木瓜蛋白酶
木瓜蛋白酶的正确使用方法
木瓜蛋白酶的正确使用方法木瓜蛋白酶是一种天然的酶类蛋白，具有促进食物消化和改善肠道健康的作用。
它可以帮助人体分解蛋白质，促进食物的消化吸收，对于一些消化不良、胃肠道问题的人群来说，木瓜蛋白酶的正确使用方法尤为重要。
本文将详细介绍木瓜蛋白酶的正确使用方法，希望能够帮助大家更好地使用这一天然酶类蛋白，改善身体健康。
首先，我们需要了解木瓜蛋白酶的作用原理。
木瓜蛋白酶主要是从木瓜中提取得到的一种酶类蛋白，它能够在酸性环境下发挥作用，帮助人体分解蛋白质，促进食物的消化吸收。
因此，在使用木瓜蛋白酶时，我们需要注意保持胃酸的正常分泌，这样才能更好地发挥木瓜蛋白酶的作用。
其次，正确的使用方法是非常重要的。
一般来说，我们可以在餐前30分钟左右服用木瓜蛋白酶，这样可以更好地帮助食物的消化吸收。
在服用木瓜蛋白酶时，我们需要根据自身的情况来确定剂量，一般建议按照产品说明书上的剂量来服用，不宜过量。
另外，木瓜蛋白酶最好不要与热水一起服用，因为高温会破坏木瓜蛋白酶的活性，影响其效果。
此外，木瓜蛋白酶的使用还需要注意一些禁忌。
孕妇、哺乳期妇女、以及有胃溃疡、出血性胃炎等胃肠道疾病的患者不宜服用木瓜蛋白酶。
在服用木瓜蛋白酶的过程中，如果出现过敏反应或者不良反应，应立即停止使用，并及时就医。
最后，我们需要注意存放木瓜蛋白酶。
木瓜蛋白酶应存放在阴凉干燥处，避免阳光直射和高温，以免影响其活性。
另外，木瓜蛋白酶的包装应密封保存，避免受潮和受污染，以保证其质量和效果。
总之，木瓜蛋白酶作为一种天然的酶类蛋白，对于促进食物消化和改善肠道健康具有重要作用。
正确的使用方法可以更好地发挥其作用，改善消化不良和胃肠道问题。
在使用木瓜蛋白酶时，我们需要注意保持胃酸的正常分泌，正确掌握使用剂量和时间，避免与禁忌人群，注意存放环境，这样才能更好地享受木瓜蛋白酶带来的益处。
希望本文能够帮助大家更好地了解木瓜蛋白酶的正确使用方法，改善身体健康。
木瓜蛋白酶营养成分
木瓜蛋白酶营养成分木瓜蛋白酶是一种天然的酵素，广泛存在于木瓜的果肉和种子中。
它不仅在烹饪中被广泛应用，还具有丰富的营养成分，对我们的健康非常有益。
下面将为您详细介绍木瓜蛋白酶的营养成分及其对身体的益处。
1. 蛋白酶活性：木瓜蛋白酶具有较高的蛋白酶活性，能够有效分解蛋白质。
这对于消化系统的健康非常重要，能够帮助身体更好地吸收和利用蛋白质。
此外，它也有助于消化不良和胃痛的缓解。
2. 天然酶：木瓜蛋白酶是一种天然酶，无添加剂和化学成分。
与人工消化酶相比，木瓜蛋白酶更容易被身体吸收和利用。
它不会对身体产生负担，特别适合消化系统较弱或胃口较差的人群。
3. 富含维生素C：除了蛋白酶活性外，木瓜蛋白酶还富含维生素C。
维生素C是一种强力的抗氧化剂，能够抵抗自由基的损害，增强免疫系统的功能。
它还有助于胶原蛋白的合成，促进肌肤的保湿和延缓衰老。
4. 丰富的纤维素：木瓜蛋白酶还富含纤维素，这对于肠道健康至关重要。
纤维素可以增加肠道蠕动，促进食物和废物的通畅排泄，预防便秘和其他消化问题。
同时，它还有助于调节血糖和胆固醇水平，降低心脏病和糖尿病的风险。
如何充分利用木瓜蛋白酶的营养成分呢？1. 食用新鲜木瓜：新鲜木瓜是最佳的来源，因为它含有最高浓度的蛋白酶活性和维生素C。
您可以将木瓜切成块状，直接食用或加入水果沙拉、果汁中。
2. 选择未成熟的木瓜：未成熟的木瓜含有更丰富的蛋白酶活性，适用于需要更强消化帮助的人群。
您可以将未成熟的木瓜切成薄片，腌制后食用。
3. 煮熟的木瓜种子：木瓜种子中也富含蛋白酶活性，煮熟后可以直接食用。
您可以将木瓜种子煮熟后剥皮，作为零食或添加到糕点中，增加营养价值和口感。
总结起来，木瓜蛋白酶不仅具有较高的蛋白酶活性，还富含维生素C和纤维素。
它能够帮助促进消化系统的健康，增强免疫力，改善肠道功能，并有助于预防心脏病和糖尿病。
在食用木瓜时，建议选择新鲜木瓜和未成熟木瓜，同时充分利用木瓜种子的营养价值。
加入木瓜蛋白酶，让身体更健康！。
木瓜蛋白酶的生物合成和分泌机制研究
木瓜蛋白酶的生物合成和分泌机制研究木瓜蛋白酶（Papain）是一种重要的天然蛋白酶，广泛存在于木瓜等植物中。
其生物合成和分泌机制的研究对于深入了解蛋白质合成过程及其应用具有重要意义。
本文将探讨木瓜蛋白酶的生物合成和分泌机制以及相关研究进展。
生物合成是指在细胞内通过基因表达、转录和翻译等过程，将DNA信息转化为具有生物活性的蛋白质的过程。
而分泌则是指细胞将合成的蛋白质经过适当的转运和包装作用释放到细胞外的过程。
研究发现，木瓜蛋白酶的生物合成和分泌过程主要发生在木瓜果实细胞中。
首先，木瓜蛋白酶的合成依赖于相关基因的表达和转录。
在转录过程中，DNA中的木瓜蛋白酶基因被转录为mRNA分子。
该mRNA分子随后通过RNA聚合酶酶的作用将其转录为mRNA前体。
经过转录的mRNA进一步经过剪接和修饰等过程，形成成熟的mRNA。
该mRNA含有编码木瓜蛋白酶的氨基酸序列。
随后，该mRNA通过核糖体进行翻译，将氨基酸按照特定的顺序合成为蛋白质链。
在木瓜果实细胞中，成熟的木瓜蛋白酶由内质网（ER）合成并进入到高尔基体（Golgi）。
在内质网中，木瓜蛋白酶的氨基酸链被翻译后进一步经过蛋白质修饰，如糖基化和硫醇化等。
这些修饰过程可以增加蛋白质的稳定性和生物活性。
经过修饰后的木瓜蛋白酶进入高尔基体进行包装和排序。
在高尔基体，蛋白质会经过进一步的修饰和包装，形成成熟的蛋白质颗粒。
这些颗粒包含了大量的木瓜蛋白酶，并且被液泡所包裹。
这些液泡可以将成熟的木瓜蛋白酶从高尔基体运输到细胞膜的负责分泌的区域。
经过运输的成熟的木瓜蛋白酶颗粒和液泡最终融合在细胞膜上，并释放到细胞外环境中。
这个过程被称为分泌。
在此过程中，细胞膜扮演了关键角色，它通过与液泡融合，将木瓜蛋白酶包裹在囊泡内，并释放到细胞外环境。
尽管对木瓜蛋白酶的生物合成和分泌机制的研究已经有了一定的进展，但仍然有许多问题需要进一步探讨。
例如，目前尚不清楚木瓜蛋白酶的mRNA剪接和修饰等过程中所涉及的详细机制。
木瓜蛋白酶
食品添加剂木瓜蛋白酶学院:食品与营养工程学院专业:食品加工班级:食工102学号:010*******姓名:王瑞真木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶又称木瓜酶，是一类疏基蛋白酶。
广泛存在与番木瓜的根、茎、叶和果实内，在未成熟的乳汁中含量最丰富。
它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特色，因此在食品、医药、饲料、皮革及纺织等行业得到广泛应用[1]。
一、木瓜蛋白的组分工业用的木瓜蛋白酶一般都是未经纯化的多酶体系。
由木瓜乳胶提取粗制酶,除含有木瓜蛋白酶外,还含有半耽氨酸蛋白酶、纤维素酶、溶菌酶、谷氨酞胺以及低相对分子质量的疏基化合物,还有葡萄糖酶等。
其中大部分都是疏基蛋白酶,主要的两种组分是木瓜凝乳酶和木瓜蛋白酶[2]。
二、木瓜蛋白的结构木瓜乳汁中四种已知半肤氨酸蛋白酶的一级结构具有高度同源性,其氨基酸数目和同源性比较如表1所示。
除chymopapain含有8个半肤氨酸外,其余三种酶都只含有7个半肤氨酸。
25位的流基是活性位点,不参与二硫键的形成（chymopapain的117位琉基也不参与二硫键的形成 ）,其余疏基以相同的方式形成三个二硫键，具有同样的保守性。
人们在不同清晰下得到了四种酶的X 一射线结构。
四种酶的肤链折叠方式相似,形成两个大小相、构型不同的区域。
一个是由a一螺旋构成的L一区,另一个是由大量反向平行的片层构成的R一区。
活性位点氨基酸残基Cys25,Asn179和His159 就位于这些区域的表面,其中Cys25位于 L一区,起始a一螺旋上。
木瓜蛋白酶家族的Cys25 ，Gly23，Gly65 形成的S。
亚部位是一个大口袋，对底物专一性影响较小；S亚部位由于酶不同其氨基酸组成不同,几何形状亦不同,对酶的性质影响较大[3]。
三、木瓜蛋白酶的提取工艺1.过去的常规提取方法木瓜蛋白酶最原始的提取方法是烘干法，就是在番木瓜浆液中加入保护剂，然后将浆液离心取上清液放置于鼓风干燥箱中，在55～60℃烘干，粉碎后即得到粗酶制品。
木瓜蛋白酶
木瓜蛋白酶一、名称和属性广义的木瓜酶指的是木瓜蛋白酶（Papain）、木瓜凝乳蛋白酶（Chymopapain）、淀粉酶（Amylase）等等组成的复合酶，这里主要讨论木瓜蛋白酶。
木瓜蛋白酶（Papain），或简称木瓜酶、木瓜酵素，又称嫩精或木瓜粉，是存在于木瓜果实中的一种半胱氨酸酶，属于蛋白水解酶。
二、作用机制木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。
它的外观为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性；木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液为无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。
木瓜蛋白酶是一种含巯基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，但几乎不能分解蛋白胨。
木瓜蛋白酶的剪切肽键的机制包括：在His-159作用下Cys-25去质子化，而Asn-158能够帮助His-159的咪唑环的摆放，使得去质子化可以发生；然后Cys-25亲核攻击肽主链上的羰基碳，并与之共价连接形成酰基－酶中间体；接着酶与一个水分子作用，发生去酰基化，并释放肽链的羰基末端。
三、应用情况木瓜酶具有纯天然、无毒无害、使用安全等功能特性，而被广泛用于食品、美容化妆品、医药保健品、日化品、饲料、皮革、纺织品等行业，并远销日本、韩国、美国、俄罗斯、马来西亚等国外市场。
国际上FAO／WHO把木瓜蛋白酶列为A级食品添加剂，其使用量可不受限制；中国食品添加剂标准化技术委员会也已批准将木瓜蛋白酶列入使用品种。
3.1食品行业木瓜蛋白酶主要被用于将硬的肉纤维（蛋白质组成）切断，并且该用途已经被南美洲的土著居民使用了数千年。
该酶是嫩肉粉（在大多数的超级市场都可以买到）的成分之一。
3.2生化行业木瓜蛋白酶在准备细胞培养液（cell culture）的第一步中被用于分离细胞。
用酶处理小组织块10分钟后，就可以将连接细胞的细胞外基质打断；然后再用蛋白酶抑制剂来停止反应，防止木瓜蛋白酶进一步裂解细胞本身；最后用Pasteur pipette将组织块打散为单细胞悬浮液。
【木瓜百科】木瓜蛋白酶有哪些功效？
【木瓜百科】木瓜蛋白酶有哪些功效？
什么是木瓜蛋白酶？木瓜蛋白酶有什么功效？木瓜蛋白酶对人体有什么好处？以下耕种帮就作详细介绍，供网友们参考。
一、什么是木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶又叫木瓜酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。
木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶，它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点，因此在食品、医药、饲料、日化、皮革及纺织等行业得到广泛应用。
二、木瓜蛋白酶的功效1、、健脾消食：木瓜中的木瓜蛋白酶，可将脂肪分解为脂肪酸，大大提高食品营养价值，有利于人体对食物进行消化和吸收，故有健脾胃，消食、润肠通便、排毒的功效，舒缓胃部不适。
2、抗疫杀虫：木瓜蛋白酶具有抗结核杆菌及寄生虫如绦虫、蛔虫、鞭虫、阿米巴原虫等作用，故可用于杀虫抗痨。
3、通乳抗癌：木瓜中的凝乳酶有通乳作用。
在保健品中添加木瓜酶蛋白可以起到抗癌、抗肿瘤、抗淋巴性白血病、抗病原菌和寄生虫、结核杆菌的作用，并可以防治高血压、肾炎、便秘的作用。
4、补充营养，提高抗病能力：木瓜中含有大量水分、碳水化合物、蛋白质、脂肪、多种维生素及多种人体必需的氨基酸，是体内环保，增强免疫力，抗衰老的天然素材。
5、抗痉挛：木瓜蛋白酶具有缓解痉挛疼痛的作用，对腓肠肌痉挛有明显的治疗作用。
6、美容：木瓜酵素能帮助分解并去除肌肤表面的老废角质，所以也常应用在保养中，是润肤、美颜、通便、美容、丰
胸圣品，富各种营养素。
木瓜蛋白酶及应用概况
木瓜蛋白酶及应用概况
木瓜蛋白酶是一种天然的蛋白酶，广泛存在于木瓜和番木瓜等植物中。
它是一种短链肽酶，能够水解具有芳香氨基酸的肽链，如苯丙氨酸、酪氨酸等。
由于其在酵素催化反应中的高效性和广泛的底物适应性，因此在生物制药、食品加工、纺织印染、皮革加工、海产品加工等众多领域有着重要的应用价值。
木瓜蛋白酶最常见的应用领域是在生物制药中。
由于其具有高效、特异性、温和、安全等优势，是制备生物药物中最常用的工具酶之一。
在生物制药制造中，木瓜蛋白酶可以被用来裂解蛋白质、去除杂质和纯化生物药物等。
此外，还可用于制备抗菌肽和人工合成肽。
因此，木瓜蛋白酶在生物制药中有着广泛的应用前景。
木瓜蛋白酶还广泛应用于食品加工中，如清蒸鱼、果冻、酱油等传统菜肴中均常用到木瓜蛋白酶。
木瓜蛋白酶可以水解食品中的蛋白质，降低蛋白质的臭味和涩味，改善食品口感。
同时，木瓜蛋白酶还能使食品中的氨基酸、多肽和肽等生物活性物质释放出来，增加食品的营养成分。
因此，木瓜蛋白酶在食品加工中同样扮演着重要的角色。
再比如在纺织印染加工中，木瓜蛋白酶可以去除面料表面的胶质和粘合剂，改善面料柔软度和手感。
在皮革加工领域，木瓜蛋白酶可以去除皮革表面的蛋白质和胶质，使得皮革更加柔软、光滑、有弹性，同时还可以降低某些离子和金属离子对皮革影响的程度。
而在海产品加工领域，木瓜蛋白酶可以用于去除海产中的甲壳质和外壳，改善食品口感和食用体验。
总之，木瓜蛋白酶由于其高效性、广泛性、安全性等特点，被广泛应用于生物制药、食品加工、纺织印染、皮革加工、海产品加工等各个领域。
木瓜蛋白酶的应用前景非常广阔，将有潜力促进中国相关行业的发展。
木瓜蛋白酶水解igg分子
木瓜蛋白酶水解igg分子摘要：1.木瓜蛋白酶简介2.木瓜蛋白酶对IgG分子的水解作用3.木瓜蛋白酶水解IgG分子的实验方法4.木瓜蛋白酶在水解IgG分子中的应用5.总结正文：【1.木瓜蛋白酶简介】木瓜蛋白酶（Papain）是一种来源于木瓜的巯基蛋白酶，具有广泛的应用前景。
它是一种高效、特异性强的蛋白酶，可以水解蛋白质分子。
由于其温和的催化条件和相对简单的操作流程，木瓜蛋白酶在生物化学和分子生物学研究中备受关注。
【2.木瓜蛋白酶对IgG分子的水解作用】IgG是免疫球蛋白的一种，具有抗原结合活性，参与机体免疫反应。
木瓜蛋白酶可以特异性地识别和水解IgG分子中的某些部位，从而影响其生物活性。
研究发现，木瓜蛋白酶对IgG分子的水解作用具有种属特异性，不同物种的IgG分子可能被水解的部位有所不同。
【3.木瓜蛋白酶水解IgG分子的实验方法】实验过程中，首先需要提取IgG分子，然后采用适当的方法纯化。
接下来，通过酶促反应，将木瓜蛋白酶与IgG分子混合，观察水解反应的进程。
可以通过电泳、光谱分析等方法检测水解产物，从而确定木瓜蛋白酶对IgG分子的水解效果。
【4.木瓜蛋白酶在水解IgG分子中的应用】木瓜蛋白酶水解IgG分子的研究在生物化学、分子生物学和免疫学等领域具有广泛应用。
例如，通过研究木瓜蛋白酶对IgG分子的水解作用，可以揭示免疫系统中抗原-抗体复合物的形成与降解机制。
此外，在药物研发中，木瓜蛋白酶水解IgG分子有助于优化药物分子设计，提高药物的生物利用度和疗效。
【5.总结】木瓜蛋白酶作为一种重要的生物催化剂，对IgG分子的水解作用具有显著的特异性和高效性。
研究木瓜蛋白酶水解IgG分子不仅有助于深入了解免疫系统的相关机制，还为药物研发和生物化学研究提供了新的思路和方法。
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发酵工程与设备课程论文题目木瓜蛋白酶班别学号姓名成绩木瓜蛋白酶摘要：木瓜蛋白酶是一种能分解蛋白质的蛋白酶。
先了解木瓜蛋白酶的制备及保存，接着分析它的化学修饰和酶活力的影响。
最后，木瓜蛋白酶的固定化及方法以及它在各个行业的应用。
Abstract: Papain is a protease that breaks down proteins.To understand the preparation and preservation of papain and then analyzed its chemical modification and enzyme activities.Finally, the immobilized papain and the method and its application in various industries关键字：木瓜蛋白酶化学修饰酶活力固定化行业的应用Keywords:papain Chemical modification enzyme immobilization industry applications木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。
它的外观为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性。
它是利用未成熟的番木瓜果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品。
它是一种含疏基肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，同时，还具有合成功能，能把蛋白水解物合成为类蛋白质。
溶于水和甘油，水溶液无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。
作为植物来源的蛋白酶来说，此酶研究进展的最快。
此酶主要是以内肽酶的形态起作用。
活性的产生，而半胱氨酸残基是不可缺少的，所以是硫基蛋白酶的一种，底物的特异性不太严格，分子量为23400，氨基酸残基数212。
一、木瓜蛋白酶的制备及保存木瓜蛋白酶的制备是将未成熟番木瓜果实割取乳液去杂，在室温下，入半胱氨酸溶液在研钵中充分磨匀，静置后取上清液即为粗制酶，其水溶液呈混浊状，然后在通过离心去杂的上清液中加入硫酸铵,分级分离得沉淀，加入半胱氨酸溶液后经盐析重结晶干燥得精制酶，木瓜蛋白酶室温贮存活力稳定性与活力高低呈反比，正常使用时造成活力下降的主要因素为干燥失重(温度和空气氧化，粗制酶比精制酶稳定。
热风吹干和喷雾干燥的酶比冷冻干燥的酶稳定。
因此酶应存放在低于10摄氏度条件下，为了避免木瓜蛋白酶失活，可以加入适量亚硫酸氢钠。
二、木瓜蛋白酶的化学修饰由于天然木瓜蛋白酶在高温、重金属离子、极端pH 等条件下, 易遭到破坏, 使酶的生产和使用受到极大的限制。
如何提高酶的稳定性、解除抗原性、改变酶学性质、扩大酶的应用范围, 越来越引起人们的重视.酶的化学修饰就是利用化学手段将某些化学物质或基团结合到酶分子上, 或将酶分子的某些部分删除或置换, 改变酶的理化性质, 最终达到改变酶的催化性质的目的, 创造出一些天然酶所不具有的优良性能, 提高其生物活性, 增强在不良环境下的稳定性. 近年来, 酶分子化学修饰研究在修饰方法、修饰试剂及修饰酶的性质等方面, 取得了一系列研究成果。
酶的化学修饰是酶工程的一项重要课题. 而通过化学修饰方法得到优质的半合成酶, 使它们的性能得到改善, 拓宽它们的应用领域, 也是一个极具挑战性的研究,酶化学修饰的结果对于研究酶结构与功能的关系提供了一些信息. 研究结果表明, 以酸酐类小分子化合物为修饰剂对木瓜蛋白酶进行化学修饰是一种操作简便, 条件温和, 制备效果较好的酶修饰方法.关于酸酐对木瓜蛋白酶的修饰结果相比, 本文采用的修饰剂偏苯二甲酸酐和均苯四甲酸酐对木瓜蛋白酶进行化学修饰后, 使修饰木瓜蛋白酶结合了更多的羧基官能团, 从而在热稳定性、耐碱性和耐洗涤剂方面显示优良的性能.三、木瓜蛋白酶酶活力的影响影响酶活力测定的因素很多，主要有温度、pH 和底物浓度等。
1、温度对酶活力测定的影响每一种酶在一定条件下，只有在某一个温度下表现出最大活性，即所谓最适温度。
但它也会受其它条件如底物作用时间和pH 的影响而改变。
当其他规定条件不变时，温度改变1℃，反应速度可相差10%以上。
通过试验，木瓜蛋白酶的适宜温度为60±0.2℃，所以，反应必须在恒温槽内进行，并且所有试剂在反应开始前进行预热。
2、pH 对酶活力测定的影响酶的活性与作用底物的氢离子浓度有很大关系。
不同的酶都有不同的最适pH 和所需要的缓冲液。
同一种酶在不同的pH 时测定的活性不同。
只有在某种缓冲液和某种pH 范围内才表现出最大活性，即所谓最适pH，一般认为酶分子处在最适pH时，其活性基团解离状态最易与酶和底物结合，酶和底物结合减弱，活性就降低。
pH 对酶稳定性影响很大，在最适pH 的一侧或两侧都可能导致酶的不可逆破坏。
通过试验，木瓜蛋白酶的最适pH 为7.0。
3、底物浓度对酶活力测定的影响在酶活性测定中，底物纯度和浓度是十分重要的因素，要求底物尽可能纯化。
在测定木瓜蛋白酶时，规定选用上海乳品一厂出品的生化纯（B.R）酪素。
底物浓度是决定酶反应速度的因素。
在低的底物浓度时，底物浓度增加，反应速度随着增加，反应速度与底物浓度成正比。
当底物浓度增高时，增加底物浓度，反应速度虽随之增加，但它不再与底物浓度成正比。
当底物浓度增加到一定程度以后，反应速度不受底物浓度的影响而趋于恒定，达到了测定酶活性时底物要过量的要求。
4、酶浓度对酶活力测定的影响在一定条件下，假定底物浓度为饱和量时，反应速度与酶浓度成正比，这时，反应速度与底物浓度无关，即零级反应。
测定活性用的酶应尽可能纯化，但是工业用的酶制剂难以达到高纯度。
为避免由于微量杂酶的存在而引起的反应，尽可能用低浓度的待测酶液，同时还应注意以下两点：（1）做好待测酶液的制备。
精确称取酶粉1.0000~2.0000g，用少量缓冲液于37℃溶解，用玻璃棒捣研3~4 次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度，再用 4 层纱布过滤，其滤液供测定用。
如果在制备过程中，没有充分将酶粒捣研开或过滤不当都将造成误差；（2）当其他条件恒定以后，一定要控制好待测酶液的用量。
测定木瓜蛋白酶，通常OD 值控制在0.2~0.4 之间。
四、木瓜蛋白酶的固定化及方法固定化酶的研究发展迅速,人们已经先后进行多种固定化方法研究。
酶的固定化方法主要有:吸附法、包埋法、共价键结合法、交联法等。
这些方法各有利弊。
载体材料作为固定化酶的重要部分,其结构和性能对固定化酶的酶学性质产生很大的影响。
因此很多学者一直致力于对载体的研究,以求获得适于某种酶的价格低廉的载体、操作简便和酶活力回收更高的固定化方法。
前人利用海藻酸钠进行固定化酶,由于海藻酸钠钙化后小球硬度不够, 装柱时易变形,较易溶解,本试验在海藻酸钠中加入壳聚糖粉末, 小球硬度明显提高;此方法还未见报道。
本文利用此改进的包埋法来制备固定化木瓜蛋白酶 ,与尼龙布的共价键结合法固定化木瓜蛋白酶进行比较,并对其性质进行研究。
传统固定化方法的优点并改进其不足一直是固定化酶方面研究的重要内容。
改善酶固定化效果的途径有：改善表面积以及孔径等物理结构，如采用分子筛或纳米纤维微孔膜；改善化学交联的反应及方式，如辐照，引发剂引发等；改善结合的方向选择性，如采用定向固定化的方法；其他手段，如利用长臂使酶远离载体表面，使载体一酶体系的溶解度随温度、pH值等条件的改变而改变，以便于产物的分离及酶的回收。
1、包埋法固定包埋法:将酶或含酶菌体包埋在多孔载体中,使酶固定化的方法称为包埋法。
凝胶包埋法是将酶包埋在各种凝胶内部的微孔中,制成一定形状的固定化酶的方法。
最常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、海藻酸钙、卡拉胶、聚丙烯酰胺等。
微胶囊包埋法是将酶包埋在高分子半透膜中,制成微胶囊固定化酶的方法。
1.1海藻酸钠- 壳聚糖固定化木瓜蛋白酶海藻酸是从褐藻提取的,是甘露糖醛酸以β-1, 4键相连接的多糖类物质,它是包埋酶较为理想的载体,其固定化方法较为简单,条件温和,操作可在室温下进行,酶很少失活。
但是,海藻酸钙凝胶在含多价阴离子(磷酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐等) 的溶液以及高浓度电解质( K+ , Na+) 溶液中不稳定,Ca2 +离子易脱落,凝胶变软,甚至溶解。
在研究海藻酸钠- 壳聚糖固定化木瓜蛋白酶时一方面在制作凝胶时使用Tris盐酸缓冲液,减少Ca2 +离子的脱落,保持凝胶的稳定;另一方面首次通过加入壳聚糖粉末来提高凝胶硬度,壳聚糖上的正电荷(- NH+3)与海藻酸的羧基相互作用,起到稳定凝胶的作用,适用于装柱使用,与不加壳聚糖粉末的固定化酶酶活性相同。
1.2壳聚糖胶囊法固定化木瓜蛋白酶壳聚糖是由甲壳素经脱乙酰化反应而得到的一种生物高分子物质,又名脱乙酰甲壳质。
壳聚糖作为固定化酶载体具有化学性质稳定、耐热性好等优点,是固定化酶的良好载体。
采用壳聚糖与羧甲基纤维素钠复凝聚形成胶囊将木瓜蛋白酶固定化,确定酶固定的最佳条件为:给酶量为500mg/10mL ,壳聚糖浓度为0.2%、pH值为7.5、温度为50℃,所得固定化木瓜蛋白酶活力回收率最高可达69.8%。
2、吸附法固定吸附法:利用固体吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面而使酶固定化的方法称为吸附法。
常用的吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、羧基磷灰石等。
吸附法制备固定化酶,操作简便、条件温和,不会引起酶的变性失活,载体价廉易得,而且可反复使用。
由于靠物理吸附作用,结合力较弱,酶与载体结合不牢固、易脱落,所以在实际生产中运用较少,这方面的研究也较少。
冷冻- 真空吸附法在介孔材料中固定木瓜蛋白酶。
介孔分子筛孔道里组装功能材料的方法有多种, 常见的有气相吸附、浸渍法等, 与普通吸附方法相比, 冷冻- 真空吸附法是一种新的方法, 其优点为: 一是驱动力大, 吸附蛋白量会更大; 二是在低温状态下可保持酶蛋白的活性。
3、共价偶联法固定共价偶联法:利用酶活性中心外的非必需基团与固相载体上的基团共价结合而制成固定化酶的方法叫共价偶联法,也叫共价结合法。
共价结合法是目前研究最活跃的固定化方法之一。
它的优点在于酶与载体结合牢固,不易脱落,可以连续使用较长时间。
但也存在以下缺陷: (1) 在固定化过程中酶分子与载体分子之间发生直接(刚性) 碰撞,易使酶的构象改变,使酶失活; ( 2) 载体一般是疏水性物质,当酶直接被固定在疏水载体上时会改变酶的微环境,使酶蛋白构象发生折叠、失活; (3) 传统共价结合法得到的固定酶自由度低,酶分子和底物之间存在较大空间位阻,不利于保留酶游离态的均相催化活性。
故称之为"刚性固定化"。
共价偶联法常用的载体有纤维素、葡聚糖、琼脂糖、甲壳素等。