纤维素CMC酶、FPA酶和半纤维素酶测定
纤维素酶酶活的测定方法
检测分析纤维素酶酶活的测定方法河南省科学院生物研究所 刘德海 杨玉华 安明理河南省饲料产品质量监督检验站 陈小鸽 饲用纤维素酶在饲料工业中已普及应用,对其质量检测显得日益重要。
纤维素酶是一种复合酶,按作用底物的能力划分为两部分,一部分是对棉花纤维素能起催化水解作用的酶,称为C1酶;另一部分是对羧甲基纤维素钠(Na-CMC)起水解作用的酶,称为C x酶。
据此,一般采用两种测定方法,一种是适用于C X酶的CMC法,另一种是适用于C1酶的滤纸法。
下面就此两种方法作一介绍。
1 C MC(羧甲基纤维素)法1.1 材料1.1.1 饲用纤维素酶 由河南省科学院生物研究所提供。
1.1.2 试剂 磷酸氢二钠、柠檬酸、羧甲基纤维素、3,5-二硝基水杨酸、氢氧化钠、酒石酸钾钠、亚硫酸钠、苯酚。
1.1.3 仪器 721型分光光度计、恒温水浴锅、PHS-2酸度计、秒表。
1.1.4 试剂配制1.1.4.1 pH5.0柠檬酸缓冲液 制取0.2mol/L 磷酸氢二钠液(称取7.16g磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中,定容至100mL)和0.1mol/L的柠檬酸液(称取2.1g柠檬酸溶解于蒸馏水中,定容至100 mL),取磷酸氢二钠液24.3mL、柠檬酸液25.7mL 混匀,用精密酸度计测至pH值为5.0。
1.1.4.2 羧甲基纤维素溶液 准确称取2.0g羧甲基纤维素钠盐溶于200mL水中,沸水浴中加热至溶化,过滤,取滤液100mL,加柠檬酸缓冲液20 mL、蒸馏水40mL,混匀,贮存于冰箱中备用。
1.1.4.3 3,5-二硝基水杨酸显色液 准确称取6.3g3,5-二硝基水杨酸置于2mol/L氢氧化钠262mL溶液中,然后加酒石酸钾钠的热溶液(182.0g酒石酸钾钠溶于500mL水中),再加5.0 g苯酚和5.0g亚硫酸钠,搅拌至溶解,冷却后定容至1000mL,贮于棕色瓶中置冰箱中备用。
1.1.4.4 0.1%标准葡萄糖溶液 准确称取经105℃烘至恒重的无水葡萄糖250.000mg,溶于蒸馏水中,定容至250mL。
纤维素酶活力测定方法
纤维素酶活力测定方法纤维素酶活力测定方法很多，主要原因是纤维素酶种类繁多、来源很广，不同来源的纤维素酶其结构和功能相差很大，其次纤维素酶作用的底物比较复杂，反应产物不同，致使纤维素酶活力的测定方法复杂而不统一。
近年来随着多种交叉学科的快速发展，生物化学、分子生物学以及基因工程等相关领域的研究，促进了更多更新的纤维素酶活测定以及动力学研究方法的出现。
纤维素酶酶活测定方法——传统检测方法曾报道过传统纤维素酶测定方法很多，如微晶纤维素酶活测定方法、滤纸酶活(FPA)测定方法、水杨什酶活测定方法、、染色纤维素法、滤纸崩溃法、棉线切断法、梭甲基纤维素钠盐(CMC-Na)酶活性测定方法、棉花糖法、CMC粘度降低法、荧光定糖法平板法。
纤维素酶系总的糖化能力的测定常见有三种一是通过测定荧光物质的荧光强度的大小，来计算其还原糖含量的荧光法，其主要是根据还原糖与反应液生成荧光物质。
二是滤纸酶活(FPA)测定法，纤维素酶系总的糖化能力，通过以滤纸为底物经纤维素酶水解后生成的还原糖的量表征，因为滤纸是聚合度和结晶度都居“中等”的纤维性材料。
三是滤纸崩溃法，以滤纸完全崩溃为粉末状所需的时间来表征纤维素酶的活力，在容器内加入缓冲液和适当稀释的酶液，放入一定尺寸的滤纸条，一定温度条件下反复振荡。
外切葡萄糖什酶活力的测定有棉花糖化法方法和微晶纤维素酶活测定方法两种。
两者均采用DNS显色法，通过计算还原糖的量来表征外切葡萄糖什酶活力，主要是利用纤维素酶降解微晶纤维素、棉。
纤维素酶中内切葡萄糖什酶对CMC-Na有降解能力，因此内切葡萄糖什酶活力的表征主要为CMC-Na酶活性测定方法。
用标准葡萄糖溶液作标准曲线，通过DNS 法显色，针对内切葡萄糖什酶与CMC-Na降解生成的葡萄糖等还原糖，以每分钟生成相当于1 I} mol的葡萄糖所需酶量定义为一个酶活性单位，使用分光光度计测其吸光度。
B一葡萄糖什酶活性的测定常用方法有三种:一是将它们衍生为无荧光的底物，因为伞形酮(7一羚基香豆素)与4一甲基伞形酮具有强烈荧光的特点，使用荧光法进行测定;二是Banish和Swiain法，它以水杨什作底物，使释放出来的水杨醇显色(或DNS显色)，酶解产物用4一氨基安替比林作显色剂，再用分光光度法比色测定;三是以对一硝基苯一I}一葡萄糖什为底物进行酶解，底物水解后释放出的配基对硝基苯酚可直接在100}120nm波长范围内测定。
[知识]两种常用纤维素酶活力测定方法---滤纸酶活-CMC酶活
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检测纤维素酶酶活力—滤纸酶活力(FPA)滤纸酶活力代表了纤维素酶的三种酶组分协同作用后的总酶活。
采用3，5一二硝基水杨酸法测定酶活：(简称DNS法)1、原理：纤维素经纤维素酶水解后生成还原糖，还原糖能将3，5一二硝基水杨酸中硝基还原成氨基，溶液变为橙色的氨基化合物，即：3一氨基一5二硝基水杨酸，在一定的还原糖浓度范围内，橙色的深度与还原糖的浓度成正比，据此可以推算出纤维素酶的活力。
2、采用的滤纸酶活单位定义：滤纸酶活反映了纤维素酶的3种水解酶，即内切型葡聚糖酶、外切型葡聚糖酶和β葡聚糖苷酶组成的诱导复合酶系的协同水解纤维素能力。
是该菌株整个纤维素酶系的酶活力水平的综合体现。
代表了纤维素酶的三种酶组分协同作用后的总酶活。
在此滤纸酶活单位定义为：以滤纸为底物，在一定反应条件(pH4.8，50℃，恒温lh)下，以水解反应中，1ml纤维素酶液1min催化纤维素生成lug葡萄糖为1个滤纸酶活单位，以U表示。
3、滤纸酶活力(FPA)的测定：①取0．5ml适当稀释的酶液，加入PH值为4.8，0.1mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液lml或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液lml；②再加入50±0.5mg滤纸(1cmx6cm)一条，于50℃保温酶解反应1小时，(先预热5分钟)；③加入DNS显色液3ml(标准曲线用量是1.5ml)，放入已沸腾的水中沸水浴lOmin，流水冷却后在540nm下测吸光度；④同时用100℃煮沸lOmin后失活的酶液做对照，扣除本底；⑤根据吸光度从葡萄糖标准曲线中查出相应的葡萄糖含量，根据生成的葡萄糖克数计算出酶活值。
滤纸酶活按下面公式计算：X=（WxNxlOOO）／（TxM）X:为滤纸酶酶活力，单位U／mL。
W：为从葡萄糖标准曲线中查得的葡萄糖的浓度。
N：为酶液稀释总倍数。
T：为反应时间。
M：为样品的体积。
4、葡萄糖标准曲线绘制方法标准曲线绘制：取25ml具塞刻度试管6支，加入1.0 mg /ml的葡萄糖标准溶液0.0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml,加蒸馏水2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0.0ml,加DNS试剂1.5 ml，混匀后在沸水浴中加热5分钟，取出立即用冷水冷却，用水定容至25 ml，摇匀，测吸光度A，以吸光度为纵坐标，葡萄糖的含量为横坐标，绘制标准曲线。
纤维素酶酶活测定可编辑全文
纤维素酶酶活测定纤维素酶活测定方法一、原理纤维素酶能将纤维素降解成纤维二糖和葡萄糖，具有还原性末端的纤维二糖糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可与DNS试剂发生显色反应。
反应颜色强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖量又与反应液中的纤维素酶的活力成正比。
酶活定义纤维素酶活力单位是指55℃、pH5.0的条件下，以每分钟催化羧甲基纤维素钠水解生成1μmol还原糖所需的酶量定义为一个酶活力单位U。
二、实验试剂羧甲基纤维素钠（聚合度1700-2000），内切纤维素酶（苏柯汉）50mmol NaAC-HAC、DNS试剂三、实验仪器容量瓶（1000ml ×2、500 ml×3、100 ml ×4、50ml×4 ml）、移液器、烧杯（500ml×3、50ml×3）、具塞试管、电热套、水浴锅、分光光度计、pH计、电子天平四、标准曲线的绘制五、酶活测定由于苏柯汉给定的pH范围为4.8-5.2，故选用pH 5.0的50mmol NaAC-HAC缓冲液测定纤维素酶酶活。
1、样品的制备CMC-Na溶液的制备：用pH 5.0的50mmol NaAC-HAC缓冲液配置0.5%的CMC-Na （羧甲基纤维素钠）溶液，准确称量CMC-Na0.05g，精确至0.001g，溶于蒸馏水中，45℃水浴锅中搅拌溶解，冷却后定容至100ml。
纤维素酶液的制备：准确称取纤维素酶，精确到0.001g。
用50mmol NaAC-HAC pH5.0的缓冲液配置成适当的浓度10000倍，保证吸光度在0.2-0.6之间。
2、DNS法测酶活：取1.8ml 0.5% CMC-Na的溶液于25ml 具塞刻度试管中，55℃预热10min左右，加入0.2ml 适当稀释的酶液，于55℃水浴锅中保温30min后，然后加2ml DNS，混匀，沸水浴5min，冷却至室温，定容到25ml。
混匀测OD540nm。
纤维素酶活力的测定
纤维素酶液中各种酶的作用方式图
2.2 纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原
糖能将碱性条件下的3,5-二硝基水杨酸（DNS）还原，生成 红棕色的氨基化合物，在540nm波长处有最大光吸收，在一 定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利 用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力。
3.器材和试剂
3.1器材：
水浴锅、 分光光度计、 记时器、 比色管（4支+6支）、 移液管（5支）、 吸耳球
3.2试剂（公用）： 如下
1 ） D N S试剂
称取3 , 5 一 二硝基水杨酸( 1 0 10 . 1 ) g，置于约6 0 0 m L水中，逐渐 加入氢氧化钠l o g ，在5 0 ℃水浴中( 磁力)搅拌溶解，再依次加入酒石酸 甲钠2 0 0 g 、苯酚( 重蒸) 2 g 和无水亚硫酸钠5 g ，待全部溶解并澄清后， 冷却至室温，用水定容至 I O O O m L ，过滤。贮存于棕色试剂瓶中，于 暗处放置7 d 后使用。
性回归系数应在0 . 9 9 9ห้องสมุดไป่ตู้0以上时方可使用( 否则须重做) 。
4 . 2 样 品的测定
4 . 2 . 1 待测酶液的制备 称取酶样1 g , 精确至0 . 1 m g ( 或吸取液体酶样1 mL ， 精
确至0 . 0 1 m L ) ， 用水（柠檬酸缓冲液，0.05 mol/LpH4.8） 溶解100ml(100倍），之后分别做200倍、400倍、600倍、800 倍稀释， 磁力搅拌混匀， 准确稀释定容 放置1 0 m i n ， 待测。 4 . 2 . 2 滤纸条的准备
有最大光吸收，由此，可根据测得的吸光值与葡萄糖浓度的关
系来计算纤维素酶的活力（FPA）。
两种常用纤维素酶活力测定方法滤纸酶活-CMC酶活
检测纤维素酶酶活力—滤纸酶活力(F PA)滤纸酶活力代表了纤维素酶的三种酶组分协同作用后的总酶活。
采用3，5一二硝基水杨酸法测定酶活：(简称DNS法)1、原理：纤维素经纤维素酶水解后生成还原糖，还原糖能将3，5一二硝基水杨酸中硝基还原成氨基，溶液变为橙色的氨基化合物，即：3一氨基一5二硝基水杨酸，在一定的还原糖浓度范围内，橙色的深度与还原糖的浓度成正比，据此可以推算出纤维素酶的活力。
2、采用的滤纸酶活单位定义：滤纸酶活反映了纤维素酶的3种水解酶，即内切型葡聚糖酶、外切型葡聚糖酶和β葡聚糖苷酶组成的诱导复合酶系的协同水解纤维素能力。
是该菌株整个纤维素酶系的酶活力水平的综合体现。
代表了纤维素酶的三种酶组分协同作用后的总酶活。
在此滤纸酶活单位定义为：以滤纸为底物，在一定反应条件(pH4.8，50℃，恒温lh)下，以水解反应中，1ml纤维素酶液1mi n催化纤维素生成lu g葡萄糖为1个滤纸酶活单位，以U表示。
3、滤纸酶活力(F PA)的测定：①取0．5ml适当稀释的酶液，加入PH值为4.8，0.1mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液l ml或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液lml；②再加入50±0.5mg滤纸(1cmx6c m)一条，于50℃保温酶解反应1小时，(先预热5分钟)；③加入DNS显色液3ml(标准曲线用量是1.5ml)，放入已沸腾的水中沸水浴l Omin，流水冷却后在540nm下测吸光度；④同时用100℃煮沸lOmi n后失活的酶液做对照，扣除本底；⑤根据吸光度从葡萄糖标准曲线中查出相应的葡萄糖含量，根据生成的葡萄糖克数计算出酶活值。
滤纸酶活按下面公式计算：X=（WxNxlO OO）／（TxM）X:为滤纸酶酶活力，单位U／mL。
纤维素酶的CMC酶活测定条件的研究
网络出版时间：2012-11-06 14:59网络出版地址：/kcms/detail/11.1759.TS.20121106.1459.006.html纤维素酶的CMC酶活测定条件的研究孙盈田永强赵丽坤(兰州交通大学化学与生物工程学院，甘肃兰州730070)摘要：本实验研究和分析了CMC酶活性测定法的实验条件。
通过单因素实验对酶促反应时间、酶促反应温度、pH、测定波长、底物浓度、粗酶液和底物添加量六个影响因素进行了研究。
最后结合正交实验、方差分析和多重比较,确定了纤维素酶活力测定的最佳条件组合。
结果表明，在pH6.2、粗酶液和底物添加量各为2mL的情况下，影响纤维素酶活力测定的主次因素依次为酶促反应时间、酶促反应温度、测定波长和底物浓度。
纤维素酶活力测定的最佳条件为：在酶促反应温度为40℃，pH6.2，底物浓度为10g/L，粗酶液和底物添加量各为2mL，酶促反应时间30min，测定波长为520nm。
关键词：纤维素酶，酶活力测定，条件Study on The Optimum Conditions of Determination of Cellulase ActivitySun Ying Tian Yongqiang Zhao Likun(School of Chemical and Biological Engineering, Lanzhou Jiaotong University，Lanzhou 730070,China)Abstract: The experimental conditions of CMC enzyme activity assay were researched. Six influencing factors:enzymatic reaction time, reaction-temperature, pH, detective wavelength, substrate concentration, crude enzymeand substrate addition were studied by a single factor test. Finally, orthogonal experiment, variance analysis andmultiple comparisons were married together, and the optimum conditions of determination of CMC enzymeactivity were determined. The results showed that, when the volume of crude enzyme and substrate were 2mL andpH6.2, the primary and secondary factors which affected cellulase activity were enzymatic reaction time, reactiontemperature, enzymatic determination of wavelength and substrate concentration. Experiments showed that: theenzymatic reaction temperature 40℃, pH6.2, substrate concentration 10g/L, the volume of crude enzyme andsubstrate were 2mL, enzymatic reaction time 30min, and the detective wavelength at 520nm were the optimumconditions for the determination.Key words: Cellulase; the determination of enzyme activity; condition中国分类号：TS207.3 文献标识码：A纤维素是地球上最古老、最丰富的天然高分子，也是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖，是取之不尽用之不竭、人类最宝贵的天然可再生资源，占植物界碳含量的50%以上[1]。
粗饲料中纤维素、半纤维素酶解测定方法的研究与评价的开题报告
粗饲料中纤维素、半纤维素酶解测定方法的研究与评价的
开题报告
一、选题背景
纤维素和半纤维素是植物体中最主要的成分之一，是植物细胞壁的重要组成部分。
粗饲料中的纤维素和半纤维素对于反刍动物的消化有着至关重要的作用，在家畜的饲
养过程中起着非常重要的作用。
尤其对于草食动物而言，其在消化过程中微生物必须
首先将纤维素和半纤维素水解为双糖和单糖，这也是其生长和发展的前提条件。
因此，能够准确测定粗饲料中的纤维素和半纤维素含量，对于家畜饲养和养殖行业具有重要
的实际意义。
二、研究目的
本论文主要研究和评价粗饲料中纤维素、半纤维素酶解测定方法的准确性和可靠性，为家畜饲养和养殖行业提供可靠的检测方法和数据支持。
三、研究内容
1. 纤维素、半纤维素的含义和作用；
2. 纤维素、半纤维素酶解测定方法的种类和优缺点；
3. 粗饲料中纤维素、半纤维素含量的取样方法和试验结果；
4. 对比不同纤维素、半纤维素酶解测定方法的检测准确性和可靠性；
5. 结果分析和讨论，提出进一步研究和改进方向。
四、研究意义
1. 为粗饲料中纤维素、半纤维素酶解测定提供准确性和可靠性的科学依据，为家畜饲养和养殖行业提供数据支持；
2. 增强学生的科研能力和实践能力，提升专业素养和综合能力。
五、研究方法
1. 对不同方法进行对比实验，筛选出具有准确性和可靠性的测定方法；
2. 通过标准化测定程序，获得准确的试验数据并进行分析和处理。
六、预期结果
本论文预计能够找到一个能够准确测定粗饲料中纤维素、半纤维素含量的测定方法，并评价其准确性和可靠性。
有望提供科学依据和数据支持，为家畜饲养和养殖行业提供有益的帮助。
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纤维素CMC酶、FPA酶和半纤维素酶测定
1.纤维素CMC酶
1.0标题
用3.5一二硝基水杨酸法测定纤维素CMC酶活性单位。
2.0范围
生产分析和质量控制部门适用。
3.0原理
纤维素CMC酶（EC3.2.1.4）水解羧基纤维素分子中β－1.4葡萄糖苷键,释放出的还原糖(以葡萄糖计)与3.5二硝基水杨酸(DNS)反应,产生颜色变化,这种颜色变化与释放还原糖(以葡萄糖计)的量成正比关系,即与酶样品中的酶活性成正比。
通过在550nm的光吸收值查对标准曲线(以葡萄糖为标准物)可以确定还原糖产生的量,从而确定出酶的活力单位。
4.0试剂
4.1无水醋酸钠(分析纯)
4.2冰醋酸(分析纯)
4.3 3.5－二硝基水杨酸
4.4无水葡萄糖
4.5四水酒石酸钾钠(分析纯)
4.6氢氧化钠(分析纯)
4.7重蒸苯酚(分析纯)
4.8无水亚硫酸钠(分析纯)
4.9叠氮化钠(分析纯)
4.10羧甲基纤维素钠
5.0仪器
5.1水浴锅(恒温)50±1℃
5.2电热干燥箱80±1℃
5.3 722型分光光度机计
5.4分析天平感量0.1㎎
5.5一级玻璃制品
5.6电冰箱
6．0试剂的准备
6．1乙酸－乙酸钠缓冲溶液（PH=4.8）
溶液A：量取冰醋酸6ml，定容至1000ml，制成0.1M醋酸钠溶液。
溶液B：称取8.2g醋酸钠，溶解后容至1000ml，制成0.1M醋酸钠溶液。
以A：B=4：6的比例混合，低温冷藏备用。
6.2 DNS试剂:
溶液A:称分析纯NaOH 104g溶于1300ml水中,加入30g分析纯3.5一二硝基水杨酸。
溶液B:称分析纯酒石酸钾钠910g，溶于2500ml热水中，再称取25g重蒸苯酚和25g无水亚硫酸钠加入酒石酸钾钠溶液。
将A、B溶液混合，定容至5000ml，贮存于棕色瓶中，暗处放置一星期后可使用。
6.3 CMC溶液：用羧甲基纤维素钠（CMC）以PH4.8醋酸缓冲液配成1%的溶液。
7．0标准曲线制作：
7.1无水葡萄糖80℃烘干至恒重。
7.2准确称取1.000g溶于1000ml水中，加10mg叠氮化钠防腐，4℃冷藏备用。
7.3标准葡萄糖曲线制作
取1mg/ml标准葡萄糖液各0，0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml补加水至2.0ml,加入2.0mlDNS 试剂,具塞,沸水浴中加热10分钟,冷却后定容至15ml,分光光度计550nm波长下测OD值,3次重复实验的均值用最小乘法相拟合Y=ax+b一元线性方程。
由光密度值引得葡萄糖量。
8.0 CMC酶活性测定。
8.1活性定义：1g酶粉（1ml酶液）于50℃PH4.8条件下，每分钟水解1%CMC溶液产生1µg还原糖（以葡萄糖计）的酶量定义为1个CMC酶活力单位。
8.2分析程序：
取三支15ml刻度试管分别加入0.2ml稀释酶液，在分别吸取1.8mlCMC溶液,50℃水浴保温30分钟,空白样用0.2ml稀释酶液,加入1.8ml醋酸缓冲液,同样50℃水浴30分钟,再吸取DNS2ml 摇匀后,具塞,沸水浴反应10分钟,冷却后,补加水至15ml,轻轻上下摇匀,用空白调零点,于550nm 下测OD值。
9.0计算活力单位
A×D×5×1000
CMC酶活力=————————µ/g(ml)
30
A：OD值在标准曲线上对应的葡萄糖量（）
D：酶粉（液）稀释倍数
2.FPA酶
即滤纸酶，即以滤纸作为底物，因滤纸中的纤维素含量较高，FPA酶水解滤纸中的纤维素，释放出的还原糖与3.5-乙硝基水扬酸（DNS）反应，产生颜色变化，这种颜色变化与释放的还原糖量成正比关系，即与酶样品的酶活性成正比关系。
通过在550NM的光吸收值查对标准曲线，可以确定还原糖产生的量，从而确定酶活力单位，它也是恒量纤维素酶活的一个重要指标。
3.半纤维素酶：
1.0标题
用3.5一二硝基水杨酸测定半纤维素酶活性单位
2.0范围
生产分析和质量控制部门适用
3.0原理
半纤维素酶水解木聚糖，释放出的还原糖（以木糖计）与3.5一二硝基水杨酸（DNS）反应，产生颜色变化，这种颜色变化与释放的还原性糖（以木糖计）的量成正比关系，即与酶样品中的酶活性成正比。
通过在550nm的光吸收值查对标准曲线（以木糖为标准物）可以确定还原糖产生的量，从而确定出酶的活力单位。
4.0单位定义
一个半纤维素酶单位定义为；1g酶粉（或1ml酶液）于50℃PH4.8条件下，每分钟分解1%木聚糖溶液产生一微克还原糖（以木糖）的酶量定义为一个半纤维素酶活力单位。
5.0试剂
5.1无水醋酸钠（分析纯）
5.2冰醋酸（分析纯）
5.3 3.5一二硝基水杨酸（分析纯）
5.4木糖（分析纯）
5.5四水酒石酸钾钠（分析纯）
5.6氢氧化钠（分析纯）
5.7重蒸苯酚（分析纯）
5.8无水亚硫酸钠（分析纯）
5.9叠氮化钠（分析纯）
5.10木聚糖（分析纯）
6.0仪器
6.1水浴锅（恒温）50±1℃
6.2电热干燥箱80±1℃
6.3 772型分光光度计
6.4分析天平感量0.1
6.5一级玻璃制品
6.6电冰箱
7.0试剂的制备：
7.1乙酸－乙酸钠缓冲溶液（PH=4.8）
溶液A：量取冰醋酸6ml，定容至1000ml配成0.1MNaNC溶液。
溶液B：称取8.2gNaAC，溶解后容至1000ml，制成0.1MNaAC溶液。
使用溶液以A：B=4：6的比例混合，低温冷藏备用。
7.2 DNS试剂
溶液A：称分析纯NaoH104g，溶于1300ml水中，加入30g分析纯3.5一二硝基水杨酸。
B：称分析纯酒石酸钾钠910g溶于2500ml水中，再称取25g重蒸苯酚和25g无水亚硫酸钾钠加入酒石酸钾钠溶液，将A、B溶液混合加入1200ml中，储存于棕色瓶中，暗处放置一星期后可使用。
7.3木聚糖溶液：用木聚糖以PH4.8醋酸缓冲液配成1%溶液。
8.0标准曲线制作：
8.1木糖80℃烘干至恒重。
8.2标准称取1.000g木糖以溶于1000ml水中，加10ml叠氮化钠防腐，4℃冷藏备用。
8.3标准木糖曲线制作
取1mg/ml标准木糖液各0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2补加水至2.0ml，加入2.0mlDNS 试剂,具塞、沸水浴中加热10分钟，冷却后定容至15ml，分光光度计550nm波长下测OD值，3次重复试验的均值用最小二乘法相拟合Y=ax+b一元线性方程，由光密度值引得木糖量。
9.0半纤维素酶活性测定；
15ml刻度试管中加入稀释酶液0.2ml（三支平行样），再各吸取1.8ml1%的木聚糖溶液，摇匀，50℃水溶60分钟，取出后，再吸取2mlDNS试剂摇匀，具塞，立即沸水浴反应10分钟，冷却后，补加水定容到15ml，轻轻上下摇匀，空白用0.2ml稀释酶液加。
1.8ml醋酸缓冲液，不加木聚糖溶液，同样依上述步骤，用空白调零点，于550nm下测OD值。
10.0计算活力单位:
半纤维素酶活力=(A×D×5×1000)÷60 u/g(ml)
A:OD值在标准曲线上对应的葡萄糖量(mg)
D:酶粉(液)稀释倍数。