生物化学实验
生物化学实验原理和方法

生物化学实验原理和方法
生物化学实验是研究生物体内化学反应的实验方法,主要用于研究生物体内分子结构、代谢途径、蛋白质结构和功能等方面的问题。
生物化学实验的基本原理是利用生物体内的生物分子(如蛋白质、核酸、酶等)进行化学反应或与其他物质相互作用,从而检测、分离或定量这些分子。
生物化学实验主要包括以下几个方面的原则和方法:
1. 分离与纯化:将某一特定生物分子从其他组分中分离出来,获得纯净的样品。
常用方法包括离心、电泳、柱层析、过滤等。
2. 分析与测定:对生物分子的含量、结构和性质进行定量或定性的研究。
常用方法包括分光光度法、荧光法、比色法、拉曼光谱等。
3. 酶反应:酶是生物体内催化生物化学反应的一类蛋白质,其活性与底物浓度、温度、pH值等因素有关。
通过测定底物转化率来研究酶的活性。
常见的酶反应方法有酶解反应、酶促进反应等。
4. 蛋白质分析:蛋白质是生物体内最为重要的分子之一,可以通过电泳、质谱、Western blot等方法进行分析,从而了解蛋白质的结构、含量和功能。
5. 核酸分析:核酸是生物体内遗传信息的主要载体,可以通过PCR、凝胶电泳、
Southern blot等方法进行分析,用于检测基因的突变、限制性片段长度多态性等。
以上是一些常用的生物化学实验原理和方法,实际的生物化学实验会根据具体的研究目的和问题而选择适合的方法和技术。
生物化学课内实践教学(3篇)

第1篇一、前言生物化学作为一门研究生物体内化学反应及其调控规律的学科,在生命科学领域具有极其重要的地位。
为了让学生更好地理解和掌握生物化学的理论知识,提高学生的实验技能和科学素养,我们开展了生物化学课内实践教学活动。
本文将对本次实践教学进行总结和分析。
二、实践内容1. 蛋白质鉴定实验(1)实验目的:掌握蛋白质的鉴定方法,了解蛋白质在生物体内的作用。
(2)实验原理:蛋白质具有特定的氨基酸序列,通过特定的化学反应,可以产生具有特定颜色的化合物,从而实现对蛋白质的鉴定。
(3)实验步骤:①制备蛋白质样品;②加入双缩脲试剂,观察颜色变化;③加入Folin-酚试剂,观察颜色变化;④计算蛋白质含量。
2. 酶活性测定实验(1)实验目的:掌握酶活性测定的方法,了解酶在生物体内的作用。
(2)实验原理:酶活性是指酶催化特定反应的能力,通过测定酶催化反应的速度,可以评估酶的活性。
(3)实验步骤:①制备酶反应体系;②测定酶催化反应的速度;③计算酶活性。
3. 核酸提取实验(1)实验目的:掌握核酸提取的方法,了解核酸在生物体内的作用。
(2)实验原理:核酸是生物体内的重要遗传物质,通过特定的方法可以将核酸从细胞中提取出来。
(3)实验步骤:①破碎细胞;②提取核酸;③检测核酸。
4. 脂质分离实验(1)实验目的:掌握脂质分离的方法,了解脂质在生物体内的作用。
(2)实验原理:脂质具有不同的极性,可以通过特定的方法将其分离。
(3)实验步骤:①制备脂质样品;②加入氯仿,观察分层现象;③分离脂质。
三、实践总结1. 通过本次实践教学,我们掌握了蛋白质、酶、核酸和脂质的鉴定、提取和分离方法,提高了我们的实验技能。
2. 在实验过程中,我们学会了如何设计实验方案、操作实验仪器和记录实验数据,为今后的科研工作打下了基础。
3. 通过实验,我们深入了解了生物体内化学反应及其调控规律,增强了我们对生物化学理论知识的理解。
四、实践反思1. 实验过程中,我们发现部分同学对实验原理掌握不牢固,导致实验结果不准确。
生物化学实验报告

生物化学实验报告实验目的,通过本次实验,掌握生物化学实验的基本方法和技能,了解生物化学实验的原理和应用,提高实验操作能力和实验结果分析能力。
实验原理,生物化学实验是利用生物化学原理和方法,对生物体内的化学成分和代谢过程进行研究的实验。
其中包括蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子的分离、鉴定和定量分析。
实验材料和仪器,本次实验所需材料包括,蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子样品;试剂,酚酞、硫酸、氢氧化钠、蛋白质定性试剂、酶定性试剂等;仪器,分光光度计、离心机、电泳仪、显微镜等。
实验步骤:1. 蛋白质的定性实验,取少量蛋白质样品,加入蛋白质定性试剂,观察颜色变化并记录结果。
2. 核酸的定性实验,取少量核酸样品,加入核酸定性试剂,观察颜色变化并记录结果。
3. 酶的定性实验,取少量酶样品,加入酶定性试剂,观察反应情况并记录结果。
4. 碳水化合物的定性实验,取少量碳水化合物样品,加入酚酞试剂,观察颜色变化并记录结果。
5. 生物分子的定量分析,利用分光光度计、离心机、电泳仪等仪器,对生物分子进行定量分析。
实验结果分析,根据实验结果,可以对样品中的蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子进行鉴定和定量分析,从而了解生物体内的化学成分和代谢过程。
实验结论,通过本次实验,掌握了生物化学实验的基本方法和技能,了解了生物分子的定性和定量分析方法,提高了实验操作能力和实验结果分析能力。
实验意义,生物化学实验是生物化学理论与实践相结合的重要环节,通过实验可以加深对生物化学原理和方法的理解,为今后的科研工作和实验教学提供了重要的基础。
在本次实验中,我们不仅学会了生物分子的定性和定量分析方法,还培养了实验操作能力和实验结果分析能力,为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
通过本次实验,我们对生物化学实验的原理和应用有了更深入的了解,提高了实验操作能力和实验结果分析能力,为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
生物化学实验报告

生物化学实验报告生物化学是一门研究生命体系中化学成分和物质转换过程的科学,其实验研究对于揭示生命的本质、改善人类生命质量具有重要意义。
本文将以实验报告的形式,介绍一次生物化学实验的设计、过程和结果。
一、实验目的本次实验的目的旨在从多个方面探究某种生物化学物质的结构、性质及功能,以及探索该物质在生命体系中的作用。
具体的实验目标包括:1. 通过化学方法及相关仪器对该化合物的分子结构进行分析和测定;2. 对该化合物的氧化还原性进行测定,并探究其可能的氧化还原反应机制;3. 通过光谱分析、酶活性测定等方法,确定该化合物在生命体系中的作用及其机制;4. 总结实验结果,探讨该化合物在生物化学领域中的应用及前景。
二、实验步骤本次实验主要包括以下步骤:1. 提取目标化合物。
选用某一生物体组织作为原料,在适当的化学反应条件下,经过酶促反应、液液抽提、柱层析等步骤,旨在获得目标化合物的高纯度样品。
2. 分析结构。
使用核磁共振(NMR)、高效液相色谱(HPLC)、紫外可见光谱(UV-vis)等现代科学仪器和技术,对提取的化合物进行结构分析和测定,以揭示化合物分子结构,及其性质和可能的反应机制。
3. 氧化还原性测定。
利用常用的氧化还原滴定法,对化合物的氧化还原性进行测定,及探究其可能的氧化还原反应机制。
4. 酶活性测定。
通过对该化合物活性酶的特定底物的催化反应,测定其反应速率及相关动力学参数,以推测该化合物在生命体系中的作用方式及机制。
5. 总结实验结果。
根据所测得的实验数据和分析结果,对该化合物的结构、性质及功能进行总结,即探讨其在生物化学领域中的应用及未来前景。
三、实验结果及分析根据实验数据和分析结果,我们可以得出以下结论:1. 通过化学反应及柱层析等步骤,我们从生物体组织中获得了目标化合物,并通过核磁共振(NMR)等技术分析,揭示了化合物的结构;2. 通过常用的氧化还原滴定法,我们测定了化合物的氧化还原性,并推测了其可能的氧化还原反应机制;3. 通过酶活性测定等方法,我们推测了该化合物在生命体系中的作用机制及性质,具体表现为一定的生物活性及催化能力;4. 综合以上实验结果,我们总结了该化合物在生物化学领域中的应用前景,并探讨了可能的发展方向及挑战。
生物化学实验(整理版)

生物化学实验(整理版)一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能,提高实验技能。
3. 培养科学探究能力,提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作:了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项:严格按照实验步骤进行操作,注意实验安全,保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式:包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
2. 实验报告的要求:内容完整、条理清晰、数据准确、分析深入、讨论充分、结论明确。
五、实验拓展1. 结合实验内容,查阅相关文献,了解生物化学领域的最新研究进展。
2. 尝试设计新的实验方案,对生物化学现象进行深入探究。
3. 参加学术讲座、研讨会等活动,拓宽生物化学知识面。
生物化学实验(整理版)一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能,提高实验技能。
3. 培养科学探究能力,提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作:了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项:严格按照实验步骤进行操作,注意实验安全,保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式:包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
生物化学的实验技术有哪些

生物化学的实验技术有哪些生物化学是一门研究生物体化学组成和生命过程中化学变化的学科,实验技术在生物化学的研究中起着至关重要的作用。
以下为您介绍一些常见的生物化学实验技术。
一、分光光度法分光光度法是一种基于物质对光的吸收特性来定量分析物质浓度的方法。
在生物化学中,常用于测定蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度。
例如,通过测量蛋白质在 280nm 处的吸光度,可以估算蛋白质的浓度。
分光光度法操作简便、快速,且灵敏度较高。
二、电泳技术电泳是指带电粒子在电场中向与其所带电荷相反的电极移动的现象。
在生物化学中,常用的电泳技术有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
琼脂糖凝胶电泳常用于分离和分析 DNA 片段,根据 DNA 片段的大小不同,在凝胶中移动的速度不同,从而实现分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳则常用于分离蛋白质,能够分辨分子量差异较小的蛋白质。
三、层析技术层析技术是利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同,从而实现分离的方法。
常见的层析技术有凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
凝胶过滤层析根据分子大小进行分离,大分子先流出,小分子后流出。
离子交换层析基于分子所带电荷的不同来分离物质。
亲和层析则利用生物分子之间的特异性亲和力进行分离,具有很高的选择性。
四、离心技术离心是利用离心机旋转产生的离心力,使不同密度、大小的颗粒分离的技术。
在生物化学实验中,常用于分离细胞器、细胞组分、蛋白质复合物等。
差速离心通过逐渐提高离心速度,分步沉淀不同大小的颗粒。
密度梯度离心则是在离心管中形成密度梯度,使不同密度的颗粒在相应的密度区带中沉降,从而实现分离。
五、PCR 技术(聚合酶链式反应)PCR 技术是一种用于扩增特定 DNA 片段的分子生物学技术。
通过高温变性、低温退火和适温延伸的循环过程,使 DNA 片段呈指数级扩增。
PCR 技术在基因诊断、基因克隆、基因突变检测等方面有着广泛的应用。
六、酶联免疫吸附测定(ELISA)ELISA 是一种利用抗原抗体特异性结合进行检测的技术。
常见的生物化学实验方法

常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段,广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法,根据分子的化学性质和大小差异,将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱(GC)、液相色谱(LC)和薄层色谱(TLC)等。
在生物化学实验中,色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如,气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物,液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异,将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中,电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如,聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量,SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱(TOF-MS)和液相色谱质谱联用(LC-MS)等。
在生物化学实验中,质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如,利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定,通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图,确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合,从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中,核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如,Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数,Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
大学生物化学实验报告

一、实验名称:蛋白质分子量测定——凝胶层析法二、实验目的:1. 了解凝胶层析法的基本原理和操作步骤。
2. 学习利用凝胶层析法测定蛋白质的分子量。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
三、实验原理:凝胶层析法是一种利用凝胶作为固定相,通过分子大小不同的物质在凝胶孔径中的移动速度差异来实现分离的方法。
在凝胶层析中,大分子物质不能进入凝胶内部的孔径,而小分子物质可以进入孔径,从而在洗脱过程中,大分子物质先流出,小分子物质后流出。
通过测量不同分子量蛋白质的洗脱体积,可以计算出其分子量。
四、实验材料与试剂:1. 凝胶层析柱(直径1.5cm,长30cm)2. 凝胶(聚丙烯酰胺凝胶)3. 蛋白质样品(已知分子量)4. 标准样品(已知分子量)5. 洗脱液(Tris-HCl缓冲液)6. 显色剂(考马斯亮蓝G-250)7. 移液器8. 旋转混匀器9. 分光光度计五、实验步骤:1. 准备凝胶层析柱:将凝胶倒入层析柱中,用洗脱液充分浸泡凝胶,直至凝胶膨胀并固定在层析柱中。
2. 准备样品:将蛋白质样品和标准样品分别稀释至适当浓度。
3. 加样:将蛋白质样品和标准样品分别加入凝胶层析柱中,用洗脱液洗脱,收集不同洗脱体积的洗脱液。
4. 显色:将收集到的洗脱液加入考马斯亮蓝G-250显色剂,室温下显色10分钟。
5. 测量:用分光光度计测定显色液在595nm处的吸光度值。
6. 数据处理:以标准样品的分子量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。
根据蛋白质样品的吸光度值,从标准曲线上查得蛋白质的分子量。
六、实验结果:(此处插入实验数据表格,包括标准样品和蛋白质样品的分子量、洗脱体积、吸光度值等)七、实验分析:通过凝胶层析法,成功分离了蛋白质样品,并测定了其分子量。
实验结果表明,蛋白质样品的分子量与标准样品的分子量相符,说明实验操作正确。
八、讨论与心得:1. 凝胶层析法是一种简单、有效的蛋白质分离方法,可用于测定蛋白质的分子量。
2. 在实验过程中,要注意凝胶层析柱的制备、样品的加入和洗脱液的收集等操作步骤,以保证实验结果的准确性。
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生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一:糖的颜色反应实验1.1 莫氏实验一、目的掌握莫氏(molisch)实验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸(浓硫酸、浓盐酸)脱水产生糠醛或糠醛衍生物,后者在浓无机酸作用下,能与α-萘酚生成紫红色缩合物,在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环,因此又称“紫环反应”,其反应如下图:利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材1、棉花或滤纸。
2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。
3、试管1.5*15cm(*4)。
四、实验试剂1、莫氏试剂:称取α-萘酚5g,溶于95%乙醇并稀释至100ml。
此试剂需新鲜配置,并贮于棕色试剂瓶中。
2、1%蔗糖溶液:称取蔗糖1g,溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液:称取葡萄糖1g,溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液:讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物,然后缓缓倾入沸蒸馏水中,边加边搅。
最后以沸蒸馏水稀释至100ml。
五、操作于4支试管中,分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少1,摇匀,讲试管2滴1ml水中)。
然后各加莫氏试剂许纤维素(棉花或滤纸浸在倾斜,沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇!)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层,观察液面交界处有无紫色环出现。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后,应做好标记,浓硫酸加入的方式应保持一致。
2、莫氏反应非常灵敏,所用的试剂应洗净,不可再样品中混入纸屑等杂物。
3、当糖浓度过高时,由于浓硫酸对他的焦化作用,将呈现红色及褐色而不呈现紫色,需稀释后再做。
思考题:1、解释α-苯酚反应的原理。
2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些?试验1.2 塞氏试验一、目的掌握塞氏(Seliwanoff)实验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下,脱水生产5-羟甲基糠醛,后者与间苯二酚作用,呈2,以果红色反应,有时亦同时产生棕色沉淀,此沉淀溶于乙醇,呈鲜红色沉淀糖为例,其反应如下:三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。
2、试管1.5cm*15cm(*3)。
3、水浴锅。
四、实验试剂1、塞氏试剂:溶50mg间苯二酚于100ml盐酸中[V(HO):V(HCl)=2:1],临用2时配制。
2、1%果糖溶液:称取果糖1g,溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液:见实验1.1。
4、1%蔗糖溶液:见实验1.1。
五、操作于3支试管中分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%果糖溶液各0.5ml。
各加塞氏试剂2.5ml,摇匀。
同时至沸水浴内。
比较各管颜色变化及红色出现的先后次序。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后,应做好标记,并按顺序置于沸水锅内。
2、实验过程中,要仔细观察溶液颜色的变化情况。
思考题1、在塞氏实验中,反应产生的沉淀为何能够溶于乙醇溶液并产生鲜红色?2、蔗糖为何有塞氏反应?实验1.3 杜氏实验一、目的掌握杜氏(Tollen)实验鉴定戊糖的原理和方法。
二、原理戊糖在浓硫酸溶液中脱水生成糠醛,后者与间苯三酚结合成樱桃红色物质:本实验虽常用以鉴定戊糖,但并非戊糖的特有反应。
果糖、半乳糖和糠醛等都是呈阳性反应、戊糖反应最快,通常在45s内即产生樱桃红色沉淀。
三、实验器材1、吸管1.0ml(*3)2、试管1.5cm*15cm(*3)3、水浴锅四、实验试剂1、杜氏试剂:2%间苯三酚乙醇溶液(2g间苯三酚溶于100ml95%乙醇中)3ml,缓缓加入浓盐酸15ml及蒸馏水9ml即得,临时用配制。
2、1%阿拉伯糖溶液:称取阿拉伯糖1g,溶于蒸馏水并稀释至100ml。
3、1%葡萄糖溶液,见实验1.1。
4、1%半乳糖溶液:称取半乳糖1g,溶于蒸馏水并稀释至100ml。
五、操作于三支试管中加入杜氏试剂1ml,再分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%半乳糖阿拉伯糖溶液,摇匀。
将试管同时加入沸水浴中,观察颜色变化,并1%溶液和记录颜色变化的时间。
六.注意事项1、试管中加入各种糖后,应做好标记,并按顺序置于沸水浴锅中。
2、实验过程中,要仔细观察溶液颜色的变化情况。
思考题1、在Tollen反应分析位置样品时,应注意些什么问题?2、列表总结和比较本实验三种颜色反应的原理及其应用。
二、多糖的性质多糖的实验一、目的1、熟悉淀粉多糖的碘实验反应原理和方法。
2、进一步了解淀粉的水解过程。
二、原理淀粉分布于植物界,谷、果实、种子、块茎中含量丰富,工业用的淀粉主要来源于玉米、山芋、马铃薯。
本实验以马铃薯为原料,利用淀粉不溶于或难溶于水的的性质来制备淀粉。
1,是由于碘被吸附在淀粉上,形成一复合物,此复合物不淀粉遇碘呈蓝色稳定,极易被醇、氢氧化钠和加热等使颜色褪去,其他多糖大多数能与碘呈特异的颜色,此类呈颜色物质也不稳定。
淀粉在酸催化下加热,逐步水解成分子较小的糖、最后水解成葡萄糖,(CHO)(CH10O5) CHOCHO411 612104517422淀粉各种糊精麦芽糖葡萄糖淀粉完全水解后,失去与碘的作用,同时出现单糖的还原性。
三、实验器材1、马铃薯 3、布氏漏斗(*1)、抽滤瓶500ml(*1)2、纱布、研钵(*1) 4、表面皿10cm(*1)、白瓷板、皮头滴管5、试管1.5cm*15cm(*4) 8、量筒25ml(*1)6、电炉、石棉网 9、吸管1.0ml(*1)7、烧杯50ml(*1) 10、木质试管四、实验试剂1、稀释液:配制2%碘化钾溶液,加入适量碘,使溶液呈淡棕黄色即可。
2、0.1%淀粉:称取淀粉1g,加少量水,调匀,倾入沸水,边加边搅,并以热水稀释至1000ml,可加数滴甲苯防腐。
3、10%NaOH溶液:称取NaOH10g,溶于蒸馏水并稀释至100ml。
4、本尼迪特试剂:见实验2.(相对密20ml置烧杯中,加入浓硫酸78ml:量取蒸馏水)V/V硫酸(20%、 5.度1.84).摇匀,冷却后贮于试剂瓶中。
6、10%碳酸钠溶液:称取无水碳酸钠10g,溶于蒸馏水并稀释至100ml。
五、操作1、马铃薯淀粉的制备讲生马铃薯去皮,在研钵中充分研碎,加水混合,用纱布过滤,除去粗颗粒,滤液中的淀粉很快沉到底部,多次用水洗淀粉,抽滤,滤饼放在表面皿上,在空气中干燥即得。
2、淀粉与碘的反应(1)置少量自制淀粉于白瓷板上,加1至3滴稀碘液,观察颜色变化。
(2)取试管1支,加0.1%淀粉液5ml,再加2滴稀碘液,摇匀后,观察其颜色变化。
将管内液体分成3分,其中1分加热,观察颜色是否褪去。
冷却后,颜色是否全部恢复。
另2份分别加入乙醇或10%NaOH溶液,观察颜色变化并解释之。
3、淀粉的水解在一小烧杯内加入1%淀粉溶液25ml及20%硫酸1ml,放在石棉网上小火加热,微沸后每隔2min取出反应2滴置于白瓷板上做碘试验。
与此同时另取反应液3滴,用10%碳酸钠溶液中和后,做本尼迪特试验(参阅试验2),记录试验结果并解释之。
六、注意事项1、淀粉提取时可适当加热以促进淀粉聚沉,但温度不能超过50℃,否则会因溶解度增大而减少产量。
2、用水洗涤淀粉时需待淀粉沉降完全后再小心倾出上清液,亦可直接用滴管吸去上清液。
思考题淀粉有没有还原性?如何验证?三、植物组织中可溶性总糖的测定一、目的掌握蒽酮比色法定糖的原理和方法。
二、原理糖在浓硫酸作用下,脱水生成糠醛或羟基糠醛,糠醛或羟基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在60nm处有最大吸收。
在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的定量。
蒽酮法几乎可以测定所有的糖类物质,不但可以测定戊糖于己糖,而且可以测定寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素、糖原等(因为反应液中的浓硫酸可以将多糖水解成单糖而发成反应),所以用蒽酮法测出的糖含量,实际上是溶液中的总糖含量。
此外,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅。
三、实验器材.1、新鲜植物叶片 5、水浴锅、电炉2、吸管1.0ml(*2)、5ml(*1)、0.1ml 6、电子分析天平(*1)、0.2ml(*1)、0.5ml(*3). 7、容量瓶100ml(*1)、玻璃漏斗。
3、试管1.5cm*15cm(*7) 8、量筒、研钵、三角烧杯4、紫外可见分光光度计。
四、实验试剂1、蒽酮试剂:取2g蒽酮溶于1000ml80%(V/V)的硫酸中,当日配制使用。
2、标准葡萄糖溶液(0.1mg/ml):100ml葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000ml(可滴加几滴甲苯作防腐剂)五、操作1、制作标准曲线取干净试管6支,按表6进行操作。
以吸光度为纵坐标,各标准溶液浓度(mg/ml)为横坐标作为图得标准曲线。
表6 蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作管号 0 1 2 3 4 5试剂标准葡萄糖溶液/ml0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.50.5 0.8 蒸馏水/ml1.00.6 0.90.7置冰水浴中 5min4.0蒽酮试4.04.04.04.04.0沸水浴中准确煮10mi,取出,用自来水冷却,室放10mi,620n处比色620nm、可溶性糖的提取和测取新鲜植物叶片,洗净表面污物,用滤纸吸去表面水分。
称取0.5g,剪碎、加入3ml蒸馏水,在年播种磨成匀浆,转入锥形瓶,并用12ml蒸馏水冲洗研钵2至3次,洗出液也转入锥形瓶中。
用塑料薄膜封口,于沸水中提取30min,冷却后过滤并定容至100ml,此为待测液,吸取待测液0.5ml于试管中,加蒸馏水0.5ml,浸于冰水浴中冷却,再加入4ml蒽酮试剂,沸水浴中煮沸10min,取出用自来水冷却后比色,其他条件与做标准曲线相同,测得的吸光度值有标准曲线查算出样品液的糖含量。
六、计算(总糖)=[(C*V)/m]*100%式中(总糖):总糖的质量分数(%);C:从标准曲线上查出的糖含量(mg/ml);V:样品稀释后的体积(ml)m:样品的质量(mg)七、注意事项1、若提取物中过多色素会干扰显色,须事先除去。
2、参见实验8注意事项。
思考题.1、本实验蒽酮法用于测定植物叶片的可溶性糖,非可溶性糖可用此方法除去吗?2、制作标准曲线时应注意哪些问题?三、蒽酮-硫酸比色定糖法一、目的掌握蒽酮比色法定糖的原理和方法。
二、原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以和游离得的己糖或多糖中的己糖基,戊醛糖及己糖醛酸起反应,反应溶液呈蓝绿色,在620nm出有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应,单显现的颜色不同,当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈红色,对于以上特定的糖类,反应较稳定。
本法多用于测定糖原含量,亦可用于测定葡萄糖含量。
三、实验器材1、无蛋白滤液或其他材料 4、紫外可见光光度计2、吸管1.0ml(*2)、5ml(*1)、0.1ml 5、水浴锅(*1)、0.2ml(*1)、0.5ml(*3). 6、电炉3、试管1.5cm*15cm(*7) 7、电子分析天平。