分子生物学-2.doc
分子生物学 2
分子生物学一、名词解释：1、melting temperature ( Tm ):将核酸加热变形过程中，紫外光吸收值达到最大值50%时，的温度称为核酸的解链温度，由于这一现象和结晶的溶解类似，又称溶解温度。
2、C value paradox：C值矛盾，指生物基因组的大小同生物在进化上所处地位的高低没有绝对的相关性的现象。
3、Exon：外显子，这个区域的DNA包含编码信息,构成成熟mRNA。
4、semi-conservation replication：DNA半保留复制，指的是在复制时，DNA两条链解开，以每条链为模板，按照碱基互补配对原则合成互补链，这样形成的两个子代DNA分子与原来的亲代DNA分子完全相同，每个子代DNA分子中各有一条链来自亲本，一条链为新合成的。
5、promoter：启动子，在起始阶段，RNA聚合酶结合到位于基因起始上游处特殊序列的双链DNA上的特殊序列。
6、open reading frame ( ORF )：开放阅读框，无论是在原核生物中还是真核生物中，mRNA都具备至少含有一个由起始密码子开始、以终止密码子结束的一段连续的核苷酸序列。
7、gene family：基因家族，某一祖先基因由于重复和突变产生的一系列基因8、renaturation：DNA复性，指变性的DNA分子中两条彼此分开的多核苷酸链间碱基重新配对，形成双螺旋的过程。
9、cistron：顺反子，即结构基因，为决定一条多肽链合成的功能单位。
比传统基因概念更小的基本功能单位10、Pseudogene：假基因，与有关功能的基因在核苷酸顺序组成上非常相似，却不具有正常基因的功能。
11、Okazaki fragment ：冈崎片段，DNA复制中先合成较短片段，再由连接酶连成大分子DNA。
12、Primer：引物，一小段单链的DNA或RNA片段。
13、Klenow fragment：克列诺片段，DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理后产生的大片段。
(完整word版)医学分子生物学名词解释-2
1.转录泡（三元复合物）：转录泡是由RNA聚合酶核心酶、DNA模板链以及转录形成的RNA新链三者结合形成的转录复合物.在转录的延伸阶段，RNA聚合酶使DNA双螺旋解链，暴露出长度约为17bp的局部单链区，因外形酷似泡状结构故称之为转录泡2.3.密码子：mRNA上每3 个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这 3 个核苷酸称为密码,也叫三联子密码4.摆动假说：在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵守碱基配对原则，第三对碱基有一定的自由度，可以”摆动"，因而使某些tRNA可以识别1个以上的密码子.5.SD序列：位于原核生物起始密码子上游7～12个核苷酸处的保守区，该序列能与16SrRNA的3端互补，促使mRNA与核糖体的结合，与翻译的起始有关。
6.校正tRNA：校正tRNA通过改变反密码子区校正突变。
可分为无义突变的校正RNA和错义突变的校正RNA、移码突变的校正RNA。
7.无义突变:在蛋白质的结构基因中，一个核苷酸的改变使代表某个氨基酸的密码子变成终止密码子（UAG、UGA、UAA),使蛋白质合成提前终止，合成无功能的或无意义的多肽的突变，叫做无义突变.8.错义突变:错义突变是由于结构基因中某个核苷酸的变化而使一种氨基酸的密码变成另一种氨基酸的密码.9.移码突变：在正常地DNA分子中，碱基缺失或增加非3地倍数，造成这位置之后的一系列编码发生移位错误的改变,这种现象称移码突变。
10.可读框:可读框是指mRNA上从起始密码子到终止密码子的一段序列.11.信号肽：常指新合成多肽链中用于指导蛋白质跨膜转移(定位）的N—末端氨基酸序列（有时不一定在N端）。
12.分子伴侣:一类能帮助其他蛋白质进行正确组装、折叠、转运、介导错误折叠的蛋白质进行降解的蛋白。
当蛋白质折叠时,它们能保护蛋白质分子免受其它蛋白质的干扰。
很多分子伴侣属于热休克蛋白（例如HSP-60）,它们在细胞受热时大量合成.热激可导致蛋白质稳定性降低，增加错误折叠的几率,因此在受到热刺激时,细胞中的蛋白质需要更多热休克蛋白的帮助。
分子生物学-2_真题-无答案
分子生物学-2(总分100,考试时间90分钟)一、判断题1. 用重组修复和SOS修复的方式修复DNA损伤，在修复完成后都会产生较高的基因突变概率。
A. 正确B. 错误2. DNA错配修复不需要消耗能量。
A. 正确B. 错误3. 紫外线照射损伤DNA的主要原因是形成了嘧啶二聚体。
A. 正确B. 错误4. 只有DNA聚合酶Ⅰ参与了大肠杆菌的错配修复过程。
A. 正确B. 错误5. 点突变不会造成移码突变。
A. 正确B. 错误6. 切除修复不能修复嘧啶二聚体造成的DNA损伤。
A. 正确B. 错误7. 大肠杆菌的DNA同源重组修复不需要DNA聚合酶。
A. 正确B. 错误8. 核苷酸的插入或缺失突变不一定会造成移码突变。
A. 正确B. 错误9. 碱基类似物造成DNA突变的主要原因是其掺入DNA后抑制了DNA复制。
A. 正确B. 错误10. 真核生物的DNA错配修复需要PCNA的参与。
A. 正确B. 错误11. 大肠杆菌的错配修复机制能修复所有可能的碱基错配。
A. 正确B. 错误12. DNA损伤的光复活修复过程需要内切酶的参与。
A. 正确B. 错误13. 镰状细胞贫血是由于血红蛋白β链基因发生了缺失突变。
A. 正确B. 错误14. 胸腺嘧啶二聚体可以使DNA聚合酶失活，因而阻碍了DNA合成。
A. 正确B. 错误15. 紫外线照射不会造成DNA的单碱基突变。
A. 正确B. 错误16. 通常情况下SV40基因组的突变率比HIV低。
A. 正确B. 错误17. 参与大肠杆菌SOS修复的DNA聚合酶是DNA聚合酶Ⅲ。
A. 正确B. 错误18. DNA修复过程通常需要DNA连接酶。
A. 正确B. 错误19. DNA中的碱基G如果发生脱氨基反应将导致DNA发生突变。
A. 正确B. 错误20. 着色性干皮病人的DNA错配修复系统存在缺陷。
A. 正确B. 错误二、选择题1. 以下哪一项不会引起插入/缺失(insertion/deletion)突变?A. 胞嘧啶的脱氨基作用B. DNA复制过程中发生的错误C. 转座作用D. 吖啶的诱变作用2. 由于碱基突变使编码Cys的密码子TGC突变为TGA，这种突变称为：A. 无义突变B. 错义突变C. 沉默突变D. 移码突变3. 下列哪种因素不会诱发DNA突变：A. 放射性同位素辐射B. 紫外线C. 亚硝酸盐D. 饱和脂肪乳剂4. 亚硝酸能够诱导DNA分子中碱基的哪一类反应：A. 嘧啶二聚体B. 脱氨基C. 烷基化D. 羟基化5. 尿嘧啶糖苷酶的功能是：A. 切除RNA分子中的尿嘧啶B. 切除RNA分子中的尿苷酸C. 切除DNA分子中的尿苷酸D. 切除DNA分子中的尿嘧啶6. 以下有关大肠杆菌SOS反应激活过程的描述哪一项正确：A. DNA损伤激活RecA，RecA激活LexA成为转录激活蛋白B. DNA损伤激活RecA，RecA诱导降解转录抑制蛋白LexAC. DNA损伤激活转录激活蛋白LexA，LexA诱导降解RecAD. DNA损伤激活转录抑制蛋白LexA，LexA诱导降解RecA7. 原核细胞DNA的甲基化位点主要是在以下哪种序列上，为错配修复系统提供了区分母链与子链的标签：A. CpGB. GA TCC. FAATD. TGAC8. 原核生物中主要负责DNA修复的是以下哪一类DNA聚合酶：A. DNA polymerase ⅠB. DNA polymerase ⅡC. DNA polymerase ⅢD. Klenow9. 以下哪类化合物最易造成DNA的插入或缺失突变：A. 硫酸二甲酯B. 5-溴尿嘧啶C. 吖啶衍生物D. 乙基乙磺酸10. 以下有关胸腺嘧啶二聚体的说法错误的是：A. 胸腺嘧啶二聚体的出现不会造成DNA复制的终止B. 细胞内有多种修复机制可以修复胸腺嘧啶二聚体C. 胸腺嘧啶二聚体是DNA复制过程中产生的D. 胸腺嘧啶二聚体的光复活修复机制在真核与原核生物中普遍存在11. 切除修复可以修复以下哪种类型的突变：A. 胸腺嘧啶二聚体B. 插入突变C. 缺失突变D. DNA片段倒转12. 以下哪一项不是：RecBCD的活性：A. 外切酶B. DNA解链酶C. A TP酶D. 蛋白酶13. 以下哪种酶或蛋白质不会在大肠杆菌SOS反应中出现：A. RecAB. RecBCDC. DNA聚合酶VD. LexA14. 以下哪种修复机制不需要DNA聚合酶活性：A. 光复活修复B. SOS修复C. 碱基切除修复D. 核苷酸切除修复15. 大肠杆菌的SOS反应中，负责DNA合成的是：A. DNA聚合酶ⅠB. DNA聚合酶ⅢC. DNA聚合酶ⅣD. DNA聚合酶Ⅴ16. 以下哪一项是硫酸二甲酯致使DNA损伤的作用途径：A. 脱氨基作用B. DNA链交联C. 脱碱基作用D. 碱基烷基化17. 哺乳动物细胞的Ku70蛋白和Ku80蛋白参与了以下哪一类DNA修复过程：A. 错配修复B. 双链DNA断裂修复C. 碱基切除修复D. 核苷酸切除修复18. 以下哪一类不属于DNA的自发损伤：A. 碱基自发脱氨基B. 碱基自发脱嘌呤C. DNA复制中产生的错配碱基D. 紫外线照射产生的嘧啶二聚体19. 哺乳动物DNA损伤发生后，细胞内哪类蛋白质表达会上升：A. DNA聚合酶B. DNA连接酶C. P53D. RNA聚合酶20. 以下哪种基因突变对大肠杆菌来说最有可能是致死性的：A. DNA聚合酶ⅠB. dUTPaseC. DNA甲基化酶D. LexA。
分子生物学课后习题答案 2)
分子生物学课后习题答案(2)《现代分子生物学》第四次作业1、简述原核生物和真核生物mRNA的区别。
答：①原核生物mRNA常以多顺反子的形式存在。
真核生物mRNA一般以单顺反子的形式存在。
②原核生物mRNA的转录和翻译不仅发生在同一个细胞空间里，而且这两个过程几乎是同步进行的。
真核生物mRNA的合成和功能表达发生在不同的空间和时间范畴内。
③原核生物mRNA半衰期很短。
真核生物mRNA的半衰期较长。
④原核与真核生物mRNA的结构特点也不同：原核生物mRNA的5’端无帽子结构，3’端没有或只有较短的poly A结构。
真核生物mRNA的5’端存在帽子结构，且绝大多数具有poly A结构。
2、大肠杆菌的终止子有哪两大类？请分别介绍一下它们的结构特点。
答：大肠杆菌的终止子可以分为不依赖于p因子（内在终止子）和依赖于p因子两大类。
不依赖于p因子的终止子结构特点：1.终止位点上游一般存在一个富含GC碱基的二重对称区，由这段DNA转录产生的RNA容易形成发卡式结构。
2.在终止位点前面有一端由4—8个A组成的序列，所以转录产物的3’端为寡聚U，这种结构特征的存在决定了转录的终止。
依赖于p因子的终止子的结构特点：1.转录的RNA也具有发夹结构，但发夹结构后无poly(U)。
2.形成的发夹结构较疏松，茎环上不富含GC。
3.终止需要ρ因子的参与。
4.与不依赖于ρ因子的终止一样，终止信号存在于新生的RNA 链上而非DNA链上过程。
3、真核生物的原始转录产物必须经过哪些加工才能成为成熟的mRNA，以用作蛋白质合成的模版？答：1.装上5′端帽子；2.装上3′端多聚A尾巴；3.剪接：将mRNA前体上的居间顺序切除，再将被隔开的蛋白质编码区连接起来。
剪接过程是由细胞核小分子RNA参与完成的，被切除的居间顺序形成套索形；4.修饰：mRNA分子内的某些部位常存在N6-甲基腺苷，它是由甲基化酶催化产生的，也是在转录后加工时修饰的。
4、简述Ⅰ、Ⅱ类内含子的剪接特点。
分子生物学试题及答案2
分子生物学试题及答案2一、单项选择题（每题2分，共10分）1. DNA分子的双螺旋结构是由哪位科学家提出的？A. 牛顿B. 达尔文C. 沃森和克里克D. 孟德尔答案：C2. 以下哪个不是DNA聚合酶的功能？A. 复制DNAB. 修复DNA损伤C. 转录mRNAD. 合成DNA答案：C3. 在中心法则中，信息流的方向是什么？A. DNA→DNAB. DNA→RNA→蛋白质C. RNA→DNAD. 蛋白质→RNA答案：B4. 以下哪种分子不是RNA分子？A. mRNAB. tRNAC. rRNAD. DNA答案：D5. 基因编辑技术CRISPR-Cas9中，Cas9蛋白的作用是什么？A. 识别并结合到目标DNA序列B. 切割RNA分子C. 转录mRNAD. 翻译蛋白质答案：A二、多项选择题（每题3分，共15分）1. 下列哪些是真核生物mRNA的加工过程？A. 加帽B. 剪接C. 多聚腺苷酸化D. 甲基化答案：ABC2. DNA复制过程中涉及的酶有哪些？A. DNA聚合酶B. DNA连接酶C. DNA解旋酶D. DNA修复酶答案：AC3. 以下哪些是基因表达调控的机制？A. 转录因子的结合B. DNA甲基化C. 组蛋白修饰D. RNA干扰答案：ABCD4. 以下哪些是RNA分子的功能？A. 作为蛋白质合成的模板B. 催化生化反应C. 作为遗传物质D. 参与基因表达调控答案：ABD5. CRISPR-Cas9技术可以用于哪些应用？A. 基因敲除B. 基因插入C. 基因编辑D. 基因表达分析答案：ABC三、填空题（每空1分，共20分）1. DNA分子的双螺旋结构由两条反向平行的_________链组成。
答案：多脱氧核苷酸2. 在转录过程中，RNA聚合酶识别的DNA序列是_________序列。
答案：启动子3. 真核生物的mRNA在细胞核中经过剪接后，会加上一个_________结构。
答案：5'端帽子4. 在蛋白质合成过程中，tRNA分子的_________端携带氨基酸。
《分子生物学》习题及答案解析.doc
分子生物学习题及答案第1章序言1.简述孟德尔、摩尔根和Waston等人对分子生物学发展的首要奉献。
孟德尔是遗传学的奠基人，被誉为现代遗传学之父。
他经过豌豆试验，发现了遗传学三大根本规律中的两个，别离为别离规律及自在组合规律。
摩尔根发现了染色体的遗传机制，创建染色体遗传理论，是现代试验生物学奠基人。
于1933年因为发现染色体在遗传中的效果，赢得了诺贝尔生理学或医学奖。
Watson于1953年和克里克发现DNA双螺旋结构一（包含中心法则）,取得诺贝尔生理学或医学奖，被誉为''DNA之父”。
2.写出DNA、RNA、mRNA和siRNA的英文全名。
DNA： deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸RNA： ribonucleic acid 核糖核酸mRNA： messenger RNA 信使RNAtRNA： transfer RNA 转运RNArRNA： ribosomal RNA 核糖体RNAsiRNA： small interfering RNA 搅扰小RNA3.试述''有其父必有其子”的生物学实质。
其生物学实质是基因遗传。
子代的性状由基因决议，而基因因为遗传的效果，其基因的一半来自于父方，一般来自于母方。
4.早期首要有哪些试验证明DNA是遗传物质？写出这些试验的首要进程。
1）肺炎链球菌转化试验：表面光滑的S型肺炎链球菌（有荚膜多糖一致病性）；表面粗糙R型肺炎链球菌（无荚膜多糖）。
%1活的S型一打针一试验小鼠一小鼠死亡%1死的S型（经烧煮灭火）一打针一试验小鼠一小鼠存活%1活的R型一打针一试验小鼠一小鼠存活%1死的S型+活的R型一试验打针一小鼠死亡%1别离被杀死的S型菌体的各种组分+活的R型菌体一打针一试验小鼠一小鼠死亡（内只要死的S型菌体的DNA转化R型菌体导致致病菌）*DNA是遗传物质的载体2）噬菌体侵染细菌试验%1细菌培育基35S符号的氨基酸+无符号噬菌体一培育1-2代一子代噬菌体简直不含带有35S符号的蛋白质%1细菌培育基32N符号的核昔酸+无符号噬菌体一培育1-2代一子代噬菌体含有30% 以上32N符号的核昔酸*噬菌体传代进程中发挥效果的或许是DNA而不是蛋白质。
分子生物学实验_2
1 实验概述分子生物学试验指导1 实验概述1.1 实验目的实验过程中, 主要通过碱裂解法提取质粒DNA.对质粒进行双酶切、并连接构建成重组DNA分子、大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备、感受态细胞的转化以及目的蛋白质gfp 的正常表达, 来完成一系列分子生物学基础实验。
通过本实验, 学习并掌握碱裂解法、双酶切、氯化钙法制备感受态细胞的制备及采用α互补现象进行重组DNA鉴定的原理和方法。
1.2 实验原理质粒是细菌内共生型遗传因子, 它能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞特定的表型, 经过改造的基因工程质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的重要媒介, 这种基因的运载工具在基因工程中具有极广泛的用途。
本次实验中, 分子克隆质粒载体T所携带的外源基因是gfp绿色荧光蛋白, 实验的最终目的是将gfp基因插入表达载体P中, 组成重组子, 并导入到大肠杆菌细胞中并诱导其表达, 培养出绿色的大肠杆菌菌落。
为此, 我们要利用碱变性法将大肠杆菌中的质粒DNA提取出来, 并通过HandⅢ和NCO Ⅰ两种酶的双酶切作用, 从而获得目的外源基因片段gfp和表达载体-P质粒的DNA, 然后通过连接酶连接后形成重组子, 并通过氯化钙法导入大肠杆菌感受态细胞中, 让其在含有Amp和IPTG的LB琼脂平板上生长繁殖, 最后通过观察大肠杆菌能否在含有Amp 和IPTG的LB平板上长出绿色的菌落, 来判断gfp基因工程菌的构建效果。
广东工业大学现代分子生物技术实验报告2 实验流程2.1 实验安排表实验内容时间安排质粒T、质粒P的提取 3 h电泳检测质粒提取效果30～45 min确定质粒提取成功后, 利用HindⅢ、NcoⅠ这2种限制性内10～11 h切酶分别对质粒T、质粒P进行双酶切电泳检测酶切情况, 若酶切成功, 利用试剂盒回收DNA片断45 min利用T4 DNA连接酶进行连接14～16 h大肠杆菌感受态细胞的制备 3 h转化（gfp基因导入受体细胞） 2 h 重组子的筛选（在含有Amp的LB平板上筛选）12～16 h诱导表达与鉴定（加入诱导物IPTG诱导gfp表达）12～16 h2.2 实验流程图①质粒DNA的提取与纯化碱液裂解法；乙醇洗涤纯化（T-gfp质粒作为克隆载体、P32作为表达载体）②通过观察电泳图片, 来鉴定T、P两种质粒DNA的提取结果琼脂糖凝胶电泳的方法③对成功提取的T、P两种质粒DNA进行双酶切限制性内切酶Han dⅢ、NcoⅠ④T-gfp、P两种质粒的DNA片段的回收割胶（试剂盒快速回收）用刀片把凝胶上的目的DNA条带割取下来3 实验操作方法⑤连接T-gfp、P两种质粒的目的DNA T4噬菌体DNA连接酶（重组DNA分子的构建）⑥大肠杆菌感受态细胞的制备氯化钙法⑦将连接后的重组DNA分子导入大肠杆菌感受态细胞感受态细胞的转化⑧重组子的筛选含有AMP r的重组子才能在AMP平板上生长⑨将含有gfp、AMP r两种目的基因的重组子进行诱导表达重组DNA分子的鉴定在平板上加入底物IPTGgfp绿色荧光蛋白基因被诱导表达⑩gfp基因只有在诱导物IPTG和底物X-gal的存在时, 才能正常表达, 在平板上生成绿色的菌落构建出含有gfp绿色荧光蛋白基因的工程菌图2.1 gfp基因工程菌的构建与表达广东工业大学现代分子生物技术实验报告3实验操作方法3.1 质粒DNA的提取3.1.1 实验概述1.分子克隆载体载体是指运载外源DNA有效进入受体细胞内的工具。
(整理)分子生物学 (2)
名词解释基因：产生一条多肽链或功能RNA所需的全部核苷酸序列。
基因组：生物有机体的单倍体细胞中的所有DNA，包括核中的染色体DNA和线粒体、叶绿体等亚细胞器的DNA。
基因组大小：是指一个基因组中所拥有的DNA含量，一般以重量计算，单位通常是皮克（10-12克），写成pg；有时也用道耳顿；或是以核苷酸碱基对的数量表示，单位为百万计，写成Mb或Mbp。
1pg等于978Mb。
C值矛盾：也称C值反常现象，C值谬误。
C值，通常是指一种生物单倍体基因组DNA的总量，以每细胞内的皮克（pg）数表示。
而C值矛盾则是C值往往与种系的进化复杂性不一致的现象，即基因组大小与遗传复杂性之间没有必然的联系，某些低等的生物C值却很大，如一些两栖动物的C值甚至比哺乳动物还大。
核型：是指染色体组在有丝分裂中期的表型, 是染色体数目、大小、形态特征的总和。
在对染色体进行测量计算的基础上, 进行分组、排队、配对, 并进行形态分析的过程叫核型分析。
CpG岛：C pG双核苷酸在人类基因组中的分布很不均一，而在基因组的某些区段，CpG保持或高于正常概率，GC含量大于50%,长度超过200bp。
卫星DNA：又称随机DNA。
因为真核细胞DNA的一部分是不被转录的异染色质成分，其碱基组成与主体DNA不同，因而可用密度梯度沉降技术如氯化铯梯度离心将它与主体DNA分离。
卫星DNA通常是高度串联重复的DNA。
基因簇：指基因家族中的各成员紧密成簇排列成大串的重复单位，定于染色体的的特殊区域。
基因簇少则可以是由重复产生的两个相邻相关基因所组成，多则可以是几百个相同基因串联排列而成。
他们属于同一个祖先的基因扩增产物。
也有一些基因家族的成员在染色体上排列并不紧密，中间还含有一些无关序列。
但总体是分布在染色体上相对集中的区域。
基因家族：在基因组进化中，一个基因通过基因重复产生了两个或更多的拷贝，这些基因即构成一个基因家族，是具有显著相似性的一组基因，编码相似的蛋白质产物。
分子生物学实验2 大肠杆菌感受态细胞的制备
实验大肠杆菌感受态细胞的制备实验原理：转化是将异源DNA分子引入另一细胞系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段。
受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的变异株，经过CaCl2等化学试剂的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许带有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。
经过转化的细胞在选择性培养基上，可以筛选出转化体，即带有外源DNA分子的受体细胞。
实验目的：学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞过程。
实验内容：JM109感受态细胞的制备、一、实验材料和试剂大肠杆菌JM109或DH5α，LB固体/液体培养基，0.1mol/LCaCl2溶液。
二、主要设备台式高速离心机，超净工作台，低温冰箱，恒温水浴锅，制冰机，分光光度计，微量移液器、恒温摇床，等。
三实验方法1.受体菌的培养从于37℃培养16-20小时的新鲜LB平板上挑取新活化单菌落，接种于3~5ml LB液体培养基中，37℃下振荡培养（300rpm）12小时左右，直至对数生长后期。
将该菌悬液以1：100~1：50（V：V）的比例接种于100ml LB液体培养基，37℃下振荡培养2~3小时至OD600=0.35～0.5左右。
2.感受态细胞的制备（1）在无菌条件下，将培养液转入预冷的1.5ml离心管中，冰上放置20min，使其停止生长。
（2）4℃下，4000rpm离心5min，弃去上清。
（3）加入0.75ml预冷的0.1mol/L CaCl2溶液悬浮细胞，冰上放置30分钟，4℃下4000离心5min。
（4）弃去上清，加入0.2ml预冷的0.1mol/L CaCl2溶液悬浮细胞，贮存于4℃备用。
或贮存于-70℃（加10-30%的甘油），可保存半年。
四.注意事项：1、整个实验都应在无菌的条件下操作。
2、整个操作均在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化率会降低。
分子生物学 (2)
一名词解释1.基因：产生一条多肽链或功能RNA 所必需的全部核苷酸序列。
2.断裂基因：在DNA 分子的结构基因内既含有能转录翻译的片段，也含有不转录翻译的片段，这类基因称断裂基因3.顺反子：由顺/反测验定义的遗传单位，与基因等同，都是代表一个蛋白质质的DNA 单位组成。
一个顺反子所包括的一段DNA 与一个多肽链的合成相对应。
4.变性：是DNA双链的氢键断裂，最后完全变成单链的过程称为变性。
5.复性：热变性的DNA缓慢冷却，单链恢复成双链。
6.顺式作用元件：影响自身基因表达活性的非编码DNA序列。
例：启动子、增强子、弱化子等7.反式作用因子：能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质。
8.增强子：在启动区存在的能增强或促进转录的起始的DNA序列。
但不是启动子的一部分。
9.PCR:即聚合酶链式反应。
扩增样品中的DNA 量和富集众多DNA 分子中的一个特定的DNA 序列的一种技术。
在该反应中，使用与目的DNA 序列互补的寡核苷酸作为引物，进行多轮的DNA合成。
每一轮中都包括DNA 变性，引物退火和在Tap DNA 聚合酶催化下的DNA 合成反应。
10.SD 序列:原核生物起始密码AUG 上游7～12 个核苷酸处的一段保守序列，能与16S rRNA 3′端反向互补，被认为在核糖体-mRNA 的结合过程中起作用。
11.转录：生物体以DNA为模板合成RNA的过程。
12.操纵子:细菌基因表达和调控的单位，包括结构基因和能被调控基因产物识别的DNA 控制元件。
13.SSB:即单链结合蛋白，大肠杆菌中一种与单链DNA 结合的蛋白质14.启动子:DNA 模板上具有活化RNA 聚合酶、启动转录起始功能的特殊序列。
15.终止子:模板DNA 上的具有终止转录功能的特殊序列。
16.Tm值：增色效应达到最大值一半时的温度17.C值矛盾：C值与生物结构或组成的复杂性不一致的现象18.多顺反子：原核细胞中数个结构基因常串联为一个转录单位转录成的 mRNA 能编码几种功能相关的蛋白质。
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分子生物学-2
(总分：100.00，做题时间：90分钟)
一、判断题(总题数：20，分数：50.00)
1.用重组修复和SOS修复的方式修复DNA损伤，在修复完成后都会产生较高的基因突变概率。
（分数：
2.50）
A.正确
B.错误
2.DNA错配修复不需要消耗能量。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
3.紫外线照射损伤DNA的主要原因是形成了嘧啶二聚体。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
4.只有DNA聚合酶Ⅰ参与了大肠杆菌的错配修复过程。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
5.点突变不会造成移码突变。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
6.切除修复不能修复嘧啶二聚体造成的DNA损伤。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
7.大肠杆菌的DNA同源重组修复不需要DNA聚合酶。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
8.核苷酸的插入或缺失突变不一定会造成移码突变。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
9.碱基类似物造成DNA突变的主要原因是其掺入DNA后抑制了DNA复制。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
10.真核生物的DNA错配修复需要PCNA的参与。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
11.大肠杆菌的错配修复机制能修复所有可能的碱基错配。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
12.DNA损伤的光复活修复过程需要内切酶的参与。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
13.镰状细胞贫血是由于血红蛋白β链基因发生了缺失突变。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
14.胸腺嘧啶二聚体可以使DNA聚合酶失活，因而阻碍了DNA合成。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
15.紫外线照射不会造成DNA的单碱基突变。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
16.通常情况下SV40基因组的突变率比HIV低。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
17.参与大肠杆菌SOS修复的DNA聚合酶是DNA聚合酶Ⅲ。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
18.DNA修复过程通常需要DNA连接酶。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
19.DNA中的碱基G如果发生脱氨基反应将导致DNA发生突变。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
20.着色性干皮病人的DNA错配修复系统存在缺陷。
（分数：2.50）
A.正确
B.错误
二、选择题(总题数：20，分数：50.00)
21.以下哪一项不会引起插入/缺失(insertion/deletion)突变?（分数：2.50）
A.胞嘧啶的脱氨基作用
B.DNA复制过程中发生的错误
C.转座作用
D.吖啶的诱变作用
22.由于碱基突变使编码Cys的密码子TGC突变为TGA，这种突变称为：（分数：2.50）
A.无义突变
B.错义突变
C.沉默突变
D.移码突变
23.下列哪种因素不会诱发DNA突变：（分数：2.50）
A.放射性同位素辐射
B.紫外线
C.亚硝酸盐
D.饱和脂肪乳剂
24.亚硝酸能够诱导DNA分子中碱基的哪一类反应：（分数：2.50）
A.嘧啶二聚体
B.脱氨基
C.烷基化
D.羟基化
25.尿嘧啶糖苷酶的功能是：（分数：2.50）
A.切除RNA分子中的尿嘧啶
B.切除RNA分子中的尿苷酸
C.切除DNA分子中的尿苷酸
D.切除DNA分子中的尿嘧啶
26.以下有关大肠杆菌SOS反应激活过程的描述哪一项正确：（分数：2.50）
A.DNA损伤激活RecA，RecA激活LexA成为转录激活蛋白
B.DNA损伤激活RecA，RecA诱导降解转录抑制蛋白LexA
C.DNA损伤激活转录激活蛋白LexA，LexA诱导降解RecA
D.DNA损伤激活转录抑制蛋白LexA，LexA诱导降解RecA
27.原核细胞DNA的甲基化位点主要是在以下哪种序列上，为错配修复系统提供了区分母链与子链的标签：（分数：2.50）
A.CpG
B.GATC
C.FAAT
D.TGAC
28.原核生物中主要负责DNA修复的是以下哪一类DNA聚合酶：（分数：2.50）
A.DNA polymerase Ⅰ
B.DNA polymerase Ⅱ
C.DNA polymerase Ⅲ
D.Klenow
29.以下哪类化合物最易造成DNA的插入或缺失突变：（分数：2.50）
A.硫酸二甲酯
B.5-溴尿嘧啶
C.吖啶衍生物
D.乙基乙磺酸
30.以下有关胸腺嘧啶二聚体的说法错误的是：（分数：2.50）
A.胸腺嘧啶二聚体的出现不会造成DNA复制的终止
B.细胞内有多种修复机制可以修复胸腺嘧啶二聚体
C.胸腺嘧啶二聚体是DNA复制过程中产生的
D.胸腺嘧啶二聚体的光复活修复机制在真核与原核生物中普遍存在
31.切除修复可以修复以下哪种类型的突变：（分数：2.50）
A.胸腺嘧啶二聚体
B.插入突变
C.缺失突变
D.DNA片段倒转
32.以下哪一项不是：RecBCD的活性：（分数：2.50）
A.外切酶
B.DNA解链酶
C.ATP酶
D.蛋白酶
33.以下哪种酶或蛋白质不会在大肠杆菌SOS反应中出现：（分数：2.50）
A.RecA
B.RecBCD
C.DNA聚合酶V
D.LexA
34.以下哪种修复机制不需要DNA聚合酶活性：（分数：2.50）
A.光复活修复
B.SOS修复
C.碱基切除修复
D.核苷酸切除修复
35.大肠杆菌的SOS反应中，负责DNA合成的是：（分数：2.50）
A.DNA聚合酶Ⅰ
B.DNA聚合酶Ⅲ
C.DNA聚合酶Ⅳ
D.DNA聚合酶Ⅴ
36.以下哪一项是硫酸二甲酯致使DNA损伤的作用途径：（分数：2.50）
A.脱氨基作用
B.DNA链交联
C.脱碱基作用
D.碱基烷基化
37.哺乳动物细胞的Ku70蛋白和Ku80蛋白参与了以下哪一类DNA修复过程：（分数：2.50）
A.错配修复
B.双链DNA断裂修复
C.碱基切除修复
D.核苷酸切除修复
38.以下哪一类不属于DNA的自发损伤：（分数：2.50）
A.碱基自发脱氨基
B.碱基自发脱嘌呤
C.DNA复制中产生的错配碱基
D.紫外线照射产生的嘧啶二聚体
39.哺乳动物DNA损伤发生后，细胞内哪类蛋白质表达会上升：（分数：2.50）
A.DNA聚合酶
B.DNA连接酶
C.P53
D.RNA聚合酶
40.以下哪种基因突变对大肠杆菌来说最有可能是致死性的：（分数：2.50）
A.DNA聚合酶Ⅰ
B.dUTPase
C.DNA甲基化酶
D.LexA。