生物化学实验方法手册
生物化学实验指导
二、结果及讨论
【参考范围】 1、波长的检测：在 529nm ± 1nm 处有最大吸收值为合格。 2、杂光的检测：T% ≤ 5%为合格。 3、比色皿配套：Tmax % – Tmin% ≤ 0. 5% 为合格比色皿配套。 【注意事项】 1、722 型分光光度计的使用方法：选定检测波长，置调节模式为透光率 T，将某一盛装参比介质 的空白比色皿置于光路，打开遮光板，调 0%T，盖上遮光板调 100%T，再将盛装待测液体的比色皿置 于光路，测出 T 值，或置调节模式为吸光度 A，即可测出 A 值。注意每次测定均需重新调 0%T、100%T。 2、在杂光检测中，用于调 0%T 的黑纸片应完好无孔洞，否则会导致假合格现象。 3、使用比色皿时，其盛装液体不能超过总体积的 2/3，也不宜少于 1/2，且在检测前必须用擦镜纸 将比色皿外的液体擦拭干净。
糖标准溶液管：第 2、3 号管。注意稀释后要混匀。
2 号管
3 号管
110mmol/L 葡萄糖液（μl）
100
50
D.W.（μl）
50
50
葡萄糖液浓度（mmol/L）
பைடு நூலகம்
73.33
55
2、再将第 2、3 号管分别取 50μl，加 D.W.50μl 依次作等倍稀释（各 4 管），得到 8 种较低浓度的
葡萄糖标准溶液，稀释方法见下图：
实验一 分光光度计性能检测
【实验目的】 1、掌握分光光度计的性能检测，包括波长检测、杂光检测以及比色皿配对。 2、掌握分光光度计的使用方法。 【实验原理】 1、波长检测：⑴可见光区域的黄光波段比较狭窄，适用于光度计波长的粗测；⑵镨钕滤光片在
5-生物化学实验指导书
生物化学实验指导书生物化学教研室2011、2、1目录实验须知实验内容实验一蛋白质的两性电离和等电点的测定实验二血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳实验三血清总蛋白测定（双缩脲法、Folin—酚法）实验四 PH与温度对酶活性的影响实验五激活剂和抑制剂对酶活性的影响实验六酶的特异性实验七琥珀酸脱氢酶活性的抑制实验八分光光度计的使用实验九血糖的测定（葡萄糖氧化酶法）实验十肝中酮体生成作用实验十一血清胆固醇测定（酶法）实验十二 ALT的测定实验十三血红蛋白与核黄素的凝胶柱色谱分离实验十四肝组织核酸的提取、分离和鉴定实验十五血清尿素氮的测定实验十六血清胆红素测定实验十七：总糖的测定---蒽酮比色法实验十八：饥饿与饱食对肝糖元含量的影响实验十九：乳酸脱氢酶活力测定生物化学实验须知一、实验目的1．培养学生科学的思维方法和学习作风，独立工作能力。
2．学习基础生物化学实验方法，为今后的学习与研究准备更好的条件。
3．培养学生爱护国家财物、爱护集体、团结互助的优良道德品质。
4．培养学生的书面及口头表达能力。
二、实验的总要求1．按教研室予先公布的实验进度表，了解各次实验的具体内容，并认真做好预习。
弄清各步骤的意义，避免教条或机械式做实验。
未预习者不得进实验室。
2．进行实验不仅要求结果良好，而且要求敏捷高效。
一切步骤都按正规操作方法进行；样品与试剂勿过量取用；注意力集中，避免差错。
3．实验中观察要仔细，记录要详尽、及时与客观。
无论实验成功与失败，都应直接记录在实验报告本中，不得于实验后追记。
对于失败的实验，要分析其原因。
4．实验室是集体学习与工作的场所，实验时应保持肃静，不得大声喧哗，以免影响他人的工作与思考。
5．注意保持实验室内的整洁。
实验用器具、试剂等应排列整齐有序。
实验时切勿将试剂、标本溅洒于实验台面、地面及衣物上，如果有溅出应及时处理。
实验后应清洗用过的仪器及清理自己的实验场所。
实验所用的器材、设备不得随意乱动。
实验室内的一切器材物品严禁携出。
生物化学实验操作指南
生物化学实验操作指南一、实验前的准备工作在进行生物化学实验之前，我们需要做一些准备工作，以确保实验的顺利进行。
首先，我们需要检查实验室的安全设施是否完备，如灭火器、安全眼镜、实验台等。
其次，我们需要准备实验所需的试剂和设备，包括试管、移液器、天平等。
同时，我们还需要检查这些试剂和设备的质量和完整性，以免对实验结果产生干扰。
最后，我们需要阅读实验操作指南，了解实验的目的、步骤和注意事项。
二、实验步骤1. 实验前的样品处理在进行生物化学实验之前，我们通常需要对样品进行处理。
例如，如果我们要提取蛋白质，我们需要将样品细胞破碎，并使用离心机将细胞碎片和细胞核分离。
如果我们要提取核酸，我们需要使用酶来消化细胞壁，并使用离心机将细胞碎片和细胞核分离。
2. 试剂的配制与标定在进行生物化学实验中，我们通常需要配制一些试剂。
例如，我们可以配制缓冲液、酶液等。
在配制试剂之前，我们需要准确称取所需的化学品，并按照实验操作指南中的比例配制。
同时，我们还需要标定试剂的浓度，以确保实验结果的准确性。
3. 实验操作在进行生物化学实验时，我们需要按照实验操作指南中的步骤进行操作。
例如，如果我们要进行酶活性测定实验，我们首先需要将样品和试剂加入试管中，然后在适当的温度和pH下进行反应。
在反应过程中，我们需要定时取样，并使用分光光度计等设备测定反应的吸光度。
最后，我们需要根据实验数据计算出酶的活性。
4. 数据处理与分析在完成实验后，我们需要对实验数据进行处理和分析。
例如，我们可以使用统计学方法对数据进行统计分析，并绘制图表来展示实验结果。
同时，我们还可以使用生物信息学工具对实验数据进行进一步的分析，如序列比对、结构预测等。
三、实验注意事项在进行生物化学实验时，我们需要注意以下几点：1. 实验操作要规范，遵守实验室的安全操作规程，如佩戴实验服和手套，避免接触有害物质等。
2. 试剂的使用要准确，按照实验操作指南中的比例使用，避免使用过量或不足。
生物化学试验指导书
生物化学实验指导适用专业：农学、植物保护、园艺、农产品质量与安全、中草药栽培与鉴定目录生物化学实验室规则 (1)实验记录及实验报告 (2)实验一植物DNA的提取与测定 (3)实验二蛋白质的两性性质及等电点测定 (7)实验三温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 (9)实验四还原糖和总糖的测定—3,5-二硝基水杨酸比色法 (12)实验五糖的颜色反应和定性鉴定 (14)实验六双缩脲法测定蛋白质含量 (19)附录 (21)附录1 生物化学实验基本操作 (21)附录2 实验样品的制备 (25)附录3 常用试剂的配制 (26)附录4 市售常用酸、碱的浓度 (26)附录5 一般化学试剂的分级 (27)附录6 易变质及需特殊方法保存的试剂 (27)附录7 标准缓冲液的配制 (28)附录8 常用缓冲液的配制方法 (29)附录9 干燥剂 (36)附录10 硫酸铵饱和度的常用表 (37)附录11 离心机转数(r/min)与相对离心力(RCF)的换算 (38)生物化学实验室规则1．每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。
2．实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3．实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。
4．实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5．使用仪器、药品、试剂和各物品必须注意节约。
洗涤和使用仪器时，应小心仔细，防止损坏仪器。
使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障须立即报告教师，不得擅自动手检修。
6．实验室内严禁吸烟！加热用的电炉应随用随关，严格做到：人在炉火在，人走炉火关。
生物化学实验指南
实验一糖的呈色反应和定性鉴定目的要求(1) 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。
(2) 了解鉴定还原糖的方法及其原理。
Ⅰ. Molish反应——α-萘酚反应实验原理糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。
自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。
此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈颜色近似的阳性反应。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。
试剂Molish试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，分别加入各待测糖溶液1 mL，然后加两滴Molish试剂，摇匀。
倾斜试管，沿管壁小心加入约1mL浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。
用水代替糖溶液，重复一遍，观察结果。
Ⅱ. 蒽酮反应实验原理糖经浓酸作用后生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10-酮-9，10-二氢蒽）作用生成蓝绿色复合物。
试剂蒽酮试剂：取0.2g 蒽酮溶于100mL 浓硫酸中，当日配制。
待测糖溶液，同Molish试验。
操作方法取试管，编号，均加入1mL蒽酮溶液，再向各管滴加2 ~ 3滴待测糖溶液，充分混匀，观察各管颜色变化并记录。
Ⅲ. 酮糖的Seliwanoff反应实验原理该反应是鉴定酮糖的特殊反应。
酮糖在酸的作用下较醛糖更易生成羟甲基糠醛。
后者与间苯二酚作用生成鲜红色复合物，反应仅需20-30秒。
醛糖在浓度较高时或长时间煮沸，才产生微弱的阳性反应。
试剂Sediwanoff试剂：0.5g 间苯二酚溶于1升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前配制。
1%葡萄糖；1%蔗糖；1%果糖。
操作方法取试管，编号，各加入Sediwanoff试剂1mL，再依次分别加入待测糖溶液各4滴，混匀，同时放入沸水浴中，比较各管颜色的变化过程。
生物化学实验指导
生物化学实验指导生物化学实验是探索生命奥秘的重要手段，通过实验操作，我们能够更深入地理解生物体内的化学反应和物质代谢过程。
本实验指导将帮助您顺利完成生物化学实验，提高实验技能和科学素养。
一、实验前的准备（一）了解实验目的在进行每个实验之前，务必清楚地知道实验的目的是什么。
这将有助于您在实验过程中保持专注，并理解实验结果的意义。
（二）预习实验内容认真阅读实验教材和相关的参考资料，熟悉实验的原理、步骤和注意事项。
如果有不明白的地方，可以向老师或同学请教。
（三）准备实验用品根据实验要求，准备好所需的仪器、试剂和材料。
检查仪器是否完好，试剂是否过期，并确保材料的质量和数量符合实验要求。
二、实验安全（一）个人防护在实验过程中，要穿戴好实验服、手套和护目镜等防护用品，以保护自己免受化学试剂和生物样本的伤害。
了解所使用化学试剂的性质和危险特性，遵守化学品的储存、使用和处理规定。
避免直接接触有毒、有害和腐蚀性试剂，如果不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。
（三）生物安全对于涉及生物样本的实验，要遵循生物安全操作规范，防止感染和交叉污染。
在处理微生物、细胞和组织样本时，要在无菌条件下进行，并妥善处理废弃物。
（四）防火防爆实验室中严禁烟火，要熟悉灭火器和紧急喷淋装置的位置和使用方法。
对于易燃易爆的试剂和气体，要严格按照操作规程使用和储存。
三、常用仪器的使用（一）移液器移液器是定量移取液体的常用工具。
使用前要根据所需移液量选择合适的移液器和吸头，并进行校准。
移液时要保持垂直，缓慢按下和释放按钮，避免产生气泡。
（二）离心机离心机用于分离不同密度的物质。
使用前要平衡样品，选择合适的转速和离心时间。
离心结束后，要等离心机完全停止转动后再打开盖子，以免发生危险。
分光光度计用于测定溶液中物质的浓度。
使用前要进行仪器校准，选择合适的波长和比色皿。
测量时要确保比色皿清洁，溶液无气泡和杂质。
（四）pH 计pH 计用于测量溶液的酸碱度。
分子生物学实验B+实验手册（发给学生）
分子生物学实验B+实验手册（发给学生）生物化学与分子生物学实验B实验一植物总DNA的提取[实验目的]掌握CTAB法提取植物总DNA的基本原理和实验技术以及紫外检测鉴定DNA的纯度和浓度的方法。
[实验原理]CTAB法是提取植物总DNA的主要技术。
CTAB是十六烷基三甲基溴化铵的缩写，是一种非离子去污剂。
植物叶片经液氮研磨导致细胞壁破裂后，加入去污剂CTAB，可使核蛋白体解析，然后使蛋白和多糖杂质沉淀，DNA进入水相，再用酚、氯仿抽提纯化DNA。
CTAB与核酸形成复合物，在高盐（>0.7mM）浓度下可溶，但在低盐浓度（0.1-0.5mM NaCl）下沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。
核酸、蛋白质、多糖在特定的紫外波长都有特征吸收。
核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm。
纯的DNA样品A260/280≈1.8，并且1μg/ml DNA溶液A260= 0.020。
【器材与试剂】一、试剂1、2×CTAB提取液CTAB（粉）2%Tris-HCl (pH8.0) 100mMEDTA (pH 8.0) 20mMNaCl 1.4M2、氯仿-异戊醇混合液氯仿：异戊醇24：13、TE缓冲液Tris-HCl (pH8.0) 10mMEDTA (pH 8.0) 1mM二、仪器电子分析天平、电热恒温水浴锅、高速冷冻离心机、冰箱、紫外分光光度计、研钵、液氮、50ml离心管1个、玻璃棒1支、陶瓷研钵和杵子1套、50mL烧杯1个、剪刀1把、滴管1支三、实验材料：植物叶片（幼嫩叶片为佳）、【基本步骤】1.称取2g新鲜的植物叶片，用蒸馏水冲洗叶面，吸水纸轻轻吸干水分；2.将叶片剪成1cm长，置研钵中，倒入液氮，尽快研磨成粉末；3.在液氮完成挥发之前，将粉末转入加有15mL预热（65℃）的CTAB提取缓冲液的50mL离心管中，65℃水浴保温30min，不时地轻轻摇动混匀，使其充分裂解；4.加入等体积的24：1的氯仿/异戊醇，盖上盖子，温和摇动，使成乳状液；5. 8000rpm离心15min；6.取出离心管（出现3层），小心地吸取上层清液转移到干净的50mL离心管中（根据需要，上清液可用氯仿/异戊醇反复提取多次，去除杂质）；7.沿离心管壁慢慢加入2倍体积预冷的无水乙醇（或2/3体积的异丙醇），可看到纤维状的沉淀（注：为使DNA沉淀完全，可将离心管放于－20℃冰箱中，静置30min以上）。
生物化学实验指导手册
实验一、考马斯亮蓝G-250法测定可溶性蛋白质含量【实验目的】学习、掌握考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理和方法。
【实验原理】考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合则呈现蓝色。
染料的最大吸收从465nm变为595nm，蛋白质－染料复合物在595nm具有很大的光吸收值，蛋白质测定的灵敏度较高，最低检出量为1ug蛋白质。
本方法操作简便快捷，灵敏度高，测定范围1-1000ug。
【实验材料、仪器及试剂】1．材料：新鲜的植物材料2．仪器：722分光光度计，天平，离心机，研钵，容量瓶，试管，移液管，漏斗（1）标准牛血清蛋白质溶液：0.1mg/ml（2）考马斯亮蓝G-250溶液：【实验步骤】1．样品的提取：准确称取鲜样2克，用2ml蒸馏水在冰浴中研成匀浆，转移到25ml容量瓶中并定容。
在8000rpm冷冻离心10min，取上清液待测。
2．标准曲线的绘制：取8支具塞试管，按表1加入试剂。
将上面8支试管摇匀，放置5分钟后，用1cm光径比色杯在595nm下比色，记录吸光值，以蛋白质浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
根据样品吸光值在标准曲线查得蛋白质含量。
【结果计算】C × V T样品中蛋白质含量（ug/g.FW）＝V S×W F×1000式中：C为查标准曲线值（ug）；V T为提取液总体积（ml）；V S 为测定时加样量（ml）；W F为样品鲜重（g）。
实验二植物组织中游离氨基酸总量的测定【实验目的】学习掌握鲜材料中游离氨基酸含量测定的原理和方法。
【实验原理】当氨基酸与水合茚三酮共热时，能定量地生成酮茚胺。
该产物显示蓝紫色，称为Ruhemans紫。
其最大吸收值在570nm ，并在一定范围内与氨基酸含量成正比。
氨基酸与茚三酮的反应分为两步进行，第一步：氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步：所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和氨缩合生成Ruhemans紫。
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生物化学实验方法手册
Markus R Wenk National University of
Singapore, Singapore
Aaron Zefrin Fernandis National
University of Singapore, Singapore
A Manual For Biochemistry
Protocols
2007,127pp.
Paperback
ISBN 978-981-270-066-7
Markus R Wenk等编
该书是生物医学研究手册丛书的第三卷，其前两卷分别是《初级哺乳动物细胞培养手册》和《生物医学研究中的显微镜技术》，后续还将推出《生物材料及骨架编织技术手册》和《知识产权管理手册》，这五卷均由世界科学出版社出版。
本手册共分为6章，各章内容分别是：1.蛋白纯化；2.蛋白分析；3.脂肪分析；4.哺乳动物细胞培养；5.显微镜学；
6.分析与鉴定。
作者希望这本手册不仅仅是将各种生物化学实验方法的简单罗列，更希望读者能够通过这本手册掌握生
物化学实验技巧进而理解这些方法背后的原理。
这本手册将给广大读者带来一个全景式的生物化学，尤其对于那些初次踏入生物化学领域的读者，选择这本手册会是一个不错的开始。
这本手册的编者都是科研一线人员，所编著的方法实用且前沿，并且详尽地介绍了生物化学中可能会使用的实验方法。
本手册适合从事生物化学、分子生物学的相关人员，在实验中它是一本不错的参考工具。
程恩隽，博士生
(国家纳米科学中心）
Chengenjun, DoctoralCandidate
(National Center for Nanoscience and Nanotechnology ,China)。