液质分析条件的优化策略课件(PPT42页)
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《液相色谱分析法》课件
液相色谱分析法
,
汇报人：
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理：对检测到的信号 进行处理，得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定 量结果，对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的 质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降 低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当 的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色 谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱 中分离，根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检 测器时，检测器对样品进 行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்
,
汇报人：
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理：对检测到的信号 进行处理，得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定 量结果，对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的 质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降 低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当 的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色 谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱 中分离，根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检 测器时，检测器对样品进 行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்
液质联用ppt课件
14
HPLC分离原理
最广的色谱法是反相色谱 主要用于分离非极性至中等极性的各类分子型
化合物，因为键合相表面的官能团不流失，溶 剂的极性可以在很大范围内调整，因此应用范 围很宽。 十八烷基（C18）化学键合相是最常用的非极性 键合相，反相键合相表面具有非极性烷基官能 团，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性 能，剩余硅醇基的多寡，视覆盖率而定。因此， 分离机制比较复杂。
很大，相应源参数也应该改变，所以恒定比例 流动相能满足分离分析要求时，尽量不用梯度， 尤其定量分析时
39
流动相的选择
流动相中加入甲酸、乙酸等可提高正离子化效 率
(**)液质联用中，流动相有时需要加入缓冲盐 A CH3COONH4 B HCOONH4 C KH2PO3 是否加酸不是绝对的，具体应根据LC的分离情
18
离子化的方法(Ionisation Methods)
电子轰击电离 EI 化学离子化 CI 场电离，场解吸 FD 快原子轰击 FAB 基质辅助激光解析电离 电喷雾电离 ESI 大气压化学电离 APCI
MALDI
19
电喷雾电离源 Electrospray Ionization (ESI)
37
仪器测试条件的选择
液相色谱条件 质谱条件
38
HPLC条件的选择(流动相)
根据化合物类型选择流动相组成，甲醇-水，乙 腈-水或甲醇-乙腈-水（**DMF、DMSO、 DCSO、THF ）
某些化合物只有某种流动相体系才出峰 一般正离子方式用甲醇，负离子方式用乙腈好
些 梯度的设定：梯度变化太快对离子化效率影响
+ ++ ++ +
HPLC分离原理
最广的色谱法是反相色谱 主要用于分离非极性至中等极性的各类分子型
化合物，因为键合相表面的官能团不流失，溶 剂的极性可以在很大范围内调整，因此应用范 围很宽。 十八烷基（C18）化学键合相是最常用的非极性 键合相，反相键合相表面具有非极性烷基官能 团，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性 能，剩余硅醇基的多寡，视覆盖率而定。因此， 分离机制比较复杂。
很大，相应源参数也应该改变，所以恒定比例 流动相能满足分离分析要求时，尽量不用梯度， 尤其定量分析时
39
流动相的选择
流动相中加入甲酸、乙酸等可提高正离子化效 率
(**)液质联用中，流动相有时需要加入缓冲盐 A CH3COONH4 B HCOONH4 C KH2PO3 是否加酸不是绝对的，具体应根据LC的分离情
18
离子化的方法(Ionisation Methods)
电子轰击电离 EI 化学离子化 CI 场电离，场解吸 FD 快原子轰击 FAB 基质辅助激光解析电离 电喷雾电离 ESI 大气压化学电离 APCI
MALDI
19
电喷雾电离源 Electrospray Ionization (ESI)
37
仪器测试条件的选择
液相色谱条件 质谱条件
38
HPLC条件的选择(流动相)
根据化合物类型选择流动相组成，甲醇-水，乙 腈-水或甲醇-乙腈-水（**DMF、DMSO、 DCSO、THF ）
某些化合物只有某种流动相体系才出峰 一般正离子方式用甲醇，负离子方式用乙腈好
些 梯度的设定：梯度变化太快对离子化效率影响
+ ++ ++ +
液质联用中质谱条件的优化策略(PPT42页)
合适的液相色谱平台
• 能提供一个连续、稳定的液流环境 • 真空脱气设备 • 系统的死体积尽可能小，减少管路的长度 • 输液泵的设计能适用于微径柱的要求 • 二极管阵列检测器的池体积与质谱仪匹配 • 必要的液相色谱辅助配件 • 必要的液相色谱与质谱仪的软件操作平台
合适的液相色谱柱
• 柱内径：2.1mm • 柱长度：
Area Nortriptyline Propranolol Tetracycline
Caffeine Tryptophan Paracetamol
Nicotinic acid
Salicylic acid
Compound
Solution Chemistry Effects on Positive Ion ESI-MS of Leu-Enkephalin
– Start with acetonitrile
01094
Useful pH Ranges for Volatile Buffers
Buffers normally used in LC/MS :
Buffer
Formate Acetate
??? Ammonia Diethylamine Triethylamine
1 .E+ 07 1 .E+ 07 1 .E+ 07 8 .E+ 06 6 .E+ 06 4 .E+ 06 2 .E+ 06 0 .E+ 00
Variation of pe ak ar ea with pH in positive ESI
0. 1%f o rmic pH 3 pH 5 pH 8 pH 9
0.005% TFA
• A significant increase in sensitivity of peptides was observed for most peptides analyzed using 5% acetic acid rather than TFA.
[课件]液质联用缺点及解决办法,药物分析PPT
![[课件]液质联用缺点及解决办法,药物分析PPT](https://img.taocdn.com/s3/m/58290d3ffad6195f302ba606.png)
残留效应是指在高浓度的样品进样分析后，在进样系统中
现在要检测一个化合物，但是在这个过程中受到另个 化合物的影响。影响物质比目标药物的分子量小1，而 且它的浓度是被监测的目标药物的20倍，以0.1%的甲 酸水和甲酸乙腈溶液为流动相分析时，保留时间非常接 近，跑了20min也没有分开。
二、多种物质的同时测定
对于复方制剂，当存在两种或多种药物的剂量相差悬殊 的情况时，通常会导致各个待测物在生物体液中的浓度相 差巨大，因而符合它们各自药代动力学研究的药物浓度的 线性范围也相差甚远。此时需要对各个待测物的质谱响应 、线性范围和灵敏度三者进行综合考虑。
虽然也有研究者尝试采用曲线回归法校正浓度与响应之 间的非线性关系, 但是该法的耐用性仍然是个未知数。若 不进行浓缩处理甚至为了保证良好的线性而稀释待测成分, 血药浓度低的成分的质谱响应就会降低，可能不能满足药 动学研究所需要达到的灵敏度。
加入添 加剂
在流动相中加入少量添加剂，如甲酸、乙酸、醋酸铵等，能够有效地降低基质带 来的背景干扰
四、专属性结果的可靠性
虽然目前质谱的选择性是其他检测器难以比拟的，但高 通量 LC-MS 分析有时会导致假阳性结果的出现，进而降 低测定结果的可靠性。特别是当待测样品中存在原型药物 的 II相代谢物时，假阳性结果出现的几率会更高。这是因 为这类代谢物容易在离子源内发生中性丢失反应形成与母 体药物相同的离子，从而影响对后者的准确定量 质谱的专属性有时还会受到其自身分辨力的限制，尤其 是当监测对象为单个离子或是伪离子对时，这种现象更为 明显。
改善色 谱峰形
内源性基质造成的竞争性离子化抑源自往往具有浓度依赖性，良好的色谱峰形可以 保证待测物流出色谱柱时尽可能得到富集和浓缩，进而降低基质效应产生的可 能性
液质联用讲座.ppt
• LC可以直接分析不挥发性化合物、极性化合物、热不稳 定化合物和大分子化合物(包括蛋白、多肽、多糖、多聚 物等)，分析范围广，而且不需衍生化步骤。
• MS是强有力的结构解析工具，能为结构定性提供较多的 信息，作为理想的色谱检测器，不仅特异性强，而且具有 极高的检测灵敏度。自1983年McLaffeny等 开发串联质 谱技术(MS／MS)以来，经过短短十几年的发展，串联质 谱已成为一种成熟的技术，在许多领域发挥了巨大作用。 串联质谱法是指质量分离的质谱检测技术，在单极质谱给 出化合物相对分子量的信息后，对准分子离子进行多级裂 解，进而获得丰富的化合物碎片信息，确认目标化合物， 对目标化合物进行定量等，有分离、结构解析同步完成的 特点，能直接分析混合物组分，有高度的选择性和可靠性， 其检测水平可以达到pg级
用MS2质量分析器扫描指定母离子的子离子碎片，所 得到的质谱图只能是由指定母离经碰撞产生。
子离子扫描，pruduct ion scan
• 子离子扫描可以得到母离子的碎片信息。这 些信息可以帮助操作者了解母离子的结构信 息，区别几种m/z相同的母离子，降低假阳 性率。 子离子扫描的作用是：
• 通过母离子碎片种类和强度的差异来区别 m/z相同的母离子
• 扫描类型选择
• 全扫描(Full Scan) • 子离子扫描(Daughter Scan) • 母离子扫描(Parent Scan) • 中性碎片丢失扫描(Constant Neutral Loss Scan) • 选择离子监测(SIR) • 多反应监测(MRM)
全扫描
• 全扫描用于检测离子源产生的离子流中，各种离 子的m/z和强度。从全扫描得到的信息可以知道 目前样品中的组分状态。
仪器用途
该系统是Waters-Micromass公司在2005年推出的一 款最新高质量三重四极杆串联液质联用仪，它能广泛应 用于医药、农药、生物化学、食品安全、环保、生命科 学等领域，它是解决不易挥发、热不稳定、大分子量及 宽极性范围等样品分析难题的强有力工具。通过高灵敏 度的串联质谱系统，结合高效液相色谱的分离或直接进 样可以详细地研究未知组分的结构。从分子水平上准确 阐述样品的化学成分，也十分适合新产品、新配方的开 发研制，同时可准确和深入地了解各种化合物的实质性 差异，并实时定性、定量地描述样品中的复杂组分的产
液质联用PPT
1. 质谱基本知识
1.4.4 质谱仪器类型-四极杆/线性离子阱质量分析器
Ion Accumulation (patented) Fragment Ion Generation
Q0
Q1
Q2
Q3
Ion trap MS Mass Selection
1、在串联四极杆的基础上，将Q3设计成线性离子阱 2、Q2中实现第一次的碎裂，进入Q3分析 ——空间串联 3、Q3的离子阱功能，可以进一步进行Frag/scan ，MSn－时间串联
2. 联用技术
2.2 液相色谱/质谱联用
• 高效液相色谱(HPLC)是分离化合物范围最广， 准确度高，对化合物破坏性小的快速分离方法， 特别适用于有机生物分子的分离。 • 质谱仪(MS)是灵敏度很高，对未知化合物的结构 分析定性准确，对被测定化合物和相应标准样品 的了解要求较低的定性手段。
2. 联用技术
2.2 .1 LC/MS连接时的主要问题 难挥发和/或热不稳定被分析物的离子化； 流速不兼容：LC的传统柱流速1ml/min.或 更高，而MS需在高真空条件下工作； 流动相不兼容：LC分离时经常加不挥发性 的缓冲液、添加剂等。
2. 联用技术
难挥发和/或热不稳定被分析物的离子化： ——应用软电离技术
☺ 快原子轰击(FAB)； ☺ 热喷雾(TS)； ☺ 电喷雾(ESI)； ☺ 基质辅助激光解吸离子化(MALDI)。
2. 联用技术
流动相不兼容：
☺ 尽量不使用不挥发性的流动相； ☺ 用挥发性溶剂置换不挥发性的缓冲液； ☺ 使用柱上连续流动液－液萃取技术； ☺ 利用双柱，进行相切换； ☺ 利用微膜离子抑制系统。
5. LC/MS/MS的应用
5.1 新生儿疾病的筛查
(完整版)液相色谱-质谱(LC-MS)联用的原理及应用ppt课件
? 其中ESI，APCI，APPI统称大气压电离 (API)
实验室现有的离子源:
? ESI电喷雾电离源 ? APCI大气压化学电离源
电喷雾（ESI）的特点
? 通常小分子得到[M+H]+ ]+,[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷 离子，生物大分子产生多电荷离子，由于质谱仪测 定质 / 荷比，因此质量范围只有几千质量数的质谱 仪可测定质量数十几万的生物大分子。
100 90 80 70 60 50 40
30 20 10
0
1.0
2.0质量色谱图3.0
4.0
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
1.0
2.0
总3离.0 子流图4.0
5.0
6.0
准分子离子:
? 指与分子存在简单关系的离子，通过它可 以确定分子量 .液质中最常见的准分子离子 峰是[M+H]+ 或[M-H]- .
电喷雾与大气压化学电离的比较
? 电离机理：电喷雾采用离子蒸发，而 APCI电离是 高压放电发生了质子转移而生成 [M＋H]+或[M-H]离子。
r
100
147255.00
Reconst uct of act
147415.00 147096.00
Int Ant ibod1y.15e2
50 147575.00
147224.00
146892.00
147532.00 147729.00
同位素离子
? 由元素的重同位素构成的离子称为同位素离子 . ? 各种元素的同位素 ,基本上按照其在自然界的
? 不同类型有机物有不同的裂解方式 ? 相同类型有机物有相同的裂解方式 ,只是质量
溶液的调配与分离PPT课件(初中科学)
配置一定质量分数的溶液
（1）配制溶液的一般步骤：
•计算：（固体计算质量、液体计算体积）
•称量：（固体秤质量、液体量体积）
•溶解：（在烧杯中溶解，用玻璃棒搅拌，冷却后装瓶，并贴上标签）
（2）需要的仪器：托盘天平、药匙、量筒、胶头滴管、烧杯、玻璃杯
溶解度与溶质质量分数的换算
溶解度与溶质质量分数的换算，是对一定温度下的饱和溶液而
1、溶解度曲线表示的意义：
(1)曲线上的点，表示某物质在某一温度下的溶解度。
(2)曲线的走向表示某物质的溶解度随温度的变化情况。
(3)两条溶解度曲线的交点表示两种溶质在某一温度下有相同的溶解度。
2、应用
(1)查找某一温度下某物质的溶解度。
(2)比较某一温度下两种物质溶解度的大小。
物质溶解性的等级
20℃时的溶解
大于10克
1－10克
0．01－1克
小于0.01克
易溶
可溶
微溶
难溶
度
溶解性等级
所谓的易溶、可溶、微溶、难溶时相对的。自然界没有绝对不溶解。习
惯上称作“不溶”的物质，只是溶解度很小，一般忽略不计而已。
溶解度与温度的关系
①．大多数固体物质的溶解度随着温度的升高而增大，如硝酸钾等；
某溶液的密度是1.2g/cm3，实验测得每100ml该溶液中含溶质
24g，求该溶液的溶质质量分数？
溶液稀释和浓缩的计算
（1）.溶液稀释就是往浓溶液中加溶剂变成稀溶液的过程。
（2）.溶液稀释问题的特点是:稀释前后溶液中溶质质量保持不变，即:
浓溶液的质量×浓溶液中溶质的质量分数＝ 稀溶液的质量×稀溶液中
⑤晶种的选择是关键，要获得形状完整的晶种，应使用纯净的硫酸铜，
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• Avoid Non-volatile Buffers – Alkali-metal phosphates, borates, etc.
01111
Change Retention to Improve Resolution – Select Solvents/ Modifiers that are MS Compatible
9.5 – 11.5 10 – 12
Intensity (peak area) F ormate pH
2.5 Phosphate
pH 2.5 Acetate pH
6.0 Phosphate
pH 6.0 Ammonia
pH 8.0 Phosphate
pH 8.0
01121
Effect of Buffer on Analyte Response
液质分析条件的优化策略课件(PPT42页)
液质分析条件的优化策略 （简化板）
液质分析条件的优化策略课件(PPT42页)
液相色谱与液质联用仪使用的要点
• 质量校正的正确 • 对于相关分析要有合适的支持软件（Maxnet，
TargeLyness） • 合适的液相色谱平台 • 合适的质谱接口方式 • 液相色谱分析中合适的色谱柱的选用 • 质谱检测模式的选择 • 必要的后液流补充
• Compatible LC/MS Buffers and Modifiers: – Formic acid, acetic acid, ammonium acetate, ammonium formate, ammonium hydroxide, trifluoroacetic acid – TFA concentration should be <0.1% v/v – Keep volatile buffer concentrations <20 mM to minimize ESI ion suppression
6.00
8.00
10.00 12.00 14.00 16.00 min
Suitable Solvents for LC/MS
• Reverse-Phase LC/MS Solvents – ACN, MeOH, H2O, Isopropanol
• Normal-Phase LC/MS Solvents (for APCI-MS) – Hexane, Methylene Chloride, Acetone, Ethanol
• Volatile buffer – minimize instrument downtime • Buffer concentration:
– High ion suppression decreases ESI sensitivity
– Low system adequately buffered? • pH range permitted by stationary phase • Methanol or acetonitrile
pKa
3.8 4.8
7 9.2
10.5 11.0
pH range
2.8 – 4.8 3.8 – 5.8
6–8 8.2 – 10.2
Buffer Concentrations/Additive amounts: • 10 to 50 mM • formic, acetic acids 0.01 - 1% v/v • trifluoroacetic acid <0.1% v/v • alkylamine type bases <0.1% v/v
质量校正的正确（Myoglobin校正）
质量校正的正确（Myoglobin校正）
质量校正的正确（CsI校正）的肽测定
质量校正的正确（CsI校正）的蛋白测定
质量校正的关键点
• 针对不同的分析采用不同的校正，一般 蛋白质采用Myoglobin，对于小分子分析 建议采用CsI校正。
• 对于采用Myoglobin校正的建议采用高次 方的校正曲线（3-4）；对CsI校正的建议 采用低次方的校正曲线（1-2）
Abundance
250000 200000 150000 100000 50000
1.0% HOAc
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00 12.00 14.00 16.00 min
Abundance
250000 200000 150000 100000 50000
0.2% TFA
2.00
4.00
合适的液相色谱平台
• 能提供一个连续、稳定的液流环境 • 真空脱气设备 • 系统的死体积尽可能小，减少管路的长度 • 输液泵的设计能适用于微径柱的要求 • 二极管阵列检测器的池体积与质谱仪匹配 • 必要的液相色谱辅助配件 • 必要的液相色谱与质谱仪的软件操作平台
合适的液相色谱柱
• 柱内径：2.1mm • 柱长度：
– Start with acetonitrile
01094
Useful pH Ranges for Volatile Buffers
Buffers normally used in MS :
Buffer
Formate Acetate
??? Ammonia Diethylamine Triethylamine
Mobile phase: A - 10mM buffer pH 6.0; B – methanol
Gradient: 5% to 75% in 4 min
3.E+08 3.E+08 2.E+08 2.E+08 1.E+08 5.E+07 0.E+00
Pr ocainamide Caffeine Propranolol Nortriptyline Oxazepam
根据分析的目的选择50mm或150mm • 柱填料选用新型的填料：
Symmetry，Discovery，Vydac，Zorbax， Xterra，Intersil，Diamonsil等
LC/MS Flow Injection Analysis of Peptides and Proteins by Reversed-Phase HPLC
Buffer type
Phosphate buffers suppress the MS response of caffeine at all pHs and also the MS response of Oxazepam at pH 8. Volatile buffers (formate, acetate, ammonia) generally provide good responses.
01111
Change Retention to Improve Resolution – Select Solvents/ Modifiers that are MS Compatible
9.5 – 11.5 10 – 12
Intensity (peak area) F ormate pH
2.5 Phosphate
pH 2.5 Acetate pH
6.0 Phosphate
pH 6.0 Ammonia
pH 8.0 Phosphate
pH 8.0
01121
Effect of Buffer on Analyte Response
液质分析条件的优化策略课件(PPT42页)
液质分析条件的优化策略 （简化板）
液质分析条件的优化策略课件(PPT42页)
液相色谱与液质联用仪使用的要点
• 质量校正的正确 • 对于相关分析要有合适的支持软件（Maxnet，
TargeLyness） • 合适的液相色谱平台 • 合适的质谱接口方式 • 液相色谱分析中合适的色谱柱的选用 • 质谱检测模式的选择 • 必要的后液流补充
• Compatible LC/MS Buffers and Modifiers: – Formic acid, acetic acid, ammonium acetate, ammonium formate, ammonium hydroxide, trifluoroacetic acid – TFA concentration should be <0.1% v/v – Keep volatile buffer concentrations <20 mM to minimize ESI ion suppression
6.00
8.00
10.00 12.00 14.00 16.00 min
Suitable Solvents for LC/MS
• Reverse-Phase LC/MS Solvents – ACN, MeOH, H2O, Isopropanol
• Normal-Phase LC/MS Solvents (for APCI-MS) – Hexane, Methylene Chloride, Acetone, Ethanol
• Volatile buffer – minimize instrument downtime • Buffer concentration:
– High ion suppression decreases ESI sensitivity
– Low system adequately buffered? • pH range permitted by stationary phase • Methanol or acetonitrile
pKa
3.8 4.8
7 9.2
10.5 11.0
pH range
2.8 – 4.8 3.8 – 5.8
6–8 8.2 – 10.2
Buffer Concentrations/Additive amounts: • 10 to 50 mM • formic, acetic acids 0.01 - 1% v/v • trifluoroacetic acid <0.1% v/v • alkylamine type bases <0.1% v/v
质量校正的正确（Myoglobin校正）
质量校正的正确（Myoglobin校正）
质量校正的正确（CsI校正）的肽测定
质量校正的正确（CsI校正）的蛋白测定
质量校正的关键点
• 针对不同的分析采用不同的校正，一般 蛋白质采用Myoglobin，对于小分子分析 建议采用CsI校正。
• 对于采用Myoglobin校正的建议采用高次 方的校正曲线（3-4）；对CsI校正的建议 采用低次方的校正曲线（1-2）
Abundance
250000 200000 150000 100000 50000
1.0% HOAc
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00 12.00 14.00 16.00 min
Abundance
250000 200000 150000 100000 50000
0.2% TFA
2.00
4.00
合适的液相色谱平台
• 能提供一个连续、稳定的液流环境 • 真空脱气设备 • 系统的死体积尽可能小，减少管路的长度 • 输液泵的设计能适用于微径柱的要求 • 二极管阵列检测器的池体积与质谱仪匹配 • 必要的液相色谱辅助配件 • 必要的液相色谱与质谱仪的软件操作平台
合适的液相色谱柱
• 柱内径：2.1mm • 柱长度：
– Start with acetonitrile
01094
Useful pH Ranges for Volatile Buffers
Buffers normally used in MS :
Buffer
Formate Acetate
??? Ammonia Diethylamine Triethylamine
Mobile phase: A - 10mM buffer pH 6.0; B – methanol
Gradient: 5% to 75% in 4 min
3.E+08 3.E+08 2.E+08 2.E+08 1.E+08 5.E+07 0.E+00
Pr ocainamide Caffeine Propranolol Nortriptyline Oxazepam
根据分析的目的选择50mm或150mm • 柱填料选用新型的填料：
Symmetry，Discovery，Vydac，Zorbax， Xterra，Intersil，Diamonsil等
LC/MS Flow Injection Analysis of Peptides and Proteins by Reversed-Phase HPLC
Buffer type
Phosphate buffers suppress the MS response of caffeine at all pHs and also the MS response of Oxazepam at pH 8. Volatile buffers (formate, acetate, ammonia) generally provide good responses.