pLVX-Puro慢病毒载体使用说明
慢病毒使用操作指南
慢使用操作指南慢使用操作指南1.慢简介1.1 定义：慢是一种特殊的，能够在细胞中长期存活并进行复制。
1.2 用途：慢广泛应用于基因转导、基因敲除和基因表达等实验研究中。
2.慢使用前准备工作2.1 实验室准备工作2.1.1 实验室空间准备：确保实验室内有足够的操作空间和合适的消毒设备。
2.1.2 材料准备：准备好所需的培养基、细胞培养物、慢载体等。
2.1.3 设备准备：确保离心机、冰箱等设备正常工作，并准备好相关的仪器和器材。
2.2 人员准备工作2.2.1 人员培训：对参与慢操作的人员进行培训，了解操作步骤和安全风险。
2.2.2 个人防护：提供必要的防护装备，如实验服、手套、面罩等。
3.慢操作步骤3.1 细胞培养3.1.1 细胞培养物准备：根据实验需求选择合适的细胞培养物，并进行细胞的预处理和培养。
3.1.2 细胞密度调整：根据实验要求，调整细胞培养物的密度，以保证细胞的正常生长。
3.2 慢感染3.2.1 慢载体注射：将慢载体注射到培养好的细胞中。
3.2.2 感染条件控制：根据实验需求，控制慢感染的时间、浓度和温度等条件。
3.3 细胞培养和检测3.3.1 细胞培养：将感染好的细胞进行培养，并观察细胞的生长状态。
3.3.2 细胞检测：使用相关实验方法，对感染细胞进行检测和分析。
4.实验安全措施4.1 操作环境控制：确保实验室内通风良好，避免慢的扩散和污染。
4.2 废液处理：将产生的废液经过正确处理，避免对环境和人体造成污染和伤害。
4.3 事故应急处理：在发生事故或意外情况时，立即采取应急措施，并及时报告相关人员。
5.附件本文档所涉及的附件，包括但不限于实验记录表格、实验数据文件等。
6.法律名词及注释6.1 慢：指一种具有长周期和潜伏期的。
7.结束语感谢您阅读本文档，如有任何疑问或意见，请随时与我们联系。
慢病毒(过表达)包装步骤
慢病毒（过表达）包装步骤秦超1.转染复苏293T细胞,传2-3代进行转染，转染推荐使用合元公司的慢病毒转染试剂。
转染步骤：（以10cm培养皿为例）⑴最好在铺细胞后20h左右进行转染，控制转染前细胞密度70%—90%，保证细胞处于良好的状态,转染前一小时把一半培养基（约5ml）换成新的（含血清，因为此转染试剂不需换液）。
⑵加psin 10ug，pspax2 10ug，pmd2.g 5ug于800ul opti—mem，混匀⑶加40ul慢病毒转染试剂于800ul opti—mem，混匀，室温静置5min⑷将⑶所得的转染试剂稀释液滴加到⑵所得到的质粒稀释液中，边加边轻轻混匀，室温放置20min⑸取出细胞培养皿，将⑷得到的质粒转染试剂复合体加入到细胞培养基中，前后轻轻推摇使混合均匀，放回培养箱。
2.收毒(36—48h)收毒前如果质粒带有荧光标签可先看一下转染效率，一般达到60%即可.⑴将培养皿中的病毒上清液吸出到15cm离心管中，然后2000rpm离心10min,以沉淀细胞碎片。
⑵取上清用0.22um滤清过滤到浓缩管(用蛋白质浓缩管即可）中。
4000rpm离心至所需体积。
⑶浓缩完毕后，吸出浓缩后的病毒液,按每次的接毒量分装，-80℃冻存。
由于反复冻融会降低慢病毒滴度，因此避免反复冻融。
3.接毒接毒前12-20h铺细胞，使接毒时细胞密度约为40％—50%，务必使用生长状态良好的细胞。
将分装好的慢病毒滴加到细胞中，加polybrene使其终浓度为8ug/ml细胞密度60%—70%时可以再接毒一次。
4.检测及培养细胞系（48h)如果带有荧光标签可直接显微镜看一下感染效率，如需用药杀用puromycin杀三天（对照组完全杀死），剩下的即为基因整合进去的细胞。
如需培养成细胞系,可继续培养。
如果剩下的细胞较少可用高浓度血清，待细胞聚团时用胰酶消化一下，使细胞铺匀。
慢病毒感染细胞 操作手册
慢病毒感染细胞实验方法一、实验概述培养生长状态良好的目的细胞，根据慢病毒感染预实验结果设计各组实验条件，进行正式感染。
若为荧光标记的慢病毒感染，参照预实验确定的感染时间点，于荧光显微镜下观察GFP表达情况，荧光率达70-80％左右，细胞汇合度达80%左右，收集细胞进入下游实验。
若为抗性基因（如Puromycin）标记的慢病毒感染，感染48 h-72h后，使用抗生素筛选48h，收集细胞汇合度70%-80%左右的生长状态良好的细胞进行下游实验。
二、实验材料1.主要试剂试剂名称试剂来源cat.No.胎牛血清Ausbian VS500TDMEM Corning 10-013-CVR胰酶生工生物工程（上海）股份有限公司T0458-50G Puromycin Clontech 631305D-Hanks 上海吉凯基因技术有限公司配制2.主要仪器仪器名称仪器来源cat.No.荧光显微镜奥林帕斯IX71CO2培养箱日本三洋SANYO MCO-175倒置显微镜上海蔡康光学仪器有限公司XDS-100离心机赛默飞世尔科技(中国)有限公司Fresco 21生物安全柜上海振样创空气净化设备有限公司Bio 1200-Ⅱ-A2三、实验步骤1．准备目的细胞（1）从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中，并不时摇动使其尽快解冻。
（2）完全解冻后，1300 rpm，离心3 min，75%酒精擦拭冻存管消毒后，移至生物安全柜。
（3）吸去冻存液上清，加入1 mL新鲜的完全培养基重悬细胞，将细胞悬液接种至含有3 mL完全培养基的6-cm dish 中，轻轻晃匀后置于37℃、5% CO2培养箱。
（4）24 h后更换一次培养液继续培养，待细胞汇合度达80%左右传代培养，保持细胞良好的生长状态。
2．目的细胞慢病毒感染（1）贴壁细胞：a.处于对数生长期的细胞胰酶消化，完全培养基制成3-5×104个/mL细胞悬液，并根据表1接种相应的细胞数到培养板中，继续培养保证感染时铺板量达到15-30%左右。
pLVX-Het-2慢病毒载体使用说明
pLVX-Het-2pLVX-Het-2载体基本信息：载体名称: pLVX-Het-2质粒类型: 慢病毒载体；双顺反子载体高拷贝/低拷贝: 高拷贝克隆方法: 限制性内切酶，多克隆位点启动子: CMV载体大小: 8902 bp5' 测序引物及序列: CMV Forward：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG 3' 测序引物及序列: --载体标签: DmrA载体抗性: 氨苄青霉素筛选标记: 潮霉素（Hygromycin）克隆菌株: Stbl3宿主细胞（系）: 常规细胞系（293、CV-1、CHO等）备注: 慢病毒载体pLVX-Het-2表达DmrA融合蛋白；两个MCS 区。
稳定性: 稳表达组成型/诱导型: 组成型病毒/非病毒: 慢病毒pLVX-Het-2载体质粒图谱和多克隆位点信息：pLVX-Het-2载体序列：ORIGIN1 TGGAAGGGCT AATTCACTCC CAAAGAAGAC AAGATATCCT TGATCTGTGG ATCTACCACA61 CACAAGGCTA CTTCCCTGAT TAGCAGAACT ACACACCAGG GCCAGGGGTC AGATATCCAC121 TGACCTTTGG ATGGTGCTAC AAGCTAGTAC CAGTTGAGCC AGATAAGGTA GAAGAGGCCA 181 ATAAAGGAGA GAACACCAGC TTGTTACACC CTGTGAGCCT GCATGGGATG GATGACCCGG 241 AGAGAGAAGT GTTAGAGTGG AGGTTTGACA GCCGCCTAGC ATTTCATCAC GTGGCCCGAG 301 AGCTGCATCC GGAGTACTTC AAGAACTGCT GATATCGAGC TTGCTACAAG GGACTTTCCG 361 CTGGGGACTT TCCAGGGAGG CGTGGCCTGG GCGGGACTGG GGAGTGGCGA GCCCTCAGAT 421 CCTGCATATA AGCAGCTGCT TTTTGCCTGT ACTGGGTCTC TCTGGTTAGA CCAGATCTGA481 GCCTGGGAGC TCTCTGGCTA ACTAGGGAAC CCACTGCTTA AGCCTCAATA AAGCTTGCCT 541 TGAGTGCTTC AAGTAGTGTG TGCCCGTCTG TTGTGTGACT CTGGTAACTA GAGATCCCTC601 AGACCCTTTT AGTCAGTGTG GAAAATCTCT AGCAGTGGCG CCCGAACAGG GACTTGAAAG 661 CGAAAGGGAA ACCAGAGGAG CTCTCTCGAC GCAGGACTCG GCTTGCTGAA GCGCGCACGG 721 CAAGAGGCGA GGGGCGGCGA CTGGTGAGTA CGCCAAAAAT TTTGACTAGC GGAGGCTAGA 781 AGGAGAGAGA TGGGTGCGAG AGCGTCAGTA TTAAGCGGGG GAGAATTAGA TCGCGATGGG 841 AAAAAATTCG GTTAAGGCCA GGGGGAAAGA AAAAATATAA ATTAAAACAT ATAGTATGGG 901 CAAGCAGGGA GCTAGAACGA TTCGCAGTTA ATCCTGGCCT GTTAGAAACA TCAGAAGGCT 961 GTAGACAAAT ACTGGGACAG CTACAACCAT CCCTTCAGAC AGGATCAGAA GAACTTAGAT 1021 CATTATATAA TACAGTAGCA ACCCTCTATT GTGTGCATCA AAGGATAGAG ATAAAAGACA 1081 CCAAGGAAGC TTTAGACAAG ATAGAGGAAG AGCAAAACAA AAGTAAGACC ACCGCACAGC 1141 AAGCGGCCGG CCGCTGATCT TCAGACCTGG AGGAGGAGAT ATGAGGGACA ATTGGAGAAG 1201 TGAATTATAT AAATATAAAG TAGTAAAAAT TGAACCATTA GGAGTAGCAC CCACCAAGGC 1261 AAAGAGAAGA GTGGTGCAGA GAGAAAAAAG AGCAGTGGGA ATAGGAGCTT TGTTCCTTGG1321 GTTCTTGGGA GCAGCAGGAA GCACTATGGG CGCAGCGTCA ATGACGCTGA CGGTACAGGC 1381 CAGACAATTA TTGTCTGGTA TAGTGCAGCA GCAGAACAAT TTGCTGAGGG CTATTGAGGC 1441 GCAACAGCAT CTGTTGCAAC TCACAGTCTG GGGCATCAAG CAGCTCCAGG CAAGAATCCT 1501 GGCTGTGGAA AGATACCTAA AGGATCAACA GCTCCTGGGG ATTTGGGGTT GCTCTGGAAA 1561 ACTCATTTGC ACCACTGCTG TGCCTTGGAA TGCTAGTTGG AGTAATAAAT CTCTGGAACA 1621 GATTTGGAAT CACACGACCT GGATGGAGTG GGACAGAGAA ATTAACAATT ACACAAGCTT 1681 AATACACTCC TTAATTGAAG AATCGCAAAA CCAGCAAGAA AAGAATGAAC AAGAATTATT 1741 GGAATTAGAT AAATGGGCAA GTTTGTGGAA TTGGTTTAAC ATAACAAATT GGCTGTGGTA 1801 TATAAAATTA TTCATAATGA TAGTAGGAGG CTTGGTAGGT TTAAGAATAG TTTTTGCTGT 1861 ACTTTCTATA GTGAATAGAG TTAGGCAGGG ATATTCACCA TTATCGTTTC AGACCCACCT 1921 CCCAACCCCG AGGGGACCCG ACAGGCCCGA AGGAATAGAA GAAGAAGGTG GAGAGAGAGA 1981 CAGAGACAGA TCCATTCGAT TAGTGAACGG ATCTCGACGG TATCGCCTTT AAAAGAAAAG 2041 GGGGGATTGG GGGGTACAGT GCAGGGGAAA GAATAGTAGA CATAATAGCA ACAGACATAC 2101 AAACTAAAGA ACTACAAAAA CAAATTACAA AAATTCAAAA TTTTCGGGTT TATTACAGGG 2161 ACAGCAGAGA TCCAGTTTAT CGATAAGCTT GGGAGTTCCG CGTTACATAA CTTACGGTAA 2221 ATGGCCCGCC TGGCTGACCG CCCAACGACC CCCGCCCATT GACGTCAATA ATGACGTATG 2281 TTCCCATAGT AACGCCAATA GGGACTTTCC ATTGACGTCA ATGGGTGGAG TATTTACGGT 2341 AAACTGCCCA CTTGGCAGTA CATCAAGTGT ATCATATGCC AAGTACGCCC CCTATTGACG 2401 TCAATGACGG TAAATGGCCC GCCTGGCATT ATGCCCAGTA CATGACCTTA CGGGACTTTC 2461 CTACTTGGCA GTACATCTAC GTATTAGTCA TCGCTATTAC CATGGTGATG CGGTTTTGGC 2521 AGTACACCAA TGGGCGTGGA TAGCGGTTTG ACTCACGGGG ATTTCCAAGT CTCCACCCCA 2581 TTGACGTCAA TGGGAGTTTG TTTTGGCACC AAAATCAACG GGACTTTCCA AAATGTCGTA 2641 ACAACTCCGC CCCATTGACG CAAATGGGCG GTAGGCGTGT ACGGTGGGAG GTCTATATAA 2701 GCAGAGCTCG TTTAGTGAAC CGTCAGATCG CCTGGAGACG CCATCCACGC TGTTTTGACC 2761 TCCATAGAAG ACACCGACTC TAGCTAGAGG ATCTATTTCC GGTGAATTCC TCGAGACTAG 2821 TATGTCTAGA GGAGTCCAGG TGGAAACCAT CTCCCCAGGA GACGGGCGCA CCTTCCCCAA 2881 GCGCGGCCAG ACCTGCGTGG TGCACTACAC CGGGATGCTT GAAGATGGAA AGAAATTTGA 2941 TTCCTCCCGG GACAGAAACA AGCCCTTTAA GTTTATGCTA GGCAAGCAGG AGGTGATCCG 3001 AGGCTGGGAA GAAGGGGTTG CCCAGATGAG TGTGGGTCAG AGAGCCAAAC TGACTATATC 3061 TCCAGATTAT GCCTATGGTG CCACTGGGCA CCCAGGCATC ATCCCACCAC ATGCCACTCT 3121 CGTCTTCGAT GTGGAGCTTC TAAAACTGGA AAGCGGCCGC GGATCCTACG TATGACCGCC 3181 CCTCTCCCTC CCCCCCCCCT AACGTTACTG GCCGAAGCCG CTTGGAATAA GGCCGGTGTG 3241 CGTTTGTCTA TATGTTATTT TCCACCATAT TGCCGTCTTT TGGCAATGTG AGGGCCCGGA 3301 AACCTGGCCC TGTCTTCTTG 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ATCTTAGCCA GACGAGCGGG TTCGGCCCAT TCGGACCGCA 4201 AGGAATCGGT CAATACACTA CATGGCGTGA TTTCATATGC GCGATTGCTG ATCCCCATGT 4261 GTATCACTGG CAAACTGTGA TGGACGACAC CGTCAGTGCG TCCGTCGCGC AGGCTCTCGA 4321 TGAGCTGATG CTTTGGGCCG AGGACTGCCC CGAAGTCCGG CACCTCGTGC ACGCGGATTT 4381 CGGCTCCAAC AATGTCCTGA CGGACAATGG CCGCATAACA GCGGTCATTG ACTGGAGCGA 4441 GGCGATGTTC GGGGATTCCC AATACGAGGT CGCCAACATC TTCTTCTGGA GGCCGTGGTT 4501 GGCTTGTATG GAGCAGCAGA CGCGCTACTT CGAGCGGAGG CATCCGGAGC TTGCAGGATC 4561 GCCGCGGCTC CGGGCGTATA TGCTCCGCAT TGGTCTTGAC CAACTCTATC AGAGCTTGGT 4621 TGACGGCAAT TTCGATGATG CAGCTTGGGC GCAGGGTCGA TGCGACGCAA TCGTCCGATC 4681 CGGAGCCGGG ACTGTCGGGC GTACACAAAT CGCCCGCAGA AGCGCGGCCG TCTGGACCGA 4741 TGGCTGTGTA GAAGTACTCG CCGATAGTGG AAACCGACGC CCCAGCACTC GTCCGAGGGC 4801 AAAGGAATAG ACGCGTCTGG AACAATCAAC CTCTGGATTA CAAAATTTGT GAAAGATTGA 4861 CTGGTATTCT TAACTATGTT GCTCCTTTTA CGCTATGTGG ATACGCTGCT TTAATGCCTT 4921 TGTATCATGC TATTGCTTCC CGTATGGCTT TCATTTTCTC CTCCTTGTAT AAATCCTGGT 4981 TGCTGTCTCT TTATGAGGAG TTGTGGCCCG TTGTCAGGCA ACGTGGCGTG GTGTGCACTG 5041 TGTTTGCTGA CGCAACCCCC ACTGGTTGGG GCATTGCCAC CACCTGTCAG CTCCTTTCCG 5101 GGACTTTCGC TTTCCCCCTC CCTATTGCCA CGGCGGAACT CATCGCCGCC TGCCTTGCCC 5161 GCTGCTGGAC AGGGGCTCGG CTGTTGGGCA CTGACAATTC CGTGGTGTTG TCGGGGAAGC 5221 TGACGTCCTT TCCATGGCTG CTCGCCTGTG TTGCCACCTG GATTCTGCGC GGGACGTCCT 5281 TCTGCTACGT CCCTTCGGCC CTCAATCCAG CGGACCTTCC TTCCCGCGGC CTGCTGCCGG 5341 CTCTGCGGCC TCTTCCGCGT CTTCGCCTTC GCCCTCAGAC GAGTCGGATC TCCCTTTGGG 5401 CCGCCTCCCC GCCTGGAATT AATTCTGCAG TCGAGACCTA GAAAAACATG GAGCAATCAC 5461 AAGTAGCAAT ACAGCAGCTA CCAATGCTGA TTGTGCCTGG CTAGAAGCAC AAGAGGAGGA 5521 GGAGGTGGGT TTTTCCAGTC ACACCTCAGG TACCTTTAAG ACCAATGACT TACAAGGCAG 5581 CTGTAGATCT TAGCCACTTT TTAAAAGAAA AGAGGGGACT GGAAGGGCTA ATTCACTCCC 5641 AACGAAGACA AGATATCCTT GATCTGTGGA TCTACCACAC ACAAGGCTAC TTCCCTGATT 5701 AGCAGAACTA CACACCAGGG CCAGGGGTCA GATATCCACT GACCTTTGGA TGGTGCTACA 5761 AGCTAGTACC AGTTGAGCCA GATAAGGTAG AAGAGGCCAA TAAAGGAGAG AACACCAGCT 5821 TGTTACACCC TGTGAGCCTG CATGGGATGG ATGACCCGGA GAGAGAAGTG TTAGAGTGGA 5881 GGTTTGACAG CCGCCTAGCA TTTCATCACG TGGCCCGAGA GCTGCATCCG GAGTACTTCA 5941 AGAACTGCTG ATATCGAGCT TGCTACAAGG GACTTTCCGC TGGGGACTTT CCAGGGAGGC 6001 GTGGCCTGGG CGGGACTGGG GAGTGGCGAG CCCTCAGATC CTGCATATAA GCAGCTGCTT 6061 TTTGCCTGTA CTGGGTCTCT CTGGTTAGAC CAGATCTGAG CCTGGGAGCT CTCTGGCTAA 6121 CTAGGGAACC CACTGCTTAA GCCTCAATAA AGCTTGCCTT GAGTGCTTCA AGTAGTGTGT 6181 GCCCGTCTGT TGTGTGACTC TGGTAACTAG AGATCCCTCA GACCCTTTTA GTCAGTGTGG 6241 AAAATCTCTA GCAGTAGTAG TTCATGTCAT CTTATTATTC AGTATTTATA ACTTGCAAAG 6301 AAATGAATAT CAGAGAGTGA GAGGCCTTGA CATTGCTAGC GTTTTACCGT CGACCTCTAG 6361 CTAGAGCTTG GCGTAATCAT GGTCATAGCT GTTTCCTGTG TGAAATTGTT ATCCGCTCAC 6421 AATTCCACAC AACATACGAG CCGGAAGCAT AAAGTGTAAA GCCTGGGGTG CCTAATGAGT 6481 GAGCTAACTC ACATTAATTG CGTTGCGCTC ACTGCCCGCT TTCCAGTCGG GAAACCTGTC 6541 GTGCCAGCTG CATTAATGAA TCGGCCAACG CGCGGGGAGA GGCGGTTTGC GTATTGGGCG6601 CTCTTCCGCT TCCTCGCTCA CTGACTCGCT GCGCTCGGTC GTTCGGCTGC GGCGAGCGGT6661 ATCAGCTCAC TCAAAGGCGG TAATACGGTT ATCCACAGAA TCAGGGGATA ACGCAGGAAA6721 GAACATGTGA GCAAAAGGCC AGCAAAAGGC CAGGAACCGT AAAAAGGCCG CGTTGCTGGC6781 GTTTTTCCAT AGGCTCCGCC CCCCTGACGA GCATCACAAA AATCGACGCT CAAGTCAGAG6841 GTGGCGAAAC CCGACAGGAC TATAAAGATA CCAGGCGTTT CCCCCTGGAA GCTCCCTCGT6901 GCGCTCTCCT GTTCCGACCC TGCCGCTTAC CGGATACCTG TCCGCCTTTC TCCCTTCGGG6961 AAGCGTGGCG CTTTCTCATA GCTCACGCTG TAGGTATCTC AGTTCGGTGT AGGTCGTTCG7021 CTCCAAGCTG GGCTGTGTGC ACGAACCCCC CGTTCAGCCC GACCGCTGCG CCTTATCCGG7081 TAACTATCGT CTTGAGTCCA ACCCGGTAAG ACACGACTTA TCGCCACTGG CAGCAGCCAC7141 TGGTAACAGG ATTAGCAGAG CGAGGTATGT AGGCGGTGCT ACAGAGTTCT TGAAGTGGTG7201 GCCTAACTAC GGCTACACTA GAAGAACAGT ATTTGGTATC TGCGCTCTGC TGAAGCCAGT7261 TACCTTCGGA AAAAGAGTTG GTAGCTCTTG ATCCGGCAAA CAAACCACCG CTGGTAGCGG7321 TTTTTTTGTT TGCAAGCAGC AGATTACGCG CAGAAAAAAA GGATCTCAAG AAGATCCTTT7381 GATCTTTTCT ACGGGGTCTG ACGCTCAGTG GAACGAAAAC TCACGTTAAG GGATTTTGGT7441 CATGAGATTA TCAAAAAGGA TCTTCACCTA GATCCTTTTA AATTAAAAAT GAAGTTTTAA7501 ATCAATCTAA AGTATATATG AGTAAACTTG GTCTGACAGT TACCAATGCT TAATCAGTGA7561 GGCACCTATC TCAGCGATCT GTCTATTTCG TTCATCCATA GTTGCCTGAC TCCCCGTCGT7621 GTAGATAACT ACGATACGGG AGGGCTTACC ATCTGGCCCC AGTGCTGCAA TGATACCGCG7681 AGACCCACGC TCACCGGCTC CAGATTTATC AGCAATAAAC CAGCCAGCCG GAAGGGCCGA7741 GCGCAGAAGT GGTCCTGCAA CTTTATCCGC CTCCATCCAG TCTATTAATT GTTGCCGGGA7801 AGCTAGAGTA AGTAGTTCGC CAGTTAATAG TTTGCGCAAC GTTGTTGCCA TTGCTACAGG7861 CATCGTGGTG TCACGCTCGT CGTTTGGTAT GGCTTCATTC AGCTCCGGTT CCCAACGATC7921 AAGGCGAGTT ACATGATCCC CCATGTTGTG CAAAAAAGCG GTTAGCTCCT TCGGTCCTCC7981 GATCGTTGTC AGAAGTAAGT TGGCCGCAGT GTTATCACTC ATGGTTATGG CAGCACTGCA8041 TAATTCTCTT ACTGTCATGC CATCCGTAAG ATGCTTTTCT GTGACTGGTG AGTACTCAAC8101 CAAGTCATTC TGAGAATAGT GTATGCGGCG ACCGAGTTGC TCTTGCCCGG CGTCAATACG8161 GGATAATACC GCGCCACATA GCAGAACTTT AAAAGTGCTC ATCATTGGAA AACGTTCTTC8221 GGGGCGAAAA CTCTCAAGGA TCTTACCGCT GTTGAGATCC AGTTCGATGT AACCCACTCG8281 TGCACCCAAC TGATCTTCAG CATCTTTTAC TTTCACCAGC GTTTCTGGGT GAGCAAAAAC8341 AGGAAGGCAA AATGCCGCAA AAAAGGGAAT AAGGGCGACA CGGAAATGTT GAATACTCAT8401 ACTCTTCCTT TTTCAATATT ATTGAAGCAT TTATCAGGGT TATTGTCTCA TGAGCGGATA8461 CATATTTGAA TGTATTTAGA AAAATAAACA AATAGGGGTT CCGCGCACAT TTCCCCGAAA8521 AGTGCCACCT GACGTCGACG GATCGGGAGA TCAACTTGTT TATTGCAGCT TATAATGGTT8581 ACAAATAAAG CAATAGCATC ACAAATTTCA CAAATAAAGC ATTTTTTTCA CTGCATTCTA8641 GTTGTGGTTT GTCCAAACTC ATCAATGTAT CTTATCATGT CTGGATCAAC TGGATAACTC8701 AAGCTAACCA AAATCATCCC AAACTTCCCA CCCCATACCC TATTACCACT GCCAATTACC8761 TAGTGGTTTC ATTTACTCTA AACCTGTGAT TCCTCTGAAT TATTTTCATT TTAAAGAAAT8821 TGTATTTGTT AAATATGTAC TACAAACTTA GTAGTTTTTA AAGAAATTGT ATTTGTTAAA8881 TATGTACTAC AAACTTAGTA GT //pLVX-Het-2其他相关慢病毒载体：Tet-pLKO-neo Tet-pLKO-puro pPACKH1-GAG pMD2.G pCMV-dR8.2-dvpr pLKO.1-GFP-shRNA pLKO.1-TRC control pLKO.1-hygro pLKO.1-TRCpCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro FUW-tetO-hOKMSFUW-tetO-hOCT4 FUW-tetO-hSOX2 FUW-tetO-hKLF4FUW pLVX-AcGFP1-N1 pLVX-AcGFP1-C1pLVX-AmCyan1-N1 pLVX-DsRed-Express2-C1 pLVX-DsRed-Express2-N1 pLVX-DsRed-Monomer-N1 pLVX-PAmCherry-C1 pLVX-PAmCherry-N1pLVX-ZsGreen1-N1 pLVX-IRES-ZsGreen1 pLVX-IRES-mCherrypLVX-mCherry-C1 pLVX-mCherry-N1 pLVX-tdTomato-C1pLKO.1-puro pLentilox 3.7 pLVX-Tet-On-Advanced pLVX-IRES-Puro pLVX-IRES-Neo pLVX-IRES-HygpLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 pLVX-EF1α-AcGFP1-N1 pLVX-EF1α-AcGFP1-C1 pLVX-EF1α-mCherry-C1 pLVX-EF1α-IRES-mCherry pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-MetLuc Control pLVX-MetLuc pLVX-Hom-Mem1pLVX-Het-2 pLVX-DD-AcGFP1-Actin pPRIME-TET-GFP-FF3pSIH1-H1-CopGFP pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pLOX-CWBmi1 pLOX-CW-CREpRSV-rev pMDLg-pRRE pLL3.7pLVX-DD-AmCyan1 Control pLVX-DD-AmCyan1 Reporter pLVX-DD-tdTomato Reporter pLVX-DD-tdTomato Control pLVX-PTuner-Green pLVX-CherryPicker2pLVX-TetOne-Puro-Luc pLVX-TetOne pLVX-TetOne-PuropLVX-TetOne-Luc pLVX-rHom-Nuc1 pLVX-rHom-Sec1pLVX-rHom-1 pLVX-Hom-Nuc1 pLVX-Het-Nuc1pLVX-PTuner pLVX-PTuner2 pLVX-DD-ZsGreen1 Reporter pLVX-Het-1 pLVX-CherryPicker Control pLVX-Tet3GpCDH-CMV-MCS-EF1-RFP-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Hygro pCDH-CMV-MCS-EF1-Neo pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV pCDH1-MCS2-EF1-copGFP pCDF1-MCS2-EF1-Puro pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP pWPXL pLVX-TRE3G-ZsGreen1 pLVX-TRE3G-mCherry pLenti6.3-EmGFP-BveI miR pLenti6/V5-GW/lacZpLenti6.3/V5-GW/EmGFP pLenti6.3-MCS pLenti6.3-DsRed2-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP pLVX-shRNA2 psPAX2VSV-G pSico PGK Puro pcDNA6.2-DsRed2-MCS1 miR pcDNA6.3-EmGFP-NC- II pcDNA6.2-EmGFP-NC- I pcDNA6.2-EmGFP-BsaI miR pLenti6.3-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-DsRed2 pLEX-MCSpGIPZ pLP2 pLP1FUGW pFUGW pLOX-Ttag-iresTKpMDLg/pRRE pLentG-KOSM pCMV-dR8.91pLVX-TRE3G-Luc Control pLVX-TRE3G-IRES pCgpvpSico pSicoR pLVTHMpGensil-1 pLVX-EF1α-IRES-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pPACKH1-REV pLVX-Het-Mem1 pLVX-shRNA1pLKO.1-puro-GFP-siRNA pPRIME-TREX-GFP-FF3 pcDNA6.2-DsRed2-BsmBI miR pCDH-MSCV-MCS-EF1-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP pLVX-TRE3GFUW-tetO-hMYC pLOX-TERT-iresTK pLP/VSVGFUW-M2rtTA pCDH-EF1-MCS-(PGK-Puro) pcDNA6.2-EmGFP-MCS1 miR pLVX-AmCyan1-C1 pLVX-Hom-1 pcDNA6.2-BsaI miRpLVX-DsRed-Monomer-C1 pLVX-mCherry-Actin pTRIPZpLVX-ZsGreen1-C1 pLVX-CherryPicker1 LeGO-iC2 pLVX-IRES-tdTomato pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro pLKO.3GpLVX-tdTomato-N1 pLVX-PTuner2-C pLVX-Puro pLVX-Tight-Puro pLVX-DD-ZsGreen1 Control pSicoR PGK Puro pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-N1 pCDH-UbC-MCS-EF1-Hygro pLVTHpLVX-EF1α-mCherry-N1 pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP。
慢病毒感染敲低细胞-傅锦林
慢病毒感染敲低流程
一、慢病毒包装
1．复苏293T细胞于10cm皿中，传至第3-4代。
2．转染病毒包装质粒（PEI转染）：
（1）转染前2小时换无血清培养基。
（2）质粒DNA稀释至1mlDMEM中，枪头吹匀（8μg shRNA 和各4μg pMDLg/pRRE, RSV-Rev, CMV-VSVG）。
（3）20μL PEI稀释至1mlDMEM中，用枪头缓慢吹匀，室温放置5min。
（4）DNA稀释液加到PEI稀释液中，缓慢吹匀,室温放置5min。
（5）DNA和PEI混合液加入到10cm皿293T细胞中，摇匀后于培养箱培养。
（6）4h后换有血清培养基。
3. 48h 和72h收集病毒液，保存于4度冰箱。
合并病毒液，3000rpm 离心10min取上清，0.45μm滤膜过滤，收集滤液。
二、病毒感染筛选
1．复苏HELA细胞于10cm皿中，传至2-3代。
2．细胞大约70%汇合度时，换8μg/ml polybrene的新鲜培养基，加2ml病毒液。
3．培养12h后继续感染（同2）。
4．感染后48h加puromycin至终浓度为3μg/ml。
5．感染后72h传代，继续使用puromycin筛选一代。
6．进行Western检验及其他试验。
傅锦林11.4。
慢病毒包装及质粒转染手册
使用Fugene进行慢病毒包埋步骤
注意：所有操作必须在BSL-2实验室环境进行
第一节：制作慢病毒存储液
293FT细胞的培养：细胞每周按照1:4 - 1:6的比例传代3次，保持其融合度在50%以下
第1天293FT铺板
以30%融合度左右进行10cm皿铺板，37°C, 5% CO 2条件下培养24小时
第2天转染
本实验中pcmv△R8.91:PLP-VSVG :DNA=2:2:2, Total DNA:PEI=1:3
2. 试管2：对每管的转染试剂，加入570ul Opti-MEM,将30ul Fugene加入试管正中
心，避免接触任何管壁，轻轻振荡（不能使用移液器），室温下孵育5min.
3. 将加入Opti-MEM- Fugene混合液加入试管1(DNA)，轻轻震荡混匀。
4．短暂离心使管壁液体流下。
5.室温下孵育15分钟
6. 15分钟后，将Optimem/DNA/Fugene加入细胞，摇动培养皿混匀。
7. 37°C, 5% CO 2培养过夜（12-16小时）
第3天换液
第4天。
慢病毒载体构建和包装操作手册
慢病毒载体构建及包装操作手册目录慢病毒收到后的注意事项一、整体实验流程二、实验材料三、慢病毒包装和浓缩四、感染目的细胞附1. 汉恒生物慢病毒质粒列表附2. 慢病毒滴度测定方法简介附3. 慢病毒MOI感染参数附4. 汉恒生物各病毒载体感染目的细胞比较慢病毒安全使用和注意事项➢慢病毒安全使用注意事项（*非常重要！！！*）1)慢病毒相关实验请在生物安全柜（BL-2级别）内操作。
2)操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。
3)操作病毒时特别小心病毒溅出。
如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干净。
接触过病毒的枪头，离心管，培养板，培养液请于84消毒液浸泡后统一处理。
4)如需要离心，应使用密封性好的离心管，如有必要请用封口膜封口后离心。
5)病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌处理。
6)实验完毕用香皂清洗双手。
➢慢病毒收到后的注意事项1)慢病毒的储存用户收到病毒液后在短期内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存（尽量一周内用完）；如需长期保存请分装后放置于-80℃。
注：a．反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融会降低病毒滴度10%-50%）；在病毒使用过程中应尽量避免反复冻融，所以我们前期对病毒进行了分装（200 l/tube），收到后直接放置-80℃保存即可。
b．如果病毒储存时间超过6个月，我们建议在使用前重新测定病毒滴度。
2)慢病毒的稀释用户需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细胞用PBS或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)混匀分装后置于4℃保存(请尽量一周内用完)。
一、整体实验流程二、实验材料（一）慢病毒载体、包装细胞和菌株该病毒包装系统为三质粒系统，组成为psPAX2, pMD2.G, pHBLV TM系列质粒。
1、载体信息（见附表1）2、细胞株：我们采用293T作为慢病毒的包装细胞。
该细胞系为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为DMEM+10% FBS+双抗。
pLVX-IRES-Neo慢病毒载体使用说明
pLVX-IRES-Neo pLVX-IRES-Neo载体基本信息：载体名称:pLVX-IRES-Neo, pLVX IRES Neo质粒类型: 慢病毒载体；哺乳动物细胞表达载体；双顺反子载体高拷贝/低拷贝: 高拷贝启动子: CMV克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 8269 bp5' 测序引物及序列: CMV-F: CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG (Invitrogen)3' 测序引物及序列: IRES-R: CCTCACATTGCCAAAAGACG载体标签: 无标签载体抗性: 氨苄青霉素筛选标记: 新霉素Neomycin克隆菌株: Stbl3 E.coli备注: pLVX-IRES-Neo载体以双顺反子的形式同时表达Neo抗性基因和目的基因；CMV启动子驱动目的基因的过表达。
稳定性: 稳表达组成型: 组成型病毒/非病毒: 慢病毒pLVX-IRES-Neo载体质粒图谱和多克隆位点信息：pLVX-IRES-Neo载体序列：ORIGIN1 TGGAAGGGCT AATTCACTCC CAAAGAAGAC AAGATATCCT TGATCTGTGG ATCTACCACA61 CACAAGGCTA CTTCCCTGAT TAGCAGAACT ACACACCAGG GCCAGGGGTC AGATATCCAC121 TGACCTTTGG ATGGTGCTAC AAGCTAGTAC CAGTTGAGCC AGATAAGGTA GAAGAGGCCA 181 ATAAAGGAGA GAACACCAGC TTGTTACACC CTGTGAGCCT GCATGGGATG GATGACCCGG 241 AGAGAGAAGT GTTAGAGTGG AGGTTTGACA GCCGCCTAGC ATTTCATCAC GTGGCCCGAG 301 AGCTGCATCC GGAGTACTTC AAGAACTGCT GATATCGAGC TTGCTACAAG GGACTTTCCG 361 CTGGGGACTT TCCAGGGAGG CGTGGCCTGG GCGGGACTGG GGAGTGGCGA GCCCTCAGAT 421 CCTGCATATA AGCAGCTGCT TTTTGCCTGT ACTGGGTCTC TCTGGTTAGA CCAGATCTGA481 GCCTGGGAGC TCTCTGGCTA ACTAGGGAAC CCACTGCTTA AGCCTCAATA AAGCTTGCCT 541 TGAGTGCTTC AAGTAGTGTG TGCCCGTCTG TTGTGTGACT CTGGTAACTA GAGATCCCTC601 AGACCCTTTT AGTCAGTGTG GAAAATCTCT AGCAGTGGCG CCCGAACAGG GACTTGAAAG 661 CGAAAGGGAA ACCAGAGGAG CTCTCTCGAC GCAGGACTCG GCTTGCTGAA GCGCGCACGG 721 CAAGAGGCGA GGGGCGGCGA CTGGTGAGTA CGCCAAAAAT TTTGACTAGC GGAGGCTAGA 781 AGGAGAGAGA TGGGTGCGAG AGCGTCAGTA TTAAGCGGGG GAGAATTAGA TCGCGATGGG 841 AAAAAATTCG GTTAAGGCCA GGGGGAAAGA AAAAATATAA ATTAAAACAT ATAGTATGGG 901 CAAGCAGGGA GCTAGAACGA TTCGCAGTTA ATCCTGGCCT GTTAGAAACA TCAGAAGGCT 961 GTAGACAAAT ACTGGGACAG CTACAACCAT CCCTTCAGAC AGGATCAGAA GAACTTAGAT 1021 CATTATATAA TACAGTAGCA ACCCTCTATT GTGTGCATCA AAGGATAGAG ATAAAAGACA 1081 CCAAGGAAGC TTTAGACAAG ATAGAGGAAG AGCAAAACAA AAGTAAGACC ACCGCACAGC 1141 AAGCGGCCGG CCGCTGATCT TCAGACCTGG AGGAGGAGAT ATGAGGGACA ATTGGAGAAG 1201 TGAATTATAT AAATATAAAG TAGTAAAAAT TGAACCATTA GGAGTAGCAC CCACCAAGGC 1261 AAAGAGAAGA GTGGTGCAGA GAGAAAAAAG AGCAGTGGGA ATAGGAGCTT TGTTCCTTGG 1321 GTTCTTGGGA GCAGCAGGAA GCACTATGGG CGCAGCGTCA ATGACGCTGA CGGTACAGGC 1381 CAGACAATTA TTGTCTGGTA TAGTGCAGCA GCAGAACAAT TTGCTGAGGG CTATTGAGGC 1441 GCAACAGCAT CTGTTGCAAC TCACAGTCTG GGGCATCAAG CAGCTCCAGG CAAGAATCCT1501 GGCTGTGGAA AGATACCTAA AGGATCAACA GCTCCTGGGG ATTTGGGGTT GCTCTGGAAA 1561 ACTCATTTGC ACCACTGCTG TGCCTTGGAA TGCTAGTTGG AGTAATAAAT CTCTGGAACA 1621 GATTTGGAAT CACACGACCT GGATGGAGTG GGACAGAGAA ATTAACAATT ACACAAGCTT 1681 AATACACTCC TTAATTGAAG AATCGCAAAA CCAGCAAGAA AAGAATGAAC AAGAATTATT 1741 GGAATTAGAT AAATGGGCAA GTTTGTGGAA TTGGTTTAAC ATAACAAATT GGCTGTGGTA 1801 TATAAAATTA TTCATAATGA TAGTAGGAGG CTTGGTAGGT TTAAGAATAG TTTTTGCTGT 1861 ACTTTCTATA GTGAATAGAG TTAGGCAGGG ATATTCACCA TTATCGTTTC AGACCCACCT 1921 CCCAACCCCG AGGGGACCCG ACAGGCCCGA AGGAATAGAA GAAGAAGGTG GAGAGAGAGA 1981 CAGAGACAGA TCCATTCGAT TAGTGAACGG ATCTCGACGG TATCGCCTTT AAAAGAAAAG 2041 GGGGGATTGG GGGGTACAGT GCAGGGGAAA GAATAGTAGA CATAATAGCA ACAGACATAC 2101 AAACTAAAGA ATTACAAAAA CAAATTACAA AAATTCAAAA TTTTCGGGTT TATTACAGGG 2161 ACAGCAGAGA TCCAGTTTAT CGATAAGCTT GGGAGTTCCG CGTTACATAA CTTACGGTAA 2221 ATGGCCCGCC TGGCTGACCG CCCAACGACC CCCGCCCATT GACGTCAATA ATGACGTATG 2281 TTCCCATAGT AACGCCAATA GGGACTTTCC ATTGACGTCA ATGGGTGGAG TATTTACGGT 2341 AAACTGCCCA CTTGGCAGTA CATCAAGTGT ATCATATGCC AAGTACGCCC CCTATTGACG 2401 TCAATGACGG TAAATGGCCC GCCTGGCATT ATGCCCAGTA CATGACCTTA TGGGACTTTC 2461 CTACTTGGCA GTACATCTAC GTATTAGTCA TCGCTATTAC CATGGTGATG CGGTTTTGGC 2521 AGTACATCAA TGGGCGTGGA TAGCGGTTTG ACTCACGGGG ATTTCCAAGT CTCCACCCCA 2581 TTGACGTCAA TGGGAGTTTG TTTTGGCACC AAAATCAACG GGACTTTCCA AAATGTCGTA 2641 ACAACTCCGC CCCATTGACG CAAATGGGCG GTAGGCGTGT ACGGTGGGAG GTCTATATAA 2701 GCAGAGCTCG TTTAGTGAAC CGTCAGATCG CCTGGAGACG CCATCCACGC TGTTTTGACC 2761 TCCATAGAAG ACACCGACTC TACTAGAGGA TCTATTTCCG GTGAATTCCT CGAGACTAGT 2821 TCTAGAGCGG CCGCGGATCC CGCCCCTCTC CCTCCCCCCC CCCTAACGTT ACTGGCCGAA 2881 GCCGCTTGGA ATAAGGCCGG TGTGCGTTTG TCTATATGTT ATTTTCCACC ATATTGCCGT 2941 CTTTTGGCAA TGTGAGGGCC CGGAAACCTG GCCCTGTCTT CTTGACGAGC ATTCCTAGGG 3001 GTCTTTCCCC TCTCGCCAAA GGAATGCAAG GTCTGTTGAA TGTCGTGAAG GAAGCAGTTC 3061 CTCTGGAAGC TTCTTGAAGA CAAACAACGT CTGTAGCGAC CCTTTGCAGG CAGCGGAACC 3121 CCCCACCTGG CGACAGGTGC CTCTGCGGCC AAAAGCCACG TGTATAAGAT ACACCTGCAA 3181 AGGCGGCACA ACCCCAGTGC CACGTTGTGA GTTGGATAGT TGTGGAAAGA GTCAAATGGC 3241 TCTCCTCAAG CGTATTCAAC AAGGGGCTGA AGGATGCCCA GAAGGTACCC CATTGTATGG 3301 GATCTGATCT GGGGCCTCGG TGCACATGCT TTACATGTGT TTAGTCGAGG TTAAAAAAAC 3361 GTCTAGGCCC CCCGAACCAC GGGGACGTGG TTTTCCTTTG AAAAACACGA TGATAAGCTT 3421 GCCACAACCA TGGCTGAACA AGATGGATTG CACGCAGGTT CTCCGGCCGC TTGGGTGGAG 3481 AGGCTATTCG GCTATGACTG GGCACAACAG ACAATCGGCT GCTCTGATGC CGCCGTGTTC 3541 CGGCTGTCAG CGCAGGGGCG CCCGGTTCTT TTTGTCAAGA CCGACCTGTC CGGTGCCCTG 3601 AATGAACTGC AGGACGAGGC AGCGCGGCTA TCGTGGCTGG CCACGACGGG CGTTCCTTGC 3661 GCAGCTGTGC TCGACGTTGT CACTGAAGCG GGAAGGGACT GGCTGCTATT GGGCGAAGTG 3721 CCGGGGCAGG ATCTCCTGTC ATCTCACCTT GCTCCTGCCG AGAAAGTATC CATCATGGCT 3781 GATGCAATGC GGCGGCTGCA TACGCTTGAT CCGGCTACCT GCCCATTCGA CCACCAAGCG 3841 AAACATCGCA TCGAGCGAGC ACGTACTCGG ATGGAAGCCG GTCTTGTCGA TCAGGATGAT 3901 CTGGACGAAG AGCATCAGGG GCTCGCGCCA GCCGAACTGT TCGCCAGGCT CAAGGCGCGC 3961 ATGCCCGACG GCGAGGATCT CGTCGTGACC CATGGCGATG CCTGCTTGCC GAATATCATG 4021 GTGGAAAATG GCCGCTTTTC TGGATTCATC GACTGTGGCC GGCTGGGTGT GGCGGACCGC 4081 TATCAGGACA TAGCGTTGGC TACCCGTGAT ATTGCTGAAG AGCTTGGCGG CGAATGGGCT4141 GACCGCTTCC TCGTGCTTTA CGGTATCGCC GCTCCCGATT CGCAGCGCAT CGCCTTCTAT 4201 CGCCTTCTTG ACGAGTTCTT CTGAACGCGT CTGGAACAAT CAACCTCTGG ATTACAAAAT 4261 TTGTGAAAGA TTGACTGGTA TTCTTAACTA TGTTGCTCCT TTTACGCTAT GTGGATACGC 4321 TGCTTTAATG CCTTTGTATC ATGCTATTGC TTCCCGTATG GCTTTCATTT TCTCCTCCTT4381 GTATAAATCC TGGTTGCTGT CTCTTTATGA GGAGTTGTGG CCCGTTGTCA GGCAACGTGG 4441 CGTGGTGTGC ACTGTGTTTG CTGACGCAAC CCCCACTGGT TGGGGCATTG CCACCACCTG 4501 TCAGCTCCTT TCCGGGACTT TCGCTTTCCC CCTCCCTATT GCCACGGCGG AACTCATCGC 4561 CGCCTGCCTT GCCCGCTGCT GGACAGGGGC TCGGCTGTTG GGCACTGACA ATTCCGTGGT 4621 GTTGTCGGGG AAGCTGACGT CCTTTCCATG GCTGCTCGCC TGTGTTGCCA CCTGGATTCT 4681 GCGCGGGACG TCCTTCTGCT ACGTCCCTTC GGCCCTCAAT CCAGCGGACC TTCCTTCCCG 4741 CGGCCTGCTG CCGGCTCTGC GGCCTCTTCC GCGTCTTCGC CTTCGCCCTC AGACGAGTCG 4801 GATCTCCCTT TGGGCCGCCT CCCCGCCTGG AATTAATTCT GCAGTCGAGA CCTAGAAAAA 4861 CATGGAGCAA TCACAAGTAG CAATACAGCA GCTACCAATG CTGATTGTGC CTGGCTAGAA 4921 GCACAAGAGG AGGAGGAGGT GGGTTTTCCA GTCACACCTC AGGTACCTTT AAGACCAATG 4981 ACTTACAAGG CAGCTGTAGA TCTTAGCCAC TTTTTAAAAG AAAAGAGGGG ACTGGAAGGG 5041 CTAATTCACT CCCAACGAAG ACAAGATATC CTTGATCTGT GGATCTACCA CACACAAGGC 5101 TACTTCCCTG ATTAGCAGAA CTACACACCA GGGCCAGGGG TCAGATATCC ACTGACCTTT 5161 GGATGGTGCT ACAAGCTAGT ACCAGTTGAG CCAGATAAGG TAGAAGAGGC CAATAAAGGA 5221 GAGAACACCA GCTTGTTACA CCCTGTGAGC CTGCATGGGA TGGATGACCC GGAGAGAGAA 5281 GTGTTAGAGT GGAGGTTTGA CAGCCGCCTA GCATTTCATC ACGTGGCCCG AGAGCTGCAT 5341 CCGGAGTACT TCAAGAACTG CTGATATCGA GCTTGCTACA AGGGACTTTC CGCTGGGGAC 5401 TTTCCAGGGA GGCGTGGCCT GGGCGGGACT GGGGAGTGGC GAGCCCTCAG ATCCTGCATA 5461 TAAGCAGCTG CTTTTTGCCT GTACTGGGTC TCTCTGGTTA GACCAGATCT GAGCCTGGGA 5521 GCTCTCTGGC TAACTAGGGA ACCCACTGCT TAAGCCTCAA TAAAGCTTGC CTTGAGTGCT 5581 TCAAGTAGTG TGTGCCCGTC TGTTGTGTGA CTCTGGTAAC TAGAGATCCC TCAGACCCTT 5641 TTAGTCAGTG TGGAAAATCT CTAGCAGTAG TAGTTCATGT CATCTTATTA TTCAGTATTT 5701 ATAACTTGCA AAGAAATGAA TATCAGAGAG TGAGAGGCCT TGACATTGCT AGCGTTTACC 5761 GTCGACCTCT AGCTAGAGCT TGGCGTAATC ATGGTCATAG CTGTTTCCTG TGTGAAATTG 5821 TTATCCGCTC ACAATTCCAC ACAACATACG AGCCGGAAGC ATAAAGTGTA AAGCCTGGGG 5881 TGCCTAATGA GTGAGCTAAC TCACATTAAT TGCGTTGCGC TCACTGCCCG CTTTCCAGTC 5941 GGGAAACCTG TCGTGCCAGC TGCATTAATG AATCGGCCAA CGCGCGGGGA GAGGCGGTTT 6001 GCGTATTGGG CGCTCTTCCG CTTCCTCGCT CACTGACTCG CTGCGCTCGG TCGTTCGGCT 6061 GCGGCGAGCG GTATCAGCTC ACTCAAAGGC GGTAATACGG TTATCCACAG AATCAGGGGA 6121 TAACGCAGGA AAGAACATGT GAGCAAAAGG CCAGCAAAAG GCCAGGAACC GTAAAAAGGC 6181 CGCGTTGCTG GCGTTTTTCC ATAGGCTCCG CCCCCCTGAC GAGCATCACA AAAATCGACG 6241 CTCAAGTCAG AGGTGGCGAA ACCCGACAGG ACTATAAAGA TACCAGGCGT TTCCCCCTGG 6301 AAGCTCCCTC GTGCGCTCTC CTGTTCCGAC CCTGCCGCTT ACCGGATACC TGTCCGCCTT 6361 TCTCCCTTCG GGAAGCGTGG CGCTTTCTCA TAGCTCACGC TGTAGGTATC TCAGTTCGGT 6421 GTAGGTCGTT CGCTCCAAGC TGGGCTGTGT GCACGAACCC CCCGTTCAGC CCGACCGCTG 6481 CGCCTTATCC GGTAACTATC GTCTTGAGTC CAACCCGGTA AGACACGACT TATCGCCACT 6541 GGCAGCAGCC ACTGGTAACA GGATTAGCAG AGCGAGGTAT GTAGGCGGTG CTACAGAGTT 6601 CTTGAAGTGG TGGCCTAACT ACGGCTACAC TAGAAGAACA GTATTTGGTA TCTGCGCTCT 6661 GCTGAAGCCA GTTACCTTCG GAAAAAGAGT TGGTAGCTCT TGATCCGGCA AACAAACCAC 6721 CGCTGGTAGC GGTGGTTTTT TTGTTTGCAA GCAGCAGATT ACGCGCAGAA AAAAAGGATC6781 TCAAGAAGAT CCTTTGATCT TTTCTACGGG GTCTGACGCT CAGTGGAACG AAAACTCACG6841 TTAAGGGATT TTGGTCATGA GATTATCAAA AAGGATCTTC ACCTAGATCC TTTTAAATTA6901 AAAATGAAGT TTTAAATCAA TCTAAAGTAT ATATGAGTAA ACTTGGTCTG ACAGTTACCA6961 ATGCTTAATC AGTGAGGCAC CTATCTCAGC GATCTGTCTA TTTCGTTCAT CCATAGTTGC7021 CTGACTCCCC GTCGTGTAGA TAACTACGAT ACGGGAGGGC TTACCATCTG GCCCCAGTGC7081 TGCAATGATA CCGCGAGACC CACGCTCACC GGCTCCAGAT TTATCAGCAA TAAACCAGCC7141 AGCCGGAAGG GCCGAGCGCA GAAGTGGTCC TGCAACTTTA TCCGCCTCCA TCCAGTCTAT7201 TAATTGTTGC CGGGAAGCTA GAGTAAGTAG TTCGCCAGTT AATAGTTTGC GCAACGTTGT7261 TGCCATTGCT ACAGGCATCG TGGTGTCACG CTCGTCGTTT GGTATGGCTT CATTCAGCTC7321 CGGTTCCCAA CGATCAAGGC GAGTTACATG ATCCCCCATG TTGTGCAAAA AAGCGGTTAG7381 CTCCTTCGGT CCTCCGATCG TTGTCAGAAG TAAGTTGGCC GCAGTGTTAT CACTCATGGT7441 TATGGCAGCA CTGCATAATT CTCTTACTGT CATGCCATCC GTAAGATGCT TTTCTGTGAC7501 TGGTGAGTAC TCAACCAAGT CATTCTGAGA ATAGTGTATG CGGCGACCGA GTTGCTCTTG7561 CCCGGCGTCA ATACGGGATA ATACCGCGCC ACATAGCAGA ACTTTAAAAG TGCTCATCAT7621 TGGAAAACGT TCTTCGGGGC GAAAACTCTC AAGGATCTTA CCGCTGTTGA GATCCAGTTC7681 GATGTAACCC ACTCGTGCAC CCAACTGATC TTCAGCATCT TTTACTTTCA CCAGCGTTTC7741 TGGGTGAGCA AAAACAGGAA GGCAAAATGC CGCAAAAAAG GGAATAAGGG CGACACGGAA7801 ATGTTGAATA CTCATACTCT TCCTTTTTCA ATATTATTGA AGCATTTATC AGGGTTATTG7861 TCTCATGAGC GGATACATAT TTGAATGTAT TTAGAAAAAT AAACAAATAG GGGTTCCGCG7921 CACATTTCCC CGAAAAGTGC CACCTGACGT CGACGGATCG GGAGATCAAC TTGTTTATTG7981 CAGCTTATAA TGGTTACAAA TAAAGCAATA GCATCACAAA TTTCACAAAT AAAGCATTTT8041 TTTCACTGCA TTCTAGTTGT GGTTTGTCCA AACTCATCAA TGTATCTTAT CATGTCTGGA8101 TCAACTGGAT AACTCAAGCT AACCAAAATC ATCCCAAACT TCCCACCCCA TACCCTATTA8161 CCACTGCCAA TTACCTGTGG TTTCATTTAC TCTAAACCTG TGATTCCTCT GAATTATTTT8221 CATTTTAAAG AAATTGTATT TGTTAAATAT GTACTACAAA CTTAGTAGT//pLVX-IRES-Neo其他相关慢病毒载体：Tet-pLKO-neo Tet-pLKO-puro pPACKH1-GAGpMD2.G pCMV-dR8.2-dvpr pLKO.1-GFP-shRNA pLKO.1-TRC control pLKO.1-hygro pLKO.1-TRCpCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro FUW-tetO-hOKMSFUW-tetO-hOCT4 FUW-tetO-hSOX2 FUW-tetO-hKLF4FUW pLVX-AcGFP1-N1 pLVX-AcGFP1-C1pLVX-AmCyan1-N1 pLVX-DsRed-Express2-C1 pLVX-DsRed-Express2-N1 pLVX-DsRed-Monomer-N1 pLVX-PAmCherry-C1 pLVX-PAmCherry-N1 pLVX-ZsGreen1-N1 pLVX-IRES-ZsGreen1 pLVX-IRES-mCherry pLVX-mCherry-C1 pLVX-mCherry-N1 pLVX-tdTomato-C1 pLKO.1-puro pLentilox 3.7 pLVX-Tet-On-Advanced pLVX-IRES-Puro pLVX-IRES-Neo pLVX-IRES-HygpLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 pLVX-EF1α-AcGFP1-N1 pLVX-EF1α-AcGFP1-C1 pLVX-EF1α-mCherry-C1 pLVX-EF1α-IRES-mCherry pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-MetLuc Control pLVX-MetLuc pLVX-Hom-Mem1pLVX-Het-2 pLVX-DD-AcGFP1-Actin pPRIME-TET-GFP-FF3pSIH1-H1-CopGFP pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pLOX-CWBmi1 pLOX-CW-CREpRSV-rev pMDLg-pRRE pLL3.7pLVX-DD-AmCyan1 Control pLVX-DD-AmCyan1 Reporter pLVX-DD-tdTomato Reporter pLVX-DD-tdTomato Control pLVX-PTuner-Green pLVX-CherryPicker2pLVX-TetOne-Puro-Luc pLVX-TetOne pLVX-TetOne-PuropLVX-TetOne-Luc pLVX-rHom-Nuc1 pLVX-rHom-Sec1pLVX-rHom-1 pLVX-Hom-Nuc1 pLVX-Het-Nuc1pLVX-PTuner pLVX-PTuner2 pLVX-DD-ZsGreen1 Reporter pLVX-Het-1 pLVX-CherryPicker Control pLVX-Tet3GpCDH-CMV-MCS-EF1-RFP-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Hygro pCDH-CMV-MCS-EF1-Neo pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV pCDH1-MCS2-EF1-copGFP pCDF1-MCS2-EF1-Puro pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP pWPXL pLVX-TRE3G-ZsGreen1 pLVX-TRE3G-mCherry pLenti6.3-EmGFP-BveI miR pLenti6/V5-GW/lacZpLenti6.3/V5-GW/EmGFP pLenti6.3-MCS pLenti6.3-DsRed2-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP pLVX-shRNA2 psPAX2VSV-G pSico PGK Puro pcDNA6.2-DsRed2-MCS1 miR pcDNA6.3-EmGFP-NC- II pcDNA6.2-EmGFP-NC- I pcDNA6.2-EmGFP-BsaI miR pLenti6.3-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-DsRed2 pLEX-MCSpGIPZ pLP2 pLP1FUGW pFUGW pLOX-Ttag-iresTKpMDLg/pRRE pLentG-KOSM pCMV-dR8.91pLVX-TRE3G-Luc Control pLVX-TRE3G-IRES pCgpvpSico pSicoR pLVTHMpGensil-1 pLVX-EF1α-IRES-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pPACKH1-REV pLVX-Het-Mem1 pLVX-shRNA1pLKO.1-puro-GFP-siRNA pPRIME-TREX-GFP-FF3 pcDNA6.2-DsRed2-BsmBI miR pCDH-MSCV-MCS-EF1-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP pLVX-TRE3GFUW-tetO-hMYC pLOX-TERT-iresTK pLP/VSVGFUW-M2rtTA pCDH-EF1-MCS-(PGK-Puro) pcDNA6.2-EmGFP-MCS1 miR pLVX-AmCyan1-C1 pLVX-Hom-1 pcDNA6.2-BsaI miRpLVX-DsRed-Monomer-C1 pLVX-mCherry-Actin pTRIPZpLVX-ZsGreen1-C1 pLVX-CherryPicker1 LeGO-iC2pLVX-IRES-tdTomato pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro pLKO.3GpLVX-tdTomato-N1 pLVX-PTuner2-C pLVX-PuropLVX-Tight-Puro pLVX-DD-ZsGreen1 Control pSicoR PGK PuropLVX-EF1α-DsRed-Monomer-N1 pCDH-UbC-MCS-EF1-Hygro pLVTHpLVX-EF1α-mCherry-N1 pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP。
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pLVX-Puro pLVX-Puro载体基本信息：载体名称: pLVX-Puro , pLVXpuro质粒类型: 哺乳动物细胞慢病毒表达载体高拷贝/低拷贝: 高拷贝启动子: CMV克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 8102 bp5' 测序引物及序列: CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG 3' 测序引物及序列: --载体标签: --载体抗性: 氨苄筛选标记: 嘌呤霉素备注: 含有组成型CMV启动子的慢病毒载体稳定性: /组成型: --病毒/非病毒: 慢病毒pLVX-Puro载体质粒图谱和多克隆位点信息：pLVX-Puro载体简介：DescriptionpLVX-Puro is an HIV-1-based, lentiviral expression vector. Lentiviral particles derived from the vector allow you to express your gene of interest in virtually any cell type, even primary cells. Expression of your gene is driven by the constitutively active human cytomegalovirus immediate early promoter (PCMV IE), located just upstream of the multiple cloning site (MCS), allowing constitutive, high level expression of your protein of interest.pLVX-Puro contains all of the viral processing elements necessary for the production of replication-incompetent lentivirus, as well as elements to improve viral titer, transgene expression, and overall vector function. The woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element (WPRE) promotes RNA processing events and enhances nuclear export of viral and transgene RNA (1), leading to increased viral titers from packaging cells, and enhanced expression of your gene of interest in target cells. In addition, the vector includes a Rev-response element (RRE), which further increases viral titers by enhancing the transport of unspliced viral RNA out of the nucleus (2). Finally, pLVX-Puro also contains a central polypurine tract (cPPT) element that increases nuclear importation of the viral genome during target cell infection, resulting in improved vector integration and more effi cient transduction (3). In addition to lentiviral elements, pLVX-Puro contains a puromycin resistance gene (Puror) under the control of the murine phosphoglycerate kinase (PGK) promoter (PPGK) for the selection of stable transductants. The vector also contains a pUC origin of replication and an E. coli ampicillin resistance gene (Ampr) for propagation and selection in bacteria.UsepLVX-Puro constitutively expresses your gene of interest from PCMV IE when transduced into target cells. Before the vector can be transduced into cells, however, it must be transfected into 293T packaging cells with our Lenti-X™ HT Packaging System (Cat. Nos. 632160 and 632161). This packaging system allows you to safely produce high titer, infectious,replication-incompetent, VSV-G pseudotyped lentiviral particles that can infect a wide range of cell types, including non-dividing and primary cells (4).pLVX-Puro载体序列：ORIGIN1 TGGAAGGGCT AATTCACTCC CAAAGAAGAC AAGATATCCT TGATCTGTGG ATCTACCACA61 CACAAGGCTA CTTCCCTGAT TAGCAGAACT ACACACCAGG GCCAGGGGTC AGATATCCAC121 TGACCTTTGG ATGGTGCTAC AAGCTAGTAC CAGTTGAGCC AGATAAGGTA GAAGAGGCCA181 ATAAAGGAGA GAACACCAGC TTGTTACACC CTGTGAGCCT GCATGGGATG GATGACCCGG 241 AGAGAGAAGT GTTAGAGTGG AGGTTTGACA GCCGCCTAGC ATTTCATCAC GTGGCCCGAG 301 AGCTGCATCC GGAGTACTTC AAGAACTGCT GATATCGAGC TTGCTACAAG GGACTTTCCG 361 CTGGGGACTT TCCAGGGAGG CGTGGCCTGG GCGGGACTGG GGAGTGGCGA GCCCTCAGAT 421 CCTGCATATA AGCAGCTGCT TTTTGCCTGT ACTGGGTCTC TCTGGTTAGA CCAGATCTGA 481 GCCTGGGAGC TCTCTGGCTA ACTAGGGAAC CCACTGCTTA AGCCTCAATA AAGCTTGCCT 541 TGAGTGCTTC AAGTAGTGTG TGCCCGTCTG TTGTGTGACT CTGGTAACTA GAGATCCCTC 601 AGACCCTTTT AGTCAGTGTG GAAAATCTCT AGCAGTGGCG CCCGAACAGG GACTTGAAAG 661 CGAAAGGGAA ACCAGAGGAG CTCTCTCGAC GCAGGACTCG GCTTGCTGAA GCGCGCACGG 721 CAAGAGGCGA GGGGCGGCGA CTGGTGAGTA CGCCAAAAAT TTTGACTAGC GGAGGCTAGA 781 AGGAGAGAGA TGGGTGCGAG AGCGTCAGTA TTAAGCGGGG GAGAATTAGA TCGCGATGGG 841 AAAAAATTCG GTTAAGGCCA GGGGGAAAGA AAAAATATAA ATTAAAACAT ATAGTATGGG 901 CAAGCAGGGA GCTAGAACGA TTCGCAGTTA ATCCTGGCCT GTTAGAAACA TCAGAAGGCT 961 GTAGACAAAT ACTGGGACAG CTACAACCAT CCCTTCAGAC AGGATCAGAA GAACTTAGAT 1021 CATTATATAA TACAGTAGCA ACCCTCTATT GTGTGCATCA AAGGATAGAG ATAAAAGACA 1081 CCAAGGAAGC TTTAGACAAG ATAGAGGAAG AGCAAAACAA AAGTAAGACC ACCGCACAGC 1141 AAGCGGCCGG CCGCTGATCT TCAGACCTGG AGGAGGAGAT ATGAGGGACA ATTGGAGAAG 1201 TGAATTATAT AAATATAAAG TAGTAAAAAT TGAACCATTA GGAGTAGCAC CCACCAAGGC 1261 AAAGAGAAGA GTGGTGCAGA GAGAAAAAAG AGCAGTGGGA ATAGGAGCTT TGTTCCTTGG 1321 GTTCTTGGGA GCAGCAGGAA GCACTATGGG CGCAGCGTCA ATGACGCTGA CGGTACAGGC 1381 CAGACAATTA TTGTCTGGTA TAGTGCAGCA GCAGAACAAT TTGCTGAGGG CTATTGAGGC 1441 GCAACAGCAT CTGTTGCAAC TCACAGTCTG GGGCATCAAG CAGCTCCAGG CAAGAATCCT 1501 GGCTGTGGAA AGATACCTAA AGGATCAACA GCTCCTGGGG ATTTGGGGTT GCTCTGGAAA 1561 ACTCATTTGC ACCACTGCTG TGCCTTGGAA TGCTAGTTGG AGTAATAAAT CTCTGGAACA 1621 GATTTGGAAT CACACGACCT GGATGGAGTG GGACAGAGAA ATTAACAATT ACACAAGCTT 1681 AATACACTCC TTAATTGAAG AATCGCAAAA CCAGCAAGAA AAGAATGAAC AAGAATTATT 1741 GGAATTAGAT AAATGGGCAA GTTTGTGGAA TTGGTTTAAC ATAACAAATT GGCTGTGGTA 1801 TATAAAATTA TTCATAATGA TAGTAGGAGG CTTGGTAGGT TTAAGAATAG TTTTTGCTGT 1861 ACTTTCTATA GTGAATAGAG TTAGGCAGGG ATATTCACCA TTATCGTTTC AGACCCACCT 1921 CCCAACCCCG AGGGGACCCG ACAGGCCCGA AGGAATAGAA GAAGAAGGTG GAGAGAGAGA 1981 CAGAGACAGA TCCATTCGAT TAGTGAACGG ATCTCGACGG TATCGCCTTT AAAAGAAAAG 2041 GGGGGATTGG GGGGTACAGT GCAGGGGAAA GAATAGTAGA CATAATAGCA ACAGACATAC 2101 AAACTAAAGA ATTACAAAAA CAAATTACAA AAATTCAAAA TTTTCGGGTT TATTACAGGG 2161 ACAGCAGAGA TCCAGTTTAT CGATAAGCTT GGGAGTTCCG CGTTACATAA CTTACGGTAA 2221 ATGGCCCGCC TGGCTGACCG CCCAACGACC CCCGCCCATT GACGTCAATA ATGACGTATG 2281 TTCCCATAGT AACGCCAATA GGGACTTTCC ATTGACGTCA ATGGGTGGAG TATTTACGGT 2341 AAACTGCCCA CTTGGCAGTA CATCAAGTGT ATCATATGCC AAGTACGCCC CCTATTGACG 2401 TCAATGACGG TAAATGGCCC GCCTGGCATT ATGCCCAGTA CATGACCTTA TGGGACTTTC 2461 CTACTTGGCA GTACATCTAC GTATTAGTCA TCGCTATTAC CATGGTGATG CGGTTTTGGC 2521 AGTACATCAA TGGGCGTGGA TAGCGGTTTG ACTCACGGGG ATTTCCAAGT CTCCACCCCA 2581 TTGACGTCAA TGGGAGTTTG TTTTGGCACC AAAATCAACG GGACTTTCCA AAATGTCGTA 2641 ACAACTCCGC CCCATTGACG CAAATGGGCG GTAGGCGTGT ACGGTGGGAG GTCTATATAA 2701 GCAGAGCTCG TTTAGTGAAC CGTCAGATCG CCTGGAGACG CCATCCACGC TGTTTTGACC 2761 TCCATAGAAG ACACCGACTC TACTAGAGGA TCGCTAGCGC TACCGGACTC AGATCTCGAG2821 CTCAAGCTTC GAATTCTGCA GTCGACGGTA CCGCGGGCCC GGGATCCCGC GACTCTAGAT 2881 AATTCTACCG GGTAGGGGAG GCGCTTTTCC CAAGGCAGTC TGGAGCATGC GCTTTAGCAG 2941 CCCCGCTGGG CACTTGGCGC TACACAAGTG GCCTCTGGCC TCGCACACAT TCCACATCCA 3001 CCGGTAGGCG CCAACCGGCT CCGTTCTTTG GTGGCCCCTT CGCGCCACCT TCTACTCCTC 3061 CCCTAGTCAG GAAGTTCCCC CCCGCCCCGC AGCTCGCGTC GTGCAGGACG TGACAAATGG 3121 AAGTAGCACG TCTCACTAGT CTCGTGCAGA TGGACAGCAC CGCTGAGCAA TGGAAGCGGG 3181 TAGGCCTTTG GGGCAGCGGC CAATAGCAGC TTTGCTCCTT CGCTTTCTGG GCTCAGAGGC 3241 TGGGAAGGGG TGGGTCCGGG GGCGGGCTCA GGGGCGGGCT CAGGGGCGGG GCGGGCGCCC 3301 GAAGGTCCTC CGGAGGCCCG GCATTCTGCA CGCTTCAAAA GCGCACGTCT GCCGCGCTGT 3361 TCTCCTCTTC CTCATCTCCG GGCCTTTCGA CCTGCAGCCC AAGCTTACCA TGACCGAGTA 3421 CAAGCCCACG GTGCGCCTCG CCACCCGCGA CGACGTCCCC AGGGCCGTAC GCACCCTCGC 3481 CGCCGCGTTC GCCGACTACC CCGCCACGCG CCACACCGTC GATCCGGACC GCCACATCGA 3541 GCGGGTCACC GAGCTGCAAG AACTCTTCCT CACGCGCGTC GGGCTCGACA TCGGCAAGGT 3601 GTGGGTCGCG GACGACGGCG CCGCGGTGGC GGTCTGGACC ACGCCGGAGA GCGTCGAAGC 3661 GGGGGCGGTG TTCGCCGAGA TCGGCCCGCG CATGGCCGAG TTGAGCGGTT CCCGGCTGGC 3721 CGCGCAGCAA CAGATGGAAG GCCTCCTGGC GCCGCACCGG CCCAAGGAGC CCGCGTGGTT 3781 CCTGGCCACC GTCGGCGTCT CGCCCGACCA CCAGGGCAAG GGTCTGGGCA GCGCCGTCGT 3841 GCTCCCCGGA GTGGAGGCGG CCGAGCGCGC CGGGGTGCCC GCCTTCCTGG AGACCTCCGC 3901 GCCCCGCAAC CTCCCCTTCT ACGAGCGGCT CGGCTTCACC GTCACCGCCG ACGTCGAGGT 3961 GCCCGAAGGA CCGCGCACCT GGTGCATGAC CCGCAAGCCC GGTGCCTGAC CGCGTCTGGA 4021 ACAATCAACC TCTGGATTAC AAAATTTGTG AAAGATTGAC TGGTATTCTT AACTATGTTG 4081 CTCCTTTTAC GCTATGTGGA TACGCTGCTT TAATGCCTTT GTATCATGCT ATTGCTTCCC4141 GTATGGCTTT CATTTTCTCC TCCTTGTATA AATCCTGGTT GCTGTCTCTT TATGAGGAGT4201 TGTGGCCCGT TGTCAGGCAA CGTGGCGTGG TGTGCACTGT GTTTGCTGAC GCAACCCCCA 4261 CTGGTTGGGG CATTGCCACC ACCTGTCAGC TCCTTTCCGG GACTTTCGCT TTCCCCCTCC 4321 CTATTGCCAC GGCGGAACTC ATCGCCGCCT GCCTTGCCCG CTGCTGGACA GGGGCTCGGC 4381 TGTTGGGCAC TGACAATTCC GTGGTGTTGT CGGGGAAGCT GACGTCCTTT CCATGGCTGC 4441 TCGCCTGTGT TGCCACCTGG ATTCTGCGCG GGACGTCCTT CTGCTACGTC CCTTCGGCCC 4501 TCAATCCAGC GGACCTTCCT TCCCGCGGCC TGCTGCCGGC TCTGCGGCCT CTTCCGCGTC 4561 TTCGCCTTCG CCCTCAGACG AGTCGGATCT CCCTTTGGGC CGCCTCCCCG CCTGGAATTA 4621 ATTCTGCAGT CGAGACCTAG AAAAACATGG AGCAATCACA AGTAGCAATA CAGCAGCTAC 4681 CAATGCTGAT TGTGCCTGGC TAGAAGCACA AGAGGAGGAG GAGGTGGGTT TTCCAGTCAC 4741 ACCTCAGGTA CCTTTAAGAC CAATGACTTA CAAGGCAGCT GTAGATCTTA GCCACTTTTT 4801 AAAAGAAAAG AGGGGACTGG AAGGGCTAAT TCACTCCCAA CGAAGACAAG ATATCCTTGA 4861 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pLKO.1-TRCpCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro FUW-tetO-hOKMSFUW-tetO-hOCT4 FUW-tetO-hSOX2 FUW-tetO-hKLF4FUW pLVX-AcGFP1-N1 pLVX-AcGFP1-C1pLVX-AmCyan1-N1 pLVX-DsRed-Express2-C1 pLVX-DsRed-Express2-N1 pLVX-DsRed-Monomer-N1 pLVX-PAmCherry-C1 pLVX-PAmCherry-N1pLVX-ZsGreen1-N1 pLVX-IRES-ZsGreen1 pLVX-IRES-mCherrypLVX-mCherry-C1 pLVX-mCherry-N1 pLVX-tdTomato-C1 pLKO.1-puro pLentilox 3.7 pLVX-Tet-On-Advanced pLVX-IRES-Puro pLVX-IRES-Neo pLVX-IRES-HygpLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 pLVX-EF1α-AcGFP1-N1 pLVX-EF1α-AcGFP1-C1 pLVX-EF1α-mCherry-C1 pLVX-EF1α-IRES-mCherry pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-MetLuc Control pLVX-MetLuc pLVX-Hom-Mem1pLVX-Het-2 pLVX-DD-AcGFP1-Actin pPRIME-TET-GFP-FF3pSIH1-H1-CopGFP pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pLOX-CWBmi1 pLOX-CW-CREpRSV-rev pMDLg-pRRE pLL3.7pLVX-DD-AmCyan1 Control pLVX-DD-AmCyan1 Reporter pLVX-DD-tdTomato Reporter pLVX-DD-tdTomato Control pLVX-PTuner-Green pLVX-CherryPicker2pLVX-TetOne-Puro-Luc pLVX-TetOne pLVX-TetOne-PuropLVX-TetOne-Luc pLVX-rHom-Nuc1 pLVX-rHom-Sec1pLVX-rHom-1 pLVX-Hom-Nuc1 pLVX-Het-Nuc1pLVX-PTuner pLVX-PTuner2 pLVX-DD-ZsGreen1 Reporter pLVX-Het-1 pLVX-CherryPicker Control pLVX-Tet3GpCDH-CMV-MCS-EF1-RFP-T2A-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-Hygro pCDH-CMV-MCS-EF1-Neo pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV pCDH1-MCS2-EF1-copGFP pCDF1-MCS2-EF1-Puro pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP pWPXL pLVX-TRE3G-ZsGreen1 pLVX-TRE3G-mCherry pLenti6.3-EmGFP-BveI miR pLenti6/V5-GW/lacZpLenti6.3/V5-GW/EmGFP pLenti6.3-MCS pLenti6.3-DsRed2-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP pLVX-shRNA2 psPAX2VSV-G pSico PGK Puro pcDNA6.2-DsRed2-MCS1 miR pcDNA6.3-EmGFP-NC- II pcDNA6.2-EmGFP-NC- I pcDNA6.2-EmGFP-BsaI miR pLenti6.3-BveI miR pLenti6.3-MCS-IRES2-DsRed2 pLEX-MCSpGIPZ pLP2 pLP1FUGW pFUGW pLOX-Ttag-iresTKpMDLg/pRRE pLentG-KOSM pCMV-dR8.91pLVX-TRE3G-Luc Control pLVX-TRE3G-IRES pCgpvpSico pSicoR pLVTHMpGensil-1 pLVX-EF1α-IRES-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP pPACKH1-REV pLVX-Het-Mem1 pLVX-shRNA1pLKO.1-puro-GFP-siRNA pPRIME-TREX-GFP-FF3 pcDNA6.2-DsRed2-BsmBI miR pCDH-MSCV-MCS-EF1-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP pLVX-TRE3GFUW-tetO-hMYC pLOX-TERT-iresTK pLP/VSVGFUW-M2rtTA pCDH-EF1-MCS-(PGK-Puro) pcDNA6.2-EmGFP-MCS1 miR pLVX-AmCyan1-C1 pLVX-Hom-1 pcDNA6.2-BsaI miRpLVX-DsRed-Monomer-C1 pLVX-mCherry-Actin pTRIPZpLVX-ZsGreen1-C1 pLVX-CherryPicker1 LeGO-iC2pLVX-IRES-tdTomato pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro pLKO.3GpLVX-tdTomato-N1 pLVX-PTuner2-C pLVX-PuropLVX-Tight-Puro pLVX-DD-ZsGreen1 Control pSicoR PGK PuropLVX-EF1α-DsRed-Monomer-N1 pCDH-UbC-MCS-EF1-Hygro pLVTHpLVX-EF1α-mCherry-N1 pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP。