多聚赖氨酸包被方法
多聚赖氨酸处理
配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
我曾用过多聚赖氨酸包被培养瓶,但浓度是0.1mg/ml,我都是放一夜,第二天吸掉晾干就用,当然要紫外消一下.我觉得时间长点没什么大碍。
我们这里的老师说，多聚赖氨酸不能用紫外线照射。
1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时，应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为15-30万) ；2.感觉你“浓度为50ng/1ml”有些低，我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到20－30ug/ml；3.包被时间一般为6－7h，或者过夜也可；4.使用时应该先用灭菌水洗三次＋PBS（起平衡盐作用）洗一次，洗液的量应该大于包被液的量；5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间，太长了会有影响吗？”，我包被时间最长的经历有过48h,最后只是多聚赖氨酸随着时间延长蒸发一些而量变少了，但是对细胞生长并无大碍，这是我曾经有过的经历，所以我会负责地告诉你；6.“多聚赖氨酸能在4度冰箱里放多久？”，最好置于－20度保存，放置数月乃至半年都可以。
多聚赖氨酸包被方法
多聚赖氨酸包被方法物理包被利用多聚赖氨酸的聚电解质特性，通过静电作用将其包裹在目标物表面。
这种包被方法具有简单、无毒、环境友好等优势。
常用的物理包被方法包括静电吸附、沉淀共沉淀和纳米胶团包被。
静电吸附法是一种简单有效的物理包被方法，多聚赖氨酸与目标物质通过静电相互作用结合。
多聚赖氨酸具有正电荷，可以与带负电位的目标物质静电吸附。
例如，将多聚赖氨酸与负电荷的纳米颗粒混合搅拌，多聚赖氨酸通过静电吸附形成包被层，使纳米颗粒表面带正电荷。
沉淀共沉淀法是一种多聚赖氨酸包被的物理方法，基于多聚赖氨酸的凝胶形成能力。
多聚赖氨酸在适当条件下可以与其他蛋白质形成复合凝胶，从而包被目标物质。
该方法主要通过改变多聚赖氨酸的溶液条件来实现，如调节pH值、离子强度和温度等。
纳米胶团包被法是利用多聚赖氨酸形成纳米胶团，从而实现目标物质的包被。
当多聚赖氨酸在适当条件下形成胶团时，目标物质会被包裹在胶团内部。
这种包被方法可以使目标物质在多聚赖氨酸胶团内部得到保护，并增强其稳定性。
化学包被是一种通过化学反应将多聚赖氨酸与目标物质共价结合的方法。
这种包被方法具有较高的稳定性和持久性。
常用的化学包被方法包括胺基化和交联反应。
胺基化是一种将多聚赖氨酸表面的羧基转化为胺基的化学反应。
通过胺基化反应，多聚赖氨酸表面的胺基可以与目标物质表面的羧基或酸酐结合。
这种包被方法可以增加多聚赖氨酸与目标物质的接触面积，从而提高包被效果。
交联反应是一种将多聚赖氨酸与目标物质共价交联的化学反应。
通过交联反应，可以将多聚赖氨酸与目标物质牢固结合，从而实现包被效果。
常用的交联反应包括胺基化交联反应、醛胺交联反应等。
总的来说，多聚赖氨酸包被方法在药物和食品工业中具有广泛的应用前景。
无论是物理包被还是化学包被，都可以通过适当的方法来实现多聚赖氨酸与目标物质的结合。
这种包被方法不仅可以提高目标物质的稳定性和生物活性，还可以改善其溶解性和缓释性，从而提高其应用性能。
多聚赖氨酸包被方法
多聚赖氨酸包被方法多聚赖氨酸（polylysine）是一种具有多种应用潜力的天然生物高分子材料。
其在医学、食品及其他领域中有着广泛的应用前景。
然而，多聚赖氨酸的应用受到其在水溶液中聚集和沉淀的限制。
为了克服这一问题，研究人员开发了多种多聚赖氨酸包被方法，用以稳定多聚赖氨酸的分散态，提高其应用效果。
一、电化学沉积法电化学沉积法是一种常用的多聚赖氨酸包被方法，在这种方法中，通过在多聚赖氨酸溶液中施加电压，利用电化学反应将多聚赖氨酸沉积到基体表面。
这种方法具有简单、可控性高的优点，可以调控包被层的厚度和组成，从而实现不同应用需求。
二、化学交联法化学交联法是另一种常见的多聚赖氨酸包被方法。
在这种方法中，利用化学反应将多聚赖氨酸交联到基体表面，形成稳定的包被层。
常用的交联剂包括戊二醛、硫酸氯化钠等。
化学交联法可以使多聚赖氨酸形成致密的包被层，提高其稳定性和抗溶解性，适用于一些需要长时间稳定性的应用。
三、共沉淀法共沉淀法是一种将多聚赖氨酸与其他物质一起沉淀到基体表面的方法。
通过调节多聚赖氨酸和其他物质的配比和沉淀条件，可以实现多聚赖氨酸的包被。
这种方法适用于多聚赖氨酸与其他物质共同发挥应用功能的场景，如药物缓释系统、生物传感器等。
四、物理吸附法物理吸附法是一种简单而有效的多聚赖氨酸包被方法。
将多聚赖氨酸溶液滴在基体表面，使其通过物理相互作用（如静电相互作用）与基体表面相互吸附，形成包被层。
这种方法不需要特殊实验条件，成本低廉，适用于一些对包被层要求不高的应用。
综上所述，多聚赖氨酸包被方法的选择应根据实际应用需求和条件来确定。
不同的包被方法具有各自的特点和适用范围，在多聚赖氨酸的应用中起着重要的作用。
未来随着科技的不断进步和对多聚赖氨酸功能的深入研究，相信会有更多创新的包被方法出现，进一步拓宽多聚赖氨酸的应用领域。
包被细胞培养板的相关问题---精品资料
培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。
不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。
(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：）答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll 。
以PBS配成1mg/ml的母液，－20度保存。
包被
聚赖氨酸包被载玻片改良法时间:2011-09-01 17:34来源:生物吧作者:刘浩点击:324 次原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。
这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。
这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确处理。
经典的载玻片处理技术用加有洗涤剂的水清洗载玻片数分钟后,再于水中浸泡30 min。
配制足量的500μg/ ml 多聚-L-赖氨酸水溶液,逐一浸载玻片。
经空气干燥后,贮于4℃, 1 周内使用。
在实践中我们发现,该方法操作不当,易导致试验脱片现象。
为确保各项重大试验质量,我们对经典方法进行改良,并取得很好的效果。
1. 清洗载玻片:(1) 用加有玻璃清洁剂的水,浸泡新的载玻片24 h。
(2) 清水冲洗载玻片后,用清水浸泡载玻片24 h。
(3) 用蒸馏水浸洗5 次,再用蒸馏水浸泡载玻片过夜。
(4) 次日用蒸馏水冲洗载玻片,晾干,装盒备用。
2. 包被载玻片:(1) 根据切片组织大小,决定包被载玻片的位置及面积大小。
(2) 用移液器吸取0. 1 % 多聚-L-赖氨酸作者单位:200092 上海第二医科大学新华医院上海儿科研究所10μl 置于载玻片预定位置,用枪头涂匀预定面积。
对多张载玻片逐一进行涂片。
(3) 肉眼观察载玻片预定面积内多聚-L-赖氨酸分布是否均匀,有皱缩的玻片予以剔除。
(4) 将载玻片平放,自然干燥,逐一做好标记。
(5) 将包被载玻片置标本盒内,贮于4 ℃备用。
(6) 根据切片数量多少,当天制备包被载玻片,当天使用。
改良后的载玻片处理技术,不仅可在包被前提供清洁好的载玻片,有利于一次包被成功,而且载玻片在包被前经过预定位置逐一精细涂片,并用肉眼观察和剔除皱缩玻片,从而确保了载玻片包被的质量。
多聚赖氨酸包被步骤
多聚赖氨酸包被步骤
多聚赖氨酸（PLA）是一种生物可降解材料，可用于包被（coating）应用。
下面是多聚赖氨酸包被的步骤：
1. 准备多聚赖氨酸（PLA）材料：将多聚赖氨酸溶解在适当的溶剂中，使其成为可涂覆的液体。
2. 准备基质表面：将需要包被的基质表面进行预处理，如清洁、去除表面污物和优化表面性质。
3. 涂覆多聚赖氨酸：使用适当的涂覆技术（如喷涂、旋涂、刷涂或浸涂等），将多聚赖氨酸溶液均匀涂覆在基质表面上，形成一层薄膜。
4. 干燥和固化：将涂覆的基质表面在适当的条件下进行干燥和固化，使多聚赖氨酸薄膜固化成为稳定的包被层。
5. 优化和表征：对包被层进行优化处理，如调节其厚度、表面形貌和性质等，并对包被层进行相应的表征和测试，以确保其性能和稳定性。
需要注意的是，多聚赖氨酸包被的具体步骤可能因应用需求和使用的材料而略有不同，上述步骤仅为一般参考。
在实际操作中，还需要根据具体情况进行调整和优化，以达到最佳的包被效果。
多聚赖氨酸促进细胞贴壁步骤
多聚赖氨酸促进细胞贴壁步骤多聚赖氨酸，听起来是不是有点高大上？其实它就是一种小小的分子，可是这个小家伙在细胞贴壁这件事情上可谓是如鱼得水，简直是个小能手。
想象一下，细胞就像是一群小伙伴，它们在一片广阔的空间里自由游荡，就像我们在沙滩上奔跑，突然有一天，这些小伙伴们要找个地方定居，搭个窝。
多聚赖氨酸就像是那种热情好客的邻居，给小伙伴们提供了一个超级好的栖息地。
先说说细胞贴壁，细胞在培养皿里游来游去，就像小鱼在水里游，但有时候它们也需要一个地方安家，这就需要细胞贴壁。
没错，细胞也有自己的小心思，想要在一个舒适的环境中生存。
多聚赖氨酸就像是那个热情的室内设计师，专门为细胞们打造理想的生活空间。
它能和细胞表面的受体产生很好的互动，帮助细胞稳稳地粘在培养基上，哇，真是太给力了！你知道吗，多聚赖氨酸的结构就像一个长长的链子，简直是个万里长征的先锋。
它的链子上挂满了小小的赖氨酸分子，这些小分子就像小小的钩子，能够牢牢抓住细胞的表面，让它们不再漂泊。
想象一下，一个小伙伴手里拿着钩子，随便一钩就把另一位小伙伴拉过来了，这感觉就像是在聚会上，大家互相拉着，嘻嘻哈哈地凑到一起。
使用多聚赖氨酸的过程其实很简单，首先要把它溶解在合适的溶液里，这就像给我们的朋友们准备一杯好喝的饮料，确保每一滴都能吸引到小伙伴。
然后，把这个溶液均匀地涂抹在培养皿上，嘿，就像是在给沙滩铺上细腻的沙子，之后，静静地等待，细胞们就会陆续到来，纷纷扎根。
等它们一到，那场面就像热闹的市场，大家争先恐后地找位置，争取在这个理想的环境中安居乐业。
细胞一旦贴壁，就开始了自己的生活，就像是我们在新家里装修，细胞们也开始分泌各种有用的物质，像是营养品和生长因子，为自己的新家增添活力。
这时候，你会发现，细胞们变得越来越开心，就像小猫在阳光下打盹，舒服得不行。
多聚赖氨酸不仅让细胞们找到了栖息地，还让它们在这个新家中茁壮成长，简直是一举两得。
这其中也有一些小挑战。
细胞贴壁后，有时候它们会面临一些竞争，其他的细胞也想来蹭热闹，这就像邻居们一起聚餐，谁的拿手菜更好，谁就更受欢迎。
如何使用多聚赖氨酸包被激光共聚焦小皿(conforcol)
Prepare polylysine-coated coverslidsMaterials:Poly-l-lysine hydrobromide(P-1524), 100mg dissolved in 10ml h2o, •Incubate cover glasses in 100% ethanol for overnight.•Wash cover glasses for 30 min in running tap water.•Rinse with dH20.•Incubate cover gl asses in 40 µg/ml poly-L-lysine (MW ~70-90kD，made by 0.1M PB,Ph7.2) for 1 hour at room temperature.•Wash cover glasses for 1 hour in running tap water.•Rinse cover glasses 3 times 5 min each in dH2O.•Dry cover glasses on filter paper in a dust-free area.•Sterilize cover glasses inside the laminar flow chamber under UV light for at least 4 hours.处理好玻片之后，将玻片放入培养皿中，接种细胞，密度为10000个/ml，培养三天。
rocedure:1.After treatment, cells were fixed for 10min in 4% Para formaldehyde；2.After fixation, cells were washed three times in TBST (TBS plus 0.05%Tween-20)(10min/each);3.then blocked in 5% nonfat dried milk (NFDM in TBST) for 60 min;4.To detect the interest proteins, the cells were incubated with themonoclonal antibody(1:100) or polyclone antibody(1:500) in TBST plus 5% NFDM for 90 min;5.After three washes in TBST(10min/each at 60RPM), the cells wereincubated with dye-conjugated secondary antibody (Molecular Probes, Inc) diluted 1:400 in 5% NFDM for 60min6.After three washes in D-PBST the cells were pretreated with RNAseA for20min, followed by PI staining for 15min,then three washes in PBS.7.Cells then were mounted in glycerol PBS buffer(50% glycerol plus50%D-PBS)8.Cells were examined on microscope (Carl Zeiss,Inc., Thornwood, NY)equipped with fluorescence using an oil immersion63× objective lens.Images were captured using a Sony color video camera (Park Ridge, NJ)。
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Poly-lysine-coated tissue culture surfaces
1. To coat coverslips:
Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 100-μl aliquots at -20°C.
When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution.
Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating.
Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator.
Allow surface to dry.
2. To coat culture dishes: 多聚赖氨酸包被培养皿/板
Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm fil ter. 配制1mg/ml储存液
Store in 5-ml aliquots at -20°C.
分装保存在-20度
When ready to use, dilute 1 part stock solution with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working solution.
使用前按1：10稀释成100μg/ml工作浓度。
用5-10ml一次性无菌注射器和0.22μm 滤器过滤除菌，备用。
Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry.
加入培养皿或培养板中，使能完全覆盖皿底即可，37度培养箱放置1小时或置超净台内室温过夜。
然后吸取液体，使表面晾干。
Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C.
可以立即使用也可保存在4度3个月备用。
Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C.
加入细胞前用1XPBS 洗三遍，然后加入细胞和培养液。