纹饰；玉米花粉为圆形，直径约为20-30微米，表面具有突起；大豆花粉为长椭圆形，长度约为40-50微米，宽度约为20-30微米，表面具有网状纹饰。
2. 扫描电子显微镜观察结果：小麦花粉表面具有明显的网状纹饰，纹饰大小不一；玉米花粉表面具有突起，突起高度不一；大豆花粉表面具有网状纹饰，纹饰大小不一。
3. 结果分析：通过观察不同植物花粉的形态和结构，可以看出花粉在大小、形状、纹饰等方面存在差异，这些差异可能与植物的传粉方式和适应性有关。
部分野生杜鹃杂交授粉后花粉管生长状况分析
部分野生杜鹃杂交授粉后花粉管生长状况分析耿兴敏;张超仪;尹增芳【摘要】以映山红(Rhododendron simsii)及锦绣杜鹃(Rhododendron pulchrum)为母本，分别与杜鹃属15种杜鹃进行杂交授粉试验，观察授粉后花粉在柱头上萌发与花粉管生长状况，分析杜鹃远缘杂交组合的亲和性。
结果显示，所有父本花粉都能在映山红及锦绣杜鹃柱头表面附着并萌发，花粉管生长情况和异常花粉管的比率因父本不同而情况各异。
与锦绣杜鹃组合相比，映山红组合花粉管到达花柱底部速度快、数量多，异常花粉管比率低，部分锦绣杜鹃杂交组合，花粉管在花柱中、上部生长受阻，表明映山红组合种间杂交亲和性较高。
亲和性较差的杂交组合，花粉管生长易出现扭曲、螺旋、膨大、破裂以及胼胝质过多沉积等现象，但自交与种内杂交组合也存在各种花粉管生长异常状况。
结果表明，花粉管异常的类型与杂交亲和性无直接联系，但异常花粉管出现的比率与杂交亲和性相关。
%Rhododendron simsii and Rhododendron pulchrum as maternal parent were crossed with 15 wild Rhododendron species. In order to make clear the interspecific cross compatibility and pre -fertilization barriers, the growth of pollen tube on the stigma and into the style was observed under the epifluorescence microscopy. The results showed that pollens of all cross combinations could be attached and germinated on stigmas of R. simsii and R. pulchrum, however pollen tube growth and the ratio of abnormal pollen tubes were different due to varied male parents. Different abnormalities of arrested pollen tube tips have been detected, including colied, spiralling, swollen, burst, heavy callose deposition on the wall and so on. The growth rate of pollen tube was more rapidly among crosscombinations with better cross compatibility such as self - pollination and intraspecific hybridization of R. simsii, and their pollen tubes reached the bottom of style canal more than the cross combinations with worse cross compatibility. Different regions in the style canal and the ovary loculus for expression of pollen tube arrest have been found according to the different crosscombinations. R. simsii as maternal parent, pollen tube of all cross combinations reached the bottom of style canal, although pollen tube abnormality exited in all cross combinations. R. pulchrum as maternal parent, pollen tube growth of several cross combinations was inhibited in upper and lower style canal, and the ratio of pollen tube abnormality was higher. The results indicated R. simsii as maternal parent had better cross compatibility than R. pulchrum. In addition, abnormalities types of arrested pollen tube tips had no concern with cross compatibility, even if inbred combination had abnormal situation of pollen tubes, but emergence ratio of abnormal pollen tube was related to cross compatibility.【期刊名称】《安徽大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(000)004【总页数】8页(P94-101)【关键词】杜鹃;花粉管;杂交亲和性【作者】耿兴敏;张超仪;尹增芳【作者单位】南京林业大学风景园林系，江苏南京 210037;南京林业大学风景园林系，江苏南京 210037;南京林业大学森林资源与环境学院，江苏南京 210037【正文语种】中文【中图分类】S685.21我国野生杜鹃花资源丰富，占世界杜鹃花资源的半数以上［1］，但我国对于杜鹃花资源的应用与研究，尤其是新品种选育方面，还相当薄弱，仅限于张长芹［2］、刘晓青［3］等的报道.国外有关杜鹃花杂交育种的研究起步较早，杂交育种相关的研究也有大量报道，到2002年为止，登记的杜鹃花新品种已经有28 000种［4］.杜鹃花种间杂交障碍存在着受精前与受精后障碍.杜鹃种间杂交授粉后，花粉基本在柱头都可以萌发，但柱头表面可能会产生胼胝质阻止花粉管进入花柱，在进入花柱后，花粉管也可能发生顶端膨大、变形、停止生长等现象，或花粉管无法进入胚珠以及花粉管在胚囊过度生长等［5－7］.花粉管的生长受阻可能发生在不同的部分，不同杂交组合中花粉管生长受阻的部位存在种间差异［6］.有报道称蒙导授粉和正己烷处理可以克服杜鹃受精前障碍［8］.受精后障碍主要表现为胚珠停止发育，种子不萌发或萌发率很低以及后代出现白化苗等现象［9－11］.胚拯救是克服受精后障碍的有效技术手段，在杜鹃育种中也有报道［12］.在常绿杜鹃与黄花落叶杜鹃杂交过程中，常出现白化苗现象，Ureshino等［13－14］利用三重杂交、回交和倍性杂交等有效克服了受精后障碍并获得绿色幼苗.近年来，各地纷纷展开了野生杜鹃的引种驯化工作，但由于野生杜鹃大多分布在高山地区，生长发育要求冷凉的环境条件，对高温的忍耐力不强，杜鹃属植物，尤其是常绿品种的引种栽培至今没有成功［15－16］.高温胁迫严重影响了杜鹃花在我国城市中的推广应用.因此该研究以培育耐热性强、生态适宜范围广的杜鹃新品种为目的，以南京地区栽培的耐热性较好的映山红(Rhododendron simsii)和锦绣杜鹃(Rhododendronpulchrum)为母本，自交的同时，与高海拔地区引种的杜鹃属其他各种进行杂交.利用荧光显微镜观察这些杂交组合授粉后花粉管的生长状况，分析其远缘杂交亲和性的同时，进一步明确杜鹃杂交存在的种间杂交受精前、后障碍，为我国野生杜鹃的杂交育种提供理论依据.1 材料与方法1.1 实验材料以南京地区栽培的映山红(R.simsii)、锦绣杜鹃(R.pulchrum)为母本，自交的同时，以表1所列野生杜鹃种为父本(花粉来自中科院昆明植物园)，配置杂交组合.表1 各杜鹃野生种的学名、分类及编号Tab.1 Latin name and classification of wild Rhododendron and their abbreviations注:南京取样的映山红编号为SMS(NJ);昆明取样的映山红编号为SMS(KM)分类种名学名缩写杜鹃亚属杜鹃组睫毛杜鹃 R.ciliatum CLA薄皮杜鹃 R.taronense TRE窄叶杜鹃 R.araiophyllum APL红花露珠杜鹃 R.irroratum subsp.pogonostylum PGS常绿杜鹃亚属常绿杜鹃组DCR马银花亚属长蕊组马银花 R.ovatum OVT滇南杜鹃 R.hancockii露珠杜鹃 R.irroratum IRT马缨杜鹃 R.delavayi DLV美容杜鹃 R.calophytum CPT大白杜鹃 R.decorum HCK映山红亚属映山红组锦绣杜鹃 R.pulchrum PUR映山红R.simsii SMS白花杜鹃 R.mucronatum SPB MCN映山红亚属轮生叶组大字杜鹃 R.schlippenbachi1.2 试验方法2011年4月中旬开花前3 d对母本进行去雄套袋，待柱头分泌大量黏液时选择于当天上午9:00—12:00进行常规人工授粉，各组合至少重复15朵花.授粉24、48、72 h后采集花柱及子房，每个杂交组合取5朵花.参照Ureshino等［5］的方法，将柱头等用FAA液固定24 h后，置于70%的酒精内，于4℃条件下保存，用于解离、染色和观察.用3 mol·L－1的NaOH溶液45℃水浴解离3 h，解离前后都要用蒸馏水冲洗，然后用0.1%的苯胺蓝(0.1 mol·L－1 K3PO4·7H2O缓冲液)染色3 h，压片后使用Leica DM500B荧光显微镜观察、拍照.统计花粉管生长数量及其异常花粉管的比率.2 结果与分析2.1 不同杂交组合花粉管异常生长状况分析杂交授粉后花粉管生长状况如图1所示.图1中:(1)映山红×白花杜鹃，花粉管在柱头萌发，并向下开始生长(箭头所示);(2)映山红×白花杜鹃，花粉管在柱头上部生长，部分花粉管出现膨大、扭曲生长(箭头所示);(3)映山红×白花杜鹃，花粉管在柱头下部生长，胼胝质规则分布(箭头所示);(4)映山红×白花杜鹃，杂交授粉3 d后花粉管进入胚囊;(5)锦绣杜鹃×薄皮杜鹃，授粉5 d后，大多花粉管在柱头缠绕(箭头所示)，没有进入花柱道，花粉管有胼胝质不规则沉积(箭头所示);(6)映山红×薄皮杜鹃，花粉管粗细不均(箭头所示);(7)锦绣杜鹃×滇南杜鹃，花粉管在柱头表面打结(箭头所示);(8)映山红×滇南杜鹃，花粉管在花柱内螺旋、打结(箭头所示);(9)映山红×露珠杜鹃，花粉管破裂(箭头所示);(10)锦绣杜鹃×薄皮杜鹃，花粉管螺旋生长、粗细不均(箭头所示);(11)锦绣杜鹃×红露珠杜鹃，先端沉积胼胝质塞(箭头所示);(12)锦绣杜鹃×睫毛杜鹃，花粉管卷曲、杂乱生长(箭头所示);(13)锦绣杜鹃×露珠杜鹃，花粉管尖端膨大成气球状(箭头所示);(14)映山红×滇南杜鹃，杂交后子房未见膨大，但杂交24 h后花粉管就进入胚囊(箭头所示);(15)映山红×美容杜鹃，花粉管在子房内螺旋生长(箭头所示);(16)映山红×映山红(昆明)，花粉管正常生长.总之，该试验所配置的杂交组合中，所有花粉在授粉1 d后都能在柱头萌发，杂交亲和的花粉在花柱上部花粉管也部分出现异常，但大多数花粉仍能继续生长进入胚囊(图1(1)～1(4)).杂交亲和性较差的组合，如图1(5)所示，锦绣杜鹃×薄皮杜鹃在授粉5 d后大多数花粉还在柱头盘旋，没有进入花柱.所有杂交组合花粉管生长状况的观察结果表明，花粉管异常现象主要表现为花粉管粗细不均、螺旋、破损、尖端膨大、杂乱生长、胼胝质沉积等异常情况(图1(6)，图1(9)～1(15))，少数组合出现花粉管打结现象(图1(7)和1(8))，如映山红×大字杜鹃、映山红×薄皮杜鹃、锦绣杜鹃×美容杜鹃、锦绣杜鹃×薄皮杜鹃等.还有一些杂交组合，如锦绣杜鹃×薄皮杜鹃、映山红×薄皮杜鹃出现较多的异常类型.图1 杂交授粉后花粉管生长状况分析Fig.1 Pollen tube growth after pollination(1)映山红×白花杜鹃，×100;(2)映山红×白花杜鹃，×100;(3)映山红×白花杜鹃，×100;(4)映山红×白花杜鹃，×100;(5)锦绣杜鹃×薄皮杜鹃，×100;(6)映山红×薄皮杜鹃，×200;(7)锦绣杜鹃×滇南杜鹃，×100;(8)映山红×滇南杜鹃，×200;(9)映山红×露珠杜鹃，×100;(10)锦绣杜鹃×薄皮杜鹃，×200;(11)锦绣杜鹃×红露珠杜鹃，×100;(12)锦绣杜鹃×睫毛杜鹃，×100;(13)锦绣杜鹃×露珠杜鹃，×200;(14)映山红×滇南杜鹃，×100;(15)映山红×美容杜鹃，×200;(16)映山红×映山红(昆明)，×200;PG:花粉粒;PT:花粉管;OU:胚珠2.2 不同杂交组合花粉管生长状况2.2.1 映山红杂交组合如图2所示，以映山红作为母本时，所有杂交组合的花粉在授粉24后，映山红自交、映山红×映山红(昆明)、映山红×薄皮杜鹃以及映山红×滇南杜鹃组合的花粉管已穿过花柱进入子房.其他杂交组合，其父本花粉也都能够在柱头表面萌发，但进入花柱通道内的花粉管数量及异常花粉管的比率，因杂交组合不同而有所不同.进入花柱的花粉管数量大于50根的父本花粉，包括睫毛杜鹃、白花杜鹃、红花露珠杜鹃以及映山红自交花粉，但红花露珠杜鹃以及映山红自交花粉有70%以上出现花粉管异常现象.大白杜鹃、美容杜鹃、马缨杜鹃及大字杜鹃萌发花粉中，进入花柱的花粉管数量较少，不到20根，但异常花粉管比例也有所降低.另外，映山红×露珠杜鹃的杂交花粉，进入花柱的花粉管数量较少，但异常花粉管的比例很高.图2 授粉后花粉管在映山红柱头中生长状况及异常花粉管比例Fig.2 Pollen tubegrowth on stigmas and into the style of R.simsii after pollination and frequency of abnormal pollen tubes授粉72 h后，大部分杂交组合进入花柱中的花粉管数量均多于授粉后24 h，但映山红×马缨杜鹃组合进入花柱的花粉管数量未见增加，仍少于20.并且随着进入花柱花粉管数量的增加，部分杂交组合，如映山红×睫毛杜鹃和映山红×大白杜鹃异常花粉管的比例也在增加.除了映山红×露珠杜鹃、映山红×大字杜鹃、映山红×马缨杜鹃、映山红×白花杜鹃以及映山红×窄叶杜鹃以外，大部分杂交组合在授粉72 h后，花粉管都伸入了子房.授粉120 h后，各组合花粉管进入花柱的数量也有所增加(＞20根)，且各进入花柱的花粉管均能到达花柱底部.但个别组合，如映山红×薄皮杜鹃、映山红×滇南杜鹃异常花粉管的比例增高，主要表现为较严重的胼胝质沉积、花粉管破裂等现象.其他组合也存在花粉管异常现象，但比例较低，如映山红×睫毛杜鹃、映山红×露珠杜鹃、映山红×大字杜鹃、映山红×马缨杜鹃、映山红×美容杜鹃.2.2.2 锦绣杜鹃杂交组合授粉后花粉管在锦绣杜鹃柱头中生长状况及异常花粉管比例如图3所示.图3 授粉后花粉管在锦绣杜鹃柱头中生长状况及异常花粉管比例Fig.3 Pollen tube growth on stigmas and into the style of R.pulchrum after pollination and frequency of abnormal pollen tubes由图3可知，以锦绣杜鹃作为母本时，不同种类父本各花粉虽然亦能在柱头表面萌发，但花粉粒附着数量、萌发数量与花粉管长度等却存在显著差异.授粉24 h后，大部分组合花粉在柱头的附着量都较多，但白花杜鹃、窄叶杜鹃和滇南杜鹃花粉在母本柱头的附着量较少，并且除锦绣杜鹃×滇南杜鹃以外各组合花粉管均能通过柱头进入花柱.有部分组合萌发的花粉管数量在50根以上，如锦绣杜鹃×映山红、锦绣杜鹃×大字杜鹃与锦绣杜鹃×睫毛杜鹃，但花粉管异常的比率高达31% ～100%.与映山红为母本的杂交组合相比，大部分组合花粉管数量都比较少，并且可以发现，除了锦绣杜鹃×薄皮杜鹃、锦绣杜鹃×美容杜鹃、锦绣杜鹃×马银花与锦绣杜鹃×白花杜鹃以外，较多花粉管存在胼胝质过量沉积或者粗细不一现象.同时，仅部分组合的花粉管能够在24 h内达到花柱底部，如锦绣杜鹃×映山红、锦绣杜鹃×大白杜鹃与锦绣杜鹃×白花杜鹃.与授粉第24 h相比，授粉72 h后，大部分杂交组合中进入花柱的花粉管数量都有所增加，但是穿过花柱进入子房的杂交组合数量并未增多，仅部分组合的花粉管继续向下生长，如锦绣杜鹃×红花露珠杜鹃、锦绣杜鹃×大字杜鹃、锦绣杜鹃×马缨杜鹃、锦绣杜鹃×窄叶杜鹃、锦绣杜鹃×马银花、锦绣杜鹃×滇南杜鹃，其中锦绣杜鹃×红花露珠杜鹃、锦绣杜鹃×大字杜鹃、锦绣杜鹃×马银花与锦绣杜鹃×滇南杜鹃等组合的花粉管的70%都存在异常现象.授粉后120 h后，包括自交在内的14个杂交组合当中，有8个杂交组合的花粉管进入花柱底部，其中锦绣杜鹃自交、锦绣杜鹃×映山红(昆明)、锦绣杜鹃×白花杜鹃有较多花粉管到达花柱底部(＞50根)，异常花粉管数量较少(＜30%)，其他5个组合进入花柱底部的花粉管数量较少，并且锦绣杜鹃×红花露珠杜鹃、锦绣杜鹃×马缨杜鹃及锦绣杜鹃×美容杜鹃3个组合的异常花粉管比例较高.3 讨论亲和性授粉在花柱道和胎盘凹槽生长期间，花粉管是直的、末端半透明(称为帽区)，在帽区后边相隔一定距离有规则的胼胝质沉积［6］.映山红、锦绣杜鹃自交、杂交后，花粉管的生长出现扭曲、螺旋、膨大、断裂和胼胝质过量沉积等异常情况.Williams等［6］在杜鹃远缘杂交时还发现受精后花粉管末端渐缩、有尖刺等其他花粉管生长异常现象.花粉管异常情况出现的类型与杂交亲和性无直接联系，即使自交的组合也发现花粉管螺旋、破损、胼胝质过量沉积等异常的情形，部分组合如:锦绣杜鹃×薄皮杜鹃杂交组合，除以上异常状况外，还发现花粉管打结、杂乱生长、先端膨大等异常，在所有异常情况中较多组合出现花粉管胼胝质过量沉积、螺旋，而花粉管打结现象较少.根据Williams等［6］在杜鹃花科远缘杂交研究中的发现，花粉管的生长受阻可能发生在7个不同的部分:①花粉在柱头表面无法萌发;②花粉粒萌发，产生花粉管，但花粉管在柱头表面发生异常;③花粉管进入花柱道，但在花柱道内出现异常;④花粉管无法进入子房;⑤花粉管进入子房，但不能进入珠孔;⑥花粉管进入珠孔，但无法进入胚囊;⑦花粉管无法在胚囊内释放精子.不同杂交组合中花粉管生长受阻的部位存在种间差异.该研究以映山红作为母本杂交，各父本花粉都能够在映山红柱头上附着并萌发，并且各父本花粉管基本上都能到达花柱下部，虽然不同杂交组合花粉管的生长速度、到达花柱基部的比率及异常花粉管的比率等存在显著差异(图2).个别组合，如映山红×马缨花、映山红×滇南杜鹃杂交2个月后子房未见膨大［17］，但在研究中也观察到有花粉管进入胚珠(图1(14)).解玮佳等［18］在高山杜鹃与大喇叭杜鹃(R.excellens)杂交时也有类似发现，即有花粉管进入胚囊，但未见子房膨大.花粉管进入胚囊，并不一定能够完成受精作用，可能会出现胚囊不亲和现象，即花粉管进入胚囊并释放出精子，但精子却不能有效地与雌配子结合实现双受精，这在玉米等作物的远缘杂交中也有报道［19］.在杜鹃杂交研究中发现，花粉管进入胚囊后，会因出现过度生长等情况，而无法完成受精［7］.该研究还发现部分杂交组合在萌发初期，或花柱中、上部出现异常花粉管，但在下部恢复正常，进入胚囊.Williams等［6］发现异常的花粉管也能伸入胚囊，但是否能顺利完成受精，还需要进行进一步胚胎发育学研究.锦绣杜鹃作为母本杂交时，仅种内及映山红组内杂交72 h后，有花粉管进入花柱下部(图3)，这几个杂交组合也获得了种子［17］.杜鹃亚属、马银花亚属以及同一亚属不同组的大字杜鹃花粉管没能到达花柱基部，在花柱通道内花粉管的生长受阻，或因其生长速度过慢，在授粉72 h后花粉管仍未能达到花柱底部;并且这些杂交组合中异常花粉管的比率也较高(图3).这些杂交组合在杂交后均未获得杂交种子，虽然部分杂交组合，如锦绣杜鹃×大字杜鹃、锦绣杜鹃×睫毛杜鹃等，杂交2个月后有子房膨大现象，但并未正常发育，形成种子［17］，这表明这些杂交组合同时存在受精后障碍.整体来看，杂交亲和性较好的组合，花粉管生长速度较快，到达花柱底部的花粉管比率较高，如映山红自交及种内杂交.Williams和Rouse［20］的研究表明，花粉管生长速度及进入子房的时间与雌蕊花柱长度有关，父本/母本的柱头长度比(SLR)显著影响种间杂交成功率，比值越接近1，杂交成功率越高.映山红做母本时，花粉管到达花柱底部的杂交组合多于锦绣杜鹃母本，异常花粉管比率低(＜30%)，这表明作为母本，映山红种间杂交亲和性要优于锦绣杜鹃.这一结果也表明母本的不同可能导致花粉管生长状况不同;同种母本因父本的不同也可能对花粉管的生长情况有不同影响，Ureshino等［5］的研究中也有类似报道.参考文献:［1］方瑞征.中国植物志·第57卷［M］.北京:科学出版社，1996.［2］张长芹，冯宝钧，吕元林.杜鹃花属的杂交育种研究［J］.云南植物研究，1998，20(1):94－96.［3］刘晓青，苏家乐，李畅，等.杜鹃花杂交、自交及开放授粉结实性研究［J］.上海农业学报，2010，26(4):145－148.［4］Leslie A C.The international Rhododendron register and checklist ［M］.2nd ed.U.K.:Royal Botanic Garden Edinburgh，Edinburgh，2002. ［5］Ureshino K，Kawai M，Miyazima I.Factors of intersectional unilateral cross incompatibility between several evergreen azalea species and Rhododendron japonicum f.flavum［J］.Japan Soc Hort，2000(36):261 －265.［6］Williams E G，Knox R B，Rouse J L.Pollination sub －systems distinguished by pollen tube arrest after incompatible interspecies crosses in Rhododendron(Ericaceae)［J］.Journal of Cell Science，1982(53):255 －277.［7］Williams E G，Kaul V，Rouse J L，et al.Overgrowth of pollen tubes in embryo sacs of Rhododendron following interspecific pollinations［J］.Amer J Bot，1986(34):413 － 423.［8］Lee J S，Ryu B Y.Breaking of interspecific incompatibility in Korea native and introduced azalea［C］∥24th International Horticultural Congress(Abstract)，1994:165.［9］Okamoto A，Suto K.Cross incompatibility between Rhododendron sect.Tsutsusi species and Rhododendron japonicum(A.Gray)J.V.Suringarf.flavum Nakai［J］.Journal of the Japanese Society for Horticultural Science，2004，73(5):453－459.［10］Kita K，Kurashige Y，Yukawa T，et al.Intergeneric hybridization between Menziesia and Rhododendron based on molecular phylogenetic data［J］.Journal of the Japanese Society for Horticultural Science，2005a，74(1):51 －56.［11］Kita K，Kurashige Y，Yukawa T，et al.Plastid inheritance and plastome－genome incompati－bility of intergeneric hybrids between Menziesia and Rhododendron［J］.Journal of the Japanese Society for Horticultural Science，2005b，74(1):318－323.［12］Eeckhaut T，de Keyser E，van Huylenbroeck J，et al.Application ofembryo rescue after interspecific crosses in the genus Rhododendron ［J］.Plant Cell Tissue and Organ Culture，2007，89(1):29 －35.［13］Ureshino K，Abe T，Akabane M.Relationship between nuclear genome construction and the plastome-genome incompatibility of progenies from intra and inter-ploid cross of evergreen Azaleasx Rhododendron japonicum f.flavum［J］.Journal of the Japanese Society for Horticultural Science，2010，79(1):91 －96.［14］Ureshino K，Miyajima I，Akabane M.Effectiveness of three－way crossing for the breeding of yellow-flowered evergreen azalea［J］.Euphytica，1998，140(1):113 －118.［15］刘晓青，苏家乐，李倩中，等.部分高山杜鹃品种在南京的性状表现及配套栽培技术［J］.江苏农业科学，2008(1):119－120.［16］张春英，戴思兰，张启翔.常绿杜鹃花叶片耐热性指标研究［R］.中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会:抗性生理，2006:409－412.［17］耿兴敏，张超仪，罗凤霞，等.中国野生杜鹃花杂交结实性研究［J］.江苏农业科学，2013，2:159－161.［18］解玮佳，李世峰，李树发，等.高山杜鹃与大喇叭杜鹃种间杂交过程的观察研究［J］.西北植物学报，2012，32(12):2432－2437.［19］段桃利.玉米与其近缘种属杂交花粉管行为研究［D］.成都:四川农业大学玉米研究所，2008.［20］Williams E G，Rouse J L.Relationships of pollen size，pistil length and pollen tube growth in Rhododendron and their influence on hybridization［J］.Sex Plant Reprod，1990(3):7 －17.。
花粉生命力的测定与形态观察
实验三花粉生命力的测定与形态观察花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过催延花期解决，有的则不得不进行花粉贮藏，为此我们必须掌握花粉贮藏的原理与技术。
为了避免杂交工作失误，在使用远地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉生命力进行鉴定，以便对杂交成果进行分析与研究。
一、实验目的掌握了解花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法及原理。
二、实验材料芙蓉花的花粉。
三、仪器及药品载玻片、盖玻片、标签、标记笔、显微镜、蔗糖、蒸馏水、联苯胺、 -萘酚、酒精、碳酸钠、过氧化氢、琼脂。
四、实验原理在园艺植物有性杂交工作中，常因杂交亲本间花期不遇，或父本植株栽在异处(地)而必须预先收集花粉。
花粉贮藏在低温(0～4℃)、干燥(相对湿度0～40％)、黑暗的环境下，代谢降低，可以较长时间地保持花粉生活力，但其贮藏期长短对花粉生活力的影响因品种而不同。
在授粉之前，对贮藏的或外地采来的花粉必须预先测定花粉的生活力，以确定哪些花粉不能用于杂交，这对取得杂交效果有直接影响。
一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。
此法的缺点是需时间较长，且实验结果易受气候条件的影响；二是将待测粉受到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生命力；三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。
将花粉播种在特定的培养基上，并在一定的环境条件下来测定其发芽能力的方法。
培养基常用蔗糖、琼脂(1％)和蒸馏水配制而成。
不同植物的花粉，对蔗糖浓度要求不同，如柑桔花粉要求25％左右，苹果和梨10～15％，桃10％左右为宜。
蔗糖浓度高低可调节培养基的渗透压，以防止花粉在培养基上破裂。
培养基以微酸性为宜，一般在pH5.2～6之间。
发芽温度在20～25℃左右，并需要空气和湿度，为了促进花粉发芽，在培养基中还可加入少量的硼酸和维生素B1。
利用花粉发芽试验测定花粉生活力是一种直接的测定方法，其结果也最可靠，但操作较麻烦，要有一定设备和一定时间。
花粉育性实验报告总结
花粉育性实验报告总结
花粉育性实验是一项重要的生物学实验，通过观察花药中花粉的发生情况和花粉管的生长情况，可以了解植物的育性特征。
本次实验中，我们观察了不同种类的植物花粉的发生情况和花粉管的生长情况，并对结果进行了总结。
首先，我们选取了几种常见的植物，包括小麦、玉米和豌豆，观察了它们的花粉发生情况。
实验结果表明，这些植物的花药中都能发现大量的花粉。
不同的植物花粉的形状、大小和颜色都有所不同，这可能与它们的生物特性和生长环境有关。
通过观察花粉的形态特征，我们可以初步判断不同种植物的育性差异。
其次，我们对花粉的萌发和花粉管的生长进行了观察。
实验结果显示，花粉在适宜的条件下能够迅速萌发出花粉管，并向子房发展。
花粉管在生长过程中，长度逐渐增加，速度较快。
通过观察花粉管的生长情况，我们可以初步判断植物的育性好坏。
最后，我们还对不同植物种类之间的花粉育性进行了比较。
实验结果显示，小麦的花粉发生较多，花粉管生长速度较快；而玉米的花粉发生较少，花粉管生长速度较慢。
这表明小麦比玉米具有更好的育性特征。
豌豆的花粉发生量较大，花粉管生长速度也较快，其育性特征与小麦相似。
综上所述，通过对花粉育性的观察和比较，我们可以初步了解植物的育性特征。
花粉育性实验不仅可以加深我们对植物生殖过程的认识，还可以为植物育种提供重要的参考。
通过深入研
究植物的花粉发生和花粉管生长等特性，我们可以更好地指导植物的繁殖工作，提高农作物的产量和品质，为农业生产做出贡献。
花粉管生长的趋性实验报告
花粉管生长的趋性实验报告
以下是花粉管生长趋性实验的报告：
实验目的：观察花粉管在不同趋性物质中的生长情况，了解花粉管的趋性。
实验材料：
1. 不同浓度的趋性物质（如某种植物激素溶液）
2. 花粉粉末
3. 毛细管或显微镜玻璃片等载玻片
4. 显微镜
5. 显微镜光源
实验步骤：
1. 首先准备好不同浓度的趋性物质溶液，并标注其浓度。
2. 取一只玻璃片并在其上涂抹一层透明的胶水，待其稍干后，将其粘贴在载玻片上，制作花粉管生长液滴。
3. 将一小部分花粉粉末撒在载玻片上，使其与胶水接触。
4. 在载玻片上的花粉上滴加不同浓度的趋性物质溶液。
5. 将载玻片放置在显微镜下，使用显微镜观察花粉管在不同趋性物质中的生长情况。
6. 记录观察结果，包括花粉管的长度、生长速度等数据。
实验结果与讨论：
根据实验的观察结果，我们可以发现花粉管对趋性物质有不同的生长反应。
某些趋性物质可能会促进花粉管的生长，使其长度增加，生长速度加快；而其他趋性物质可能会抑制花粉管的生长，使其长度减少或停止生长。
未来可以进一步探究不同趋性物质对花粉管生长的影响，确定具体的趋性物质成分，以及研究其作用机制等，以深入理解花粉管的趋性行为。
同时，这项实验也具有一定的应用价值，可用于植物杂交育种、花卉园艺等领域的研究与实践中。
普通显微镜观察花粉管的结构
普通显微镜观察花粉管的结构普通显微镜是一种常见的显微镜，被广泛用于观察生物样本的微小结构。
花粉管是花粉发育后继续生长并传输精子到花的雌蕊中的细胞结构。
通过使用普通显微镜，我们可以观察到花粉管的结构，以及其在植物生殖中的重要作用。
观察花粉管的结构之前，我们首先需要进行样品的制备。
一般来说，我们可以从开放的花朵中取出花药，并将花药放置在一个干净的玻璃片上。
然后，用玻璃棒轻轻研磨花药，使花粉散落在玻璃片上。
接下来，将玻璃片放入显微镜片夹中，并在镜片夹上加上一滴适当的显微镜盖玻片液，然后将盖玻片盖在玻璃片上。
接下来，我们可以将玻璃片放入普通显微镜的样本台上，并使用低倍镜进行初步的观察。
通过调节镜头，我们可以将花粉管带入视野中。
花粉管通常有一个长而细的管状结构，其直径通常小于5微米。
使用低倍镜可以更好地观察到其整体形态。
然后，我们可以切换到高倍镜进行进一步的观察。
在高倍镜的放大下，我们可以更清楚地看到花粉管的细节结构。
花粉管主要由细胞组成，其主要分为三个区域：顶端生长区、中间生长区和尖端子细胞区。
顶端生长区是花粉管的前端，主要负责花粉管的生长。
在顶端生长区，可以看到一些顶端细胞，其形状通常呈锥形。
顶端细胞有很高的生长能力，可以持续地延伸花粉管。
中间生长区紧接在顶端生长区之后，是花粉管的中间部分。
中间生长区的细胞通常比顶端细胞更长，且较为方形。
这些细胞具有较高的代谢活性和蛋白质合成能力，为花粉管提供所需的营养和能量。
尖端子细胞区是花粉管的末端部分，主要负责花粉管的传输功能。
在尖端子细胞区，花粉管会释放出一种叫做，激活子细胞的物质。
这种物质可以阻止尖端子细胞向外生长，使花粉管停止生长并通过雌蕊中的孔洞进入花精子。
通过观察尖端子细胞区，我们可以进一步了解花粉管的传输过程。
此外，我们还可以使用一些特殊的显微技术来进一步观察花粉管的细节结构。
例如，可以使用荧光染料来标记花粉管中特定的蛋白质或器官。
这样，我们可以通过荧光显微镜观察其在花粉管中的定位和分布。
花粉管的形成与发育及相关信号传导机制研究
花粉管的形成与发育及相关信号传导机制研究花粉管是一种特殊的细胞结构，是在花粉萌发的过程中形成的。
它是花粉和雌蕊之间的重要通道，是实现植物有性生殖的前提条件之一。
在花粉萌发的过程中，花粉管的形成和发育是一个复杂的过程，并涉及到许多信号传导通路。
本文将对花粉管的形成与发育及其相关信号传导机制进行探讨。
一、花粉管的形成与发育花粉管的形成和发育可以分为四个阶段：花粉萌发、花粉管萌发、花粉管生长和细胞壁沉积。
其中最关键的是花粉管萌发。
在花粉萌发的过程中，花粉吸收营养，膨胀增大，逐渐形成花粉管细胞。
在花粉管细胞膜的不断生长和向外突起的情况下，细胞质通过细胞质流和胞吐作用向前逐步推进，同时伴随着细胞壁的沉积，最终形成完整的花粉管结构。
花粉管的生长速度很快，可以达到每小时数十微米。
这一速度远远超过了植物细胞的一般生长速度，也表明了花粉管生长中存在一些特殊的机制和调控信号。
二、花粉管生长所涉及的信号传导机制花粉管的萌发和生长是一个非常复杂的过程，其间涉及到许多信号传导通路。
下面将从三个方面来介绍这些信号传导机制。
1.钙信号通路钙离子在植物细胞生长过程中起着重要的作用。
钙离子水平的变化对植物细胞的生长和发育有着明显的影响，也是花粉管发育过程中使用最广泛的信号分子。
花粉管细胞中的钙离子浓度通过离子通道和钙离子泵等调节机制得以维持，从而保证了细胞的正常生长和发育。
钙离子通过作用于钙依赖性蛋白激酶或钙依赖性蛋白酶等细胞内酶类，引发了许多细胞内反应，从而调节了花粉管的生长和发育。
例如，钙离子可以与CaM等钙调蛋白结合，激活蛋白激酶或蛋白酶的活性，从而影响细胞骨架的组装和细胞膜的生长。
此外，钙离子还可以调节碳水化合物代谢和细胞壁合成等细胞内生物化学反应过程。
2.蛋白激酶和激酶级联反应蛋白激酶和激酶级联反应在花粉管的生长过程中也发挥着非常重要的作用。
这些酶可以通过磷酸化和去磷酸化等机制，调节花粉管细胞中一些特定的蛋白质和信号分子的活性，从而影响花粉管的生长和衰老。
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开放性试验
Giemsa染液：Giemsa粉0.5g，加甘油33ml，充分研磨1h，56度保温2h，加甲醇33ml，混匀；使用前1：20稀释
苯胺蓝染液配方:水溶性苯胺蓝0.1g,溶于磷酸钾溶液(1/30 mol/L)100mL,避光冷藏至近无色.
FAA 配方:福尔马林(38%甲醛)5 ml: 冰醋酸5ml:70%酒精90 ml
幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精,可防止材料收缩;还可加入5 ml甘油(丙三醇)以防蒸发和材料变硬.
参考资料：/view/736903.html?tp=7_01
苯胺蓝-藏红O染液:水溶性苯胺蓝0.75g,藏红O 0.25g,溶于加热的的45%醋酸，过滤。
花粉管生长途径的显微观察
实验材料1:授粉后的雌蕊,FAA固定液 mL,5%的KOH(NaOH)溶液 mL，蒸馏水，载玻片,苯胺蓝染液，50%的甘油，盖玻片，荧光显微镜
实验步骤
1,将授粉后的雌蕊用FAA固定液固定( )小时
2,将固定好的雌蕊用5%的NaOH溶液离析透明,大致
(1h,)(75min)(90min),[视情况而定,总之要离析至透明]
3,用蒸馏水漂洗3次
4取适量材料于载玻片上,加上1~2滴苯胺蓝染液染色大约1h,再加
上50%的甘油1滴.
5盖上盖玻片之后(必要时可轻压),至于荧光显微镜下观察.
实验材料2：授粉后的雌蕊，酒精-三氯甲烷-醋酸（3：4：1）溶液，70%酒精，50%酒精，30%酒精，蒸馏水，苯胺蓝-藏红O染液，45%醋酸溶液，乳酸酚
实验步骤
1,将授粉后的雌蕊在酒精-三氯甲烷-醋酸（3：4：1）溶液中固定30min.
2,在70%酒精,50%酒精，30%酒精，蒸馏水依次浸泡
2min后取出,
3,用苯胺蓝-藏红O染液染色( )min,取出
4将材料置于45%醋酸溶液中透明约1h
5,取出材料,用乳酸酚装片,置于显微镜下观察(视野中浅紫色的为花柱组织,深蓝色的为花粉管).
植物的核型分析(去壁低渗法)
实验材料:分生组织的根尖茎尖,蒸馏水,,根尖和花粉母细胞，卡诺固定液，秋水仙碱（0.01%-0.2%），对二氯苯饱和溶液，8-羟基喹啉（0.002-0.004mol/L）,70%
酒精，纤维素酶-果胶酶混合液，双蒸水，无水酒精-冰醋酸（3：1），无水酒精，Giemsa染液
实验步骤:
1预处理;有以下几种方法
（1）用低浓度的秋水仙素溶液（0. 01 %～0. 2 %）对材料进行预处理
特点：秋水仙素有很强的毒性,如果秋水仙素用量过大或处
理时间过长,会引起染色体收缩过度或产生多倍体，但用
秋水仙素进行预处理效果较好。
（2）用饱和的对二氯苯水溶液对材料进行预处理
特点：对二氯苯也有毒性,其效果和秋水仙素
相似,但价格较为便宜。
（3）用低浓度的8-羟基喹啉溶液(0.02-0.04mol/L)对材料进行预处理。
特点; 适合处理具有较大染色体的植
物。
经过该溶液处理后,染色体的缢痕区比较清晰。
（物理方法即低温处理因时间较长建议与化学方法混合使用）。
2，固定
通常用卡诺液Ⅰ(无水酒精∶冰醋酸= 3 ∶1) 对材料固定
24h 左右。
3，将材料浸泡在蒸馏水中做前低渗处理30min，
4，转入纤维素-果胶酶混合酶溶液中，25度下酶解2-4小时。
5，吸取酶液，以双蒸水漂洗3次，在双蒸水中25度下停留30min作为后低渗处理
6，将材料固定于无水酒精-冰醋酸（3:1）中并使分生组织细胞分散制成细胞悬浮液；
7，取此细胞悬浮液滴在无水酒精浸泡的遇冷的载玻片上，让细胞迅速分散，酒精灯上迅速过火使材料干燥。
8，Giemsa染液染色，自来水冲洗载玻片，自然干燥。
即可镜检拍照。
数据处理：选择中期着丝点清晰的染色体照片配对，测量每条染色体的长臂，短臂根据臂比确定每条染色体类型M:（1） m（1.01-1.70） sm(1.71-3.00) st(3.01-
7.00) t(>7.01) T(端部着丝点)
鉴别植物种类通过染色体类型。
时间大约1天半。