关于诱导多功能干细胞的介绍和思考

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胚胎干细胞和诱导多能干细胞的研究

胚胎干细胞和诱导多能干细胞的研究

胚胎干细胞和诱导多能干细胞的研究胚胎干细胞和诱导多能干细胞是近年来研究的热点,关注度非常高。

通过这些研究可以了解人类生命的诞生和发展,也可以帮助科学家研发出更好的治疗方法,治疗失明、糖尿病、帕金森氏症等疾病。

一、胚胎干细胞胚胎干细胞是从胚胎形成的,具有未分化、自我更新、细胞分化为各种类型的能力。

胚胎干细胞是在胚胎早期形成的,一般在人类胚胎在体第5-7天左右形成。

由于这个早期的胚胎受精卵(单一细胞)会分裂成许多细胞,并形成球形的胚胎囊,其中的内层细胞就是胚胎干细胞。

胚胎干细胞是一种未分化的细胞,可以分化成各种类型的细胞,例如心脏细胞、神经元、肌肉细胞等。

这些细胞的产生需要受到适当的诱导因子控制。

胚胎干细胞的研究重要的原因之一是,它们可以用来替代损坏的、或者缺陷的组织,更好地治疗疾病。

然而,胚胎干细胞的使用也引起了道德上的争议。

许多人认为,提取胚胎干细胞需要摧毁胚胎,这是对生命的不尊重。

因此,许多国家对胚胎干细胞的研究和应用进行了限制。

二、诱导多能干细胞为了克服胚胎干细胞研究和应用的道德限制,科学家开始研究可以取代胚胎干细胞的新型多能干细胞——诱导多能干细胞。

诱导多能干细胞是指一种从成体细胞中转化而来的多利细胞。

其制备方法是通过将成体细胞(例如皮肤细胞等)收集,通过对目标基因的激活,使它们回到未分化状态,并可再次分化为其他类型的细胞。

诱导多能干细胞的制备方法包括四种方案:基因转导、化学法、微环境方案和蛋白质治疗。

其中,基因转导法是非常常用的一种方法,如通过转染四种转录因子的基因,使成体细胞重回多能状态。

与胚胎干细胞相比,诱导多能干细胞的研究是一种更安全、更可控的方法。

也因此,诱导多能干细胞的研究成为了众多科学家的研究焦点之一。

三、胚胎干细胞和诱导多能干细胞的区别除了制备方法上面的区别,诱导多能干细胞和胚胎干细胞还有很多其他的不同点。

首先,胚胎干细胞来源较为困难,而诱导多能干细胞的来源较为广泛。

诱导多能干细胞可以来自成年人的各种组织,比如皮肤细胞、肾细胞、肝细胞等,因为成年人很容易获取这些细胞。

诱导多功能干细胞的构建与应用

诱导多功能干细胞的构建与应用

诱导多功能干细胞的构建与应用
多功能干细胞是一种具有自我更新和多向分化潜能的细胞,具有非常广泛的应用前景。

本文将从诱导多功能干细胞的构建和应用两个方面进行分析。

首先,诱导多功能干细胞的构建是非常重要的。

传统上,多功能干细胞的获取需要从胚胎中提取干细胞,但这种方法存在一些伦理和法律问题。

因此,研究人员开始探索利用诱导因子来将非干细胞转化为多功能干细胞的方法。

这一技术被称为iPS技术,即诱导性多能干细胞技术。

iPS技术的主要原理是通过转染一组特定的因子,使成体细胞重新获得干细胞的特性。

这种技术在研究上已经被广泛应用,也为临床治疗提供了可能。

其次,多功能干细胞的应用也是非常重要的。

多功能干细胞可以用于治疗许多疾病,如心脏病、糖尿病和帕金森病等。

例如,将多功能干细胞移植到心脏病患者的心脏中,可以促进心肌细胞的再生,从而恢复心脏功能。

此外,多功能干细胞也可以用于疾病建模和药物筛选。

通过将多功能干细胞转化为疾病特定的细胞类型,可以方便地进行疾病模拟和药物筛选。

综上所述,诱导多功能干细胞的构建和应用都有着非常重要的意义。

随着相关技术的不断发展和进步,相信多功能干细胞的应用前景会变得更加广泛。

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人诱导干细胞ipsc检测标准_概述说明以及解释

人诱导干细胞ipsc检测标准_概述说明以及解释

人诱导干细胞ipsc检测标准概述说明以及解释1. 引言1.1 概述人诱导干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)是一种在体细胞经过基因重编程而得到的多能干细胞,在医学和生物学领域引起了广泛的兴趣和研究。

iPSC具有与胚胎干细胞相似的自我更新和分化潜能,同时又避免了使用胚胎来源的争议。

这使得它们成为研究人类发育、疾病机制以及药物筛选与治疗等方面的理想模型。

1.2 文章结构本文旨在对人诱导干细胞检测标准进行全面、系统性的概述和解释。

文章分为五个部分:引言、人诱导干细胞的概述、人诱导干细胞检测的重要性与挑战、已有的人诱导干细胞检测标准概述与解释以及结论与展望。

在第二部分中,我们将介绍人诱导干细胞(iPSC)的定义、背景、特点和应用,以及制备方法和技术发展历程。

这将为后续对其检测标准进行分析和评估提供必要的背景知识。

第三部分将讨论人诱导干细胞检测的重要性和意义,以及当前面临的问题和挑战。

我们还会对未来人诱导干细胞检测标准的发展进行展望,探讨可能出现的改进方向和趋势。

在第四部分中,我们将概述已有的国际标准和相关文献,并介绍主流实验方法和技术指南。

同时,我们也会分析这些检测标准在实际应用中存在的局限性,并提出改进措施建议。

最后,在结论与展望部分,我们将对人诱导干细胞检测标准进行总结和评价,并展望其未来的研究方向与发展趋势。

同时,我们还将讨论人诱导干细胞检测标准对相关领域的影响和应用前景。

1.3 目的本文旨在全面了解并解释人诱导干细胞(iPSC)的概念、特点及其制备方法,并重点关注目前人诱导干细胞检测所面临的挑战和问题。

通过梳理已有的检测标准,分析其在实际应用中的限制,并提出改进措施建议。

最后,对人诱导干细胞检测标准未来的发展方向和应用前景进行展望,为相关研究领域提供指导与参考。

2. 人诱导干细胞(iPSC)的概述2.1 iPSC的定义和背景人诱导干细胞(induced pluripotent stem cells,简称iPSC)是一种通过重编程成体细胞回退到多能性状态而获得的多潜能干细胞。

《人诱导多能干细胞系的建立》范文

《人诱导多能干细胞系的建立》范文

《人诱导多能干细胞系的建立》篇一一、引言人诱导多能干细胞(Human Induced Pluripotent Stem Cells,简称hiPSC)的发现与建立,是现代生物学领域的一大突破。

这种干细胞具有高度自我更新能力和多向分化潜能,为疾病模型构建、药物研发以及再生医学等领域提供了新的研究工具和治疗方法。

本文将详细介绍人诱导多能干细胞系的建立过程、方法及其在科研和临床上的应用前景。

二、人诱导多能干细胞的建立1. 背景与原理人诱导多能干细胞技术的原理主要是通过特定基因的过表达和转录因子的激活,将成熟的人体细胞重编程为多能性干细胞。

这种方法在技术层面上克服了传统胚胎干细胞研究的伦理问题,同时也为疾病模型构建、药物研发等领域提供了新的研究工具。

2. 实验方法人诱导多能干细胞的建立主要涉及细胞培养、基因编辑和细胞分化等步骤。

首先,从人体获取成熟的体细胞,如皮肤成纤维细胞或外周血细胞等;然后通过基因编辑技术,将特定的转录因子导入细胞中;最后,通过体外培养和分化,诱导这些细胞成为多能性干细胞。

三、人诱导多能干细胞系的应用1. 疾病模型构建人诱导多能干细胞可模拟各种疾病的发病过程,为研究疾病的发生机制和寻找治疗方法提供了有力工具。

例如,通过建立帕金森病、糖尿病等疾病的模型,可以研究疾病的发病机制,并筛选出潜在的治疗药物。

2. 药物研发人诱导多能干细胞可用于药物研发过程中的毒性和药效评估。

通过分析药物对干细胞的影响,可以预测药物在人体内的疗效和潜在副作用,为新药研发提供有力支持。

3. 再生医学人诱导多能干细胞具有分化成多种组织细胞的能力,为再生医学提供了新的治疗手段。

例如,通过诱导干细胞分化成神经元、心肌细胞等,可以用于治疗帕金森病、心肌梗死等疾病。

此外,还可以通过基因编辑技术修复干细胞的基因缺陷,从而治疗遗传性疾病。

四、未来展望随着人诱导多能干细胞技术的不断发展,其在科研和临床上的应用前景将更加广阔。

未来,我们可以期待以下几个方面的发展:1. 技术的进一步完善:随着基因编辑和细胞培养技术的不断进步,人诱导多能干细胞的建立过程将更加高效和稳定。

诱导性多潜能干细胞

诱导性多潜能干细胞
特性
具有自我更新、多潜能分化及组织修 复的能力,与胚胎干细胞相似,但避 免了伦理问题和免疫排斥反应。
诱导性多潜能干细胞的研究历史
01
起始
进展
02
03
挑战
2006年,日本科学家山中伸弥首 次成功将小鼠成体细胞诱导为 iPSCs。
随后的研究逐渐实现了人类 iPSCs的诱导,并探索其在医学 领域的应用。
面临技术难度、安全性及伦理问 题等挑战,需要进一步研究和改 进。
诱导性多潜能干细胞的医学应用前景
疾病模型建立
利用iPSCs建立人类疾病模型,有助于深入了解 疾病机制和药物筛选。
药物研发
通过iPSCs技术,模拟人类疾病情况,用于新药 研发和毒性测试。
ABCD
个体化治疗
将患者自体细胞诱导为iPSCs,再分化为所需的 细胞类型,用于个体化治疗和组织修复。
伦理考量
尽管iPSCs具有巨大的医学应用潜力,但其涉及 的伦理问题需谨慎考虑和监管。
02
诱导性多潜能干细胞的 制备与转化
制备方法
基因转录因子诱导法
01
通过导入特定的转录因子,将体细胞诱导转化为多潜能干细胞。
人工合成小分子诱导法
02
利用人工合成的小分子化合物,诱导体细胞向多潜能干细胞转
化。
细胞重编程技术
法律问题
知识产权与专利权
关于诱导性多潜能干细胞的发现、制备和应用方法的专利申请和授权引发了一系 列法律争议。
临床试验和应用的法律框架
在将诱导性多潜能干细胞应用于临床试验和治疗方法之前,需要建立严格的法律 框架以确保安全性和有效性。
未来展望
伦理指导原则的发展
随着技术的进步,需要进一步发展和 完善关于人类胚胎研究和基因编辑的 伦理指导原则。

诱导产生多能性干细胞的研究

诱导产生多能性干细胞的研究

4.Klf4
Krueppel-like factor 4, KLF4上皮锌指转录因子 Klf4 (旧称GKLF)调节体外 细胞的增生与分化
iPS细胞诱导机制
已分化的细胞 1 病毒逆转录 3
Ips细胞 5
导入病毒基因
2 Oct3/4、Sox2、cMyc和Klf4
4
胚胎干细胞培养条件和 筛选
诱导多功能细胞
诱导性多能 干细胞用于 治疗小鼠帕 金森病
美国麻省Whitehead生物医学研究的 Wernig等近日报告,通过Oct4、Sox2、 Klf4和c-Myc四种转录因子诱导出的iPS细 胞可分化成神经细胞,可改善帕金森病小鼠的 运动功能。
iPS细胞在体外分化成 神经细胞
未分化的iPS细胞
研究者首先检验了iPS 细胞在体外的分化能力, 发现iPS细胞可以分化 成神经元细胞和神经胶 质细胞,并且能够进一 步生成神经元亚型细胞
Ips细胞系建立的一些重要环节 (几种因子的发现过程)
日本科学家发现ES细胞中那个存在着一些因子,这些因子对于 多能性的建立可能至关重要。科学家对24个与多能性维持相关 的候选基因导入小鼠成纤维细胞中,依次去掉其中一个基因, 最后在得到的10个基因中发现了4个至关重要的基因,其中任 何一个缺失都将导致实验的失败,这4个基因中的任意2个或3 个组合都无法形成具有ES细胞特性的ips细胞。从而确定了: Oct4,Sox2,c-myc和Klf4这4种基因
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Ips细胞研究中存在的问题
一.肿瘤相关基因,如c-myc的使用,有诱发癌 症的可能
二.逆转录病毒转染可能会导致一些癌基因的激 活,也可能导致某些重要基因功能受阻。
三.基因表达模式与ESC还存在一些不同。 四.效率较低,重组率只有0.1%。

诱导型多能干细胞的诱导和应用

诱导型多能干细胞的诱导和应用

诱导型多能干细胞的诱导和应用多能干细胞是可以分化成多种细胞类型的细胞,因此在医学领域中具有很大的应用价值。

从最初的胚胎干细胞到现在的诱导型多能干细胞,细胞技术的发展给医学带来了许多新的治疗和治疗方法。

本文将重点介绍诱导型多能干细胞的诱导和应用。

一、诱导型多能干细胞的诱导诱导型多能干细胞是指在体细胞中引入能够编程的基因,重编程体细胞使其回到多能干细胞的状态。

通过高度重组的DNA序列,可以前向编程成人类多能干细胞。

诱导型多能干细胞具有多能性和自我更新能力,可以用于体外的细胞培养以及治疗。

1.重编程技术诱导型多能干细胞的重编程技术,也称为“基因修饰技术”。

该技术主要通过引入四个转录因子(Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc)来引起干细胞的重编程。

重编程让细胞回到胚胎干细胞的状态,即在若干个基因的表达被抑制的情况下,可以使一般的细胞具有分化成多种细胞类型的能力。

2.邻居细胞(贡献)在重编程时,主要包括两个步骤:将体细胞极度重组为多能干细胞前体状态,并通过紫外线照射或钙离子刺激等方法转化为体外诱导型多能干细胞。

我们认为,主要原因是邻居细胞的影响,使某些基因表达模式被抑制,给它们的细胞成为多能干细胞留下了适合的基因表达模式。

3.对诱导型多能干细胞的诱导对诱导型多能干细胞的培养,我们可以使用多种细胞培养技术。

其中包括基本的细胞生物学、分子生物学技术和诱导生物学技术等。

我们可以通过半固体培养技术、3D细胞培养技术以及微流控芯片技术等方法进行培养。

可以在合适的营养条件和合适的环境中让多能干细胞成熟和分化。

二、诱导型多能干细胞的应用诱导型多能干细胞有着广泛的应用:从治疗一系列疾病到治疗其他疾病。

已经有许多疾病使用多能干细胞疗法治疗,包括心脏病、血液病、神经退行性疾病、糖尿病以及肝脏病等。

1.心脏病的治疗使用诱导型多能干细胞进行心脏病治疗的方法,主要有三种:起搏器、心肌移植和心肌细胞移植。

这些方法都可以直接将多能干细胞移植到心脏或患处进行治疗,可成为心脏疾病的有效治疗方法,改善心肌缺血、心功能障碍,甚至实现心肌再生。

诱导性多潜能干细胞现状及前景展望

诱导性多潜能干细胞现状及前景展望

诱导性多潜能干细胞现状及前景展望一、本文概述随着生物科技的飞速发展,诱导性多潜能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells,简称iPSCs)的研究已经成为当代生物医学领域的一个热点。

作为一种具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞类型,iPSCs的出现在很大程度上颠覆了我们对细胞命运的认知,为疾病治疗、药物筛选、再生医学等领域提供了新的可能性。

本文旨在全面概述诱导性多潜能干细胞的研究现状,深入剖析其潜在的应用价值,并展望未来的发展前景。

我们将从iPSCs的诱导技术、分化机制、临床应用等方面展开讨论,以期为读者提供一个清晰、深入的iPSCs研究全貌。

我们也将关注当前面临的挑战与问题,以期推动iPSCs技术的进一步发展。

二、诱导性多潜能干细胞的研究现状诱导性多潜能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells, iPSCs)是近年来生物医学领域的一个重大突破。

自从2006年日本科学家山中伸弥首次成功地将成体细胞诱导为具有类似胚胎干细胞特性的多潜能干细胞以来,iPSCs的研究已经取得了长足的进展。

在研究现状方面,iPSCs的制备方法已经从最初的病毒载体法发展到现在的非整合型质粒法、mRNA法以及蛋白法,显著提高了诱导过程的安全性和效率。

同时,关于iPSCs的分化机制也取得了重要突破,研究人员已经能够控制iPSCs向特定细胞类型分化,如心肌细胞、神经细胞、胰岛细胞等,这为再生医学和疾病治疗提供了可能。

在疾病模型方面,iPSCs技术的出现使得研究者能够利用患者自身的细胞诱导出iPSCs,进而分化为疾病相关的细胞类型,为研究疾病的发生机制和开发新的治疗方法提供了独特的工具。

例如,利用iPSCs技术,研究人员已经成功模拟了多种遗传性疾病和退行性疾病,如帕金森病、阿尔茨海默症等。

在临床应用方面,虽然目前iPSCs技术还面临诸多挑战,如分化效率、安全性等问题,但已经有一些初步的临床试验在进行。

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关于诱导多功能干细胞的介绍和思考
——2012年诺贝尔生理学或医学奖解读班级:生物技术基地姓名:林立梅学号:0131122635
【摘要】John B. Gurdon和Shinya Yamanaka获得2012年诺贝尔生理学或医学奖,他们的相继研究成果证明,成熟、分化的细胞可以被重新组装或诱导重新编程,变成未成熟的干细胞,能够发育成机体内所有种类的组织。

【关键字】重新编程干细胞诱导定向分化临床医学
【内容】
(一)两位科学家的实验概述
(1)约翰.格登:用“细胞核重编程”克隆出新动物
所谓“细胞核重编程”,就是将已经分化了的成年体细胞进行诱导,让其重新回到发育早期多能性干细胞状态,重新获得发育成各种类型细胞的能力。

通俗一点讲,就是在细胞层面实现“返老还童”。

1962年,格登做了一个划时代的实验:他假设:这些细胞的基因组仍然包含着驱动它发育成机体所有不同类型的细胞所需的信息。

并进行相关实验,将非洲爪蟾(Xenopus,一种蛙)卵细胞内不成熟的细胞核移除,然后把非洲爪蟾的成熟肠细胞的细胞核注入其中。

在此过程中,他采用核标记技术(Elsdale et al,1960),将标记的供体细胞核移植到未标记的受体卵。

在实验中,控制由囊胚或原肠胚(简称胚胎细胞核)穿插与转让肠细胞核。

移植的胚胎中,所有那些超出了囊胚期的细胞中包含明显的被标记的核,可以证明它们来源于核移植而不是从卵核。

核标记只出现在渡过了囊胚期胚胎中。

整个实验的目的很简单,就是想看看这个卵子最终会变成什么。

结果发现,一部分卵依然可以发育成蝌蚪;其中的一部分蝌蚪,可以继续发育成为爪蟾。

(2)山中伸弥:用基因技术制造出“诱导多能干细胞”
2006年Shinya Yamanaka教授从数据库中筛选出大约100个有可能在ES细胞中特别活跃的基因。

再经过近4年的紧张工作,从这100个基因中筛选出24个活跃
的可能与细胞初始化有关的基因,并一次性将这24个候选基因全部导入成人的皮肤细胞中,结果梦寐以求的干细胞出现了。

此后,又逐个检验这24个基因。

每次扣留一个基因,将其余23个导入细胞中,看看是否对初始化有影响。

如果扣留的基因有作用,那么细胞就不会发生初始化。

就这样淘汰了对于初始化不是必需的20个基因,最终将目标锁定在4个基因身上,它们分别是“Oct3/4”、“Sox2”、“Klf4”和“c-Myc”。

其中,Klf/4和c-Myc的作用是使纤维芽细胞的分裂变得不受限制,转变成类似癌细胞的细胞。

Oct3/4和Sox2的作用则是使细胞获得能够进行多种分化的能力而失去癌细胞那样的增殖性质。

Shinya Yamanaka等科学家把4个关键基因通过逆转录病毒载体转入小鼠的成纤维细胞,使其变成多功能干细胞。

这就是第一批的诱导多能干细胞——iPS细胞。

(二)实验所证明的事实和意义
John B. Gurdon 在1962 年发现细胞的特化是可逆的。

在一个经典的试验中,他将成熟的小肠细胞的细胞核注入去核的未成熟的蛙卵细胞。

这个修饰过的卵细胞发育成一个正常的蝌蚪。

成熟细胞的DNA 还具备发育出蛙的所有细胞的信息。

Shinya Yamanaka 在2006 年发现,小鼠体内完整的成熟细胞可以被重编程为未
成熟的干细胞。

令人惊讶的是,通过导入几个基因,他可将成熟细胞重编程为全能干细胞,即可发育为机体所有细胞类型的未成熟细胞。

(1)格登的实验说明:
处于高度分化状态的体细胞可以通过重编程手段发生逆向的转变,回到早期胚胎的未分化状态,且具有发育为整个成体动物个体的潜能。

这一发现对当时科学界关于细胞命运不能逆转的传统认知产生了挑战,是细胞重编程领域的里程碑成果。

格登的发现,也开创了一项重要克隆技术的先河——体细胞核转移技术( Somatic nuclear transfer,简称SNT)。

科学家可以用这一技术,将体细胞核转入卵细胞,使得该细胞具有重新转化为具有多能性细胞的潜能。

核移植技术本质上是一种把成年的细胞变成有多种分化能力的细胞的过程,戈登等人的工作告诉我们:既然一个普普通通的乳腺细胞或者上皮细胞都可以发育成为一个完整的个体。

那么可以想象,一定存在某种途径可以让这个细胞通过连续的分化有让它变成心肌细胞、骨骼细胞、牙齿细胞或者其它那些身体所拥有的细胞。

这对任何医生可都是一个巨大的诱惑——想象一下,只需要将一个细胞经过一段时间的培
养,就可以获得大量各种心、肝、脾、肺等身体的组织,这些组织可以任意用在损伤的器官修复上面。

更加美妙的是,这些细胞都可以是患者本人的!医生再也不需要考虑来自其他人的细胞或者器官所带来的可能致命的免疫排斥作用——一副美妙的画卷展现在了人类的面前。

可惜实际操作并没有那么简单,早在上个世纪30年代,斯佩曼早就发现,一种细胞要转化为另外一种细胞,需要的是周围细胞的诱导。

斯佩曼发现,如果你想把一个胚胎细胞培养成眼睛的晶状体,那只有在周围存在视杯细胞的情况才能发育出来。

而如果你想获得视杯细胞,必须在周围有神经外胚层细胞才可以发育出来……总之,如果你想获得一个有功能的肾脏,那么肾脏周围的各种器官组织一个也不能少!这可太邪恶了。

也就是说,你得让一个完成的胎儿各种器官都发育出来了你才能够得到这个肾脏。

而从一个发育完整的胎儿身上取下一个肾脏,则无异于杀人了。

(2)山中伸弥等人的实验证明:
日本科学家山中在戈登的工作40年之后终于发现,我们也许不需要一个完整的胎儿就能够获得我们想要的各种细胞。

2006年,山中伸弥通过一系列艰苦的努力(山中的工作也许需要另外一篇长文来介绍,他把日本人的吃苦耐劳的精神在细胞生物学上发挥到了极致)找到了四个基因,他发现当这四个基因重新在细胞内开始表达的时候,这个细胞就具有了类似干细胞的可诱导分化的能力,于是我们可以用更安全的方法用这样一些细胞来修复体内潜在的受损的器官或者组织。

可以将人的体细胞转变成类似胚胎干细胞的多能性干细胞。

这项研究预示着,我们将可能利用诱导多能干细胞技术进行人类疾病研究和再生医学研究。

至此,人类在将体细胞转变为干细胞的道路上实现了第一次突破。

(三)一个美好期待---细胞核重编程技术早日用于临床诱导多能干细胞技术最终必将成为临床上的一项常规技术,人们既可以通过它来获取患者的完整遗传信息,也可以直接制备出患者个人的组织器官,还可以在用药前先利用诱导多能干细胞对药物进行筛选和检测,也能利用诱导多能干细胞检测患者患上某种疾病或癌症的易感性和风险性。

甚至还能利用诱导多能干细胞预测某项疾病预防措施对患者可能带来的效果,因而影响患者的生活方式。

有科学家表示,基于诱导多能干细胞的疗法正朝临床迈进。

学校:内蒙古大学
学院:生命科学学院
姓名:林立梅
学号:0131122635
班级:2013级生物技术基地。

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