浙江大学生物化学丙实验报告.
大学生物化学实验报告
大学生物化学实验报告引言：在大学中，实验是培养学生动手能力和创新能力的重要环节之一。
作为一门重要的科学实验课程，生物化学实验通常涉及生物化学原理的研究，如酶活性测定、蛋白质分离纯化等。
本实验报告将重点介绍一次生物化学实验的设计、操作步骤、结果分析和结论，通过这次实验，我们可以更深入地了解生物化学领域的研究方法和技术。
一、实验目的：本次实验的主要目的是通过观察和分析酶活性对温度和pH的影响，进一步理解酶与环境因素之间的相互关系。
通过实验，我们希望探究最适温度和最适pH值对酶活性的影响，并进一步理解酶的特性及其应用。
二、实验材料和设备：材料：A酶液、B底物液、C缓冲液、D洗涤液、E抗原液。
设备：吸光度计、温度控制仪、离心机、电子天平、试剂瓶、试管架等。
三、实验步骤：1. 准备工作：清洗实验设备，并按照实验操作要求准备好所需试剂、药品和仪器。
2. 设置实验组和对照组：将A酶液和B底物液分别装入试管中，加入不同温度和pH的缓冲液，并设置对照组进行比较。
3. 反应条件控制：将试管置于温度控制仪中，使其保持恒定的温度，并在一定时间内进行反应。
记录每组试验的开始时间和持续时间。
4. 酶活性测定：取出试管，使用吸光度计测定样品的吸光度，并将测定结果记录下来。
5. 数据分析：根据测定结果，绘制出不同温度和pH值下的酶活性曲线，并分析数据得出结论。
四、实验结果和讨论：根据实验数据统计和分析，我们观察到酶活性与温度和pH值之间存在一定的关系。
在一定范围内，酶活性随温度的升高而增加，但超过一定温度后，酶的活性会迅速下降。
这是因为高温会破坏酶的三维结构，使其失去催化活性。
此外，不同pH值对酶活性也有一定影响。
实验结果显示，酶活性在特定的pH值下达到最大值，而在过高或过低的pH环境下，酶的催化活性显著降低。
这是因为酶的催化反应需要特定的酸碱环境，而超出其最适pH范围会导致酶结构发生变化，从而降低其活性。
综合实验结果，我们可以得出结论：酶活性受温度和pH的影响较大，而最适温度和最适pH值因酶的种类而异。
导论 浙江大学生物化学及实验(丙)课件
Symbiotic system can now carry out aerobic catabolism. Some bacterial genes move to the nucleus, and the bacterial endosymbionts become mitochondria.
efficient because fuel is oxidized to CO2.
HH
H H C=C
/\
"J R—C ZCH
基团
Carbonyl (aldehyde)
Carbonyl (ketone)
R —C—R 2 0
Ether
R1—O—R2
Guanidinium
Ester Acetyl R
O H
OH
Imidazole Sulfhydryl
Anhydride (two
carboxylic acids)
A2
Amino (protonated)
H l + R—N—H
1H
Thioester
H
H
R—N—C—N/
JI ，
+N H / \ H H
R——C=CH
HN、 、夕
H
R— O
Carboxyl
R —C—O-o
R—C—N O
Hydroxyl R —O—H <(alcohol)
Enol
?—H,H
R—C=C
Imine N-Substituted
线粒体的进化
Anaerobic metabolism is inefficient because fuel is not completely oxidized.
大学生物化学实验报告
大学生物化学实验报告大学生物化学实验报告引言：生物化学实验是大学生物化学课程的重要组成部分，通过实验可以让学生更好地理解和掌握生物化学理论知识，培养学生的实验操作能力和科学研究思维。
本篇文章将以一次生物化学实验为例，介绍实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果及讨论，并对实验的意义进行探讨。
实验目的：本次实验的目的是通过酶的催化作用，研究酶对底物浓度的影响，并探讨酶的最适底物浓度。
通过本实验，旨在加深对酶活性和酶底物反应的理解，为生物化学领域的研究提供实验依据。
实验原理：酶是一类能够加速生物体内化学反应速率的蛋白质。
酶底物反应是酶与底物之间的特异性结合，形成酶底物复合物，进而催化底物转化为产物。
酶的活性受到多种因素的影响，其中底物浓度是一个重要的因素。
底物浓度低时，酶与底物的结合速率较慢，反应速率较低；而当底物浓度增加时，酶与底物结合的速率增加，反应速率也随之增加。
然而，当底物浓度达到一定程度后，酶的活性将达到最大值，此时增加底物浓度已无法进一步提高反应速率，这被称为酶的最适底物浓度。
实验步骤：1. 准备实验所需材料和仪器：酶溶液、底物溶液、酶活力检测试剂盒、试管、移液管等。
2. 将一定量的酶溶液和不同浓度的底物溶液分别加入试管中，并在恒温水浴中预热。
3. 在每个试管中加入相同体积的酶活力检测试剂盒，并迅速混匀。
4. 将每个试管放入恒温水浴中，控制反应温度。
5. 反应一段时间后，取出试管，立即停止反应。
6. 使用酶活力检测试剂盒中的试剂，按照说明书进行检测，并记录各组实验的吸光度值。
7. 根据吸光度值，绘制底物浓度与酶活性的关系曲线。
实验结果及讨论：根据实验数据，我们绘制了底物浓度与酶活性的关系曲线。
曲线呈现出一种特定的形态，即先上升后趋于平稳。
从曲线可以观察到，在底物浓度较低时，酶活性随底物浓度的增加而增加，这是因为底物浓度的增加提高了酶与底物的结合速率。
然而，随着底物浓度的进一步增加，酶活性逐渐趋于平稳，这是因为酶的活性已经达到最大值，无法再进一步提高。
生物氧化 浙江大学生物化学及实验(丙)课件
Interlocking gears (coupHng device)
Battery (two leal species of
different reduction
potential)
Motor (energy transducer)
(a)
Weight being lifted (mechanical work)
膜结构。外膜outer membrane可允许小分子 (Mr<5000)和离子自 由通过。内膜inner membrane只允许
在内膜上有特异通道的物质通过，对大部分的小分子及离 子不通透。
外膜
Outer membrane ---- Inner membrane
内膜
-Cristae -Matrix
基质
CH2
产—8。一
CO2
CH2
c—COOJ
o
II
a-Ketoglutarate
C—S-CoA
II
o
Succinyl-CoA
CoA-SH
CO2
④
Oxidative
decarboxylation
二、电子传递链：又称为呼吸链。是由存在于线粒体内膜上 的一系列能接受氢或电子的中间传递体组成。
•电子传递链的组成成分
Dehydrogenation
CH2—coo一
CH2
coo-
Succinate CoA-SH
succinyl-CoA synthetase
GTP (ATP)
⑥
Substrate-level phosphorylation
GDP (ADP)
+R
\a-ketoglutarate dehydrogenase \ complex CH2—COO~
生物化学实验报告
生物化学实验报告实验目的，通过本次实验，掌握生物化学实验的基本方法和技能，了解生物化学实验的原理和应用，提高实验操作能力和实验结果分析能力。
实验原理，生物化学实验是利用生物化学原理和方法，对生物体内的化学成分和代谢过程进行研究的实验。
其中包括蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子的分离、鉴定和定量分析。
实验材料和仪器，本次实验所需材料包括，蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子样品；试剂，酚酞、硫酸、氢氧化钠、蛋白质定性试剂、酶定性试剂等；仪器，分光光度计、离心机、电泳仪、显微镜等。
实验步骤：1. 蛋白质的定性实验，取少量蛋白质样品，加入蛋白质定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
2. 核酸的定性实验，取少量核酸样品，加入核酸定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
3. 酶的定性实验，取少量酶样品，加入酶定性试剂，观察反应情况并记录结果。
4. 碳水化合物的定性实验，取少量碳水化合物样品，加入酚酞试剂，观察颜色变化并记录结果。
5. 生物分子的定量分析，利用分光光度计、离心机、电泳仪等仪器，对生物分子进行定量分析。
实验结果分析，根据实验结果，可以对样品中的蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子进行鉴定和定量分析，从而了解生物体内的化学成分和代谢过程。
实验结论，通过本次实验，掌握了生物化学实验的基本方法和技能，了解了生物分子的定性和定量分析方法，提高了实验操作能力和实验结果分析能力。
实验意义，生物化学实验是生物化学理论与实践相结合的重要环节，通过实验可以加深对生物化学原理和方法的理解，为今后的科研工作和实验教学提供了重要的基础。
在本次实验中，我们不仅学会了生物分子的定性和定量分析方法，还培养了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
通过本次实验，我们对生物化学实验的原理和应用有了更深入的了解，提高了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
浙江大学生物化学丙实验报告5
实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________实验名称：蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析及蛋白质相对分子质量测定 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习SDS －聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)的基本原理和操作方法2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析3、学习测定蛋白质相对分子质量(Mr)的方法二、实验内容和原理（1）实验内容1、SDS －PAGE 凝胶制作；2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 电泳分离；3、洗脱测定并计算相对分子质量。
（2）实验原理 1、电泳是带电颗粒在电场作用下，作定向运动即向着与其电荷相反的电极移动的现象。
2、电泳法分离、检测蛋白质混合样品主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所产生的电泳迁移率的差别。
3、区带电泳是样品物质在一惰性支持物上进行电泳,因电泳后，样品不同组分形成带状区间，故称区带电泳。
4、聚丙烯酰胺凝胶（PAG)由丙烯酰胺和交联试剂N,N ’-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在有催化剂（如过硫酸铵或核黄素）和增速剂（如N,N,N ’,N ’-四甲基乙二胺，TEMED ）的情况下聚合而成的。
专业： 农业资源与环境 姓名： 李佳怡学号： 3130100246 日期： 2015.6.2 地点： 生物实验中心310装订线5、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是在恒定的、非解离的缓冲系统中来分离蛋白质，这主要是由蛋白质样品所带的电荷和分子质量的差异性进行分离；在电泳过程中仍保持蛋白质的天然构象、亚基之间的相互作用及其生物活性。
6、聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为⑴连续系统凝胶缓冲液的pH值及凝胶浓度不变。
浙江大学氨基移换反应及其产物的鉴定实验报告
实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 成绩： 实验名称： 氨基移换反应及其产物的鉴定 实验类型： 定量实验 同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得一、 实验目的和要求1、学习鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理；2、学习纸层析的原理和操作技术；二、 实验内容和原理1、氨基移换反应：氨基移换反应是在氨基移换酶（转氨酶)的催化下，氨基酸的α-氨基和α-酮酸的α-酮基之间发生的互换反应。
任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶催化，转氨酶的最适pH 接近7.4，在各种转氨酶中，谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase, GPT ）和谷草转氨酶（glutamic oxalacetic transaminase,GOT ）的活性最强。
转氨作用主要发生在肝脏中。
转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。
在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶（GPT ）、谷草转氨酶（GOT ）活性较高。
2、GPT 催化下的转氨作用装订线L －谷氨酸脱氢酶在体内特别是在肝细胞内含量丰富，活性高，催化L －谷氨酸氧化脱－NH 2，加碘乙酸能抑制其活性，从而可以保护氨基移换反应的产物L －谷氨酸。
3、纸层析原理本实验用纸层析法，检查由丙氨酸和α—酮戊二酸在肝细胞谷丙转氨酶（GPT) 的作用下所生成的谷氨酸，证明组织内的氨基移换作用。
滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，是利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情况（溶解度）的不同来分离混合物的一种技术。
层析溶剂是由有机溶剂和水组成。
由于滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。
在进行分离时，由于被分离物质的组分在两相中的分布不同，随着流动相的移动，物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配，从而造成不同组分移动的速度也不相同。
浙江大学生物化学丙实验报告1
专业：农业资源与环境姓名：李佳怡 ____________学号：_J6 _______________日期： __________________ 地点：生物实验中心310课程名称：生物化学实验（丙）实验名称：蔗糖酶的提取一、实验目的和要求（必填）三、实验材料与试剂（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）七、实验结果与分析（必填）.指导老师：方祥年 成绩:_ _同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛 二、实验内容和原理（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 六、实验数据记录和处理 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、 学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法;2、 巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。
二、实验内容和原理订 1、实验内容:线 蔗糖酶的提取、分离纯化2、实验原理:① 酵母细胞破碎液体剪切法―超声波法.机械搅拌法.高压匀浆法固体剪切法一压力和研磨 非机械法——> 物理法.化学渗透法.酶溶本实验采用研磨的方法。
通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取岀来。
② 蔗糖酶的初步分离纯化蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。
本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集 样品。
由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。
实验报告细胞破碎的常用方法三、实验材料与试剂1、实验材料市售干酵母粉10g/组（3〜4人）2、实验试剂石英砂，95%乙醇（-20*0,20mmol/L Tris-HCl 缓冲液。
四、实验器材与仪器电子天平（称量干酵母粉）：研碎（每组一套）：50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）：高速冷冻离心机：恒温水浴箱（50°C）；量筒（50ml）、微量移液枪（lOOOu 1）及枪头或移液管（1ml）、玻棒、滴管等;离心管（留样品I、II用）及离心管架：制冰机：一20°C冰箱。
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. 实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________实验名称： 质粒DNA 的微量制备及电泳检测 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求1、学习并掌握质粒DNA 的提取原理和方法；2、了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作；3、学习并掌握对电泳检测结果的初步分析。
二、实验内容和原理 1、实验内容①质粒DNA 的提取②DNA 的琼脂糖凝胶电泳鉴定2、实验原理①质粒：质粒是一种染色体（核质体）外的寄生性的自主复制子，存在于细菌等细胞中，为双链闭环的DNA分子，大小在1-200kb 之间，具有自主复制和转录功能, 能表达例如抗性、菌毒素等细胞非必需的遗传信息，但其复制和转录必须要利用依赖宿主细胞（细菌）基因组DNA 编码的一些酶和蛋白质。
质粒能够自发的或人为的在细胞间转移，因此是基因工程技术中将外源基因导入受体细胞的重要载体。
②从细菌细胞中抽提质粒DNA 的步骤：a 细菌培养使质粒大量扩增；b 收集和裂解细胞,并去掉细菌碎片和核质体DNA ；c 进一步除去蛋白、脂类、RNA 等杂质，分离和纯化质粒DNA 。
③碱裂解法来分离纯化质粒DNA ：在EDTA 存在下，经过SDS 处理使细胞膜裂解，从而使菌体充分裂解，利用在碱性条件下（NaOH ），使核质体DNA 与质粒DNA 的变性；加入乙酸钾，在中性条件下，核质体DNA 与质粒DNA 又存在复性的差异，质粒DNA 很快得以复性，而细菌核质体DNA 分子难以复性，核质体DNA 会缠绕附着在细胞膜碎片上专业： 农业资源与环境姓名： 李佳怡学号： 3130100246日期： 2015.6.9地点： 生物实验中心310 装订线通过离心被沉淀下来，质粒DNA则留在上清液内；上清液中还含有可溶性蛋白质、核糖核蛋白和少量核质体DNA以及脂质类杂质等，可通过碱性酚-氯仿-异戊醇混合液的抽提去除；含有质粒DNA的上清液用无水乙醇或异戊醇沉淀，这是由于当加入无水乙醇时，其会夺去核酸周围的水分子，使其失水而易于聚合。
一般用2倍体积的乙醇或1倍体积的异丙醇沉淀DNA和RNA。
获得较纯的质粒DNA。
④DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定:DNA分子在琼脂糖凝胶中有电荷效应和分子筛效应。
DNA分子在碱性溶液中（pH8.3缓冲液）带负电荷，它在电场作用下向正极泳动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即具有不同的相对分子量的DNA片段泳动速度不同，并能区分出不同的区带。
DNA片断在凝胶中当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙锭（EB）染色后，在紫外光下可见橙红色带，并可确定DNA片断在凝胶中的位置。
⑤影响DNA泳动速率（迁移率）的因素有：DNA分子质量的影响：双链DNA分子迁移的速率与DNA分子量对数成反比。
分子量越大，迁移率越小。
DNA构型的影响：超螺旋DNA＞线状DNA＞开环DNA。
胶浓度的影响：浓度越低，相同核酸分子迁移越快，一般常用的凝胶浓度为1％～2％；电场强度的影响：电场强度愈大，带点颗粒的泳动越快。
但凝胶的有效分离范围随着电压增大而减小，所以电泳时一般采用低电压，（一般5V/cm）（电场强度）。
而对于大片段电泳，甚至用0.5～1.0V/cm 电泳过夜。
进行高压电泳时，只能使用聚丙烯酰胺凝胶。
EB的影响：溴化乙锭（EB）插入双链DNA造成其负电荷减少、刚性和长度增加。
电泳缓冲液的影响:核酸电泳常采用TAE、TBE、TPE三种缓冲系统，但它们各有利弊。
TAE价格低廉，但缓冲能力低，必须进行两极缓冲液的循环。
TPE在进行DNA回收时，会使DNA污染磷酸盐，影响后续反应。
所以多采用TBE缓冲液。
在缓冲液中加入EDTA，可以鳌合二价离子，抑制DNase，保护DNA。
缓冲液pH常偏碱性或中性，此时核酸分子带负电，向正极移动。
碱基组成与电泳温度的影响: 一般影响不大。
⑥质粒DNA不同构型在琼脂糖凝胶电泳中的迁移速度：环形双链DNA分子有三种构型。
第一种是共价闭合环状DNA，它的两条链都保持完整的环状结构，通常呈超螺旋构型，迁移速度最快；第二种是开环DNA，它的双链中的一条保持完整的环状结构，另一条单链上有一到几个切口两条核苷酸链中只有一条保持完整的环形结构，即OC构型，迁移速度最慢；第三种是线状DNA，这种质粒的双链断裂呈线状,通称L构型。
这三种构型的同一种质粒在琼脂糖凝胶中电泳时，出现不同的迁移速率，走得最快的是超螺旋构型，其次是线性构型，最慢的是开环构型。
⑦实验有关试剂的作用：溶液Ⅰ：葡萄糖：增加溶液的黏度，减少抽提过程中的机械剪切作用，防止破坏质粒DNA。
EDTA：络合掉Mg等二价离子，防止DNA酶对质粒分子的降解作用。
Tris·HCl：使溶菌液维持溶菌作用的最适pH范围。
溶液Ⅱ：SDS：解聚核蛋白并与蛋白质分子结合使之变性。
NaOH：破坏氢键，使DNA分子变性。
溶液Ⅲ：中和溶液Ⅱ的碱性，使染色体DNA复性而发生缠绕，并使质粒DNA复性。
高盐的3mol/L NaAc/KAc有利于变性的大分子核质体DNA以及K/Na离子会与SDS形成溶解度很低的盐并与蛋白质形成沉淀而除去。
酚：一种强烈的蛋白质变性剂，能非常有效地去除蛋白质，同时抑制了核酸酶的降解作用。
氯仿：有强烈的溶脂倾向，可以溶解细胞膜，同时溶解去除脂质类杂质，此外具有使蛋白质变性并分相的作用。
异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
乙醇或异丙醇——可以沉淀核酸，当加入乙醇时，其会夺去核酸周围的水分子，使其失水而易于聚合。
一般用2倍体积的乙醇或1倍体积的异丙醇沉淀DNA和RNA。
70％的乙醇——用于洗涤核酸沉淀，其目的是去除盐及挥发性较小的异丙醇。
RNaseA——用于消化质粒DNA溶液中的残余RNA。
三、实验材料与试剂1、实验材料含重组质粒菌种2、实验试剂⑴ LB液体培养基⑵氨苄青霉素：100mg/ml ⑶溶液Ⅰ⑷溶液Ⅱ⑸溶液Ⅲ⑹酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）⑺无水乙醇⑻ 70%乙醇⑼ TE缓冲液（pH 8.0）⑽ RNaseA（1mg/ml）⑾ 0.5×TBE缓冲液（pH8.0）⑿琼脂糖⒀ 6×加样缓冲液⒁ 1mg/ml溴化乙锭（EB）四、实验器材与仪器1、恒温培养箱 37℃；2、恒温摇床 37℃；3、高压灭菌锅；4、超净工作台；5、台式离心机；6、振荡器；7、微量移液枪(10，20，200，1000ul)； 8、枪头（10，20，1000ul）及枪头盒；9、离心管 1.5ml及离心管架； 10、制冰机； 11、冰箱；12、干式恒温器 37℃、50℃； 13、微波炉； 14、电泳仪及；15、电泳槽； 16、紫外检测仪。
五、实验操作方法和步骤1、收集细菌,碱裂解液提取质粒DNA，纯化质粒DNA①去除核DNA，粗提取质粒DNA离心：取1.2ml的过夜培养菌液加入1.5ml离心管中，8000r/min离心1min；弃上清液，将管倒置于吸水纸上，使液体尽可能流尽。
冰浴：将菌体沉淀加100ul溶液Ⅰ，振荡悬浮菌体，冰浴放置5～10min。
再离心：加200ul溶液Ⅱ，盖紧管盖，快速温和颠倒离心管数次，确保离心管内溶液混匀使之变清，冰浴10min。
加150ul溶液Ⅲ，盖紧管口，颠倒数次使之混匀，冰浴放置5min。
（说明：以上步骤目的）②去除可溶性杂蛋白等杂质，纯化质粒DNA离心：12000r/min离心10min，将上清液转至另一干净离心管，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），振荡混匀，12000r/min离心 10min 。
冰浴：上清液移入另一干净离心管中，加入2倍体积无水乙醇，混匀后置-20℃冰箱中20min。
离心：12000r/min离心10min，弃上清液，将溶液管口倒置吸水纸上，使液体尽可能流尽。
③去除核RNA加样：加入1ml 70﹪乙醇洗沉淀一次（动作要轻），弃70﹪乙醇溶液，将管口倒置于吸水纸上，使液体尽可能流尽，自然干燥或50℃干燥。
保存：将沉淀溶于50ul TE缓冲液（pH8.0，含20mg/L RNaseA）中，置37℃恒温器中保温30min后，取质粒DNA样液做琼脂糖凝胶电泳鉴定，其余纯化的质粒DNA样品置于-20℃保存备用。
2、DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定①加样：取5ul纯化的质粒DNA样品，与1ul 6×电泳加样缓冲液混匀，用微量移液枪小心加入样品槽中。
若DNA含量偏低，则可依上述比例增加上样量，但总体积不可超过样品槽容量。
（注：a勿划破或戳穿加样孔，勿带入气泡；b上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿；c每加完一个样品要换枪头以防互相污染。
）②电泳：加完样后，盖上电泳槽盖，立即接通电源，使电压调到100V，恒压电泳。
当溴酚蓝条带移动到距凝胶前缘约2cm时，停止电泳（约需30～60min）。
③观察和拍照：取出胶块置于紫外灯下观察，DNA存在处可显示出肉眼可辨的橘红色荧光带，再用成像仪进行拍照，以便于分析。
注：紫外光对眼睛有害，观察时戴上防护镜或眼镜，或隔着玻璃或有机玻璃观察。
六、实验数据记录和处理1、样品离心后：上层淡黄色，下层有乳黄色沉淀；2、加入溶液Ⅰ后：沉淀溶解，溶液呈淡黄色；3、加入溶液Ⅱ后：溶液无色澄清；4、冰浴后：部分凝固，呈现无色；5、加入溶液Ⅲ后：有白色絮状沉淀出现；6、离心后：溶液分层，沉淀白色，有部分粉末悬浮；7、加酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）后：分层，下层颜色土黄色，上层淡黄色；8、离心后：分层，上层无色透明，下层淡黄色，中层杂蛋白油状。
七、实验结果与分析电泳图谱：1、实验结果：①第一条带对应的DNA为超螺旋构型DNA，条带最亮，表明此结构的DNA含量最高，同时其迁移距离最远，在同样时间内，超螺旋构型DNA迁移速度最快，结果正常。
②第二条带对应的DNA为线状DNA，在三条带中颜色最浅，含量最少。
③第三条带对应的DNA，为开环DNA，迁移速度最慢，含量较线状DNA微多一些。
④点样孔处有较多DNA残留，表明加样时有较多溢出，操作不够规范，仍需改进。
⑤在第一条带之前无其它可辨的条带，可推测无RNA残留。
2、结果分析：根据实验结果得出如下分析：①在加样时，未控制好位置和高度，导致残留在点样孔中的样品较多，因此也影响了各个条带中的样品量，若在加样时操作规范，则可增大条带中DNA的量。
②各个条带之间距离较大，表明超螺旋构型DNA、线状DNA、开环DNA三种不同类型的DNA之间分离较好，且超螺旋型DNA亮度最亮，表明其含量最多。